CN110095601A - 一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。其中本发明公开的方法和试剂盒基于胶体金免疫层析技术，操作简单、快速、非常适合临场检测。另外，本发明的方法通过无创伤采集产后母猪初乳进行检测，减少了对母猪的刺激，不会影响母猪进行产子或泌乳，并且通过定量检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体效价的高低，可进一步区分母猪初乳对仔猪保护力的大小，可有效优化母猪抗猪流行性腹泻病毒的免疫方案以及筛选高质量疫苗。

Description

一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检 测方法及试剂盒

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒。

背景技术

猪流行性腹泻是严重威胁新生仔猪健康的一种肠道急性传染病，是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的。其特征为呕吐、腹泻、脱水。临床变化和症状与猪传染性胃肠疾病极为相似。1971年首发于英国，20世纪80年代初我国陆续发生本病。仔猪病死率常超过50％，是影响养殖业的一类重大疾病。

猪流行性腹泻的预防目前主要采用疫苗，对妊娠母猪进行疫苗免疫。猪只免疫后一般会产生IgA和IgG抗体。其中IgG主要位于血液中，是体液免疫的重要组成。IgA属于粘膜免疫，外源病毒进入肠道后IgA抗体成为第一道防线。因此人们现在常常认为流行性腹泻病毒疫苗的好坏与产生的IgA抗体的多少有关。仔猪通过吮吸母猪的初乳(一般是指仔猪出生后48小时内的乳汁，此时乳汁中各种抗体水平较高)获得IgA抗体，如母猪初乳中含有较高的流行性腹泻病毒特异性IgA抗体，则仔猪可能获得较强的抵抗能力。

CN104330558A公开了一种检测母猪血液中IgA抗体的ELISA方法，该方法可通过间接ELISA方法定性检测母猪血液中的IgA抗体，特异性较好，但不能定量检测母猪血液中的IgA抗体的水平，并且由于涉及产后或产前母猪的采血，可能对母猪造成一定的应激反应，甚至影响产子或泌乳。另外，ELISA方法需要专业的仪器(酶标仪和水浴锅等)，需要有一定专业素养的实验人员在相对专业的实验室开展，但是不适合现场检测。因此本领域亟需一种无创、可快速临场定量检测母猪体内IgA抗体水平的方法。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明的一个方面提供一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法，包括以下步骤：

胶体金测试卡的制备：使用猪流行性腹泻病毒抗原和羊抗猪IgA抗体制备胶体金测试卡；

标准曲线的制作：使用不同IgA抗体效价的母猪初乳制备标准样品；将所述各标准样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，并制作标准曲线；

抗体效价测定：将所述待测母猪初乳样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，通过标准曲线确定待测母猪初乳样品的抗体效价。

该定量检测方法还可进一步包括：

稀释液的制备：用磷酸盐缓冲液作稀释液；配方优选为NaH₂PO₄·2H₂O 0.296g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，双蒸水定溶至1000mL，pH值为7.2-7.4；

待测母猪初乳样品的制备：收集产后母猪初乳，用所述稀释液进行稀释，制备得到待测母猪初乳样品。

上述胶体金测试卡由胶体金试纸条装入塑料卡中制备得到，其中所述胶体金试纸条包括：吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜结合物释放垫、玻璃纤维素膜样品垫，其中所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有羊抗猪IgA抗体，所述玻璃纤维素膜结合物释放垫上包被有猪流行性腹泻病毒抗原胶体金标记物。

上述标准曲线的制作包括以下步骤：

S1：用稀释液稀释流行性腹泻病毒IgA抗体，制备得到抗体效价分别为1:512、1:256、1:128、1:64、1:32、1:16、1:1的标准样品；

S2：用稀释液按1:10的比例稀释各效价的标准样品后，分别取稀释后的各效价的标准样品70μl，滴到胶体金测试卡的样品孔，计时20分钟，每个标准样品重复三次；

S3：用免疫层析分析仪检测各效价标准样品的灰度值，并计算灰度值的平均值；

S4：以灰度值的平均值为纵坐标Y，以标准样品抗体效价的倒数为横坐标X，用免疫层析分析仪绘制得到所述标准曲线。

上述标准曲线的制作还包括：

S5：将生成的标准曲线以QR-CODE格式打印二维码。

上述产后母猪初乳为产后48小时内的母猪初乳。

上述待测母猪初乳样品的制备步骤中，对所述母猪初乳进行稀释的比例为1:10。

上述抗体效价测定步骤中，待测母猪初乳样品的测定数值为灰度值的平均值，从所述标准曲线中读取抗体效价的倒数(依据所述标准曲线，数值范围为0～512)，该读数作为测定结果。

基于上述定量检测方法的测定结果的判定方法也在本发明的保护范围之内，其判断标准为：测定结果≥32为阳性，所述阳性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平能够对仔猪提供保护作用；测定结果＜32为阴性，所述阴性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平不足以保护仔猪。

本发明另一方面提供一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的检测试剂盒，包括：上述胶体金测试卡和稀释液，以及上述的二维码；

优选所述胶体金测试卡20个，为铝箔袋独立包装；所述稀释液为20瓶，每瓶含有630μl。

上述试剂盒还包括上述判断标准说明。

基于以上技术方案，本发明提供了基于胶体金免疫层析的快速定量检测母猪初乳中猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平的方法及检测试剂盒，操作简单、快速、非常适合临场定量检测。另外，通过无创伤采集初乳进行检测，减少了对母猪的刺激，不会影响母猪产子或泌乳。相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1)无创伤采集母猪初乳，可减少对母猪的刺激，不会影响母猪产子或泌乳；

2)测定方法操作简单，无需专业人员即可操作；

3)只需一台免疫层析分析仪而无需其他专业设备，可在现场进行检测，且耗时较短；

4)通过定量检测母猪初乳中猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平，可更准确地预测母猪初乳对仔猪的保护性，进一步优化母猪流行性腹泻的免疫方案，优化免疫程序，筛选高质量的疫苗及加强管理。

附图说明

图1是检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的胶体金试纸条组装示意图(其中A为正面图；B为组装顺序图；C为层析方向)；

图2是胶体金测试卡示意图(其中C为质控线；T为测试线；S为加样孔)；

图3为标准曲线；

图4是生成的标准曲线的二维码。

具体实施方式

针对现有技术中尚未有无创、临场快速定量检测母猪体内猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平的方法，本发明提供一种基于胶体金免疫层析技术的快速定量检测母猪初乳中猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平的方法及检测试剂盒，操作简单、快速、非常适合临场检测。另外，通过无创伤采集初乳进行检测，减少了对母猪的刺激，不会影响母猪进行产子或泌乳。

本发明将通过以下具体实施方式详细说明本发明。

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

所述百分比浓度如无特别说明均为质量/质量(W/W，单位g/100g)百分比浓度、质量/体积(W/V，单位g/100mL)百分比浓度或体积/体积(V/V，单位mL/100mL)百分比浓度。

实施例中描述到的各种生物材料的取得途径仅是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本发明生物材料来源的限制。事实上，所用到的生物材料的来源是广泛的，任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用。

实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，实施例将有助于理解本发明，但是本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：检测母猪初乳中猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平的胶体金试纸条和测试卡的制备

该实施例提供的胶体金试纸条或测试卡可用于快速、现场检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体水平，并可用于检测疫苗质量以及疫苗生产过程中的质量监控等。

1.1、制备胶体金试纸条和测试卡

如图1所示，为胶体金试纸条结构示意图，其中图1中A幅为胶体金试纸条正面结构示意图，图1中B幅为胶体金试纸条侧面结构示意图，图1中C幅为胶体金试纸条的层析方向，根据图1，用于检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体水平的胶体金试纸条由吸水垫1、硝酸纤维素膜(NC膜)2、玻璃纤维素膜结合物释放垫3、玻璃纤维素膜样品垫4组成，硝酸纤维素膜2上设有检测线(T线)6和质控线(C线)5。

胶体金试纸条和测试卡的制备方法包括以下步骤：

1)包被硝酸纤维素膜(NC膜)2

用浓度为1-5mg/mL的羊抗猪IgA抗体(购自美国Fitzgerald公司)包被检测线6；用浓度为1-5mg/mL的羊抗鼠免疫球蛋白(购自北京博尔西科技有限公司)包被质控线5。具体方法为：用XYZ三维划膜喷金仪(购自上海金标生物科技有限公司)将羊抗猪IgA抗体和羊抗鼠免疫球蛋白分别喷于300mm长、20mm宽的硝酸纤维素膜2上，形成相互分离的检测线6和质控线5，检测线6和质控线5间距为0.3-1.0cm，通常选择0.5cm。37℃干燥(相对湿度≤30％)1小时后备用。

2)结合物释放垫3的制备

2.1、用胶体金标记猪流行性腹泻病毒抗原，方法为：在磁力搅拌下，向三角瓶中加入145mL纯化水，煮沸；加入1％四氯化金溶液5mL，煮沸；再加入1％柠檬酸三钠溶液7mL，煮沸5分钟制备得到胶体金溶液，冷却后保存于2-8℃备用。取1毫升胶体金溶液于离心管中，加入10μl 0.2M碳酸钾溶液，室温静止5min；加入10μl抗原，混匀后静置30min；加入10μl20％BSA溶液，平衡5min；加入10μl 20％PEG20000溶液，平衡30min；用离心机10000rpm，离心10min，去上清液。加入100μl金标复溶液(含有2％蔗糖、1％酪蛋白、0.5％BSA、0.1TritonX100、0.1％SDS的硼酸缓冲液)，复溶后备用。

2.2、按照以上2.1相同的方法用胶体金标记鼠IgG抗体(购自北京博尔西科技有限公司)，其中，每毫升胶体金溶液加入10μg鼠IgG抗体。

2.3、胶体金标记物混合液制备：将以上2.1和2.2制备的胶体金标记物按照1:1-1:4的比例混匀。

2.4、制备结合物释放垫3：结合物释放垫3的材质为玻璃纤维膜，其上包被有胶体金标记的猪流行性腹泻病毒抗原和鼠IgG抗体，具体方法为：将步骤2.3中的胶体金标记混合液按照8μl/cm的速度喷玻璃纤维素膜，37℃下放置2小时干燥，备用。

3)制备胶体金试纸条和测试卡

在PVC背板7上先粘贴硝酸纤维素膜2，在靠近硝酸纤维素膜2质控线5的一端粘贴吸水垫1，在靠近检测线6的一端粘贴结合物释放垫3和玻璃纤维素膜样品垫4，得到用于检测母猪初乳中猪流行腹泻病毒特异性IgA抗体水平的胶体金试纸，然后可按所需大小进行切割，得到用于检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的胶体金试纸条，加干燥剂后密封保存。

将上述步骤制备的胶体金试纸条装入塑料卡中，制成测试卡，并组装成试剂盒。如图2所示，示出了测试卡的正面结构示意图，在该测试卡对应于样品垫的部位设有点样口，对应于检测线和质控线的部位设有观测窗，以便观察检测线和质控线的反映情况。

1.2、胶体金试纸条和测试卡的使用

胶体金试纸条的使用方法：将样品垫端浸入样品中或将样品滴加到样品垫4，样品垫4即吸取液体向上端移动，流经结合物释放垫3时使其与结合物释放垫3上的胶体金标记猪流行性腹泻病毒抗原和鼠IgG抗体复溶，并带动其向硝酸纤维膜2渗移。若样本中有待测特异抗体(阳性样本)，其可与胶体金标记猪流行性腹泻病毒抗原结合，此抗原抗体复合物流至检测线6即被固相抗体所获，在膜上显出红色检测线条(T线)。胶体金标记的鼠IgG抗体继续前行，至质控线5与羊抗鼠免疫球蛋白(固相二抗)结合，而显出红色质控线条(C线)。反之，若样本中无待测特异抗体(阴性样本)，则无检测线条(T线)，而仅显示质控线条(C线)。如果检测线(T线)与质控线(C线)均不显色或仅检测线(T线)显色，则表示胶体金试纸条(卡)失效。

胶体金测试卡的使用方法：检测时，取待检样品2-4滴，滴在测试卡的点样口，根据观测窗内的检测线(T线)和质控线(C线)是否出现色带来确定样品中是否存在猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体。

实施例2：快速定量检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的试剂盒

该实施例中的试剂盒基于胶体金免疫层析技术，配套KRD-105免疫层析分析仪(型号KRD-105，购自北京快锐读科技有限公司)可实现快速检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的水平。

2.1、试剂盒包括：

1)胶体金测试卡：数个(该实施例中为20个)，根据实施例1中所述的方法制备得到，为铝箔袋独立包装。每个铝箔袋内包含1个测试卡、一包干燥剂；

2)稀释液：数瓶(该实施例中为20瓶)，每瓶含有630μl稀释液，其中稀释液为pH7.2-7.4的10mM PBS(配方：NaH₂PO₄·2H₂O 0.296g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，双蒸水定溶至1000mL，测定pH值为7.2-7.4)；

3)使用说明书：1份；说明书内容参见2.2。

4)标准曲线二维码：

其中标准曲线二维码通过以下步骤获得：

2.1.1、初乳标准样品的制备：用稀释液稀释流行性腹泻病毒IgA抗体，制备得到抗体效价分别为1:512、1:256、1:128、1:64、1:32、1:16、1:1的初乳标准样品；

2.1.2、用稀释液按1:10的比例稀释各效价的标准样品后，分别取稀释后的各效价的标准样品70μl，滴到测试卡的样品孔，计时20分钟，每个质控品重复三次；

2.1.3、用免疫层析分析仪(该实施例采用KRD-105型号，购自北京快锐读科技有限公司)检测各效价标准样品的灰度值，并计算灰度值的平均值；

2.1.4、以灰度值的平均值为纵坐标Y，以标准样品抗体效价的倒数为横坐标X，用免疫层析分析仪(KRD-105)绘制标准曲线，如图3所示，示出了该实施例中制作的标准曲线，其中横坐标X和纵坐标Y的值如下表1所示；

2.1.5、生成的标准曲线以QR-CODE格式打印二维码，并黏贴在试剂盒的外面，如图4所示，示出了该实施例中制备得到的标准曲线对应的QR-CODE格式二维码。

表1：标准曲线(X-Y)

2.2、试剂盒的使用：

2.2.1、收集产后母猪48小时之内的初乳，做好标记；按照1:10比例用稀释液稀释制备得到母猪初乳待检样品，比如70μl初乳加入到630μl稀释液中，混用待检；

2.2.2、从试剂盒中取出足够数量的测试卡，打开包装，按照样品顺序编号；并依次向测试卡加样孔中加入70μl的稀释后的母猪初乳待检样品，计时20分钟；

2.2.3、启动免疫层析分析仪(KRD-105)电源，用扫码枪扫描标准曲线二维码进入检测界面；

2.2.4、待测试卡反应后插入KRD-105免疫层析分析仪中，点击“检测”按钮；仪器自动检测并给出母猪初乳待检样品中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的具体效价(抗体效价的倒数)。

实施例3：检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体水平

本实施例利用实施例2的试剂盒进行检测，包括以下步骤：

1)、母猪初乳待检样品的制备：收集产后母猪48小时之内的初乳，做好标记；由于母猪初乳比较粘稠，检测前需要用稀释液(同实施例2中所述稀释液)按照1:10比例进行稀释，制备得到母猪初乳待检样品；例如将70μl初乳加入到630μl稀释液中，制备得到1:10比例稀释的母猪初乳待检样品；

2)、从实施例2的试剂盒中取出足够数量的测试卡，打开包装，按照样品顺序编号；依次向测试卡加样孔中加入70μl的稀释后的母猪初乳待检样品，计时20分钟；

3)、启动免疫层析分析仪(KRD-105)电源，用扫码枪扫描标准曲线二维码进入检测界面；

4)、待测试卡反应后插入KRD-105免疫层析分析仪中，点击“检测”按钮；仪器自动检测并给出母猪初乳待检样品中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的具体效价(抗体效价的倒数)。

进一步的，以仪器自动检测给出的具体效价(抗体效价的倒数)作为测定结果，根据测定结果评判母猪初乳中的IgA抗体水平对仔猪的保护能力大小，其判断标准为：测定结果≥32为阳性；测定结果＜32为阴性。阳性样品说明母猪初乳中的IgA抗体水平能够对仔猪提供保护作用，且数值越高，保护能力越强。阴性样品说明母猪初乳中的IgA抗体不足以保护仔猪。

3.2、临床比对：检测结果与临床症状进行比对分析

将待测样品(仔猪腹泻验证的母猪初乳42份；仔猪无腹泻的母猪初乳37份)用该实施例中3.1中所述的方法进行检测，计算抗体效价倒数的平均值和标准差。结果如下表2所示。根据表2结果可见，仔猪无腹泻的母猪初乳中的抗体水平整体高于仔猪腹泻验证的母猪初乳中的抗体水平，并且仔猪腹泻验证的母猪初乳的检测结果＜32，仔猪无腹泻的母猪初乳的检测结果≥32，表明根据本发明方法的检测结果与临床症状相吻合，并且测定结果的判断标准是有效的。

表2：临床比对结果

3.3、方法比对：本发明方法与ELISA方法进行比对

将待测样品(随机母猪初乳样品85份，其中阴性和阳性样品各占接近50％)用该实施例中3.1所述的方法(本发明方法)和ELISA试剂盒(参考方法，购自广州悦洋生物技术有限公司)说明书的操作方法分别进行检测，并判断阴阳性，结果如下表3所示。

表3：检测85份母猪初乳样品的方法比对结果

阴性符合率＝39/42*100％＝92.9％；

阳性符合率＝40/43*100％＝93.0％；

总符合率＝(39+40)/85*100％＝92.9％。

由表3数据可知，本发明方法与参考方法(ELISA试剂盒)的总符合率达到92.9％，表明本发明方法所得到的检测结果与ELISA试剂盒得到的检测结果具有较高的一致性，而本方法操作简单、耗时较短且无需专业设备和专业人员操作，适合于现场快速定量和定性检测。

实施例4：临床观察

该实施例利用实施例3的方法，通过临床观察，研究仔猪腹泻发病率与母猪初乳中IgA抗体效价水平的关系。

观察不同猪场的仔猪腹泻情况，并计算发病率。同时利用实施例3中所述的方法检测母猪初乳中抗体的效价水平，计算抗体效价倒数的均值与标准差，以评估抗体效价与仔猪腹泻发病率之间的关系。检测结果如下表4所示。

表4：仔猪腹泻发病率与母猪初乳中IgA抗体效价的关系

由表4结果可知，抗体效价倒数的均值越小，即抗体效价越低，仔猪腹泻发病率越高。当母猪初乳中抗体效价为1:40左右时，对仔猪的保护率可达50％以上，当母猪初乳中抗体效价为1:60左右时，对仔猪的保护率可达75％以上，当母猪初乳中抗体效价为1:85左右时，对仔猪的保护率可达90％以上。可见，抗体效价只有达到足够高的时候，母猪初乳对仔猪的保护才是比较全面的。本发明方法通过定量检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体效价的高低，可进一步区分母猪初乳对仔猪保护力的大小。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

胶体金测试卡的制备：使用猪流行性腹泻病毒抗原和羊抗猪IgA抗体制备胶体金测试卡；

标准曲线的制作：使用不同IgA抗体效价的母猪初乳制备标准样品；将所述各标准样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，并制作标准曲线；

抗体效价测定：将待测母猪初乳样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，通过标准曲线确定待测母猪初乳样品的抗体效价。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶体金测试卡由胶体金试纸条装入塑料卡中制备得到，其中所述胶体金试纸条包括：吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜结合物释放垫、玻璃纤维素膜样品垫，其中所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有羊抗猪IgA抗体，所述玻璃纤维素膜结合物释放垫上包被有猪流行性腹泻病毒抗原胶体金标记物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的制作包括以下步骤：

S1：用流行性腹泻病毒IgA抗体制备得到抗体效价分别为1:512、1:256、1:128、1:64、1:32、1:16、1:1的标准样品；

S2：按1:10的比例稀释各效价的标准样品后，分别取稀释后的各效价的标准样品70μl，滴到胶体金测试卡的样品孔，计时20分钟，每个标准样品重复三次；

S3：用免疫层析分析仪检测各效价标准样品的灰度值，并计算灰度值的平均值；

S4：以灰度值的平均值为纵坐标Y，以标准样品抗体效价的倒数为横坐标X，用免疫层析分析仪绘制得到所述标准曲线。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的制作还包括：

S5：将生成的标准曲线以QR-CODE格式打印二维码。

5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述待测母猪初乳样品为对母猪初乳进行1:10稀释后的样品，所述母猪初乳为母猪产后48小时内的初乳。

6.根据权利要求3至5任一项所述的方法，其特征在于，用稀释液进行稀释，所述稀释液为磷酸盐缓冲液；优选配方为：NaH₂PO₄·2H₂O 0.296g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，双蒸水定溶至1000mL，pH值为7.2-7.4。

7.根据权利要求3至6任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体效价测定步骤中，待测母猪初乳样品的测定数值为灰度值的平均值，依据该测定数值从所述标准曲线中读取抗体效价的倒数，该读数作为测定结果。

8.一种母猪初乳中IgA抗体水平对仔猪保护作用的评判方法，其特征在于，基于权利要求7所述定量检测方法中的测定结果，判断标准为：测定结果≥32为阳性，所述阳性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平能够对仔猪提供保护作用；测定结果＜32为阴性，所述阴性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平不足以保护仔猪。

9.一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：权利要求1中提及的胶体金测试卡和权利要求6中提及的稀释液，以及权利要求4中提及的二维码；

优选所述胶体金测试卡20个，为铝箔袋独立包装；所述稀释液为20瓶，每瓶含有630μl。

10.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，还包括权利要求8中的判断标准说明。