CN200965534Y

CN200965534Y - A型链球菌快速检测试纸

Info

Publication number: CN200965534Y
Application number: CN 200620148436
Authority: CN
Inventors: 万志强; 万志静
Original assignee: WHPM Bioresearch and Technology Co Ltd
Current assignee: WHPM Bioresearch and Technology Co Ltd
Priority date: 2006-10-27
Filing date: 2006-10-27
Publication date: 2007-10-24
Anticipated expiration: 2016-10-27

Abstract

一种A型链球菌快速检测试纸，属于胶体金免疫检测领域。本试纸由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、兔抗GAS多抗金标垫、样品吸液层组成。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有两条线，一条兔抗GAS多克隆抗体试验线和一条羊抗兔多克隆抗体控制线。底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和兔抗GAS多抗金标垫相互交叠连接，在金标垫上压有样品吸液层。此方法特异性强，灵敏度高，成本低，操作简便，便于贮存及运输。

Description

A型链球菌快速检测试纸

技术领域

本实用新型是利用胶体金方法来检测A型链球菌，属于胶体金免疫检测领域。

背景技术

A型链球菌(group A streptococci，GAS)也称化脓性链球菌，为β溶血性链球菌，是人类细菌感染常见的病原菌之一。GAS引起的疾病约占人类链球菌感染的90％，其感染源为病人和带菌者。传播方式有空气飞沫传播、经皮肤伤口感染和经污染食品传播等途径，在人体内繁殖能力很强，能迅速产生毒素，侵蚀肌肉和身体组织。GAS通常可引起扁桃腺炎，咽炎及猩红热等病症。此类感染还可导致严重的并发症，如风湿性热病和急性肾小球肾炎。可见，GAS感染和后遗症一直是困扰公共健康和国民经济的严重问题。快速诊断以及适当的抗生素治疗A型链球菌感染是预防此类并发症的最好方法。

传统检测GAS的方法需要对创伤感染的病灶采取标本，再采取分离培养、组织染色等方法检测，虽具较高的敏感度和特异性，但所需时间长(24小时～3周不等)、培养条件高、所需仪器昂贵、操作步骤复杂、需要专业人员，因此不易推广。

利用免疫学方法对链球菌A检测因其具有临床检测意义和价值，可作为临床诊断依据及治疗效果观察。通过免疫学方法对GAS的检测包括检测抗体和检测抗原。检测抗体需要血清作为检测样品，检测抗原非创伤性方法则可以通过检测唾液样本达到目的。目前已经有一些文献指出ELISA法有较高特异性和敏感性，但需专业人员和仪器，操作时间长，成本高，试剂盒需要冷藏，不能达到快速检测的要求。

利用免疫胶体金方法来实现对GAS抗原的检测，此方法特异性强，灵敏度高，成本低，操作简便快速，便于贮存及运输，目前国内还没有这方面的报道。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种A型链球菌快速检测试纸，作为快速检测样本中A型链球菌的手段，是通过以下技术方案实现的：

本实用新型是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、兔抗GAS多抗金标垫、样品吸液层组成，试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上包被一条兔抗GAS多克隆抗体试验线和一条羊抗兔多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和兔抗GAS多抗金标垫相互交叠连接，在金标垫上压有样品吸液层。

其中的样品吸液层是由三层材料叠加组成，第一层为无纺布层，规格为10～25g/m²；第二层为玻璃纤维层；第三层为一定规格无纺布层，其规格为10～25g/m²，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用，上述装置除有毛细管作用原理外，还有虹吸作用原理，大大加快吸水移动速度。

用A型链球菌抗原免疫实验用兔，得到兔抗GAS多克隆抗体，包被硝酸纤维素膜的试验线以及制成兔抗GAS多抗金标垫。

硝酸纤维素膜上固定有两条线，一条试验线是兔抗GAS多克隆抗体制成，另一条是羊抗兔多克隆抗体制成。将兔抗GAS多克隆抗体和羊兔抗多克隆抗体分别固定于硝酸纤维素膜上，两条线与金标垫平行放置且兔抗GAS多克隆抗体在羊抗兔多克隆抗体与金标垫之间。

按公知技术将底板、硝酸纤维素膜及金标垫、吸水板进行组装。检测时，将试纸放入检测样液中，液面不得超过MAX线，当样本中有A型链球菌抗原时，试纸的显色区试验线及控制线均变为红色，为阳性；当样本中无A型链球菌抗原时，试纸的显色区仅有一条控制线变为红色，为阴性。当试纸的显色区没有颜色显示，则表示操作不当或试纸过期，此结果无效。

根据上述方案实现的A型链球菌快速检测试纸，具有快速、灵敏、准确、操作简便的优点，同时具有保存方便，有效期长的特点。

附图说明

图1为A型链球菌检测试纸的主视结构图。

图2为A型链球菌检测试纸的俯视剖视结构图。

图3为A型链球菌检测试纸用于测试时显示为阴性结果图。

图4为A型链球菌检测试纸用于测试时显示为阳性结果图。

1.吸水板 2.硝酸纤维素膜 3.羊抗兔多克隆抗体控制线 4.兔抗GAS多克隆抗体试验线5.兔抗GAS多抗金标垫 6.样品吸液层 7.底板 8.MAX线。

具体实施情况

图1～4详细表示了本实用新型的外观及分解图，它是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、兔抗GAS多抗金标垫(5)、样品吸液层(6)、MAX线(8)组成，试纸底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上包被一条兔抗GAS多克隆抗体试验线(4)和一条羊抗兔多克隆抗体控制线(3)，在底板(7)一端端头为吸水板(1)，另一端端头为样品吸液层(6)，硝酸纤维素膜(2)两端分别与吸水板(1)和兔抗GAS多抗金标垫(5)相互交叠连接，在金标垫上压有样品吸液层(6)。

1.兔抗A型链球菌多克隆抗体的制备

选取2～3Kg新西兰大白兔，用经鉴定的A型链球菌标准菌株采用背部多点注射法免疫实验用兔，采用血凝法进行多抗血清效价测定，经检测获得较高效价的抗体。

2.胶体金的制备及与兔抗A型链球菌多克隆抗体的结合

(1)取双蒸水加适量的氯金酸磁力搅拌加温到80～100℃，加入适量枸橼酸三纳继续加热搅拌至沸腾3～10分钟，冷却后避光保存备用。

(2)把兔抗A型链球菌多克隆抗体标记的胶体金液，吸附纤维材料上，干燥后备用。

3.制膜机制膜：利用电脑控制传动速度，确认喷膜的检测线、控制线，保证每单位膜上包被的抗体量相等。

4.试纸条组合：按公知技术组合。

5.使用方法：从病灶处采集检测样品，将试纸的样品吸液端放入稀释液中，液面不得超过MAX线。液体经过金标垫、试验线及控制线向试纸的手柄端移动，5分钟内判断结果。

7.结果判断：当样本中有A型链球菌抗原时，试纸的显色区有两条线显出，即试验线及控制线均变为红色，为阳性。当样本中无A型链球菌抗原时，试纸的显色区仅有一条控制线变为红色，为阴性。当试纸的显色区没有颜色显示，则表示操作不当或试纸过期，此结果无效。

Claims

1.一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于它是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、兔抗GAS多抗金标垫(5)、样品吸液层(6)组成，试纸底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上包被一条兔抗GAS多克隆抗体试验线(4)和一条羊抗兔多克隆抗体控制线(3)，在底板(7)一端端头为吸水板(1)，另一端端头为样品吸液层(6)，硝酸纤维素膜(2)两端分别与吸水板(1)和兔抗GAS多抗金标垫(5)相互交叠连接，在金标垫上压有样品吸液层(6)。

2.根据权利要求1所述的一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于所述的样品吸液层是由三层材料叠加组成，第一层为无纺布层，规格为10～25g/m²；第二层为玻璃纤维层；第三层为一定规格无纺布层，其规格为10～25g/m²，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用，上述装置除有毛细管作用原理外，还有虹吸作用原理，大大加快吸水移动速度。

3.根据权利要求1所述的一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于此试纸利用双抗夹心法原理制成。

4.根据权利要求1所述的一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于硝酸纤维素膜上有两条线，一条兔抗GAS多克隆抗体试验线和一条羊抗兔多克隆抗体控制线。

5.根据权利要求1所述的一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于所用的抗体是利用A型链球菌抗原免疫实验用兔，得到兔抗GAS多克隆抗体，用于包被硝酸纤维素膜的试验线及制成兔抗GAS多抗金标垫。

6.根据权利要求1所述一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于硝酸纤维素膜上的两条线与金标垫平行放置且兔抗GAS多克隆抗体在羊抗兔多克隆抗体与金标垫之间。

7.根据权利要求1所述的一种A型链球菌快速检测试纸，其特征在于根据国家标准制订出最低检出量，结果显示两条线为红色时为阳性；只有一控制线为红色时为阴性；无线为试纸失效或操作不当。