CN117147885A - 一种毛发中多项毒品联合测定试剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种毛发中多项毒品联合测定试剂及其制备方法；所述多项毒品联合测定试剂包括毒品检测卡和样本处理液；所述毒品检测卡包括至少一条毒品检测试纸；所述毒品检测试纸包括包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸；所述缓冲垫和样本垫通过使用喷金仪喷涂含吐温‑20、SDS‑L胶体金免疫层析优化剂、2‑甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的缓冲溶液得到。当所述的毒品检测试纸为两条以上时，毒品检测试纸的样本垫通过样本连接垫连接。本发明采用含新型表面活性剂垫处理液的喷金仪喷涂处理工艺，与常规垫处理液的浸泡工艺相比，具有显著改善层析过程微球释放效果差，不同批次间工艺差异小、产品性能更稳定等特点。

Description

一种毛发中多项毒品联合测定试剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种毛发中多项毒品联合测定试剂及其制备方法。
背景技术
当前，毒品快检面临的问题是毒品应用场景的复杂化和毒品检测种类复杂化。我国目前已经先后列管431种毒品和整类芬太尼类物质，毒品种类的增多对毒品快检的多样化提出要求。同时，当毒品进入人体后，会通过代谢、人体循环等生命活动出现在人体各个部位，出于采样的便利性，当前毒品筛查主要取材于唾液、尿液和毛发样本。通过对样本中毒品含量进行研究和分析，研究表明毒品及其代谢物在唾液和尿液等体液含量较高，可达μg/mL级别，留存时间较短，仅为3-7天不等，只能对短期吸毒进行判断，且尿液检测存在干扰较大、样品易污染、涉及隐私等问题，唾液检测存在取样量不足、层析速度过慢等问题；而毛发中的毒品来自于药物沉积，虽然含量较少，通常为ng/mg级别，但可留存6个月至更长时间，可反映长时间的吸毒情况。因此，毛发中毒品检测在长期毒品监测中更为实用。实际应用中，相关人员往往需要对多种类的毒品进行检测，因此联检作为一种可实现多种毒品同时检测的分析手段也日益受到欢迎。
目前基于毛发中毒品多项联合检测试剂，存在材料成本较高、组装工艺较繁琐、检测项目种类较少、灵敏度较低等缺点，如中国专利（公开号：CN113156108 A）和中国专利（公开号：CN112946284 A）均提供了一种毛发毒品五联荧光检测试纸及其制备方法，该试剂仅能检测五项毒品，且由五张试纸条并列组成，存在用料成本较高、操作较繁琐、且样本量要求较多等问题；而中国专利（公开号：CN 113624974 A）提出了一种毒品六联检测试剂，该类试剂仅能同时检测六项毒品，存在检测项目种类较少、重复加样等问题。对于毒品种类的快速增长的严峻形势，3-6种毒品联检试剂在检测效率方面已显露出力有不逮的趋势。另外，前期工作的中国专利（公开号：CN114544564A）发明了一种基于AIE纳米微球的吗啡、甲基安非他明联合测定试剂，该试剂为二联检产品，其样本垫、结合垫均采用浸泡工艺，且未采用新型表面活性剂配方工艺，其层析过程微球的释放效果一般，产品性能略差。因此，开发一种操作简便、灵敏度高、检测种类更多、产品性能更稳定、可应用于毛发样本中多项毒品联合测定的试剂已经成为迫切需求。
发明内容
为了克服现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种毒品检测试纸、毒品检测卡和毒品检测试剂及其应用；本发明的毒品检测试纸、毒品检测卡和毒品检测试剂具有高效率、高灵敏度、操作简便，可应用于毛发样本中最多九项毒品联合测定。
本发明的目的可通过下述技术方案实现：
一种毒品检测试纸，包括包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸；所述缓冲垫和样本垫通过使用喷金仪喷涂含吐温-20、SDS-L胶体金免疫层析优化剂、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的缓冲溶液得到。
进一步地，所述缓冲溶液中吐温-20、SDS-L胶体金免疫层析优化剂、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的质量百分含量分别为0.01%-0.1%、0.01%-0.1%、0.01%-0.1%。
进一步地，所述缓冲垫的喷金仪喷涂参数为：喷量：4-6μL/cm，线条数量：3-4条，线条间距：2.8-3.2mm；
进一步地，所述样本垫的喷金仪喷涂参数为：喷量：8-10μL/cm，线条数量：4-5条，线条间距：3.3-3.5mm。
进一步地，所述喷金仪为峰航喷金仪HGS510；所述样本垫的垫裁切宽度：14-16mm；所述缓冲垫的垫裁切宽度：9-11mm。
进一步地，所述缓冲溶液中的缓冲对为PB、Tris-HCl中的一种；所述缓冲溶液中缓冲对的浓度为0.01-0.03M；
进一步地，所述缓冲溶液还包括糖、封闭剂、盐、防腐剂；所述缓冲溶液中糖、封闭剂、盐、防腐剂的质量百分含量分别为0.1%-5%、0.2%-1%、0.5%-20%、0.05%-0.1%；所述盐为氯化镁、氯化钙、氯化钠、磷酸钙中的一种或多种；所述糖为蔗糖、海藻糖中的一种或多种；所述封闭剂为BSA，所述缓冲溶液的防腐剂为Proclin 300。
进一步地，所述样本垫、缓冲垫的材质分别为聚酯纤维或玻璃纤维的一种；
进一步地，所述喷金仪喷涂后烘干处理，烘干温度为30-50℃，时间为16-48h。
进一步地，所述包被膜具有1-3条不同的毒品完全抗原检测线和1条DNP-pAb质控线；所述毒品完全抗原检测线包被有吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原和合成大麻素K2、K3、K4完全抗原中的一种；
优选地，所述包被膜的材质为硝酸纤维素膜；所述检测线的间隔以及与质控线的间隔均为2-5 mm。
进一步地，所述结合垫上喷涂有AIE纳米微球标记的毒品特异性单克隆抗体及DNP-BSA，所述毒品特异性单克隆抗体与包被膜中检测线的毒品完全抗原对应。所述AIE纳米微球为通过聚苯乙烯包裹，包埋AIE分子制备而成。
上述的毒品检测试纸的制备方法，包括以下步骤：
分别制备包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸；组装后得到毒品检测试纸。
一种毒品检测卡，包括至少一条上述的毒品检测试纸；当所述的毒品检测试纸为两条以上时，毒品检测试纸的样本垫通过样本连接垫连接。
进一步地，所述毒品测定检测卡内设有三张毒品检测试纸条与样本连接垫，检测试纸条结构包括样本垫、结合垫、缓冲垫、硝酸纤维素膜（包被膜）、吸水纸和PVC底板，其中样本垫用于过滤待测液；结合垫用于喷涂AIE纳米微球修饰的多种不同毒品抗体及DNP-BSA；缓冲垫用于延长外加待测液与结合垫上纳米微球的反应时间；硝酸纤维素膜（包被膜）用于包被不同的毒品完全抗原及DNP-pAb；吸水纸用于吸收未反应的纳米微球和待测液。各结构以样本垫为始，按层析方向，依次搭接固定于底板上；样本连接垫用于连接三张试纸条的样本垫，固定于三张试纸条样本垫上端。
进一步地，所述毒品测定检测卡内设有三张毒品检测试纸条，每一张试纸条的结合垫上喷涂有AIE纳米微球标记的1-3种毒品特异性单克隆抗体及DNP-BSA，硝酸纤维素膜（包被膜）上存在1-3条检测线，每一条检测线分别包被有一种毒品完全抗原，质控线包被有DNP-pAb。
进一步地，所述毒品测定检测卡内设有三张试纸条，硝酸纤维素膜（包被膜）从样本垫端至吸水纸端，依次是检测线、质控线，所述检测线之间以及与质控线的间隔是2-5mm，三张试纸条共存在3-9条检测线，且每条检测线所检测毒品项目皆不同。
进一步地，所述毒品测定检测卡的质控蛋白优选为DNP-BSA和DNP-pAb。
进一步地，所述毒品测定检测卡的毒品完全抗原为毒品分子和载体蛋白的偶联复合物，其中载体蛋白可以选择为牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)、兔血清白蛋白(RSA)中的一种或多种。
进一步优选地，所述毒品测定检测卡的毒品完全抗原为毒品分子和载体蛋白的偶联复合物，其中载体蛋白优选为牛血清白蛋白（BSA）。
一种毛发中多项毒品联合测定试剂，包括上述的毒品检测卡和样本处理液。
所述毒品测定试剂可实现毛发样本中吗啡、甲基安非他明、氯胺酮、可卡因、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺、四氢大麻酚和合成大麻素K2、K3、K4等1-9项毒品的单项或多项联合测定；所述毒品测定检测卡利用AIE纳米微球修饰检测抗体作为检测标记物；所述检测标记物包含吗啡、甲基安非他明、氯胺酮、可卡因、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺、四氢大麻酚和合成大麻素K2、K3、K4单克隆抗体等1-9种抗体；所述样本处理液可用于毛发样本的采集、处理。
上述的毒品检测试纸、毒品检测卡和毛发中多项毒品联合测定试剂在毒品检测中的应用。包括检测尿液、唾液、毛发等中的毒品。
本发明还公开了一种毒品测定试剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、抗体修饰：取AIE纳米微球，离心后使用偶联缓冲液进行重悬。加入EDC和NHS，加入纳米微球与加入EDC、NHS的质量比分别为1：1.5-6和1：3-18，室温下孵育0.5-1 h对微球进行活化。活化完毕，加入抗体进行偶联，加入纳米微球与加入抗体的质量比为100：1-50，混匀室温反应2-4 h进行偶联后离心，加入封闭缓冲液进行重悬，封闭缓冲液含质量浓度0.05%-2%的BSA，室温封闭1-2 h，离心，使用微球保存液重悬并保存，微球保存液含质量浓度0.2-1% BSA和质量浓度0.1-5%海藻糖。
S2、包被膜制备：用包被缓冲液分别对多种毒品完全抗原、DNP-pAb进行稀释并划线，其中包被缓冲液含质量浓度0.2-1% BSA、质量浓度0.5-5%海藻糖，每条检测线浓度均为0.5-2.0 mg/mL，划线用量均为0.5-1.0 μL/cm，质控线的划线浓度为0.5-1.0 mg/mL，划线用量为0.5-1.0 μL/cm，完成后将包被膜置于湿度≤35%，温度为30℃-50℃的烘箱中干燥16-48 h，干燥后密封室温储存备用；
S3、结合垫制备：对纳米微球修饰的检测抗体溶液和DNP-BSA溶液进行稀释，其中多种检测抗体溶液的体积浓度均为3-10%，DNP-BSA 的体积浓度为1%-10%，混匀，以3-7 µL/cm进行喷膜，30-50℃干燥16-48 h备用；
S4、样本垫制备：采用峰航喷金仪HGS510用样本垫处理液对样本垫进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：14-16mm；喷金仪喷涂参数为，喷量：8-10μL/cm，线条数量：4条，线条间距：3.3-3.5mm，其中样本垫处理液含质量浓度为0.1%-5%的海藻糖、质量浓度0.2%-1%的BSA、质量浓度0.01%-0.1% 吐温-20、质量浓度0.01%-0.1% 的SDS-L胶体金免疫层析优化剂、质量浓度0.01%-0.1% 的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、质量浓度0.5%-20%的NaCl、质量浓度0.05%-0.1%的Proclin 300，30-50℃烘干16-24 h备用；
S5、缓冲垫制备：采用峰航喷金仪HGS510用缓冲垫处理液对缓冲垫进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：9-11mm；喷金仪喷涂参数为，喷量：4-6μL/cm，线条数量：3条，线条间距：2.8-3.2mm，其中缓冲垫处理液含质量浓度为0.1%-5%的海藻糖、质量浓度0.2%-1%的BSA、质量浓度0.01%-0.1% 吐温-20、质量浓度0.01%-0.1% 的SDS-L胶体金免疫层析优化剂、质量浓度0.01%-0.1% 的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、质量浓度0.5%-20%的NaCl、质量浓度0.05%-0.1%的Proclin 300，30-50℃烘干16-24 h备用；
S6、样本连接垫制备：将玻璃纤维素膜裁切成特定尺寸；
S7、检测卡组装：将制备的样本垫、结合垫、缓冲垫、包被膜和吸水纸搭接粘贴于底板的相应位置上，并切成4 mm宽的试纸条，装入检测卡，再以特定尺寸的样本连接垫进行三张试纸条样本垫的连接，置于室温干燥环境下保存。
采用上述技术方案，本发明有益效果在于：
（1）本发明提供的一种毒品测定试剂，其采用光稳定性好的AIE荧光微球为标记原料以及含新型表面活性剂（SDS-L胶体金免疫层析优化剂、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱）垫处理液的喷金仪喷涂处理工艺，与常规垫处理液的浸泡工艺相比，具有显著改善层析过程微球释放效果差，不同批次间工艺差异小、产品性能更稳定等特点。
（2）本发明提供的一种毒品测定试剂，其检测灵敏度更高，如吗啡和甲基安非他明项目的最低检出限均为0.1ng/mg，均低于检测阈值0.2ng/mg。
（3）本发明提供的一种毒品测定试剂，具有结构简单，材料成本较低，操作简便等特点，只需三张检测试纸条、一次加样即可完成最多九项毒品的同时检测。
附图说明
图1为本发明所述检测卡的结构示意图。
图2为实施例9中吗啡企业参考品的线性检测结果分析图。
图3为实施例9中甲基安非他明企业参考品的线性检测结果分析图。
图4为实施例9中氯胺酮企业参考品的线性检测结果分析图。
图5为实施例9中可卡因企业参考品的线性检测结果分析图。
图6为实施例9中3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺企业参考品的线性检测结果分析图。
图7为实施例9中四氢大麻酚企业参考品的线性检测结果分析图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和特点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中所用的荧光微球均为粒径200 nm的羧基修饰的AIE荧光微球。
实施例1
图1为本发明所述检测卡的结构示意图（1是质控线，2是检测线一，3是检测线二，4是检测线三，5是加样孔，6是项目信息区）。
一种毛发中多项毒品联合测定试剂的制备
（1）聚集诱导发光荧光微球标记抗体的制备
取100 μL荧光微球溶液（固含量为1wt%）15000 rpm离心10 min，1 mL偶联缓冲液（0.02M pH =6.0的MES溶液）重悬。加入EDC和NHS，加入纳米微球与EDC、NHS的质量比分别为1:3和1:9，涡旋震荡后室温孵育30 min，15000 rpm离心10 min。加入1 mL偶联缓冲液重悬微球，加入吗啡抗体，纳米微球与抗体的质量比为100:20，混匀后室温反应4 h，12000 rpm离心10 min去除上清，加入1 mL封闭缓冲液（含质量浓度1%的BSA），混匀后室温反应2 h，用封闭缓冲液离心洗涤3次后，用1 mL保存液(0.02M pH =7.4的含1wt%BSA和5 wt %海藻糖的PBS溶液)重悬沉淀，将制备的微球修饰抗体溶液于2℃-8℃备用。
甲基安非他明抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:3；
氯胺酮抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:15；
可卡因抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:20；
四氢大麻酚抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
合成大麻素K2抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:15；
合成大麻素K3抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
合成大麻素K4抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
DNP-BSA修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:50。
（2）包被膜制备
用pH=7.4，0.02 M 的PBS包被缓冲液（含质量浓度0.2% BSA、质量浓度0.5%海藻糖）将吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原、合成大麻素K2、K3、K4完全抗原，DNP-pAb分别稀释后在硝酸纤维素膜上进行划线，检测线一、检测线二、检测线三有三种排布组合，组合一分别为吗啡完全抗原和甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原（本实施例组合一的三种抗原按顺序在三条硝酸纤维素膜上划线，下同），组合二分别为可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原，组合三分别为合成大麻素K2、K3、K4完全抗原，三种组合划线浓度均为1.0 mg/mL，划线用量均为1.0 μL/cm；质控线为DNP-pAb，划线浓度为0.5 mg/mL，划线用量为0.5 μL/cm，检测线间及检测线与质控线的间距均为4mm。完成后将包被膜置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（3）结合垫制备
将荧光微球标记的吗啡抗体溶液、甲基安非他明抗体溶液、氯胺酮抗体溶液和DNP-BSA溶液按照稀释浓度进行混合稀释，其体积浓度比例分别为6%、6%、6%、3%，将荧光微球标记的可卡因抗体、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体、四氢大麻酚抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、3%、3%，将荧光微球标记的合成大麻素K2抗体、合成大麻素K3、合成大麻素K4抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为6%、6%、6%、3%，混匀后分别用划膜喷金仪在12mm×300mm的玻璃纤维素膜上进行喷垫，参数为3μL/cm，完成后置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（4）样本垫制备
将聚酯纤维膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.2 wt %的海藻糖、0.3 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt % 的SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.05 wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、4 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300)进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：15mm；划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：8μL/cm，线条数量：4条，线条间距：3.3mm，50℃烘干16 h备用。
（5）缓冲垫制备
将玻璃纤维素膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.2 wt %的海藻糖、0.3 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.05 wt%的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、4 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300)进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：10mm，划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：4μL/cm，线条数量：3条，线条间距：3.0mm，50℃烘干16 h备用。
（6）检测卡组装
将干燥好的包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸依次粘贴于底板的相应位置（以包被膜作为分界线，样本垫、结合垫、缓冲垫在其同一侧，吸水纸在其另一侧），并压紧。组装完成后用切条机切成4 mm宽的试纸条，把三张试纸条按样品垫对准加样孔方向固定在装入检测卡中，再以5mm×18mm的样本连接垫（普通聚酯纤维膜）进行三张试纸条样本垫的连接。将检测卡装入干燥剂的铝箔袋中并封口，置于室温（10℃-30℃）环境下保存备用。
实施例2
一种毛发中多项毒品联合测定试剂的制备
（1）聚集诱导发光荧光微球修饰抗体的制备
取100μL荧光微球溶液（固含量为1wt%）15000 rpm离心10 min，1 mL偶联缓冲液（0.02M pH =6.0的MES溶液）重悬。加入EDC和NHS，加入纳米微球与EDC、NHS的质量比分别为1:3和1:9，涡旋震荡后室温孵育30 min，15000 rpm离心10 min。加入1 mL偶联缓冲液重悬微球，加入吗啡抗体，纳米微球与抗体的质量比为100:30，混匀后室温反应4 h，12000 rpm离心10 min去除上清，加入1 mL封闭缓冲液（含质量浓度1%的BSA），混匀后室温反应2 h，用封闭缓冲液离心洗涤3次后，用1 mL保存液(0.02M pH =7.4的含1 wt %BSA和5 wt %海藻糖的PBS溶液)重悬沉淀，将制备的微球修饰抗体溶液于2℃-8℃备用。
甲基安非他明抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:5；
氯胺酮抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:25；
可卡因抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:20；
四氢大麻酚抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
DNP-BSA修饰方案同上，纳米微球与抗体的质量比为100:50。
（2）包被膜制备
用pH=7.4，0.02 M 的PBS包被缓冲液（含质量浓度0.2% BSA、质量浓度0.5%海藻糖）将吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原、DNP-pAb分别稀释后在硝酸纤维素膜上进行划线，检测线一、检测线二有三种排布组合，组合一为吗啡完全抗原和甲基安非他明完全抗原，组合二为氯胺酮完全抗原和四氢大麻酚完全抗原，组合三为可卡因完全抗原和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原，划线浓度均为0.5 mg/mL，划线用量均为0.5 μL/cm；质控线为DNP-BSA，划线浓度为0.5 mg/mL，划线用量为0.5 μL/cm，检测线间及检测线与质控线的间距均为5mm。完成后将包被膜置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（3）结合垫制备
将荧光微球标记的吗啡抗体、甲基安非他明抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、5%，将荧光微球标记的氯胺酮抗体、四氢大麻酚抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、5%，将荧光微球标记的可卡因抗体、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、5%，混匀后分别用划膜喷金仪在12mm×300mm的玻璃纤维素膜上进行喷垫，参数均为4μL/cm，完成后置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（4）样本垫制备
将聚酯纤维膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.1 wt %的海藻糖、0.2 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.1 wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、5 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300)进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：15mm；划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：9μL/cm，线条数量：4条，线条间距：3.3mm，50℃烘干16 h备用。
（5）缓冲垫制备
将玻璃纤维素膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.1 wt %的海藻糖、0.2 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.1 wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、5%的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300) 进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：10mm；划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：5μL/cm，线条数量：3条，线条间距：3.0mm，50℃烘干16 h备用。
（6）检测卡组装
同实施例1中的步骤（6）。
实施例3
一种毛发中多项毒品联合测定试剂的制备
（1）聚集诱导发光荧光微球标记抗体的制备
取100μL荧光微球溶液（固含量为1wt%）15000 rpm离心10 min，1 mL偶联缓冲液（0.02M pH =6.0的MES溶液）重悬。加入EDC和NHS，加入纳米微球与EDC、NHS的质量比分别为1:3和1:9，涡旋震荡后室温孵育30 min，15000 rpm离心10 min。加入1 mL偶联缓冲液重悬微球，加入吗啡抗体，纳米微球与抗体的质量比为100:30，混匀后室温反应4 h，12000 rpm离心10 min去除上清，加入1 mL封闭缓冲液（含质量浓度1%的BSA），混匀后室温反应2 h，用封闭缓冲液离心洗涤3次后，用1 mL保存液(0.02M pH =7.4的含1 wt %BSA和5 wt %海藻糖的PBS溶液)重悬沉淀，将制备的微球修饰抗体溶液于2℃-8℃备用。
甲基安非他明抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:5；
氯胺酮抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:25；
可卡因抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
四氢大麻酚抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:5；
DNP-BSA修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:20。
（2）包被膜制备
用pH=7.4，0.02 M 的PBS包被缓冲液（含质量浓度0.2% BSA、质量浓度0.5%海藻糖）将吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原、DNP-pAb分别稀释后在硝酸纤维素膜上进行划线，检测线一、检测线二有三种排布组合，组合一为吗啡完全抗原和甲基安非他明完全抗原，组合二为氯胺酮完全抗原和四氢大麻酚完全抗原，组合三为可卡因完全抗原和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原，组合一的划线浓度均为0.5 mg/mL，划线用量均为0.5 μL/cm；组合二、组合三的划线浓度均为1.0 mg/mL，划线用量均为1.0 μL/cm；质控线为DNP-pAb，划线浓度为0.5 mg/mL，划线用量为0.5 μL/cm，检测线间及检测线与质控线的间距均为5mm。完成后将包被膜置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（3）结合垫制备
将荧光微球标记的吗啡抗体、甲基安非他明抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、3%，将荧光微球标记的氯胺酮抗体、四氢大麻酚抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、5%、3%，将荧光微球标记的可卡因抗体、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为5%、5%、3%，混匀后分别用划膜喷金仪在12mm×300mm的玻璃纤维素膜上进行喷垫，参数均为4μL/cm，完成后置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用。
（4）样本垫制备
将聚酯纤维膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.05 wt %的海藻糖、0.1 wt %的牛血清白蛋白、0.01 wt %的吐温-20、0.05 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.05 wt%的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、4 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300)以划膜喷金仪进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：15mm；划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：10μL/cm，线条数量：4条，线条间距：3.3mm，50℃烘干16 h备用。
（5）缓冲垫制备
将玻璃纤维素膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HC l(含0.05 wt %的海藻糖、0.1 wt %的牛血清白蛋白、0.01 wt %的吐温-20、0.05 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.05wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、4 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300) 以划膜喷金仪进行前处理，前处理包括裁切和划膜喷金仪喷涂；垫裁切宽度：10mm；划膜喷金仪喷涂参数为，喷量：6μL/cm，线条数量：3条，线条间距：3.0mm，50℃烘干16 h备用。
（6）检测卡组装
同实施例1中的步骤（6）。
实施例4
一种毛发中多项毒品联合测定试剂的制备
（1）聚集诱导发光荧光微球标记抗体的制备
取100μL荧光微球溶液（固含量为1wt%）15000 rpm离心10 min，1 mL偶联缓冲液（0.02M pH =6.0的MES溶液）重悬。加入EDC和NHS，加入纳米微球与EDC、NHS的质量比分别为1:3和1:9，涡旋震荡后室温孵育30 min，15000 rpm离心10 min。加入1 mL偶联缓冲液重悬微球，加入吗啡抗体，纳米微球与抗体的质量比为100:7，混匀后室温反应4 h，12000 rpm离心10 min去除上清，加入1 mL封闭缓冲液（含质量浓度1%的BSA），混匀后室温反应2 h，用封闭缓冲液离心洗涤3次后，用1 mL保存液(0.02M pH =7.4的含1 wt %BSA和5 wt %海藻糖的PBS溶液)重悬沉淀，将制备的微球修饰抗体溶液于2℃-8℃备用。
甲基安非他明抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:2；
氯胺酮抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
可卡因抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:5；
3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:10；
四氢大麻酚抗体修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:5；
DNP-BSA修饰方案同上，其中纳米微球与抗体的质量比为100:80；
（2）包被膜制备
用pH=7.4，0.02 M 的PBS包被缓冲液（含质量浓度0.2% BSA、质量浓度0.5%海藻糖）将吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原、DNP-pAb分别稀释后在硝酸纤维素膜上进行划线，检测线一、检测线二有三种排布组合，组合一为吗啡完全抗原和甲基安非他明完全抗原，组合二为氯胺酮完全抗原和四氢大麻酚完全抗原，组合三为可卡因完全抗原和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原，三种组合划线浓度均为0.5 mg/mL，划线用量均为0.5 μL/cm；质控线为DNP-pAb，划线浓度为0.5 mg/mL，划线用量为0.5 μL/cm，检测线间及检测线与质控线的间距均为5mm。完成后将包被膜置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用；
（3）结合垫制备
将荧光微球标记的吗啡抗体、甲基安非他明抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、1%，将荧光微球标记的氯胺酮抗体、四氢大麻酚抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、1%，将荧光微球标记的可卡因抗体、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺抗体和DNP-BSA按照稀释浓度进行稀释，其体积浓度比例分别为3%、3%、1%，混匀后分别用划膜喷金仪在12mm×300mm的玻璃纤维素膜上进行喷垫，参数均为4μL/cm，完成后置于湿度≤35%，温度为50℃的烘箱中干燥16 h，干燥后密封室温（10℃-30℃）储存备用；
（4）样本垫制备
同实施例1中的步骤（4）。
（5）样本垫制备
同实施例1中的步骤（5）。
（6）检测卡组装
同实施例1中的步骤（6）。
实施例5
一种毛发中多项毒品联合测定试剂的制备
（1）聚集诱导发光荧光微球修饰抗体的制备
同实施例2中的步骤（1）。
（2）包被膜制备
同实施例2中的步骤（2）。
（3）结合垫制备
同实施例2中的步骤（3）。
（4）样本垫制备
将聚酯纤维膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.1 wt %的海藻糖、0.2 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.1 wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、5 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300)进行4h的浸泡，50℃烘干16 h备用。
（5）缓冲垫制备
将玻璃纤维素膜用pH=7.4，0.02M 的Tris-HCl(含0.1 wt %的海藻糖、0.2 wt %的牛血清白蛋白、0.02 wt %的吐温-20、0.1 wt %的 SDS-L胶体金免疫层析优化剂、0.1 wt %的2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、5 wt %的NaCl、0.05 wt %的Proclin 300) 进行4h的浸泡，50℃烘干16 h备用；
（6）检测卡组装
同实施例2中的步骤（6）。
实施例6
毛发中多项毒品联合测定检测卡的标准曲线绘制
（1）多种毒品企业参考品的配制：分别取待检测毒品项目对应标准品使用样本处理液（20 mM的PB缓冲液、质量浓度0.85%的NaCl、质量浓度0.05%的Proclin 300 、质量浓度0.05% Tritonx-100，缓冲体系pH为7.4）进行梯度稀释，得到标准浓度溶液作为待测样本；
（2）开启干式免疫荧光分析仪；
（3）取85 μL待测样本滴加在实施例1-5制备的检测卡对应项目的加样孔中，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，反应8min，点击快速测试；
（4）对浓度和信号值绘制标准曲线，导入ID卡。
实施例7
毛发中多项毒品联合测定检测卡的标准曲线绘制
同实施例6，其样本处理液（20 mM的Tris-HCl缓冲液、质量浓度2%的NaCl、质量浓度0.05%的CaCl2、质量浓度0.05%的Proclin 300 、质量浓度0.05%吐温-20、质量浓度0.05%Tritonx-100，缓冲体系pH=8.0）。
实施例8
毛发中多种毒品及其代谢物含量测试
实现毛发中多种毒品含量的快速测定，其步骤如下：
（1）取约10 mg重量的毛发（发根端长度约3 cm），加入500 μL实施例5-6中所制备的样本处理液，以研磨仪研磨2分钟，静置取其上清液作为待测样本；
（2）开启干式免疫荧光分析仪，插入如实施例6中绘制的相关检测项目的ID卡，导入标准曲线；
（3）取85 μL待测样本滴加在实施例1-5所制备的检测卡对应项目的加样孔中，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，反应8min，点击快速测试；
（4）显示测试结果。
实施例9
毛发中多项毒品联合测定检测卡的性能验证，包括线性、检出限、重复性。
验证实施例2制备的检测卡的线性，其步骤如下：
（1）吗啡（MOP）和甲基安非他明（MET）企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的甲基安非他明和吗啡标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为20 ng/mg、10ng/mg、2ng/mg、0.5 ng/mg、0.2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（2）氯胺酮（KET）企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的氯胺酮标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为5 ng/mg、2ng/mg、1ng/mg、0.5 ng/mg、0.2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（3）可卡因(COC)和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的可卡因和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为20 ng/mg、10 ng/mg、5 ng/mg、2ng/mg、0.5 ng/mg、0.2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（4）四氢大麻酚(THC)企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的四氢大麻酚标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为1 ng/mg、0.5 ng/mg、0.25 ng/mg、0.125 ng/mg、0.05ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（5）开启干式免疫荧光分析仪；
（6）导入如实施例6所述所制得ID卡标准曲线；
（7）取85 μL待测样本滴加在实施例2制备的检测卡对应项目的加样孔中，各3个重复，反应8min，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，点击快速测试，测试结果如图2-7和表1-6所示：
表1 吗啡线性范围检测结果
表2 甲基安非他明线性范围检测结果
表3 氯胺酮线性范围检测结果
表4 可卡因线性范围检测结果
表5 3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺线性范围检测结果
表6 四氢大麻酚线性范围检测结果
根据检测结果可知，待检测的毛发样本中吗啡的浓度为0.2-20ng/mg，甲基安非他明的浓度为0.2-20ng/mg，氟胺酮的浓度为0.2-5ng/mg，可卡因的浓度为0.2-20ng/mg，3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺的浓度为0.2-10ng/mg，四氢大麻酚的浓度为0.05-1ng/mg的范围内，检测卡测试六个项目的线性相关系数r均≥0.9900。
验证实施例2制备的检测卡的检出限，其步骤如下：
（1）以样本处理液（20 mM的PB缓冲液、质量浓度0.85%的NaCl、质量浓度0.05%的Proclin 300 、质量浓度0.05% Tritonx-100，缓冲体系pH为7.4）作为待测样本；
（2）开启干式免疫荧光分析仪；
（3）导入如实施例6所述所制得ID卡标准曲线；
（4）取85 μL待测样本滴加在实施例2制备的检测卡对应项目的加样孔中，每个浓度水平样本共20个重复，反应8min，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，点击快速测试，测试结果如表7-12所示：
表7 吗啡检出限检测结果
表8 甲基安非他明检出限检测结果
表9 氯胺酮检出限检测结果
表10可卡因检出限检测结果
表11 3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺检出限检测结果
表12 四氢大麻酚检出限检测结果
根据检测结果可知，吗啡、甲基安非他明的检出限均≤0.02ng/mg，氯胺酮、可卡因、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺项目的检出限均＜0.2ng/mg，四氢大麻酚项目的检出限＜0.05ng/mg。
验证实施例2制备的检测卡的重复性，其步骤如下：
（1）吗啡(MOP)和甲基安非他明（MET）企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的甲基安非他明和吗啡标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为10 ng/mg、2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（2）氯胺酮（KET）企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的氯胺酮标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为2ng/mg、0.5 ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（3）可卡因(COC)和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的可卡因和3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为10 ng/mg、5 ng/mg、0.5 ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（4）四氢大麻酚（THC）企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的四氢大麻酚标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为0.5 ng/mg、0.125 ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（5）开启干式免疫荧光分析仪；
（6）导入如实施例6所述所制得ID卡标准曲线；
（7）取85 μL待测样本滴加在实施例2制备的检测卡对应项目的加样孔中，各10个重复，反应8min，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，点击快速测试，测试结果如表13-14所示：
表13吗啡、甲基安非他明、氯胺酮重复性检测结果（浓度值：ng/mg）
表14可卡因、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺、四氢大麻酚重复性检测结果（浓度值：ng/mg）
根据检测结果可知，吗啡、甲基安非他明、可卡因、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺项目的重复性CV均＜20%，氯胺酮项目的重复性CV＜15%，四氢大麻酚项目的重复性CV＜30%。
实施例10
毛发中多项毒品联合测定检测卡的垫处理液的喷金仪喷涂工艺与垫处理液的浸泡工艺的批间差性能测试
（1）分别按实施例2和实施例5制备3批检测卡；
（2）吗啡(MOP)和甲基安非他明（MET）企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的甲基安非他明和吗啡标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为10 ng/mg、2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（3）氯胺酮（KET）企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的氯胺酮标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为2ng/mg、0.5 ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（4）开启干式免疫荧光分析仪；
（5）导入如实施例6所述所制得ID卡标准曲线；
（6）取85 μL待测样本滴加在实施例2、实施例5制备的检测卡对应项目的加样孔中，每个实施例所制得三批试剂各10个重复，反应8min，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，点击快速测试。
实施例2所制三批试剂卡测试结果如表15-17所示：
表15实施例2所制三批试剂卡MOP项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
表16实施例2所制三批试剂卡MET项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
表17 实施例2所制三批试剂卡KET项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
实施例5所制三批试剂卡测试结果如表18-20所示：
表18 实施例5所制三批试剂卡MOP项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
表19 实施例5所制三批试剂卡MET项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
表20实施例5所制三批试剂卡KET项目批间差检测结果（浓度值：ng/mg）
根据检测结果可知，抽检三个毒品检测项目，实施例2（垫处理液的喷金仪喷涂工艺）批间差性能测试结果为吗啡的批间差CV＜20%，氯胺酮、甲基安非他明项目的批间差CV均＜15%；实施例5（垫处理液的浸泡工艺）批间差性能测试结果为吗啡、甲基安非他明的批间差CV均＜25%，氯胺酮项目的批间差CV＜20%；可知垫处理液的喷金仪喷涂工艺与垫处理液的浸泡工艺相比，不同批次间工艺差异较小。
实施例11
毛发中多项毒品联合测定检测卡的加速稳定性验证。
验证实施例2制备的检测卡的加速稳定性，其步骤如下：
（1）吗啡（MOP）和甲基安非他明（MET）企业参考品的配制：分别取定值为1 μg /mL的甲基安非他明和吗啡标准品充分混合，使用样本处理液稀释成浓度分别为20 ng/mg、2ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（2）氯胺酮（KET）企业参考品的配制：取定值为1 μg /mL的氯胺酮标准品，使用样本处理液稀释成浓度分别为2ng/mg、0.5 ng/mg的标准浓度溶液作为待测样本；
（3）将实施例2制备的试剂卡分别放置于50℃烘箱与室温环境，分别于第0天、第10天、第20天、第40天、第60天各取出适量的试剂卡进行测试；
（4）开启干式免疫荧光分析仪；
（5）导入如实施例6所述所制得ID卡标准曲线；
（6）取85 μL待测样本滴加在实施例2制备的检测卡对应项目的加样孔中，各3个重复，反应8min，将检测卡插入干式免疫荧光分析仪中，点击快速测试，测试结果如表21-23所示：
表21 实施例2所制试剂卡MOP项目加速稳定性检测结果
表22 实施例2所制试剂卡MET项目加速稳定性检测结果
表23 实施例2所制试剂卡KET项目加速稳定性检测结果
根据检测结果可知，实施例2所制试剂卡的加速稳定性测试结果吗啡、甲基安非他明、氯胺酮项目在50℃加速0-60天内的相对偏差均在±20%范围内，根据Arrhenius模型及医疗器械加速老化实验确定有效期的基本原则和方法，表明试剂可室温保存两年，稳定性较好。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种毒品检测试纸，其特征在于，包括包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸；所述缓冲垫和样本垫通过使用喷金仪喷涂含吐温-20、SDS-L胶体金免疫层析优化剂、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的缓冲溶液得到。
2.根据权利要求1所述的毒品检测试纸，其特征在于，所述缓冲溶液中吐温-20、SDS-L胶体金免疫层析优化剂、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的质量百分含量分别为0.01%-0.1%、0.01%-0.1%、0.01%-0.1%。
3.根据权利要求1所述的毒品检测试纸，其特征在于，所述缓冲垫的喷金仪喷涂参数为：喷量：4-6μL/cm，线条数量：3-4条，线条间距：2.8-3.2mm；
所述样本垫的喷金仪喷涂参数为：喷量：8-10μL/cm，线条数量：4-5条，线条间距：3.3-3.5mm。
4.根据权利要求1所述的毒品检测试纸，其特征在于，所述缓冲溶液中的缓冲对为PB、Tris-HCl中的一种；所述缓冲溶液中缓冲对的浓度为0.01-0.03M；
所述缓冲溶液还包括糖、封闭剂、盐、防腐剂；所述缓冲溶液中糖、封闭剂、盐、防腐剂的质量百分含量分别为0.1%-5%、0.2%-1%、0.5%-20%、0.05%-0.1%；所述盐为氯化镁、氯化钙、氯化钠、磷酸钙中的一种或多种；所述糖为蔗糖、海藻糖中的一种或多种；所述封闭剂为BSA；所述防腐剂为Proclin 300。
5.根据权利要求1所述的毒品检测试纸，其特征在于，所述样本垫、缓冲垫的材质分别为聚酯纤维或玻璃纤维的一种；
所述喷金仪喷涂后烘干处理，烘干温度为30-50℃，时间为16-48h。
6.根据权利要求1所述的毒品检测试纸，其特征在于，所述包被膜具有1-3条不同的毒品完全抗原检测线和1条DNP-pAb质控线；所述毒品完全抗原检测线包被有吗啡完全抗原、甲基安非他明完全抗原、氯胺酮完全抗原、可卡因完全抗原、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺完全抗原、四氢大麻酚完全抗原和合成大麻素K2、K3、K4完全抗原中的一种；
所述包被膜的材质为硝酸纤维素膜；所述检测线的间隔以及与质控线的间隔均为2-5mm；所述结合垫上喷涂有AIE纳米微球标记的毒品特异性单克隆抗体及DNP-BSA，所述毒品特异性单克隆抗体与包被膜中检测线的毒品完全抗原对应。
7.权利要求1-6任一项所述的毒品检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
分别制备包被膜、缓冲垫、结合垫、样本垫和吸水纸；组装后得到毒品检测试纸。
8.一种毒品检测卡，其特征在于，包括至少一条权利要求1-6任一项所述的毒品检测试纸；当所述的毒品检测试纸为两条以上时，毒品检测试纸的样本垫通过样本连接垫连接。
9.一种毛发中多项毒品联合测定试剂，其特征在于，包括权利要求8所述的毒品检测卡和样本处理液。
10.权利要求1-6任一项所述的毒品检测试纸、权利要求8所述的毒品检测卡或权利要求9所述的毛发中多项毒品联合测定试剂在毒品检测中的应用。
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