CN205049575U - 一种降钙素原（pct）定量检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型专利公开了一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒，包括检测缓冲液、检测板和ID芯片，其特征是：所述检测缓冲液为荧光染料标记的PCT单克隆抗体；检测板包括外包装板块和试纸条；外包装板块分为加样区、反应区和吸水区；试纸条为多层膜结构且包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体。检测时用荧光免疫定量分析仪对结果进行定量检测，具有检测灵敏度高，准确性好等优点。

Description

一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及检测试剂盒，具体涉及一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒。

背景技术

目前，PCT的检测方法较多，不仅可以定性亦可以做到定量检测。常用的方法有下述几种：放射免疫分析法、化学发光法、电化学发光法、透射免疫浊度法、干式免疫荧光法及胶体金比色法。

放射免疫分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。该法检测耗时长（19～22h），而且有放射性元素的污染，使用受到限制。化学发光法（ILMA）运用双单克隆抗体（降钙素原抗体和抗降钙素原抗体），分别与PCT分子结合，可排除交叉反应。但该方法操作费时，操作人员必须具备专门的操作技能，2h后才可以出结果。电化学发光法灵敏度高、线性范围宽、适用面广，但电化学发光法测定需要专门的仪器及配套试剂，且多为进口，成本较为昂贵，在基层实验室很难开展。透射免疫浊度法是将样品中的PCT与试剂中的PCT单克隆抗体发生抗原-抗体反应，使反应液浊度增加，并在一定范围内反应液浊度与所加入抗原的量呈线性关系。但该方法准确度低。干式免疫荧光法运用免疫层析技术，将荧光标记的降钙素原单克隆抗体包被于试纸条上，检测样本与试纸条上的标记抗体混合，根据荧光抗体的信号强度测量降钙素原的含量。此方法制备简单，操作成本低，但由于标记抗体与抗原的结合为固相反应，使其反应不够充分，活性较差，影响检测结果。胶体金比色法采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗降钙素原的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素原多克隆抗体，当标本（血清或血浆）加入标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。该法具有快速简便，易观察的特点，但无法准确测定PCT含量。

发明内容

本实用新型所要解决的技术问题是提供一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒。

本实用新型是通过以下技术方案实现的：一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒，包括检测缓冲液、检测板和ID芯片，其特征是：所述检测缓冲液为荧光染料标记的PCT单克隆抗体；所述检测板包括外包装板块和试纸条；外包装板块分为加样区、反应区和吸水区；所述试纸条为多层膜结构且包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体。

进一步的，所述试纸条的多层膜结构包括底板，以及在底板上依次搭接地粘贴玻璃纤维、固相抗体反应膜和上端吸水纸；所述多层膜的各层膜之间紧密相连且至少部分重叠。

进一步的，加样区对应试纸条的玻璃纤维；反应区对应试纸条的固相抗体反应膜；为硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线；所述检测线包被与标记抗体配对的PCT单克隆抗体；所述质控线包被羊抗鼠抗体；吸水区对应试纸条的上端吸水纸。

该实用新型的有益之处是，本实用新型检测原理应用免疫荧光双抗体夹心法，检测缓冲液中含有荧光染料标记的PCT单克隆抗体，试纸条的检测线包被与标记抗体配对的PCT单克隆抗体，标记抗体与包被抗体为协同抗体，能与抗原的多个位点结合，形成双抗体夹心复合物，配对抗体与样本中的抗原紧密的结合在一起，可排除因检测样本中各种各样蛋白质的非特异性吸附产生的干扰，所形成的双抗体夹心免疫复合物稳定性好，具有灵敏度高，特异性强等优点。并且检测缓冲液中以新型荧光染料替代传统的胶体金、量子点和荧光颗粒，进一步提高了检测的灵敏度和准确性。为临床诊断提供了可靠的依据。本实用新型以液相反应取代固相反应，与传统的试纸条检测方法相比，液相反应具有材料混合均一，稳定性好，反应活性高等优势，增加检测结果的准确性。综上所述，本实用新型具有检测灵敏度高，准确性好，可定量检测等优点。

附图说明

图1是本实用新型实施例的试纸条与外包装板块的整体结构示意图；

图2是本实用新型实施例的试纸条与外包装板块的装配图。

图中，1玻璃纤维，2硝酸纤维素膜，3上端吸水纸，4底板，5检测线，6质控线，7试纸条，8加样区，9反应区，10吸水区，11外包装板块。

具体实施方式

下面，结合附图以及具体实施方式，对本实用新型做进一步描述：

本实用新型提供了一种可定量检测降钙素原的试剂盒，其利用具有优良特性的新型荧光染料作为标记物，结合免疫荧光双抗体夹心法，实现血清、血浆的降钙素原的检测。

如图1所示，一种降钙素原（PCT）定量检测试剂盒，包括检测缓冲液、检测板和ID芯片。所述检测缓冲液为荧光染料标记的PCT单克隆抗体；所述检测板包括外包装板块11和试纸条7；外包装板块11分为加样区8、反应区9和吸水区10；所述试纸条7为多层膜结构且包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体。所述ID芯片已确定好了线性，由该试剂盒配套的免疫荧光定量分析仪检测系列质控品得到。

本实用新型检测降钙素原的检测板呈长条状，包括外包装板块11，以及设置与外包装板块11内部的试纸条7。

所述试纸条7包括底板4以及依次搭接地粘贴于底板4上的玻璃纤维1、硝酸纤维素膜2和上端吸水纸3等各层膜结构，各层之间紧密相连且部分重叠。

底板4为低荧光特性，承载前述各种膜结构，其根据试纸条7的形状对应裁剪而成，如本实施例为长条形。

玻璃纤维1为待检样品收集区，其前端搭接粘贴于底板4前端上，后端搭接覆盖于硝酸纤维素膜2前端。

硝酸纤维素膜2是一种低荧光特性膜，该膜上划设有两条平行带5、6，两平行带5、6沿硝酸纤维素膜2的宽度方向设置并间隔一定距离，且具有一定深度。硝酸纤维素膜2的前端搭设于玻璃纤维1与底板4上端吸水纸3之间且搭接粘贴于底板4上。

硝酸纤维素膜2包含一条包被有PCT单克隆抗体的检测线5和一条包被有羊抗鼠抗体的质控线6。该检测线5和质控线6分别为对应包被在硝酸纤维素膜2的两条平行带。

上端吸水纸3对应板块的吸水区，其前端覆盖于硝酸纤维素膜2后端一定长度，其后端搭接于底板4后端。

本实用新型检测板是将试纸条7组装于外包装板块11中而构成，试纸条7与外包装板块下面板块的槽形状适配。包装后，外包装板块上面板块设置的加样区8对应于试纸条7的玻璃纤维1，反应区9对应于试纸条7的硝酸纤维素膜2，吸水区10对应于试纸条7的上端吸水纸3。

本实用新型还包括ID芯片、检测缓冲液和配备的免疫荧光定量分析仪。

使用过程中将ID芯片插入到仪器中，用移液器吸取血清或血浆加入到检测缓冲液中并充分混匀。吸取样本混合液加入到检测板的加样区孔内，室温放置15分钟。将检测板插入到免疫荧光分析仪的样本槽中，按“检测”键，从免疫荧光分析仪的显示屏幕上可读取数据。

本实用新型工作原理为缓冲液中荧光标记的PCT抗体和血液中的PCT抗原结合形成抗原抗体复合物，当混合样本加到检测板样品孔内后，复合物通过层析作用扩散到硝酸纤维素膜的检测线上，并被检测线上的与标记抗体配对的PCT抗体所捕获。因此血液样本中PCT含量越高，检测线上复合物积累量越多。荧光抗体的信号反映了被捕获的PCT数量。

由于PCT的浓度由荧光抗体的信号强度决定，因此检测缓冲液中的PCT单克隆抗体在整个检测过程中起着非常重要的作用，它既能与荧光染料结合，又能与PCT抗原结合。PCT单克隆抗体与PCT抗原的结合是自发的过程；而PCT单克隆抗体与荧光染料的结合则是一项人为的非常关键的操作。该产品制备过程中一个重要的环节就是荧光染料标记PCT单克隆抗体。标记荧光染料的PCT单克隆抗体要求性能稳定，溶于缓冲液后无沉淀。

作为传播信号的荧光染料是本实用新型定量检测的重点。荧光染料的量子产量、稳定性等都会影响产品的最终结果。本实用新型所述检测缓冲液中，经筛选后采用的荧光染料具有较强的耐光性，不易淬灭，可稳定2年；且荧光量子产量高，易与被标记的抗体结合而不影响被标记物的特异性；水溶性好，同时最大限度的提高了信噪比。

本实用新型采用PCT协同抗体，表现为检测缓冲液中荧光染料标记的PCT单克隆抗体和检测板中与标记抗体配对的PCT单克隆抗体，上述PCT协同抗体与样本中PCT抗原的不同位点结合形成双抗体夹心复合物，从而检测出样本中PCT的含量。本实用新型中的PCT协同抗体，整合了单抗和多抗的优势，不仅具有“生物导弹”能目标明确的与单一特异抗原决定簇结合的作用，还具有多克隆抗体可识别多个抗原表位的特点，使荧光标记的抗体和与其配对的抗体与样本中的抗原紧密的结合在一起，可排除因检测样本中各种各样蛋白质的非特异性吸附产生的干扰，所形成的双抗体夹心免疫复合物稳定性好，具有灵敏度高，特异性强等优点。

所述加样区选用材料为玻璃纤维。

本实用新型中，反应区的固相抗体反应膜承载了产品的毛细管运动，选择合适的固相抗体反应膜对提高产品的灵敏度起着重要的作用。本实用新型所述固相抗体反应膜为硝酸纤维素膜。

本实用新型所述吸水区是一种具有吸收功能的材料，优选为上端吸水纸。

本实用新型所述底板支持加样区、反应区和吸水区粘贴固定。将合格试条装配于检测板中。

本实用新型以新型荧光染料替代传统的胶体金、量子点和荧光颗粒，大大提高了检测的灵敏度和准确性，与传统的胶体金、量子点和荧光颗粒方法相比，本实用新型所述试剂盒不仅可以定量检测，而且价格低廉，为临床诊断提供了可靠的依据。

本实用新型采用PCT协同抗体，它们与样本中PCT抗原特异性结合，取代PCT单抗和多抗与PCT抗原的结合，整合了单抗和多抗的优势，所形成的双抗体夹心免疫复合物稳定性好，其独有的特异性提高了该产品检测降钙素原的灵敏度，实现血清、血浆中降钙素原的荧光定量检测。在细菌及病毒感染的鉴别诊断，脓毒症的检测以及指导抗生素的使用等方面有重要的临床应用价值。

本实用新型以液相反应取代固相反应，应用检测缓冲液中荧光染料标记的PCT单克隆抗体与样本中的PCT抗原进行混合，与传统的试纸条检测方法相比，液相反应具有材料混合均一，稳定性好，反应活性高等优势，增加检测结果的准确性。

Claims (3)

1.一种降钙素原PCT定量检测试剂盒，包括检测缓冲液、检测板和ID芯片，其特征是：所述检测缓冲液为荧光染料标记的PCT单克隆抗体；所述检测板包括外包装板块（11）和试纸条（7）；所述包装板块（11）分为加样区（8）、反应区（9）和吸水区（10）；所述试纸条（7）为多层膜结构且包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体。

2.如权利要求1所述的一种降钙素原PCT定量检测试剂盒，其特征在于：所述试纸条（7）的多层膜结构包括底板（4），以及在底板（4）上依次搭接地粘贴玻璃纤维（1）、固相抗体反应膜和上端吸水纸（3）；所述多层膜的各层膜之间紧密相连且至少部分重叠。

3.根据权利要求2所述的一种降钙素原PCT定量检测试剂盒，其特征在于：所述加样区（8）对应试纸条（7）的玻璃纤维（1）；

所述反应区（9）对应试纸条（7）的固相抗体反应膜；为硝酸纤维素膜（2）上包被检测线（5）和质控线（6）；所述检测线（5）包被与标记抗体配对的PCT单克隆抗体；所述质控线（6）包被羊抗鼠抗体；

所述吸水区（10）对应试纸条（7）的上端吸水纸（3）。