CN107936070B - 具有sirt 1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法，本发明中所述的具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物，其能够很好的抑制SIRT 1的活性，适宜作为标准品及药物开发用；其中所述的提取方法具有较高的收率，成本低、耗时短，操作简便，且所得产品纯度高。

Description

具有SIRT 1抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法。
背景技术
组蛋白去乙酰化是一种重要的组蛋白共价修饰方式，在基因表达中起着非常重要的调控作用，组蛋白去乙酰化主要由组蛋白去乙酰化酶催化完成。SIRT 1（silentinformation regulator 1）相关蛋白（sirtuins）家族是一组高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的组蛋白去乙酰化酶，广泛存在于从低等生物到人类的各物种中。SIRT1主要定位于细胞核中，具有较高的NAD+ 依赖的组蛋白去乙酰化酶活性，通过对组蛋白及多种非组蛋白底物的去乙酰化修饰，调节底物的乙酰化水平和活性，从而参与基因表达调控、细胞凋亡、分化等诸多生理过程，进而影响肿瘤等疾病的发生发展。特异性的SIRT 1抑制剂作为潜在的药物来源已经引起愈来愈多科学家的关注。近年来，多种不同结构的小分子sirtuin抑制剂被发现或合成，并已有部分小分子抑制剂进入临床研究阶段。
花椒为芸香科（Rutaceae）花椒属（Zanthoxy lum L）植物花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim.）或青椒（Zanthoxylum schinifolium Sieb. et Zucc.）的干燥成熟果皮，是十三种调味料之首，既可食用，又可入药。秋季采收，晒干，除去种子和杂质。我国花椒种质资源十分丰富，花椒产量居世界第一，应用广泛。花椒的化学成分主要有挥发油、生物碱、酰胺、脂肪酸、木脂素和香豆素等，具有多种生理功能。花椒中含有糖苷类化合物，该类化合物具有潜在的SIRT 1抑制活性，故本发明以花椒为主要研究对象，进行糖苷类化合物的发现和SIRT 1抑制活性筛选。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物及其制备方法。
为了满足上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物，其特征在于具有结构通式如下：
Figure 200329DEST_PATH_IMAGE002
其中R选自以下基团：
Figure 304420DEST_PATH_IMAGE003
Figure 84157DEST_PATH_IMAGE004
Figure 479367DEST_PATH_IMAGE005
Figure 231422DEST_PATH_IMAGE006
Figure 53884DEST_PATH_IMAGE007
Figure 320918DEST_PATH_IMAGE008
Figure 208233DEST_PATH_IMAGE009
Figure 877112DEST_PATH_IMAGE010
Figure 870476DEST_PATH_IMAGE012
其中基团R1选自以下基团：
Figure 562488DEST_PATH_IMAGE014
其中基团R2和R3各自独立的为以下基团：H、OH、OCH3；
其中基团R4选自以下基团：H、甲基、乙基、丙基；
其中化合物(e)、(f)、(g)中，6位和9位的绝对构型各自独立的为：（6R, 9R）、（6R,9S）、（6S, 9R）、（6S, 9S）。
优选的，一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物的制备方法，其具体步骤如下：
1）将花椒用提取溶剂进行提取，所述花椒和提取溶剂的质量比为1:3-20，得提取液，再浓缩提取液至无有机溶剂，得到总浸膏A；
2）将总浸膏A溶于水，再利用D101大孔吸附树脂柱层析，或者利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得到不同的浸膏组分；利用D101大孔吸附树脂柱层析，得到的五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；利用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取，得到四个不同的浸膏组分G（石油醚相）、H（乙酸乙酯相）、I（正丁醇相）和J（水相）；
3）D101大孔吸附树脂柱层析所得浸膏组分B、C、D、E、F和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取所得浸膏组分G、H、I、J分别进行液质联用仪（HPLC-MS/MS或UPLC-MS/MS）分析，寻找糖苷类化合物所在部位，实验发现浸膏组分C和I为糖苷类化合物部位，且化合物类型相同，对浸膏组分C和I进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实C和I均具有SIRT 1 抑制活性；
4）对浸膏组分C或者I进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂洗脱，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用薄板层析色谱（TLC）定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6或者I-1～I-6；
5）对浸膏C-1～C-6或者I-1～I-6进行制备HPLC分离纯化，得到活性化合物，通过核磁共振谱（NMR谱），确定活性化合物的结构。
优选的，所述步骤1）中的提取溶剂为水、甲醇/ 水的混合溶液或者乙醇/ 水混合溶液，所述甲醇的体积百分数为0-100%，所述乙醇的体积百分数为0-100%。
优选的，所述步骤1）中的提取方法有室温冷浸提取、加热回流提取、渗漏提取或超声提取。
优选的，所述步骤2）中的利用D101大孔吸附树脂柱层析，所用实验条件为用乙醇/水混合溶液或甲醇/ 水混合溶液为洗脱溶剂梯度洗脱，梯度洗脱溶剂体积比为水、30%、60%、80%、100%，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积为3-6倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个浸膏组分。
优选的，所述步骤2）中利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，所用实验方法为总浸膏A溶于水后，用等体积的石油醚萃取三次，合并石油醚萃取液，浓缩，得到石油醚相，用同样的方法分别进行乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯相和正丁醇相，水相浓缩得到水相。
优选的，所述提取方法室温冷浸提取每次需要将花椒在提取溶剂中浸泡5-9天，浸提次数为1-4次；所述提取方法加热回流提取的加热温度为30-100℃，每次提取10-300分钟，提取次数为1-4次，所述提取方法渗漏提取需要将花椒在提取溶剂中浸泡6-24h，再置于渗漏装备；所述提取方法超声提取的提取温度为30-100℃，频率为20-100Hz，功率为70-1000W，每次提取0.1-2.0小时，提取次数为1-4次。
优选的，所述步骤3）中UPLC-MS/MS分析所用色谱柱为Waters ACQUITY UPLC®HSS C18 column (2.1×50 mm, 1.8 μm)；HPLC-MS/MS分析所用色谱柱为Hanban Sci &Tech Megres C18 column (4.6 ×250 mm, 5μm)；流动相为乙腈:0.5%冰醋酸水=A:B；乙腈: 0.5%冰醋酸水的洗脱比例：1-20min，A 2-15%；20-24min，A 15-50%；24-28 min，A 50-70%；28-32 min，A70-92%；流速为0.3 mL/ min，进样体积：2μL，检测器：PDA，检测波长：275nm，离子源：电喷雾离子源。
优选的，所述步骤4）中硅胶柱层析所用洗脱剂氯仿-甲醇中氯仿与甲醇的体积比为30:1～1:3。
优选的，所述步骤5）中制备HPLC分离所用色谱柱为半制备Benetnach C18柱（Hanban Sci & Tech, 10.0×250 mm, 10μm），流动相为甲醇-水，甲醇与水的洗脱比例为1:20～1:1，流速为2～5 mL/ min，进样体积：1-100 μL，检测器：紫外检测器，检测波长：208nm和254 nm。
本发明的有益效果为：
1、在癌症的发生发展方面，SIRT 1主要通过调节p53基因（p53基因是人体抑癌基因）进而调节癌症的发生发展过程，SIRT 1抑制剂被应用于多种癌症研究，如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、慢性骨髓性白血病、肺癌等。具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物组分的发现及其制备方法的研究，为癌症的治疗提供了一种研究思路，为抗癌药物的研制提供了物质基础。
2、本研究方法运用HPLC-MS/MS或UPLC-MS/MS指导研究工作，实现糖苷类化合物的快速发现，节省了时间和溶剂、试剂，提高了效率。运用TLC指导研究工作，合并相同组分，提供了分离效率。
3、半制备HPLC分离纯化样品，制备单体化合物，获得高纯度（99%以上）的化合物，确定了糖苷类化合物组分的化合物类型和结构，为新药研发提供了物质基础和标准物质。
附图说明
图1为化合物1的化学式；
图2为化合物2的化学式；
图3为化合物3的化学式；
图4为化合物4的化学式；
图5为化合物5的化学式；
图6为化合物6的化学式；
图7为化合物7的化学式；
图8为化合物8的化学式；
图9为化合物9的化学式；
图10为化合物10的化学式；
图11为化合物11的化学式；
图12为化合物12的化学式；
图13为化合物13的化学式；
图14为化合物14的化学式。
具体实施方式
实施例1：糖苷类化合物组分制备方法及组分中活性成分1、2和3的分离鉴定方法，化学式如图1、2和3所示。
1）将花椒用70%的乙醇/ 水混合溶液用室温冷浸提取3次，每次5天，合并提取液，减压浓缩至无乙醇味，得总浸膏A；
2）将总浸膏A溶于水后，进行D101大孔吸附树脂柱层析，用乙醇/ 水混合溶液为洗脱溶剂梯度洗脱，洗脱溶剂体积比为水、30%、60%、80%、100%，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积均为3倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；
3）浸膏组分B、C、D、E、F分别进行UPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位。实验发现，浸膏组分C为糖苷类化合物部位。
4）对浸膏组分B、C、D、E和F进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实C具有较好的SIRT 1 抑制活性。
5）对浸膏组分C进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6；
6）对浸膏C-2进行制备HPLC分离纯化，C-2（75 mg）经半制备HPLC分离（12%甲醇-水，Benetnach C18柱）分离，得到三个组份：C-2-1—C-2-3，C-2-1经半制备HPLC（8%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物1；C-2-2经半制备HPLC（12%甲醇-水，BenetnachC18柱）纯化，得到化合物2；C-2-3经半制备HPLC（12%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物3。经核磁共振波谱解析确定化合物1、2和3的结构，数据如下：
化合物1：分子式：C12H16O7；分子量272；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 4.73(d, J = 7.2 Hz, H-1′), 6.69 (2H, dd, J = 6.8, 2.4 Hz, H-3, H-5), 6.96 (2H,dd, J = 6.8, 2.4 Hz, H-2, H-6), 4.73 (d, J = 7.2 Hz, H-1'), 3.41 (d, J = 7.2Hz, H-2'), 3.36 (m, H-3'), 3.41 (m, H-4'), 3.36 (m, H-5'), 3.88 (d, J = 12.0Hz, H-6'a), 3.70 (dd, J = 12.0, 4.8 Hz, H-6'b)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm:152.4 (C-1), 116.6 (C-2, C-6), 119.4 (C-3, C-5) , 153.8 (C-4), 103.0 (C-1′),75.0 (C-2′), 78.0 (C-3′, C-5′), 71.4 (C-4′), 62.5 (C-6′)。
化合物2：分子式：C14H20O8；分子量316；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 7.10(d, J = 8.0 Hz, H-6), 6.72 (d, J = 2.0 Hz, H-3), 6.64 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz,H-5), 4. 69 (d, J = 7.2 Hz, H-1'), 3. 88 (dd, J = 12.8, 1.6 Hz, H-6'a), 3. 70(dd, J = 12.8, 4.8 Hz, H-6'b), 3.45 (2H, dd, J = 7.2, 6.0 Hz, H-2', 3'), 3.39(2H, m, H-4', 5'), 2.70 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 3.69 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-8)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 62.5 (C-6′), 71.4 (C-4′), 75.0 (C-2′), 78.0(C-3′, C-5′), 103.0 (C-1′), 145.3 (C-1), 148.4 (C-2), 117.7 (C-3), 136.2 (C-4), 121.4 (C-5), 119.1 (C-6), 39.7 (C-7), 64.3 (C-8)。
化合物3：分子式：C13H18O7；分子量286；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 6.41(s, H-2), 6.35 (s, H-4), 6.28 (s, H-6), 6.28 (s, H-6), 2.21 (3H, s, H3-7),4.84 (d, J = 7.2 Hz, H-1'), 3.33 (m, H-2'), 3.65 (m, H-3'), 3.25 (m, H-4'),3.33 (m, H-5'), 3.90 (dd, J = 12.0, 1.2 Hz, H-6'a), 3.70 (dd, J = 12.0, 5.2Hz, H-6'b); 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 160.1 (C-1), 102.2 (C-2), 159.2 (C-3), 109.7 (C-4), 141.2 (C-5), 111.2 (C-6), 21.6 (C-7), 102.2 (C-1'), 74.9 (C-2') , 78.1 (C-3') , 71.4 (C-4') , 78.0 (C-5') , 62.5 (C-6')。
实施例2：糖苷类化合物组分制备方法及组分中活性成分4、5、6和7的分离鉴定方法，化学式如图4、5、6和7所示。
1）将花椒用70%的甲醇/ 水混合溶液室温加热回流提取3次，每次加热温度为80℃，提取2.0小时，合并提取液，减压浓缩至无甲醇味，得总浸膏A；
2）将总浸膏A溶于水后，进行D101大孔吸附树脂柱层析，用甲醇/ 水混合溶液为洗脱溶剂梯度洗脱，洗脱溶剂体积比为水、30%、60%、80%、100%，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积均为3倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；
3）浸膏组分B、C、D、E、F分别进行HPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位。实验发现，浸膏组分C为糖苷类化合物部位。
4）对浸膏组分B、C、D、E和F进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实C具有较好的SIRT 1 抑制活性。
5）对浸膏组分C进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6；
6）对浸膏C-3进行制备HPLC分离纯化，C-3（100 mg）经半制备HPLC分离（45%甲醇-水，Benetnach C18柱）分离，得到三个组份：C-3-1—C-3-3，C-3-1经半制备HPLC（40%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物4；C-3-2经半制备HPLC（40%甲醇-水，BenetnachC18柱）纯化，得到化合物5和6；C-3-3经半制备HPLC（40%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物7。经核磁共振波谱解析确定化合物4、5、6和7的结构，数据如下：
化合物4：分子式：C18H26O7；分子量354；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 6.52(2H, s, H-3, 5), 5.94 (m, H-8), 4.90 (d, J = 17.2 Hz, H-9a),4.80 (d, J = 7.6Hz, H-1'), 3.81 (6H, s, 2,4-OMe), 3.33 (2H, d, J =7.2 Hz, H=7), 3.39 (m, H-2'), 3.47 (m, H-3'), 3.20 (m, H-4'), 3.39 (m, H-5'), 3.78 (dd, J =12.4, 1.6Hz, H-6'a), 3.66 (dd, J = 12.0, 4.8 Hz, H-6'b)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm:154.2 (C-2, 6), 138.7 (C-1), 138.4 (C-4), 134.7 (C-8), 116.2 (C-9), 107.5 (C-3, 5), 105.6 (C-1'), 78.3 (C-3'), 77.8 (C-5'), 75.7 (C-2'), 71.3 (C-4'), 62.6(C-6'), 57.0 (1,3-OMe), 41.4 (C-7)。
化合物5：分子式：C17H24O6；分子量324；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 3.29–3.49 (6H, m, H2-7, 2', 3', 4', 5'), 3.66 (dd, J = 12.2, 4.0 Hz, H-6a'), 3.84(3H, s, H3-10), 3.85 (d, J = 12.0 Hz, H-6b'), 4.80 (m Hz, H-1'), 5.02 (br d,J = 9.2 Hz, H-9a), 5.06 (dd, J = 15.6, 1.2 Hz, H-9b), 5.94 (m, H-8), 6.71(dd, J = 8.0, 1.6 Hz, H-5), 6.81 (d, J = 1.6 Hz, H-3), 7.06 (d, J = 8.0 Hz,H-6)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 150.8 (C-2), 146.3 (C-1), 139.0 (C-4),136.4 (C-8), 122.10 (C-5), 118.3 (C-6), 115.9 (C-9), 114.1 (C-3), 103.1 (C-1'), 78.2 (C-3'), 77.8 (C-5'), 74.9 (C-2'), 71.3 (C-4'), 62.5 (C-6'), 56.7(2-OMe), 40.7 (C-7)。
化合物6：分子式：C19H32O7；分子量372；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 1.97(d, J = 17.2 Hz,H-2a), 2.47 (d, J = 17.2 Hz, H-2b),5.79 (s, H-4), 1.96 (m, H-6), 1.64 (m, H-7a), 1.79 (m, H-7b), 1.62 (m, H-8a), 1.65 (m, H-8b), 3.80 (m,H-9), 1.24 (3H, d, J = 6.0 Hz, H-10), 1.00 (3H, s, H3-11), 1.08 (3H, s, H3-12), 2.03 (3H, s, H3-13), 4.31 (d, J = 7.6 Hz, H-1'), 3.10–3.49 (4H, m, 2',3', 4', 5'), 3.66 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, H-6a'), 3.85 (d, J = 12.0 Hz, H-6b')；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 37.4 (C-1), 48.1 (C-2), 202.4 (C-3), 125.4(C-4), 169.9 (C-5), 52.5 (C-6), 26.6 (C-7), 37.4 (C-8), 77.8 (C-9), 21.9 (C-10), 29.0 (C-11), 27.5 (C-12), 25.0 (C-13), 104.0 (C-1'), 75.3 (C-2'), 78.2(C-3'), 71.7 (C-4'), 77.6 (C-5'), 62.8 (C-6')。
化合物7：分子式：C19H30O7；分子量370；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 2.05(d, J = 16.8 Hz, H-2a), 2.48 (d, J = 16.8 Hz, H-2b), 5.88 (s, H-4), 2.69 (d,J = 9.2 Hz, H-6), 5.75 (dd, J = 15.2, 9.2 Hz, H-7b), 5.58 (dd, J = 15.2, 7.2Hz, H-8), 4.47 (br t, J = 6.4 Hz, H-9), 1.28 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-10), 0.98(3H, s, H3-11), 1.02 (3H, s, H3-12), 1.98 (3H, s, H3-13), 4.28 (d, J = 7.6 Hz,H-1'), 3.10–3.49 (4H, m, 2', 3', 4', 5'), 3.62 (dd, J = 11.6, 6.4 Hz, H-6a'),3.84 (dd, J = 11.6, 2.0 Hz, H-6b')；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 37.2 (C-1),48.5 (C-2), 202.0 (C-3), 126.2 (C-4), 165.7 (C-5), 56.9 (C-6), 131.2 (C-7),137.0 (C-8), 74.8 (C-9), 22.2 (C-10), 27.4 (C-11), 28.0 (C-12), 23.9 (C-13),101.2 (C-1'), 75.0 (C-2'), 78.4 (C-3'), 71.7 (C-4'), 78.2 (C-5'), 62.9 (C-6')。
实施例3：糖苷类化合物组分制备方法及组分中活性成分8、9和10的分离鉴定方法，化学式如图8、9和10所示。
1）将花椒用甲醇超声提取，提取温度为50℃，频率为40Hz，功率为500W，提1.0小时，花椒与提取溶剂的质量比为1:8，提取3次，合并提取液，再进行浓缩，干燥，得到提取物A；
2）将总浸膏A溶于水后，利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。首先，将总浸膏A溶于水后，用等体积的石油醚萃取三次，合并石油醚萃取液，浓缩，得到石油醚相（G）；水相用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得到乙酸乙酯相（H）；萃取后的水相继续用等体积的正丁醇萃取三次，合并正丁醇萃取液，浓缩，得到正丁醇相（I），水相浓缩得到水相（J）。
3）浸膏组分G、H、I、J分别进行UPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位。实验发现，浸膏组分I为糖苷类化合物部位。
4）对浸膏组分G、H、I和J进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实I具有较好的SIRT 1 抑制活性。
5）对浸膏组分I进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为15:1、8:1、4:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分I-1～I-6；
6）对浸膏I-4进行制备HPLC分离纯化，I-4（720 mg）经半制备HPLC分离（50%甲醇-水，Benetnach C18柱）分离，得到三个组份：I-4-1—I-4-3，I-4-1经半制备HPLC（25%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物8；I-4-2经半制备HPLC（20%甲醇-水，BenetnachC18柱）纯化，得到化合物9和10。经核磁共振波谱解析确定化合物8、9和10的结构，数据如下：
化合物8：分子式：C20H24O9；分子量408；1H NMR (DMSO, 400 MHz) δ ppm: 6.23(d，J =9.2 Hz, H-3), 7.95 (d, J = 9.2 Hz, H-4), 7.49 (s, H-5), 6.83 (s, H-8),4.84 (t, J = 4.8 Hz, H-2'), 3.17 (2H, dd, J = 15.6, 4.8 Hz, H2-3'), 1.24 (3H,s, H3-5'), 1.27 (3H, s, H3-6'), 4.41 (d, J = 7.6 Hz, H-1"); 13C NMR (DMSO, 100MHz) δ ppm: 161.0 (C-2), 112.7 (C-3), 145.2 (C-4), 124.4 (C-5), 126.1 (C-6),163.6 (C-7), 97.3 (C-8), 155.5 (C-9), 111.8 (C-10), 90.6 (C-2'), 29.3 (C-3'),77.4 (C-4'), 23.0 (C-5'), 23.6 (C-6'), 97.8 (C-1"), 74.0 (C-2"), 77.0 (C-3"),70.6 (C-4"), 77.4 (C-5"), 61.4 (C-6")。
化合物9：分子式：C13H18O6；分子量270；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 4.89(d, J = 12.0 Hz, H-1a), 4.62 (d, J = 12.0 Hz, H-1b), 7.37 (2H, d, J = 7.2 Hz,H-3, 7), 7.28 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-4, 6), 7.23 (d, J = 7.2 Hz, H-5), 4.31(d, J = 7.6 Hz, H-1'), 3.18–3.30 (4H, m, 2', 3', 4', 5'), 3.86 (dd, J = 12.0,2.0 Hz, H-6'a), 3.65 (dd, J = 12.0, 5.6 Hz, H-6'a); 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 71.8 (C-1), 139.1 (C-2), 129.2 (C-3), 129.3 (C-4), 128.7 (C-5), 129.3(C-6), 129.2 (C-7), 103.3 (C-1'), 75.1 (C-2'), 78.1 (C-3'), 71.7 (C-4'), 78.0(C-5'), 62.8 (C-6')。
化合物10：分子式：C11H20O6；分子量248；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 5.36(td, J = 6.4, 1.2 Hz, H-2a), 4.32 (dd, J = 11.6, 6.4 Hz, H-1a), 4.27 (d, J =7.6 Hz, H-1'), 4.21 (dd, J = 11.6, 7.6 Hz, H-1b), 3.86 (dd, J = 12.0, 2.0 Hz,H-6'a), 3.66 (dd, J = 12.0, 5.6 Hz, H-6'b), 3.23 (m, H-5'), 3.30 (2H, m, H-3', H-4'), 3.16 (t, J = 8.4 Hz, H-2'), 1.75 (3H, s, H3-4), 1.69 (3H, s, H3-5)。
实施例4：糖苷类化合物组分制备方法及组分中活性成分11和12的分离鉴定方法，化学式如图11和12所示。
1）花椒用50%的乙醇/ 水为提取溶剂进行渗漏提取，将花椒在提取溶剂中浸泡20h，花椒与提取溶剂的质量比为1:15，合并提取液，再进行浓缩，干燥，得到提取物A；
2）将总浸膏A溶于水后，利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。首先，将总浸膏A溶于水后，用等体积的石油醚萃取三次，合并石油醚萃取液，浓缩，得到石油醚相（G）；水相用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得到乙酸乙酯相（H）；萃取后的水相继续用等体积的正丁醇萃取三次，合并正丁醇萃取液，浓缩，得到正丁醇相（I），水相浓缩得到水相（J）。
3）浸膏组分G、H、I、J分别进行HPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位。实验发现，浸膏组分I为糖苷类化合物部位。
4）对浸膏组分G、H、I和J进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实I具有较好的SIRT 1 抑制活性。
5）对浸膏组分I进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为15:1、8:1、4:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分I-1～I-6；
6）对浸膏I-5进行制备HPLC分离纯化，I-5（450 mg）经半制备HPLC分离（20%甲醇-水，Benetnach C18柱）分离，得到两个组份：I-5-1—I-5-2，I-5-1经半制备HPLC（20%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物11；I-5-2经半制备HPLC（20%甲醇-水，BenetnachC18柱）纯化，得到化合物12。经核磁共振波谱解析确定化合物11和12的结构，数据如下：
化合物11：分子式：C17H24O9；分子量372；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 6.74(2H, s, H-3, 5), 6.54 (d, J =15.6 Hz, H-7), 6.32 (dt, J =15.6, 5.2 Hz, H-8),4.86 (m, H-1′), 4.22 (2H, br d, J =5.2 Hz, H-9), 3.82 (6H, 2,6-OCH3×2); 13CNMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 154.3 (C-2, 6), 135.9 (C-1), 135.2 (C-4), 131.3(C-8), 130.0 (C-7), 105.4(C-3, 5), 105.3 (C-1′), 78.3 (C-3′), 77.8 (C-5′),75.7 (C-2′), 71.3 (C-4′), 63.6 (C-9), 62.6 (C-6′), 57.1 (2,6-OCH3×2)。
化合物12：分子式：C18H27O8；分子量371；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 2.16(d, J = 17.2 Hz, H-2a), 2.61 (d, J = 17.2 Hz, H-2b),5.86 (s, H-4), 5.85 (d, J = 15.6, Hz, H-7), 5.72 (dd, J = 15.2, 7.2 Hz, H-8), 4.53 (dd, J = 7.2, 6.4Hz, H-9), 1.27 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-10), 1.01 (3H, s, H3-11), 1.03 (3H, s,H3-12), 1.94 (3H, s, H3-13), 4.26 (d, J = 7.6 Hz, H-1'), 3.16 (dd, 7.6, 8.8,H-2'), 3.18 (dd, 8.8, 7.6, H-3'), 3.25 (t, 7.6 Hz, H-4'), 3.24 (m, H-5'),3.62 (dd, J = 12.0, 6.4 Hz, H-6a'), 3.84 (dd, J = 11.6, 1.6 Hz, H-6b'); 13CNMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 42.4 (C-1), 50.8 (C-2), 101.3 (C-3), 127.1 (C-4),167.1 (C-5), 80.0 (C-6), 133.7 (C-7), 133.8 (C-8), 74.6 (C-9), 22.2 (C-10),23.5 (C-11), 24.7 (C-12), 19.6 (C-13), 101.3 (C-1'), 75.0 (C-2'), 78.4 (C-3'), 71.7 (C-4'), 78.2 (C-5'), 62.8 (C-6')。
实施例5：糖苷类化合物组分制备方法及组分中活性成分13和14的分离鉴定方法，化学式如图13和14所示。
1）将花椒用70%的甲醇/ 水室温加热回流提取3次，每次加热温度为80℃，提取2.0小时，合并提取液，减压浓缩至无甲醇味，得总浸膏A；
2）将总浸膏A溶于水后，进行D101大孔吸附树脂柱层析，用甲醇/ 水为洗脱溶剂梯度洗脱，洗脱溶剂体积比为水、30%、60%、80%、100%，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积均为3倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个不同的浸膏组分B（水）、C（30%）、D（60%）、E（80%）、F（100%）；
3）浸膏组分B、C、D、E、F分别进行UPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位。实验发现，浸膏组分C为糖苷类化合物部位。
4）对浸膏组分B、C、D、E和F进行SIRT 1 抑制活性实验测试，实验证实C具有较好的SIRT 1 抑制活性。
5）对浸膏组分C进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6；
6）对浸膏C-6进行制备HPLC分离纯化，C-6经半制备HPLC分离（45%甲醇-水，Benetnach C18柱）分离，得到三个组份：C-6-1—C-6-3，C-6-1经半制备HPLC（45%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物13；C-6-2经半制备HPLC（40%甲醇-水，Benetnach C18柱）纯化，得到化合物14。经核磁共振波谱解析确定化合物13和14的结构，数据如下：
化合物13：分子式：C15H20O6；分子量296；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 3.31(2H, m, H2-7), 3.35-3.46 (4H, m, H-2', H-3', H-4', H-5'), 3.69 (dd, J = 11.6,5.2 Hz, H-6'a), 3.88 (dd, J = 11.6, 1.2 Hz, H-6'b), 4.84 (d, J = 7.2 Hz, H-1'), 5.00 (dd, J = 8.8, 4.4 Hz, H-9a), 5.02 (dd, J = 12.0, 1.6 Hz, H-9b),5.92 (m, H-8), 7.02 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2,6), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3,5)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 157.6 (C-1), 139.2 (C-2,6), 130.5 (C-3,5),135.3 (C-4), 40.4 (t, C-7), 117.8 (C-8), 115.7 (C-9), 102.5 (C-1'), 75.0 (C-2'), 78.1 (C-3'), 71.4 (C-4'), 78.0 (C-5'), 62.5 (C-6')。
化合物14：分子式：C28H36O13；分子量580；1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ ppm: 6.71(2H, s, H-2,6), 4.76 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-7), 3.14 (m, H-8), 3.91 (d, J =6.0 Hz, H-9a), 4.28 (d, J = 8.4 Hz, H-9b), 6.65 (2H, s, H-2',6'), 4.71 (1H,d, J = 3.6 Hz, H-7'), 3.14 (m, H-8'), (d, J = 6.0 Hz, H-9'a), 4.28 (d, J =8.4 Hz, H-9'b), 3.85 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.84 (6H, s, 3',5'-OCH3), 4.85 (m, H-1"), 3.46 (m, H-2"), 3.40 (2H, m, H-3",H-4"), 3.19 (1H, m, H-5"), 3.77 (d, J= 12.0 Hz, H-6"a), 3.65 (dd, 12.0, 5.2 Hz, H-6"b)；13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ ppm: 139.6 (C-1), 104.9 (C-2), 154.4 (C-3), 135.6 (C-4), 154.4 (C-5), 104.9(C-6), 87.2 (C-7), 55.5 (C-8), 72.9 (C-9), 56.8 (2 X-OCH3), 133.1 (C-1'),104.6 (C-2'),149.4 (C-3'), 135.6 (C-4'), 149.4 (C-5'), 104.6 (C-6'), 87.6 (C-7'), 55.7 (C-8'), 72.9 (C-9'), 57.1 (2 x-OCH3), 105.4 (C-1"), 75.7 (C-2"),77.8 (C-3"), 71.4 (C-4"), 78.4 (C-5"), 62.6 (C-6")。

Claims (1)

1.一种具有SIRT 1 抑制活性的糖苷类化合物的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
1）将花椒用70%的乙醇/ 水混合溶液在室温冷浸提取3次，每次5天，合并提取液，减压浓缩至无乙醇味，得总浸膏A；
2）将总浸膏A溶于水后，进行D101大孔吸附树脂柱层析，用乙醇/ 水混合溶液为洗脱溶剂梯度洗脱，洗脱溶剂体积比为0:100、30:70、60:40、80:20、100:0，不同体积比的洗脱溶剂洗脱体积均为3倍柱体积，分别将不同体积比的洗脱液浓缩，得到五个不同的浸膏组分，所述浸膏组分为洗脱溶剂体积比为0:100的B、洗脱溶剂体积比为30:70的C、洗脱溶剂体积比为60:40的D、洗脱溶剂体积比为80:20的E、洗脱溶剂体积比为100:0的F；
3）浸膏组分B、C、D、E、F分别进行UPLC-MS/MS分析，寻找糖苷类化合物所在部位，实验发现，浸膏组分C为糖苷类化合物部位；
4）对浸膏组分C进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1，等份收集洗脱液，每份洗脱液采用TLC定性检测，合并含相同成分的洗脱液，得到六个不同的浸膏组分C-1～C-6；
5）对浸膏C-2进行制备HPLC分离纯化，75 mg 的C-2经半制备HPLC分离，HPLC中的流动相为12%甲醇-水，分离所用的色谱柱为Benetnach C18柱，得到三个组份：C-2-1、C-2-2、C-2-3，C-2-1经半制备HPLC分离纯化，HPLC中的流动相为8%甲醇-水，分离所用的色谱柱为Benetnach C18柱纯化，得到化合物1；C-2-2经半制备HPLC分离纯化，所用流动相为12%甲醇-水、所用色谱柱为Benetnach C18柱，得到化合物2；C-2-3经半制备HPLC分离纯化，HPLC中的流动相为12%甲醇-水，分离所用的色谱柱为Benetnach C18柱，得到化合物3，经核磁共振波谱解析确定化合物1、2和3的结构为：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
、
Figure DEST_PATH_IMAGE004
和
Figure DEST_PATH_IMAGE006
。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102370632A (zh) * 2010-08-16 2012-03-14 中国科学院上海药物研究所 Sirt1小分子抑制剂在制备治疗或预防癌症及与蛋白去乙酰化相关疾病的药物中的用途

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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花椒属植物生物碱研究进展;石雪萍 等;《中国野生植物资源》;20100831;第29卷(第4期);第1-7页 *

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