CN107920981A - 暗黄降低用皮肤外用剂 - Google Patents

Abstract

本发明旨在提供用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂。本发明通过提供含橙皮素及/或糖基橙皮素作为有效成分的用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂解决上述课题。

Description

暗黄降低用皮肤外用剂

【技术领域】

本发明涉及用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂。

【背景技术】

近年，在本领域中，随着年龄的增加而皮肤变黄，所谓、皮肤上的暗黄(以下，除非特别说明，简称为“暗黄”)从美容上的观点来看成为问题。作为暗黄的诱发要因，皮肤上的蛋白质的变性(糖化或Maillard反应)是主要的要因，现今认为，在处于皮肤的深部的真皮中的蛋白质因过氧化物质等变性(羰基化)是其要因。

皮肤的暗黄增加，则损害皮肤的透明感，处于看着比实际年龄老的倾向，所以暗黄对策在保持年轻上极重要。作为这样的暗黄对策的实例，在专利文献1中，公开了由南瓜种子的提取物组成的暗黄抑制剂，在专利文献2、3中，公开了含有具有暗黄抑制作用的植物提取物的皮肤外用剂。这样，含在专利文献1～3中公开的剂而以往公知的各种剂是通过抑制皮肤上的蛋白质的变性(糖化或Maillard反应)，用于使皮肤不发生暗黄的剂。

另外，在专利文献4中，公开了含选自橄榄叶提取物、水解豌豆蛋白、及柠檬提取物的1种或2种以上的有效成分的蛋白质羰基化抑制剂，所述剂是不抑制糖化或Maillard反应而抑制羰基化，由此，用于不使皮肤发生暗黄的剂。

这样，以往进行的暗黄对策是通过抑制皮肤上的蛋白质的糖化或Maillard反应，或抑制羰基化，用于不使皮肤发生暗黄的剂(例如，暗黄的预防剂)。这样，以往、在本领域中，一旦生成了暗黄，就认为不能返回到原来，从而着眼于不使皮肤生成暗黄。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：特开2007-254345号公报

专利文献2：特开2006-273811号公报

专利文献3：特开2007-254344号公报

专利文献4：特开2012-31106号公报

专利文献5：特开平10-70994号公报

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明旨在提供并非仅预防抑制皮肤的暗黄发生而用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂，本发明的课题本身就是新颖的。

【解决课题的技术方案】

为解决上述课题，本发明人等重复锐意研究努力的结果新发现，将橙皮素及/或糖基橙皮素外用于人的皮肤，则可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄，从而确立其用途，完成本发明。再者，本申请说明书中说的外用是指使本发明的暗黄降低用皮肤外用剂与对象者的期望的皮肤部位接触，使所述暗黄降低用皮肤外用剂中所含的有效成分渗透到表皮、真皮、及/或皮下组织。再者，皮肤是指，作为附属器有汗腺、皮脂腺、爪、毛等的，人的体表覆盖的皮膜。作为使本发明的暗黄降低用皮肤外用剂与对象者的期望的皮肤部位接触的手段，可例示涂布、喷雾、装载、贴附、粘附、紧密附着、压接、浸渍等。

即，本发明通过提供，以橙皮素及/或糖基橙皮素作为有效成分的用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂(以下，除非特别说明，简称为“本发明的暗黄降低用皮肤外用剂”)，解决了上述的课题。

本申请说明书中说的橙皮素是指下述化学式1所示的结构式所表示的化合物，蜜柑属的果实中所含的成分，少量发挥血流改善效果等的生理功能已知的化合物。

化学式1：

【化1】

橙皮素(化学式1)

另外，本申请说明书中说的糖基橙皮素是指向橙皮素结合了糖类的化合物整体、即，有橙皮素骨架的化合物整体，作为其具体例，可举出橙皮苷、有构成橙皮苷的芸香糖的鼠李糖基脱离的结构的7-O-β-葡萄糖基橙皮素、及糖类(例如，D-葡萄糖、D-果糖、或者D-半乳糖等的糖类)等摩尔以上α-结合到橙皮苷的α-糖基橙皮苷等。

更具体而言，橙皮苷也称为维生素P，由鼠李糖和葡萄糖构成的芸香糖有与橙皮素结合的结构的下述化学式2所示的结构式所表示的化合物，多含在柑橘类的果皮等中的成分。

化学式2：

【化2】

橙皮苷(化学式2)

另外，7-O-β-葡萄糖基橙皮素是下述化学式3所示的结构式所表示的化合物，与橙皮苷比，有水溶性高的特征。7-O-β-葡萄糖基橙皮素，例如，如专利文献5所示，使α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40)等作用于含有α-葡萄糖基橙皮苷和橙皮苷的溶液而可制造。

化学式3：

【化3】

7-O-β-葡萄糖基橙皮素(化学式3)

再者，α-糖基橙皮苷是糖类(例如，D-葡萄糖、D-果糖、或者D-半乳糖等的糖类)等摩尔以上α-结合到橙皮苷的化合物。作为α-糖基橙皮苷的代表例，可举出葡萄糖1分子α-结合到橙皮苷的芸香糖结构中的葡萄糖的以下述化学式4所示的结构式表示的α-葡萄糖基橙皮苷(别名：酶处理橙皮苷、糖转移橙皮苷、水溶性橙皮苷、或者糖转移维生素P)。

化学式4：

【化4】

α-糖基橙皮苷(化学式4)

以上所述的橙皮素及糖基橙皮素是以往作为各种食品等的原料广泛使用的、安全且广泛使用性高的化合物。糖基橙皮素之中、α-糖基橙皮苷水溶性比橙皮苷或7-O-β-葡萄糖基橙皮素高，处理性优良，在生物体内，与橙皮苷或7-O-β-葡萄糖基橙皮素同样、受生物体内酶的作用而水解至橙皮素，发挥橙皮素原本的生理活性。

【发明效果】

本发明的暗黄降低用皮肤外用剂是用于降低以往被认为不可能的已经生成的皮肤的暗黄的剂，含橙皮素及/或糖基橙皮素作为有效成分的皮肤外用剂。另外，由本发明的暗黄降低用皮肤外用剂不仅能降低皮肤的暗黄，也发挥可由作为有效成分的橙皮素及/或糖基橙皮素改善皮肤的质地改善作用、皮肤的干燥、红斑、刺激感、及搔痒感等的皮肤质等的优良的效果。特别是，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂，不仅是皮肤的暗黄，不仅是担忧皮肤的质地的粗糙度或皮肤质的降低的对象者担忧皮肤的暗黄的皮肤部位，还外用于担心皮肤的质地的粗糙或皮肤质的降低的皮肤部位，则有更显著地发挥期望的作用效果的优良的特征。再者，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂是人日常持续地安全并且容易地，而且，可无不快感地使用的同时，所述皮肤外用剂的有效成分安全并且工业上廉价并且稳定地提供的成分，所以本发明的暗黄降低用皮肤外用剂有可工业上廉价并且稳定地提供的益处。

【附图说明】

【图1】是显示在有抗氧化作用的物质共存下的羰基化牛血清白蛋白(BSA)的残留比例的图。

【图2】是显示含有糖基橙皮素的组合物单用或将含有糖基橙皮素的组合物与含有糖基柚皮素的组合物联用之时的羰基化BSA的残留比例的图。

【图3】是显示联用含有糖基橙皮素的组合物单用或含有糖基橙皮素的组合物和L-抗坏血酸2-葡萄糖苷之时的羰基化BSA的残留比例的图。

【图4】是显示在使用试验液(本发明)或对照液(对照)进行的羰基化蛋白质降低作用试验中，对于各受试者，求出在“试验结束后的角质层蛋白质”或“试验结束后的对照的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质的量和在“试验开始时的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质的量的差分，对得到的数据进行统计学处理[t检验(单侧)](p<0.05)的结果的图。

【图5】是显示在使用试验液(本发明)或对照液(对照)进行的羰基化蛋白质降低作用试验中，对于各受试者，对于在“试验结束后的角质层蛋白质”或“试验结束后的对照的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质的量，求出它们的比[(试验结束后的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)/(试验开始时的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)]，对得到的数据进行统计学处理[t检验(单侧)](p<0.05)的结果的图。

【实施方式】

以下，对于本发明的实施方式进行说明，它们至多是对实施本发明上的优选的实施方式的例示，本发明不以任何方式限于这些实施方式。

本发明的暗黄降低用皮肤外用剂作为有效成分含的橙皮素及/或糖基橙皮素是指人日常持续地安全并且容易地，并且，可无不快感地外用，只要是发挥本发明的期望的作用效果，就其来源、制法、纯度等可无特别的限制地使用。再者，由于本发明不是橙皮素或糖基橙皮素本身的制造方法涉及的发明，它们的制造方法的详细内容在本申请说明书中省略，但其概要如下所述。

作为本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中的有效成分的橙皮素，不仅是市售品，可适宜使用由公知的制造方法从蜜柑属的果实调制的。另外，作为在本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中的有效成分的糖基橙皮素如既述，是指向橙皮素结合了糖类的化合物整体。具体而言，是指由生物体内酶的作用而生成橙皮素的，橙皮苷、7-O-β-葡萄糖基橙皮素、及α-糖基橙皮苷，人可安全并且容易地，而且，可对于皮肤无刺激或不快感地外用它们，工业上廉价并且稳定地提供，只要是发挥本发明的期望的作用效果，就不仅是市售品，可使用由以往公知的制造方法得到的任何的糖基橙皮素。

接下来，作为作为本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中的其他有效成分的糖基橙皮素，可例示橙皮苷、α-糖基橙皮苷、7-O-β-葡萄糖基橙皮素等的化合物。上述橙皮苷通过以作为含有橙皮苷的植物的柑橘类的果实、果皮、种子、未成熟果等作为原料，使用水或醇等的溶剂提取，可得到工业上其期望量。另外，上述α-糖基橙皮苷，例如，如在特开平11-346792号公报等中公开，使糖转移酶作用于含有橙皮苷和α-葡萄糖基糖化合物的溶液而使α-糖基橙皮苷生成，通过对其采集，可廉价地得到工业上其期望量。再者，上述7-O-β-葡萄糖基橙皮素，例如，如在专利文献5等中公开，使α-L-鼠李糖苷酶作用于含有作用糖转移酶而得到的α-糖基橙皮苷和橙皮苷的酶反应液而生成7-O-β-葡萄糖基橙皮素，通过对其采集，可廉价地制造工业上其期望量。

作为在本发明中使用的橙皮素及糖基橙皮素，如既述，不仅是市售品，由以往公知的制造方法得到的均可使用，但更优选杂质更少的高纯度品。以下，对于其理由而以糖基橙皮素为例进行说明。

即，作为本发明人等新得到的见解，以往公知的糖基橙皮素与经结晶化工序而得到的试剂级的糖基橙皮素不同，是以不同的量的多寡含与糖基橙皮素一同来源于其制造原料的共杂物、未反应原料、再者，在其制造过程中副生成的，生理学容许性的离子性化合物的，所谓含有糖基橙皮素的组合物，所述组合物含成为杂味、着色、臭气等的原因物质的成分。再者，在本申请说明书中，以下，除非特别说明，将以糖基橙皮素作为主体，含来源于其制造原料的共杂物、未反应原料、或者，在其制造过程副生的生理学容许性的离子性化合物的糖基橙皮素含有物简称为糖基橙皮素，在本发明中使用的糖基橙皮素也当然含经结晶化工序得到的高纯度糖基橙皮素。

另外，本发明人等以解除作为以往公知的糖基橙皮素的缺点的杂味、着色等的目的，为了降低以往的糖基橙皮苷中所含的共杂物含量，通过改良以往方法的一部分，确立杂味和着色降低的糖基橙皮素(以下，除非特别说明，称为“改良糖基橙皮素”)和其制造方法，在特愿2014-41066号说明书及国际专利申请编号第PCT/JP2015/056230号单行本中公开。改良糖基橙皮素有人可日常持续安全并且容易地，而且，无不快感而外用的同时，可工业上廉价并且稳定地提供的优良的益处。从而，改良糖基橙皮素是在实施本发明上最适宜的糖基橙皮素。

以下，对于改良糖基橙皮素的制造方法和其性质进行说明。

改良糖基橙皮素是可通过包括(A)调制含有橙皮苷及淀粉部分分解物的水溶液的工序、(B)使糖转移酶作用于得到的水溶液而生成含α-葡萄糖基橙皮苷的含有糖基橙皮素的组合物的工序、及(C)采集生成的含有糖基橙皮素的组合物的工序的制造方法，在还原剂的存在下实施上述(A)乃至(C)的1或2以上的工序，或向上述(A)乃至(C)的1或2以上的工序之前的始发原料及/或后的结果物添加还原剂而制造。以下，对于在使用上述还原剂的制造方法中得到的改良糖基橙皮素(以下，有时将经上述还原剂处理工序调制的糖基橙皮素称为“还原剂处理品”)的制造原料、酶反应(糖转移反应等)、还原剂处理、及纯化方法依次进行说明。

再者，如后详述，上述还原剂处理品是指基本上不含糠醛的糖基橙皮素，在本申请说明书中，基本上不含糠醛是指与以往品比，糠醛含量是显著地低的水平的糖基橙皮素。具体而言，是指由后述的实验4的“(1)糠醛的含量”中所示的使用气相层析仪质谱分析装置(GC/MS)的分析方法(以下，简写为“GC/MS分析法”)测定之时，通常是不足200ppb(再者，1ppb是10亿分的1)、适宜地不足100ppb、更适宜地不足50ppb、再者适宜地不足30ppb、更还适宜地不足20ppb、特别适宜地不足15ppb、更特别最适是不足10ppb。再者，在本发明中使用的糖基橙皮素之中、糠醛含量降低至低于GC/MS分析法的检测界限，与以往品比杂味显著地降低的同时，着色也显著地降低的极高品质的糖基橙皮素。但是，作为在本发明中使用的糖基橙皮素，没必要是最高纯度的糖基橙皮素，所以没必要糠醛含量降低至检测界限以下的水平，或不含糠醛。从而，在本发明中使用的糖基橙皮素基本上不含糠醛即可，只要是可达成本发明的期望的目的，就也可含有与以往品比显著地少的量、或者检测界限以下的糠醛。

(制造原料)

作为还原剂处理品的制造原料的橙皮苷，在以往的糖基橙皮素的制造中使用的橙皮苷均可使用，不仅是高纯度的橙皮苷，也可适宜组合比较低纯度的含有橙皮苷的植物来源的提取物、榨汁液、或者其部分纯化物等的1种或2种以上而使用。

含有上述橙皮苷的植物，具体而言，例如，可例示属于蜜柑类、橙类、香酸柑橘类、杂柑橘类、桔柑类、红橘类、文旦类、金柑类等的蜜柑科蜜柑属的柑橘类，作为含有橙皮苷的部位，可例示它们柑橘类的果实、果皮、种子、未成熟果等。

作为制造原料的淀粉部分分解物，在使后述的糖转移酶作用之时，可糖转移到橙皮苷上，生成作为糖基橙皮素的α-糖基橙皮苷即可，例如，直链淀粉、糊精、环糊精、麦芽寡糖等的淀粉部分分解物、再者，适宜选择选自液化淀粉、糊化淀粉等的1种或2种以上的淀粉部分分解物。

另外，在后述的酶反应中使用的淀粉部分分解物的使用量相对于原料的橙皮苷的质量，通常，约0.1～约150倍、适宜地约1～约100倍、更适宜地使用选自约2～约50倍的范围的量。在酶反应中，向橙皮苷糖转移淀粉部分分解物来源的糖，使α-糖基橙皮苷有效率地生成，而且，优选酶反应系中尽可能不残留未反应橙皮苷地，使用相对于橙皮苷过量的淀粉部分分解物。其理由是，在后述的纯化工序中，淀粉部分分解物及来源于其的糖类等可与α-糖基橙皮苷比较容易地分离，与此相对，橙皮苷与α-糖基橙皮苷行为一致，难与α-糖基橙皮苷分离，所以水溶性极低，未反应的橙皮苷的残留量多，则作为整体，发生得到的糖基橙皮素的水溶性变低的不适合。

(酶反应)

本申请说明书中所说的酶反应是指使糖转移酶作用于作为上述制造原料的橙皮苷和淀粉部分分解物而使α-糖基橙皮苷生成的酶反应。

作为在上述酶反应中使用的糖转移酶，可例示α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20)、环麦芽糖糊精－葡聚糖转移酶(EC 2.4.1.19、以下，称为“CGT酶”)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)等。作为上述α-葡萄糖苷酶，可例示猪的肝脏、荞麦的种子等的动植物组织来源的酶、或者，属于毛霉(Mucor)属、青霉(Penicillium)属、黑曲霉(Aspergillus niger)等的曲霉(Aspergillus)属等的真菌培养物来源的酶，或者将属于糖酵母(Saccharomyces)属等的酵母等的微生物用营养培养基培养而得到的培养物来源的，作为CGT酶，例如，例示芽孢杆菌(Bacillus)属、土芽孢杆菌(Geobacillus)属、克雷伯菌(Klebsiella)属、类芽孢杆菌(Paenibacillus)属、热球菌(Thermococcus)属、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)属、短杆菌(Brevibacterium)属、火球菌(Pyrococcus)属、短芽孢杆菌(Brevibacillus)属、及糖酵母(Saccharomyces)属来源的。作为上述α-淀粉酶，可适宜组合属于土芽孢杆菌(Geobacillus)属等的细菌、或者，属于黑曲霉(Aspergillus niger)等的曲霉(Aspergillus)属等的真菌培养物来源的1种或2种以上而使用。这些糖转移酶只要是可达成本发明的目的，就可采用天然或基因重组型之任一者，在有市售品时，它们也可适宜使用。另外，上述糖转移酶没必要均必然纯化而使用，通常，即使是粗酶，只要是可达成本发明的目的，就均可使用。

另外，在使用上述天然或基因重组型的糖转移酶时，通过向这些糖转移酶采用适宜的淀粉部分分解物，可提高α-糖基橙皮苷的生成率。

在使用上述α-葡萄糖苷酶时，麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖等的麦芽寡糖、或者右旋糖－当量(DE)约10～约70的淀粉部分分解物，在使用CGT酶时，α-、β-、或者γ-环糊精或DE1以下的淀粉糊化物至DE约60的淀粉部分分解物，再者，在使用α-淀粉酶时，适宜地使用DE1以下的淀粉糊化物至DE约30的糊精等的淀粉部分分解物。

作为酶反应时的含有橙皮苷的溶液，适宜地使用优选尽可能高浓度含有橙皮苷的，例如，以悬浮状含有橙皮苷的悬浮液，或在水等的溶剂中于室温以上的高温溶解、或者，使用碱剂以超越pH7.0的碱侧pH溶解的高浓度含有橙皮苷的溶液。作为上述碱剂，可适宜使用约0.1～约1.0N的氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、氢氧化钙水溶液、氨水等的1种或2种以上的强碱性水溶液。

将橙皮苷使用碱剂而以溶液状使用时的橙皮苷浓度通常是约0.005w/v％以上、优选为，约0.05～约10w/v％、更优选为，约0.5～约10w/v％、更优选是约1～约10w/v％。

一方面，在不使用碱剂而以悬浮状使用橙皮苷时，将橙皮苷悬浮于水等的溶剂而作为悬浮状橙皮苷，此时的橙皮苷浓度通常设为约0.1～约2w/v％、更适宜地约0.2～约2w/v％、更适宜地约0.3～约2w/v％。

虽然使糖转移酶作用于橙皮苷和淀粉部分分解物之时的温度和时间依赖于在酶反应中使用的橙皮苷和淀粉部分分解物的浓度、及糖转移酶的种类、最适温度、最适pH、或者作用量等而变化，但通常设为约50～约100℃、适宜地约60～约90℃、更适宜地约70～约90℃、及，约5～约100小时、适宜地约10～约80小时、更适宜地约20～约70小时的范围。

另外，虽然将糖转移酶作用于高浓度含有橙皮苷的碱性溶液之时的pH和温度依赖于糖转移酶的种类、最适pH、最适温度、或者作用量、及橙皮苷的浓度等而变化，但糖转移酶可作用的尽可能高pH、高温、具体而言，设为pH约7.5～约10、适宜地pH约8～约10、及约40～约80℃、更适宜地约50～约80℃的范围。再者，碱性溶液中的橙皮苷由于容易发生分解，为了防其，优选尽可能在遮光下、厌氧下保持橙皮苷。

再者，虽然使糖转移酶作用于悬浮状橙皮苷之时的pH依赖于糖转移酶的种类、最适温度、最适pH、或者作用量、及悬浮状橙皮苷的浓度等而变化，但通常设为pH约4～约7、适宜地pH约4.5～约6.5的范围。

另外，如果觉得必要，为了提高酶反应前的橙皮苷的溶解度，使向橙皮苷的糖转移反应变得容易，任意向高含有橙皮苷的溶液、特别是高含有橙皮苷的水溶液中适量共存与水相溶性高的有机溶剂、例如，甲醇、乙醇、n-丙醇、异丙醇、n-丁醇、丙酮醇、丙酮等的低级醇、低级酮等的1种或2种以上。

酶量和反应时间处于密切的关系，通常，从经济性的观点来看，将以约5～约150小时、适宜地约10～约100小时、更适宜地约20～约80小时结束酶反应的酶量根据使用的糖转移酶的种类适宜设定即可。另外，使用固定化的糖转移酶而以批式重复反应，或以连续式反应是随意的。

含有在上述糖转移酶反应后得到的α-糖基橙皮苷和橙皮苷的酶反应液可根据需要，直接，或者，由多孔性合成吸附树脂纯化之后，由葡萄糖淀粉酶(EC 3.2.1.3)、或者β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)等的淀粉酶部分水解，使α-糖基橙皮苷的α-D-葡萄糖基的数降低。例如，在作用葡萄糖淀粉酶时，可水解α-麦芽糖基橙皮苷以上的高分子，使葡萄糖生成的同时使α-葡萄糖基橙皮苷生成、蓄积。另外，在作用β-淀粉酶时，可水解α-麦芽三糖基橙皮苷以上的高分子，使麦芽糖生成的同时，使含α-葡萄糖基橙皮苷和α-麦芽糖基橙皮苷的混合物生成、蓄积。

一方面，通过使葡萄糖淀粉酶和α-L-鼠李糖苷酶同时，或者其任一方先依次作用于含有在糖转移酶反应后得到的α-糖基橙皮苷和橙皮苷的酶反应液，使等摩尔以上α-结合到在α-糖基橙皮苷的芸香糖结构中的葡萄糖的葡萄糖脱离，通过将α-糖基橙皮苷变换为α-葡萄糖基橙皮苷而提高α-葡萄糖基橙皮苷含量的同时，使水溶性低的橙皮苷变成水溶性高的7-O-β-单葡萄糖基橙皮素，作为整体，可作为水溶性高的糖基橙皮素。

与糖转移酶同样、对于葡萄糖淀粉酶和α-L-鼠李糖苷酶，这些酶量和酶反应时间也处于密切的关系，通常，从经济性的观点来看，根据酶的种类适宜设定以约5～约150小时、适宜地约10～约100小时、更适宜地约20～约80小时结束酶反应的酶量即可。另外，使用固定化的α-L-鼠李糖苷酶以批式重复反应，或以连续式不中断反应是可适宜实施的。

(还原剂处理)

本申请说明书中所说的还原剂处理是指使用指定的还原剂，使糖基橙皮素的杂味和着色(以下，有时简写为“杂味－着色”)、再者、臭气显著地降低的处理，是指将后述的还原剂在(A)调制含有橙皮苷及淀粉部分分解物的水溶液的工序、(B)使糖转移酶作用于得到的水溶液而生成含α-葡萄糖基橙皮苷的含有糖基橙皮素的组合物的工序、及(C)采集生成的含有糖基橙皮素的组合物的工序的1或2个以上的工序中使用，或向上述(A)乃至(C)的1或2以上的工序之前的始发原料及/或上述工序后的结果物添加其指定量。

作为在改良糖基橙皮素的制造方法中使用的还原剂，只要是可达成本发明的期望的目的，就无特别的限制，在本领域中广泛使用的无机系及有机系的还原剂均可使用。但是，含还原剂处理品，在本发明中使用的糖基橙皮素或高纯度糖基橙皮素主要是以应用于人作为前提的，所以在其制造中，优选使用安全性高的，稳定性、处理性优良的还原剂。

作为适宜地在本制造方法中使用的还原剂的具体例，例如，可例示羟基胺类、二氧化氯、氢、氢化合物(硫化氢、硼氢化钠、氢化铝锂、氢化铝钾等)、硫化合物(二氧化硫、二氧化硫脲、硫代硫酸盐、亚硫酸盐、硫酸铁、过硫酸钠、过硫酸钾、过硫酸铵、亚硫酸钙等)、亚硝酸盐、氯化锡、氯化铁、碘化钾、过氧化氢、稀释过氧化苯甲酰、过氧化氢、亚氯酸钠等的亚氯酸盐等的无机系还原剂；及苯酚类、胺类、醌类、聚胺类、蚁酸和其盐类、草酸和其盐类、柠檬酸和其盐类、二氧化硫脲、肼系化合物、还原性糖质、过氧化苯甲酰、过硫酸苯甲酰、氢化二异丁基铝、儿茶素、槲皮素、生长酚、没食子酸和其酯、乙二胺四醋酸(EDTA)、二硫苏糖醇、还原型谷胱甘肽、及多酚类等的有机系还原剂。上述无机系及有机系的还原剂可使它们的1种或2种以上适宜组合而使用。

上述无机系及有机系的还原剂之中、前者的还原剂可更显著地降低不经还原剂处理而调制的糖基橙皮素所具有的杂味，可提供着色或异臭也更显著地降低的高品质的糖基橙皮素。再者，虽然其理由未定，如下所述推测。即，以本制造方法的目的使用时，有机系还原剂与无机系还原剂比，杂味－着色的降低作用低，或者，有机系还原剂是有机物，所以本身有成为杂味或着色的原因的担忧、有机系还原剂的分解物或修饰物等在还原剂处理品的纯化工序中不被完全地除去而残留时，被认为是不是因为它们给最终制品的糖基橙皮素的品质负面影响。

无机系还原剂之中、由SO₂ ^-离子、HSO₃ ^-离子、SO₃ ^2-离子、S₂O₄ ^2-离子、或者S₂O₇ ^2-离子和金属离子构成的，所谓、亚硫酸盐(也称为亚硫酸盐类)是在安全性、稳定性、及处理性的方面也优良，可在本制造方法中更适宜地使用的还原剂。特别是，作为无机系还原剂的亚硫酸钠、亚硫酸钾、亚硫酸氢钠、次硫酸钠、次硫酸钾、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、偏亚硫酸钠、偏亚硫酸钾、偏亚硫酸氢钠、及偏亚硫酸氢钾等的亚硫酸盐可在本发明中最适宜地使用。

另外，上述还原剂在改良糖基橙皮素的制造工序中的1个工序、或者对于该工序之前的始发原料及/或后的结果物应用在2个以上的工序、或者对于这些工序之前的始发原料及/或后的结果物，将其适量适宜小分而使用时，可用更少的量的还原剂有效达成本制造方法的期望的目的。

作为上述还原剂的添加量，合计在上述(A)乃至(C)的各自的工序中，相对于上述(B)酶反应后(在糖转移酶以外使用其他酶时，是指它们全部酶反应结束后)得到的酶反应液质量，通常，0.001质量％以上(以下，除非特别说明，将“质量％”简写为“％”。)、适宜地0.01～3％、更适宜地0.01～1％、再者适宜地使用选自相当于0.01～0.5％的范围的量。再者，在上述(C)的工序之前添加还原剂时，通常，由于残留的还原剂在纯化工序中基本上被除去，在作为最终制品得到的改良糖基橙皮素中基本上检测不到。在上述全工序中添加的还原剂的量相对于酶反应后得到的酶反应液质量，通常经1次乃至多次添加至合计是0.001％以上、适宜地0.01％以上、更适宜地成为0.01～1％的范围。添加时的温度通常是在上述(A)乃至(C)的工序中采用的温度，也能另行设为高于该温度的温度。具体而言，可例示室温以上的温度、适宜地50℃以上、更适宜地70℃以上、更适宜地80℃以上、再者适宜地90～120℃。

(纯化方法)

这样得到的酶反应溶液，可将其直接作为适宜地在本发明中使用的改良糖基橙皮素。但是，通常，酶反应溶液使在本领域中公知的区分方法、过滤方法、使用多孔性合成树脂等的纯化方法、浓缩方法、喷雾方法、干燥方法等的1种或2种以上的手段适宜组合而作为液状、固状、粉末状等的还原剂处理品。

作为上述多孔性合成树脂，是指有多孔性且广的吸附表面积，并且非离子性的苯乙烯-二乙烯基苯聚合物、苯酚-福尔马林树脂、丙烯酸树脂、甲基丙烯酸树脂等的合成树脂，例如，可例示市售的Rohm&Haas公司制的商品名：AmberliteXAD-1、AmberliteXAD-2、AmberliteXAD-4、AmberliteXAD-7、AmberliteXAD-8、AmberliteXAD-11、及AmberliteXAD-12等的树脂；三菱化学株式会社制的商品名：DIAIONHP-10、DIAIONHP-20、DIAIONHP-30、DIAIONHP-40、DIAIONHP-50、DIAIONHP-2MG、SEPABEADSSP70、SEPABEADSSP207、SEPABEADSSP700、SEPABEADSSP800等的树脂；及IMACTI公司制的商品名：IMACTISyn-42、IMACTISyn-44、及IMACTISyn-46等的树脂。

由使用多孔性合成吸附剂的纯化方法时，将酶反应液通入填充有多孔性合成吸附剂的柱，糖基橙皮素吸附到多孔性合成吸附剂上，与此相对，残留的淀粉部分分解物或水溶性糖类等不吸附，直接从柱流出。此时、作为糖基橙皮素的橙皮苷、7-O-β-葡萄糖基橙皮素、及α-糖基橙皮苷，通常，行为一致，无法由多孔性合成吸附剂个别地分离它们。但是，尽管操作变得烦琐，收率降低，将选择性地吸附到填充多孔性合成吸附剂的柱的糖基橙皮素用稀碱、水等的溶剂清洗之后，通入比较少量的有机溶剂或有机溶剂和水的混合液、例如，甲醇水溶液、乙醇水溶液等，α-糖基橙皮苷从柱最初溶出，接下来，通过增加通液量或提高有机溶剂浓度而未反应橙皮苷溶出。对这样得到的含有糖基橙皮素的溶出液进行蒸馏处理而馏去有机溶剂之后，浓缩至期望的浓度，则得到了橙皮苷含量降低的，杂味等降低的糖基橙皮素。再者，由于由上述有机溶剂的糖基橙皮素的溶出操作同时也成为多孔性合成吸附剂的再生操作，有使使用的多孔性合成吸附剂的重复使用变得可能的益处。

另外，在酶反应结束后至使酶反应液与多孔性合成吸附剂接触之间，例如，将对反应液进行加温而将发生的不溶物过滤除去，用硅酸铝酸镁、铝酸镁等处理而将反应液中的蛋白性物质吸附除去，或用强酸性离子交换树脂(H型)、中碱性或弱碱性离子交换树脂(OH型)等处理而脱盐等的纯化方法组合，可制造提高糖基橙皮素的纯度的液状的还原剂处理品。

再者，将上述液状的糖基橙皮素由公知的干燥方法干燥而粉末化而作为在本发明中适宜地使用的粉末状的糖基橙皮素是随意的。

这样，可制造作为不经上述还原剂处理工序而调制的糖基橙皮素(以下，有时称为“还原剂非处理品”)的缺点的特有的杂味显著地降低，而且，着色或臭气也有效降低的还原剂处理品。另外，根据本发明人等确认，还原剂非处理品特有的杂味－着色、或者，臭气仅应用上述纯化方法而基本上不发生改变。即，在还原剂非处理品的制造工序中广泛使用的，例如，使用上述多孔性合成吸附剂的纯化方法有不仅除去淀粉部分分解物或水溶性糖类，可还同时除去水溶性的盐类等的混杂物的益处，但如何驱使这样的纯化方法，显著地降低还原剂非处理品中特有的杂味－着色、或者，臭气是困难的。作为推定的理由，被认为糖基橙皮素中所含的杂味等的原因物质是不是因为向多孔性合成吸附剂的吸脱离的行为与糖基橙皮素同样，无法与糖基橙皮素分离。

另外，适宜地在本发明中使用的改良糖基橙皮素、特别是，还原剂处理品与还原剂非处理品比，杂味显著地降低，电导率也低，与电导率相关的离子性化合物含量降低。再者，作为离子性化合物，例如，作为原材料的橙皮苷中原本含的柚皮芸香苷、香叶木苷、新枳属苷、或者，作为酶反应生成物的葡萄糖基柚皮芸香苷、葡萄糖基新枳属苷等的化合物或其分解物、或者，与该分解物有密切的关联性的化合物、再者认为，来源于改良糖基橙皮素的制造原料，或者在其制造工序中副生成，在本发明中，以作为指标的糠醛为首，除了糠基醇、及羟基甲基糠醛等的糠醛类或其盐类等之外，还可举出在溶液状态下游离出钙、钾、镁、及钠等的金属的阳离子的化合物等。再者，通常适宜地在本发明中使用的还原剂处理品中微量含上述柚皮芸香苷、香叶木苷、新枳属苷、葡萄糖基柚皮芸香苷、葡萄糖基新枳属苷等的成分。再者，将上述离子性化合物在本申请说明书中称为生理学容许性的离子性化合物。

在以上所述的还原剂处理品的制造方法中，使用还原剂，则得到了杂味和着色、特别是，杂味显著地降低的改良糖基橙皮素的机制未确定，推定则如下。

(1)在制造还原剂处理品时，来源于其制造原料而存在杂味的原因物质，使还原剂作用于它们，其原因物质被遮蔽、分解乃至修饰，由此得到了杂味显著地降低的改良糖基橙皮素。

(2)在还原剂处理品的制造工序中，还原剂降低乃至抑制杂味的原因物质生成，或遮蔽、分解乃至修饰生成的杂味的原因物质，由此得到了杂味显著地降低的改良糖基橙皮素。

(3)上述(1)及(2)中所示的杂味的原因物质由还原剂受修饰，变得容易用由多孔性合成吸附剂等的纯化工序而与糖基橙皮素分离，结果，得到了杂味显著地降低的还原剂处理品。

再者，作为适宜地在本发明中使用的改良糖基橙皮素，可还例示使糖基橙皮素含有物和还原剂接触，使糖基橙皮素含有物的杂味或臭气显著地降低。这样的糖基橙皮素含有物也包含在本申请说明书中所说的还原剂处理品中。另外，使糖基橙皮素含有物和还原剂接触，则糖基橙皮素含有物的杂味可显著地降低的同时，也可有效显著地降低着色或臭气。糖基橙皮素含有物和还原剂的接触相比以固状接触，更优选使用水等的适宜溶剂，在溶液状态或悬浮状态下进行。另外，作为接触上述还原剂的糖基橙皮素含有物，可例示含有选自橙皮苷、α-糖基橙皮苷、及7-O-β-葡萄糖基橙皮素的1种或2种以上的糖基橙皮素。作为上述糖基橙皮素含有物，可例示每干燥固体物，通常以50％以上不足100％、更适宜地60％以上不足100％、再者适宜地70％以上不足100％、更还适宜地80％以上不足100％、再者适宜地90％以上不足100％含有糖基橙皮素的糖基橙皮素。

另外，使上述糖基橙皮素含有物和还原剂接触时，使用的还原剂可使用与制造还原剂处理品时同样的。另外，还原剂的使用量，糖基橙皮素的每干燥固体物，通常以0.00001％以上、适宜地0.0001～0.5％、更适宜地0.001～0.4％、更还适宜地0.001～0.3％的范围添加，通过将它们均一地混合，使糖基橙皮素和还原剂接触，即使是不经上述还原剂处理而调制的还原剂非处理品，也可显著地降低其特有的杂味等。

再者，将上述液状的还原剂处理品由公知的浓缩方法浓缩，作为糖浆状或糊状的还原剂处理品，也再由公知的干燥方法干燥，作为固状、颗粒状、或者粉末状的还原剂处理品是随意的。

如以上述，通过将上述进行还原剂处理的酶反应液供于上述纯化方法，可得到作为还原剂非处理品的缺点的特有的杂味等显著地降低的还原剂处理品。

再者，作为由上述制造方法得到的还原剂处理品，基本上不含糠醛的同时，基本上不含作为苯酚醚的一种的4-乙烯基苯甲醚(别名：4-甲氧基苯乙烯)(以下，简写为“4-VA”)，在本发明中使用的改良糖基橙皮素之中，不仅是杂味更显著地降低，着色或臭气也更显著地降低，所以在本发明中最适宜地使用。上述4-VA是被推定为源于改良糖基橙皮素的制造原料而生成的成分，在得到的糖基橙皮素中的含量通常是每干燥固体物不足30ppb，4-VA含量，在糠醛含量不足200ppb的中，通常处于与糠醛含量平行的关系。再者，基本上不含4-VA是指与糠醛的情况同样、与还原剂处理品以外的还原剂非处理品等的其他含有糖基橙皮素的组合物比，4-VA含量处于显著地低的水平。更具体而言，在还原剂处理品中的4-VA含量，由后述的实验4的“(2)4-VA的含量”中所示的使用GC/MS分析装置的分析方法测定之时，通常是每干燥固体物不足30ppb、适宜地不足15ppb、更适宜地不足10ppb、再者适宜地不足5ppb、更还适宜地不足3ppb、更还适宜地不足2ppb。

另外，还原剂处理品有与还原剂非处理品比，着色(以下，有时称为“着色度”)也显著地降低的优良的特征。糖基橙皮素的着色度由后述的实验4的“(3)色调和着色度”中所示的方法测定，其概要如下所述。即，在密闭容器中对以指定浓度含有糖基橙皮素的水溶液进行加热处理之后，对处理液的色调进行肉眼观察的同时，由分光光度计测定波长420nm处的吸光度(OD_420nm)及波长720nm处的吸光度(OD_720nm)，求出两波长处的吸光度的差(OD_420nm-OD_720nm)，以该测定值作为着色度。作为在本发明中使用的糖基橙皮素的适宜的实施方式，可例示上述吸光度的差不足0.24、适宜地是0.20以下，更适宜地0.17以下，再更适宜地超0而0.15以下的。再者，在本测定法中，鉴于对糖基橙皮素的水溶液进行加热，则还原剂非处理品有因加热而着色度显著地增大的缺点，以根据实际情况评价由糖基橙皮素的加热导致的着色的目的设定。

还原剂处理品是含糖基橙皮素和生理学容许性的离子性化合物的含有糖基橙皮素的组合物而以其作为1w/v％水溶液，在密闭容器中于100℃加热30分钟之后，作为20℃之时的电导率不足10μS/cm、适宜地不足8μS/cm、更适宜地不足6μS/cm、更还适宜地超0μS/cm而不足4.5μS/cm的含有糖基橙皮素的组合物。

另外，由上述制造方法得到的还原剂处理品是以选自橙皮苷、α-糖基橙皮苷、及7-O-β-葡萄糖基橙皮素的1种或2种以上的糖基橙皮素作为主体的组合物，适宜地，所述组合物的每干燥固体物的糖基橙皮素含量合计通常是90％以上不足100％、适宜地93％以上不足100％、更适宜地95％以上不足100％、再者97％以上不足100％、98％以上不足100％。

本申请说明书中所说的α-糖基橙皮苷含量是指以含有α-糖基橙皮苷的组合物作为试样，将其由纯化水稀释或溶解至成0.1％(w/v)，由0.45μm膜滤器过滤之后，供于由下述的条件的高效液相层析(HPLC)分析，以试剂橙皮苷(和光纯药工业株式会社销售)作为标准物质使用，基于在UV280nm处的层析谱上出现的峰的面积和橙皮苷、α-糖基橙皮苷(α-葡萄糖基橙皮苷等)等的各成分的分子量计算，在无水物质量换算的组成中的各成分的含量。由所述HPLC分析的糖基橙皮素的定量的概要如下述(1)乃至(4)所示。

<HPLC分析条件>

HPLC装置：“LC-20AD”(株式会社岛津制作所制)

脱气器：“DGU-20A3”(株式会社岛津制作所制)

柱：“CAPCELL PAK C18UG 120”(株式会社资生堂制)

样品注入量：10μl

溶离液：水/乙腈/醋酸(80/20/0.01(容积比))

流速：0.7m1/分

温度：40℃

检测：UV检测器“SPD-20A”(株式会社岛津制作所制)

测定波长：280nm

数据处理装置：“ChromatoPacC-R7A”(株式会社岛津制作所制)

(1)橙皮苷含量：用HPLC进行分析，基于其峰面积和指定浓度的标准物质的试剂橙皮苷(和光纯药工业株式会社销售)的峰面积的比而算出。

(2)α-葡萄糖基橙皮苷含量：用HPLC进行分析，基于其峰面积和指定浓度的标准物质的试剂橙皮苷(和光纯药工业株式会社销售)的峰面积的比，及α-糖基橙皮苷和橙皮苷的分子量比而算出。

(3)7-O-β-葡萄糖基橙皮素含量：用HPLC进行分析，基于其峰面积和指定浓度的标准物质的试剂橙皮苷(和光纯药工业株式会社销售)的峰面积的比，及7-O-β-葡萄糖基橙皮素和橙皮苷的分子量比而算出。

(4)其他糖基橙皮素含量：用HPLC进行分析，基于其峰面积和指定浓度的标准物质的试剂橙皮苷(和光纯药工业株式会社销售)的峰面积的比，及此外的糖基橙皮素和橙皮苷的分子量比而算出。

另外，由上述制造方法得到的还原剂处理品之中、α-糖基橙皮苷优选是α-葡萄糖基橙皮苷的糖基橙皮素，由于更显著地发挥在本发明中的期望的作用效果、即，改善已经生成的皮肤的暗黄的效果。再者，在上述糖基橙皮素中的α-葡萄糖基橙皮苷的适宜的含量优选通常是所述组合物的每固体物60～90％、适宜地70～90％、更适宜地75～90％，它们随着α-葡萄糖基橙皮苷的含量的下限增加，更显著地发挥上述的作用效果。

再者，由上述制造方法得到的还原剂处理品之中、作为1w/v％水溶液，在密闭容器中于100℃加热30分钟之后，调整至室温，放入宽度1cm的池，由分光光度计测定波长420nm(OD_420nm)及波长720nm(OD_720nm)处的吸光度之时的两波长处的吸光度的差(OD_420nm-OD_720nm)优选是不足0.24、适宜地0.20以下，更适宜地0.17以下，再更适宜地0以上0.15以下，更显著地发挥在本发明中的期望的作用效果、即，已经生成的皮肤的暗黄降低作用。另外，在与由不经指定的还原剂处理工序的制造方法得到的糖基橙皮素比，杂味－着色、及臭气显著地降低的点也优良。

再者，由上述制造方法得到的还原剂处理品之中、用高频率诱导结合等离子体发光分光分析法测定之时的还原剂处理品的每固体物的钙、钾、镁、及钠含量处于下述数值范围的含有糖基橙皮素的组合物、即，钙、钾、镁、及钠含量优选各自是1ppm以下，0.1ppm以下，0.2ppm以下，及0.4ppm以下；更适宜地钙、钾、镁、及钠含量各自，0.6ppm以下，0.06ppm以下，0.1ppm以下，及0.3ppm以下；更还适宜地是钙、钾、镁、及钠含量各自，0ppm以上0.5ppm以下，0ppm以上0.05ppm以下，0ppm以上0.08ppm以下，及0ppm以上0.2ppm以下，更显著地发挥在本发明中的期望的作用效果、即，改善已经生成的皮肤的暗黄的效果。另外，在与由以往的制造方法得到的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味－着色、及臭气显著地降低的点也优良。

还原剂处理品杂味显著地，而且，着色或臭气也显著地降低，而且，由于热稳定性也优良，例如，即使将其在80～100℃的高温加热30分钟以上，另外，含有还原剂处理品的工序或将含有其的本发明的暗黄降低用皮肤外用剂在室温乃至若干高于室温的温度经数十分钟～数个月保存，源于还原剂处理品的杂味－着色、再者，臭气也与刚制造时比不改变而保持，或它们的增大被有效抑制。再者，还原剂处理品也有耐酸性、耐热性也良好的益处。

如以上述，在本发明中使用的糖基橙皮素可为还原剂处理品和还原剂非处理品，通常，含有含作为有橙皮素骨架的化合物的(1)α-糖基橙皮苷(α-葡萄糖基橙皮苷等)及(2)橙皮苷及7-O-β-葡萄糖基橙皮素的一方或双方作为主成分的组合物、即，糖基橙皮素混合物，此外认为，来源于其制造原料，或在其制造工序中副生成、(3)柚皮芸香苷、香叶木苷、新枳属苷、葡萄糖基柚皮芸香苷等的类黄酮、及(4)盐类等的微量成分。这样的糖基橙皮素之中、作为本发明中适宜地使用的改良糖基橙皮素，可举出上述(1)及(2)的成分的合计比例(％)(＝糖基橙皮素含量)，通常，以每干燥固体物，90％以上不足100％、适宜地是93％以上不足100％、更适宜地是95％以上不足100％、再者是97％以上不足100％、98％以上不足100％。再者，改良糖基橙皮素也可含橙皮素。

在本发明中使用的改良糖基橙皮素的纯度、即，每干燥固体物的糖基橙皮素含量的上限可通常，工业上比较大量、廉价并且容易地提供的99％、也可为更廉价地提供而是98％、为再更廉价地提供而低含量至97％以下。但是，在所述改良糖基橙皮素的每干燥固体物的糖基橙皮素含量低时，与高含量的比，变得必然大量使用，结果，操作变得烦琐，处理性变差，所以糖基橙皮素含量的下限优选通常设为90％以上、适宜地93％以上、更适宜地95％以上、更适宜地97％以上、再更适宜地98％以上。

作为在本发明中使用的改良糖基橙皮素的更适宜的实施方式，糖基橙皮素是α-葡萄糖基橙皮苷等的α-糖基橙皮苷时，可例示每干燥固体物的α-糖基橙皮苷含量是50％以上不足100％。

另外，作为在本发明中使用的改良糖基橙皮素中的α-葡萄糖基橙皮苷含量的上限，在更廉价地提供本发明的暗黄降低用皮肤外用剂时，可通常，工业上比较大量、廉价并且容易地提供的90％以下，也可更廉价地是85％以下，再更廉价地是80％以下的低含量。另外，α-葡萄糖基橙皮苷含量的下限根据与上述糖基橙皮素含量同样的理由，优选通常设为60％以上、65％以上、或者70％以上。

可向本发明的暗黄降低用皮肤外用剂配合作为有效成分的橙皮素及/或糖基橙皮素以外的其他成分。作为上述其他成分，可例示柚皮素、糖基柚皮素(柚皮苷、葡萄糖基柚皮苷等)；L-抗坏血酸、L-抗坏血酸的盐类、L-抗坏血酸衍生物(L-抗坏血酸2-葡萄糖苷等)等的L-抗坏血酸类；白藜芦醇、槲皮素、绿原酸、花青苷、姜黄素、山柰酚、类黄酮类等的多酚；菜蓟叶提取物、明日叶提取物、草莓种子提取物、银杏叶提取物、温州蜜柑提取物、黑茶藨子提取物、奇异果种子提取物、越桔提取物、西印度组岛樱桃提取物、余甘子提取物、野樱莓提取物等的植物提取物；虾青素、β-胡萝卜素等的类胡萝卜素；有抑制糖化反应本身的作用(以下，称为“糖化反应抑制作用”)的植物提取物或化合物；糖质；有机酸；及氨基酸。特别是，作为本发明的暗黄降低用皮肤外用剂的有效成分的橙皮素及/或糖基橙皮素在与柚皮素、糖基柚皮素(柚皮苷、葡萄糖基柚皮苷等)、L-抗坏血酸类、甘露糖醇、N-乙酰葡萄糖胺、麦芽糖、麦芽三糖醇、棉子糖、麦芽四糖等的糖质、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、水杨酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸内酯、山梨酸、及安息香酸等的有机酸、及甘氨酸及谷氨酸钠等的氨基酸等的1种或2种以上的成分联用时，与这些成分共同作用而有效发挥暗黄降低作用，或作为本发明的暗黄降低用皮肤外用剂的有效成分的橙皮素及/或糖基橙皮素发挥的暗黄降低作用由上述其他成分有效增强，或与这些其他成分发挥的暗黄降低作用互起作用而发挥相加的乃至协同的暗黄降低作用。

作为有上述糖化反应抑制作用的植物提取物或化合物，可举出小米草、透茎冷水花、牛奶子、龙牙草、穗花牡荆果实、木通、蔬食埃塔棕果实、睡茄、罗汉柏、儿茶、栓皮栎、绞股蓝、茴芹、北美金镂梅、Alistin、淫羊藿、虎杖、银杏、日本鹿蹄草、草莓、细叶百合、黏管藻、犬枇杷、风铃木树皮、鸡爪槭、岩户百合、茴香、北美金镂梅、平铺白珠树、姜黄、梅、白背栎、短角淫羊藿(Epimedium brevicornum)、营实、狭叶松果菊、刺五加、金雀儿、龙胆、接骨木、巴拉圭冬青、糖棕、黄檗、黄连、大蓟、燕麦、圆齿碎米荠、猪毛菜、乙女百合、稻槎菜、鬼百合、牛至、橙、南瓜种子、卡图巴树皮、鹿之子百合、巴西香可可、玫瑰茄、细辛、款冬、桔梗、羊蹄、海州常山、粗糠柴、车百合、胡桃、越桔、鸭舌草、相良布、石榴、红薯、墨西哥菝葜、野山楂、山椒草、紫苏、四棱豆、蚊子草、芍药、掌叶大黄、白山菊、藜、白嫁菜、大车前、积雪草、荞麦、高沙百合、种渍花、Davilla rugosa、袂百合、柳叶破布木、丁香、狭叶番泻、壶草、雏菊、莳萝、角胡麻、大吴风草、铁炮百合、角胡麻根、甜茶、桃仁、蕺草、刺梨、杜仲茶叶、番茄、洋委陵菜、皱叶酸模、接骨木、旱金莲、野绀菊、薄荷、博多百合、胡枝子、大野芋、西番莲花、西番莲果、南美苋根、菠萝蜜、绯寒樱、葵花、姬蟒蛇草、姬百合、大花稻槎菜、槟榔、蜂斗菜、扁豆、总状升麻、野茼蒿、葛枣猕猴桃、润楠、松、马刀叶柯、马黛茶、白花百合(Lilium candidum)、玛利亚蓟的瘦果、省沽油、野木瓜、海蕴、柳、薮萱草、山刺番荔枝、山百合、蕹菜、嫁菜、荔枝种子、岷江百合(Lilium regale)、琉球矢竹、琉球蔷薇草莓、苹果未成熟果、椴花、Rooibos、莴苣、柠檬、香茅、柠檬百里香、柠檬马鞭草、香蜂花、蔷薇果、蔷薇花芽、迷迭香、洋蔷薇、月桂、多花指甲兰、采木、地榆、紫云英、柿叶、甘草叶、黑大豆种皮、黑米种子、月桃叶、细叶百合、西洋柳、杜仲叶的叶等的植物的提取物；小海萝、海萝、鹿角海萝等的海藻的提取物；生咖啡豆、甘薯烧酒粕、蘑菇(Agaricus)菌丝体等的提取物；及牛尿酚、异黄酮、1,4-蒽醌、1-氨基-2-羟基甲基蒽醌、4-氨基苯酚、1,3,5-三羟基苯、曲酸、3,4-二羟基苯基醋酸、咖啡酸、艾芬地尔、6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸、6-羟基吲哚、7-羟基-4,6-二甲基苯酞、α-硫辛酸、4-羟基查耳酮、真珠蛋白质水解物、氨基胍、赤藓红钠、麦角硫因、白藜芦醇、3,3′,5,5′-四羟基均二苯乙烯等的羟基均二苯乙烯类、氧基吲哚、肌肽、水杨酸、猪毛菜酚氢溴酸盐、芥子酸、生育酚烟酸酯、烟酰胺、去甲二氢愈创木脂酸、原花青苷、甘露糖醇、水解酪蛋白、水解性单宁、儿茶酚、绿原酸、异绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、阿魏酰咖啡酰奎尼酸等的绿原酸类、无色花青素、樱桃苷、原花青二醇－寡聚体、葡萄糖基芸香苷等。上述成分之中、作为更适宜地在本发明中使用的有糖化反应抑制作用的植物提取物或化合物，可例示睡茄、罗汉柏、儿茶、银杏、平铺白珠树、黄檗、橙、南瓜种子、卡图巴树皮、粗糠柴、葡萄糖基芸香苷、越桔、紫苏、荞麦叶、Davilla rugosa、蕺草、姬蟒蛇草、野茼蒿、葛枣猕猴桃、琉球矢竹、琉球蔷薇草莓、苹果未成熟果、柿叶、甘草叶、月桃叶、杜仲叶的提取物；及牛尿酚、异黄酮、艾芬地尔、真珠蛋白质水解物、儿茶酚、咖啡酸、及樱桃苷等。可与本发明的暗黄降低用皮肤外用剂配合的上述其他成分的配合量相对于所述暗黄降低用皮肤外用剂的全质量，可通常配合0.001％以上、适宜地0.01～50％、更适宜地0.01～30％、再者适宜地0.01～20％、更还适宜地0.01～10％。

本发明的暗黄降低用皮肤外用剂的剂形是任意的，例如，可例示处于粉末状、固状、液状、霜状、及糊状等的形态的。具体而言，例如，可例示软膏、乳液、霜剂、锭剂、颗粒剂、粉剂、喷雾剂、悬浮剂、膏剂、凝胶剂、液剂、凝胶剂、浴用剂、洗液、润肤油、精华液、扑面粉、面膜等。作为使橙皮素及/或糖基橙皮素与本发明的暗黄降低用皮肤外用剂配合的方法，在至这些皮肤外用剂完成的工序中，例如，可例示混合、混捏、混合、添加、溶解、浸渍、渗透、分布、涂布、喷雾、注入等的公知的1种或2种以上的方法。

本发明的暗黄降低用皮肤外用剂可例示处于上述形态的化妆品、药品、或者准药品，与各种化妆品适量配合而使用也是随意的。

在本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中的橙皮素及/或糖基橙皮素的配合量可根据本发明的暗黄降低用皮肤外用剂的应用频度或对象者的皮肤的状态等而适宜设定。但是，通常，在本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中，将选自橙皮素及/或糖基橙皮素的1种或2种以上的成分的全部看作橙皮素而质量换算(以下，在本申请说明书中，简称为“橙皮素换算”)之时，每干燥固体物，合计配合至含超0.0001％不足100％、适宜地超0.001％不足100％、更适宜地超0.01％不足100％、再者适宜地0.01～60％、更还适宜地0.01～40％、更还适宜地0.01～20％。另外，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂外用到对象者的频度及期间优选通常设为一天1～5次、适宜地一天1～3次(朝、昼或晚(夜))，经数天以上、适宜地数周以上、更适宜地1个月以上、更适宜地2个月以上、再者适宜地3个月以上，连日或隔1天以上继续应用。再者，低于上述使用量的下限，则有时变得期望的作用效果显著地降低或发挥不出，另外，高于上述使用量的上限，则变得无法发挥配合使用量的作用效果，从经济性的观点来看也不优选。作为本发明的暗黄降低用皮肤外用剂的应用部位，外皮、特别是，粘膜以外的皮肤适宜应用。

这样得到的，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂在室温乃至若干高于室温的温度保持或保存数十分钟～数个月时，不仅是其本身，在配合其的各种组合物中，不仅是无源于所述暗黄降低剂的着色，也完全无臭气，或者，显著地降低至无法察觉的程度。

以下，对于本发明的暗黄降低用皮肤外用剂而由实验还详细地说明。

<实验1：羰基化蛋白质降低物质的筛选>

(1)概要

可知处于皮肤的深部的真皮的蛋白质由过氧化物质等变性(羰基化)则生成羰基化蛋白质，皮肤显得变黄，所谓、诱发暗黄。在本实验中，使用后述的羰基化蛋白质模型而筛选有暗黄降低作用的物质。

(2)羰基化蛋白质模型

作为羰基化蛋白质模型，调制使牛血清白蛋白(以下，称为“BSA”)羰基化的羰基化蛋白质(以下，称为“羰基化BSA”)，在试验中使用。

<羰基化BSA的调制>

向含100μM作为羰基化诱发剂的次氯酸钠的磷酸缓冲生理盐水(以下，称为“PBS(-)”)溶解BSA至最终浓度成为40mg/mL，于37℃保持一夜，使作为皮肤暗黄的原因物质的羰基化蛋白质模型的羰基化BSA生成，将残留的次氯酸钠由超滤膜(商品名“AmiconUltra10K”、MerckMillipore株式会社)除去，得到羰基化BSA。在本实验中，以此羰基化BSA作为羰基化蛋白质模型使用。

(3)受试试样

以在后述的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物(以下，简称为“含有糖基橙皮素的组合物”)、含有糖基柚皮素的组合物(由专利第3967563号的方法调制的含单葡萄糖基柚皮苷67.6％及柚皮苷22.4％的组合物)、L-抗坏血酸2-葡萄糖苷(商品名“AA2G”、株式会社林原销售)、烟酰胺(纯度98.0％以上、试剂特级、和光纯药工业株式会社销售)、及还原型谷胱甘肽(纯度99％以上、Sigma-Aldrich公司制)作为受试试样使用。

(4)有羰基化蛋白质降低作用(暗黄降低作用)的物质的筛选(单用试验)

本发明人等应用作为筛选羰基化蛋白质生成抑制物质的方法使用的公知的抗羰基化试验法，对于上述表1中所示的受试试样，以下述顺序，对于这些化合物的羰基化蛋白质降低作用而进行研究。即，使在上述(2)中调制的含有10mg/mL的羰基化BSA的溶液100μL和作为有暗黄降低作用的候选物质的上述(3)中所示的受试试样之任一者溶解于PBS(-)至含有0.1w/v％的(全量1ml)。将在上述(2)中调制的羰基化BSA和受试试样以1:1的质量比含的溶液(以下，称为“羰基化蛋白质降低试验用受试溶液”)的全量于37℃保持16小时之后，使用上述超滤膜过滤，除去残留的抗氧化物质。接下来，基于蛋白印迹解析，使用可对蛋白质的氧化水平进行解析的试剂盒(商品名“OxyBlot^TM Protein Oxidation DetectionKit”、MerckMillipore株式会社制)，将羰基化BSA的浓度由点印迹法测定。再者，测定值(发光强度)用作为由美国国立卫生研究所(NIH)开发的图像处理软件的“Image J”解析。一方面，除了未使用受试试样之外，将上述同样地处理而得到的含有羰基化BSA的PBS(-)溶液(以下，称为“对照”)的羰基化BSA的浓度与上述同样地进行测定，各自求出对于其共存各受试试样时的测定值的比例。结果示于表1及图1。再者，与未添加受试物质的对照的羰基化BSA的比例比，羰基化BSA的比例越低，意味着羰基化蛋白质降低作用越大。再者，表中的数值以受试试样未添加的对照中的羰基化BSA的测定值作为1，各自示对于其的各受试试样单独的羰基化BSA的比例。

【表1】

受试试样	羰基化BSA的比例
		对照	1
含有糖基橙皮素的组合物	0.46
		含有糖基柚皮素的组合物	0.77
L-抗坏血酸2-葡萄糖苷	0.73
		烟酰胺	1.05
还原型谷胱甘肽	1.19

如从表1及图1明了，以对照的羰基化BSA的比例作为1之时，含有糖基橙皮素的组合物、含有糖基柚皮素的组合物、及L-抗坏血酸2-葡萄糖苷的羰基化BSA的比例各自是0.46、0.77、及0.73，与对照比，羰基化BSA的比例显示明显低值。这表明，含有糖基橙皮素的组合物、含有糖基柚皮素的组合物、及L-抗坏血酸2-葡萄糖苷有羰基化BSA降低作用、即，羰基化蛋白质降低作用。就是在其中，确证含有糖基橙皮素的组合物的羰基化蛋白质降低作用最高。一方面，烟酰胺及还原型谷胱甘肽均与对照比，羰基化BSA的比例高，所以确证在烟酰胺及还原型谷胱甘肽中无羰基化蛋白质降低作用。

(5)羰基化蛋白质降低试验-其1(含有糖基橙皮素的组合物和其他成分的联用试验)

在上述(4)中，尽管不及羰基化BSA降低作用最高的含有糖基橙皮素的组合物和此含有糖基橙皮素的组合物，但进行了确认羰基化蛋白质降低作用的含有糖基柚皮素的组合物或与L-抗坏血酸2-葡萄糖苷的联用试验。即，除了代替上述(4)中使用的羰基化蛋白质降低试验用受试溶液而使用含有糖基橙皮素的组合物的浓度是0.1、0.5、或者1.0w/v％、及含有糖基柚皮素的组合物或L-抗坏血酸2-葡萄糖苷的浓度是0.1w/v％的羰基化蛋白质降低试验用受试溶液之外，与上述(4)同样地进行试验。结果各自示于下述表2和表3、及图2和图3。再者，表中，未附“％”的数字以含有糖基橙皮素的组合物及含有糖基柚皮素的组合物均未添加的对照中的羰基化BSA(以下，称为“对照”)的测定值作为1，各自示单用或联用对于其的各受试试样之时的羰基化BSA的比例。

【表2】

【表3】

如从表2和图2的结果明了，联用含有糖基橙皮素的组合物(0.1w/v％)和含有糖基柚皮素的组合物(0.1w/v％)之时，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例是0.53降低至0.40。同样地，联用含有糖基橙皮素的组合物(0.5w/v％或1.0w/v％)和含有糖基柚皮素的组合物(0.1w/v％)之时，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例从0.24或0.07各自降低至0.10或0.06。从这些结果确证，联用含有糖基橙皮素的组合物和含有糖基柚皮素的组合物，则含有糖基橙皮素的组合物的羰基化BSA降低作用、即，羰基化蛋白质降低作用增强。

另外，从表3和图3的结果明了，联用含有糖基橙皮素的组合物(0.1w/v％)和L-抗坏血酸2-葡萄糖苷(0.1w/v％)之时，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例是0.53的增加至0.81，在此条件下，确认不到由含有糖基橙皮素的组合物和L-抗坏血酸2-葡萄糖苷的联用的羰基化BSA降低作用。但是，联用含有糖基橙皮素的组合物(0.5w/v％或1.0w/v％)和L-抗坏血酸2-葡萄糖苷(0.1w/v％)之时，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例是0.24或0.07各自降低至0.04或0.02。从这些结果确证，联用含有糖基橙皮素的组合物和L-抗坏血酸2-葡萄糖苷，则含有糖基橙皮素的组合物的羰基化BSA降低作用、即，羰基化蛋白质降低作用增强。

这些见解均是由本发明人等独自发现的新见解。

再者，虽然具体的数据未显示，但后述的实施例2～6中所示的含有糖基橙皮素的组合物均与本实验中使用的含有糖基橙皮素的组合物有同样的作用。

(6)羰基化蛋白质降低试验-其2(含有糖基橙皮素的组合物和各种糖质的联用试验)

在上述(5)中，联用含有糖基橙皮素的组合物和含有糖基柚皮素的组合物或L-抗坏血酸2-葡萄糖苷之时，它们共同地作用而显示羰基化蛋白质降低作用。接着，在本实验中，与含有糖基橙皮素的组合物联用之时，作为提高该羰基化蛋白质降低作用的化合物，关注于糖质，进一步进行检索。

即，除了用下述表4中所示的甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺、麦芽糖(商品名“麦芽糖HHH”)、棉子糖、麦芽四糖、或者糖基海藻糖(商品名“Tornare(注册商标)”、以糖基海藻糖作为主成分的化妆用基材)之任一者代替在上述(4)中使用的含有糖基柚皮素的组合物及L-抗坏血酸2-葡萄糖苷，使用含有以无水物换算0.1w/v％的溶液作为羰基化蛋白质降低试验用受试溶液以外，与上述(4)同样地，对于将上述糖质和含有糖基橙皮素的组合物联用之时的羰基化蛋白质降低作用而进行研究。结果示于表5。

【表4】

【表5】

(联用的效果)

(参考：糖质单独的效果)

如从表5所示的结果明了，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例是0.51，含有糖基橙皮素的组合物与麦芽糖、麦芽四糖、或者糖基海藻糖联用，则显著地降低至0.11、0.13、及0.13。结果确证，在麦芽糖、麦芽四糖、及糖基海藻糖中，有显著地增强含有糖基橙皮素的组合物的羰基化BSA降低作用的作用。一方面，各自单独使用甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺、麦芽糖、棉子糖、麦芽四糖、及糖基海藻糖之时的羰基化BSA的比例各自是0.51、0.48、0.18、0.23、0.71、及0.37，麦芽糖及棉子糖是其本身、确证有羰基化BSA降低作用。将含有糖基橙皮素的组合物与麦芽四糖联用之时，麦芽四糖单独的羰基化BSA的比例不过0.71，在与含有糖基橙皮素的组合物联用之时，激减至0.71～0.13，确证发挥显著的羰基化BSA降低作用。

(7)羰基化蛋白质降低试验-其3(含有糖基橙皮素的组合物和各种有机酸或氨基酸的联用试验)

在本实验中，作为与含有糖基橙皮素的组合物联用的化合物，关注于有机酸及氨基酸，进行试验。除了用表6中所示的乳酸、酒石酸、柠檬酸、水杨酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、及谷氨酸钠之任一者代替上述(4)中使用的含有糖基柚皮素的组合物或L-抗坏血酸2-葡萄糖苷，将含有0.05w/v％的溶液作为羰基化蛋白质降低试验用受试溶液使用的以外，与上述(4)同样地，对于将含有糖基橙皮素的组合物和上述有机酸或上述氨基酸之任1种联用之时的羰基化蛋白质降低作用进行研究。结果示于表7。

【表6】

有机酸及氨基酸	供应商
		乳酸(食品添加剂用)	和光纯药工业株式会社
酒石酸(试剂特级)	东京化成工业株式会社
		柠檬酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
水杨酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
		阿魏酸(纯度99％)	Sigma-Aldrich日本株式会社
葡萄糖醛酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
		葡萄糖醛酸内酯(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
醋酸(食品添加剂用)	岸田化学株式会社
		山梨酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
安息香酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
		甘氨酸(试剂特级)	和光纯药工业株式会社
谷氨酸钠(试剂特级)	和光纯药工业株式会社

【表7】

(联用的效果)

(参考：有机酸或氨基酸单独的效果)

如从表7所示的结果明了，含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例是0.59，含有糖基橙皮素的组合物与乳酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、或者谷氨酸钠联用，则显著地降低至0.35、0.35、0.16、0.49、0.25、0.26、0.44、0.32、及0.28。因此，在乳酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、及谷氨酸钠中，确证有显著地增强含有糖基橙皮素的组合物的羰基化BSA降低作用的作用。再者，供于试验的有机酸及氨基酸在它们单独使用之时的羰基化BSA的比例均处于0.71～1.08的范围，示与以含有糖基橙皮素的组合物单独的羰基化BSA的比例比高的值。

从以上所述的实验结果，将含有糖基橙皮素的组合物与含有糖基柚皮素的组合物、L-抗坏血酸2-葡萄糖苷、麦芽糖、麦芽四糖、糖基海藻糖、乳酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、或者谷氨酸钠联用，则它们共同地作用而与以含有糖基橙皮素的组合物单独使用时比，发挥显著的羰基化蛋白质降低作用。特别是，联用麦芽四糖、乳酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、或者谷氨酸钠，则发挥显著地高的羰基化蛋白质降低作用。

再者，具体数据未显示，但后述的实施例2～6中所示的含有糖基橙皮素的组合物均示与本实验中使用的含有糖基橙皮素的组合物同样的作用。

<实验2：人外用试验-其1>

(1)概要

在实验1中进行的生物体外试验中，在含有糖基橙皮素的组合物中确认显著的羰基化蛋白质降低作用，对于在将含有糖基橙皮素的组合物实际外用于人的皮肤时，对已经生成的羰基化蛋白质的作用进行研究。

(2)涂布试验

以24～38岁的健康的11名(男性7名、女性4名)作为受试者，将与各受试者的优势臂相反的上臂内侧的皮肤(3cm×3.5cm)3处设为受试部位(以下，从受试者的头部侧顺序地称为受试部位A、B、及C)，各自、将由表8所示的配合组成构成的试验液(pH5.7)用绵棒以1天2次[朝和晚(晚间是在入浴后)]在受试部位B涂布7天，在试验开始后第8天向涂布受试试样的各受试部位贴附角质层带剥离用带(商品名“角质层checkerAST-01”、有限会社朝日Biomed销售)而进行带剥离，采集角质层蛋白质(以下，称为“试验结束后的角质层蛋白质”)。再者，作为对照，除了将表8中所示的对照液(pH5.7)涂布到受试部位C之外，与上述同样地进行，采集角质层蛋白质(以下，称为“对照的角质层蛋白质”)。另外，对于受试部位A，预先在试验开始时使用角质层带剥离用带而进行带剥离，采集角质层蛋白质(以下，称为“试验开始时的角质层蛋白质”)。

【表8】

成分	对照液	试验液
			甘油	2.2g	2.2g
丁二醇(BG)	2.0g	2.0g
			PEG-60氢化蓖麻子油	0.2g	0.2g
聚山梨酯20	0.2g	0.2g
			甲基对羟基苯甲酸酯	0.1g	0.1g
在实施例1中得到的含有糖基橙皮素的组合物	0.0g	0.5g
			柠檬酸	适量	适量
氢氧化钾	适量	适量
			纯化水	适量	适量
合计	100g	100g

<判断方法>

羰基化蛋白质降低作用的评价，对于每各受试者涂布试验液的受试部位B的“试验结束后的角质层蛋白质”及受试部位A的“试验开始时的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质(皮肤的暗黄的原因物质)，与实验1的“(2)羰基化蛋白质降低试验(单用试验)”中所示的羰基化BSA浓度的测定方法同样地进行定量。另外，作为对照，对于涂布对照液的受试部位C也与上述同样地对羰基化蛋白质进行定量(以下，称为“对照的角质层蛋白质”)。

另外，对于各受试者，各自求出在涂布试验液的“试验后的角质层蛋白质”或涂布对照液的“对照的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质的量和“试验开始时的角质层蛋白质”中的羰基化蛋白质的量的差[(试验结束后的角质层蛋白质或对照的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)-(试验开始时的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)]、及，比[(试验结束后的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)/(试验开始时的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量)]而进行统计学处理[t检验(单侧)]。

<结果>

对于各受试者，对于涂布试验液的受试部位上的羰基化蛋白质(皮肤的暗黄的原因物质)量进行研究的结果示于图4及图5。如图4所示，在涂布对照液的受试者的情况中，试验结束后的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量与试验开始时比增加，这显示，在本试验期间，受试者的皮肤的羰基化蛋白质的量也增加。与此相比，在涂布试验液的受试者的情况中，试验结束后的角质层蛋白质中的羰基化蛋白质的量与试验开始时比降低。另外，从图5，处于涂布对照液的受试者的相对于与试验开始时比羰基化蛋白质的量增加约1.1倍，在涂布试验液的受试者的情况中，与试验开始时比羰基化蛋白质的量减少，所以意味着处于涂布试验液的受试者的羰基化蛋白质的量显著地降低。即，通过向皮肤涂布含有糖基橙皮素的组合物，确证可显著地降低已经生成的皮肤的羰基化蛋白质。

本实验如实显示，尽管只是仅7天的短期间的涂布试验，但即使这样也得到了显著的结果，证实了糖基橙皮素可显著地有效降低已经生成的皮肤的羰基化蛋白质的事实。另外，本试验结束后，在全体受试者中确认不到源于本试验的皮肤等上的异常，所以判断糖基橙皮素是人可安心日常持续外用的安全的物质。再者，具体数据未显示，但不仅是后述的实施例2～6中所示的含有糖基橙皮素的组合物，本申请说明书中所示的其他糖基橙皮素及橙皮素也均与本实验中使用的含有糖基橙皮素的组合物同样，有对已经生成的皮肤的羰基化蛋白质的降低作用。

本实验使用24～38岁的健康的受试者证实，糖基橙皮素有已经生成的皮肤的羰基化蛋白质降低作用。一方面，根据与本实验不同地进行的试验结果，糖基橙皮素发挥的羰基化蛋白质降低作用相比年轻层，在高龄层(40岁以上)中更显著地确认。这如果考虑伴随年龄的增加而皮肤的代谢降低，作为暗黄的原因物质的羰基化蛋白质缓慢地蓄积到皮肤，皮肤发生暗黄，则容易想到在羰基化蛋白质量多的高龄层应用糖基橙皮素时，糖基橙皮素发挥的羰基化蛋白质降低作用更显著地表现。

<实验3：人外用试验-其2>

(1)概要

接着实验2的“人外用试验-其1”，以人的眼部的皮肤作为受试部位，对于糖基橙皮素对人的皮肤的暗黄的影响而进行研究。

(2)涂布试验

将25～49岁的虽然健康，但在日常生活中感受到精神应激的女性16名作为受试者，随机地分为2组各8名(称为A组、B组)，对于两组的各受试者指示，以左右任何相同的侧的眼部作为受试部位，经计8周连日实施向此受试部位以1天2次[朝和晚(晚间在入浴时，在入浴后涂布化妆水A或B)]、以每1次3mL经手向受试部位涂布由表9所示的配合组成构成的本发明的化妆水A(A组用)或对照的化妆水B(B组用)的处置(以下，称为“使用”)，在使用开始前、使用4周后，及使用8周后进行下述所示的皮肤色测定，研究化妆水A及化妆水B对暗黄的影响。再者，本试验期间，对于受试者全员严守：(a)避免擦受试部位等的物理刺激，(b)避免过度的晒，(c)避免过度的运动，(d)不使用化妆水A、B以外的护肤剂，及(e)在使用开始前、使用4周后，及使用8周后进行皮肤色测定的前夜不饮酒。

<判断方法：色差测定(皮肤色测定)>

将受试部位的皮肤色使用色差计(商品名“柯尼卡美能达分光测色计CM-2600d”、柯尼卡美能达公司制)测定。在色差测定中的解析对象作为L*a*b*表示系中的“L*值”及“b*值”。再者，L*值是表示亮度，b*值表示皮肤的黄色的程度的指标。

在A组的8名之中、由于2名因受试者个人的情况而在试验中途离开，A组的数据解析基于6名的测定结果进行。另外，B组基于8名的测定结果而进行数据解析。由受试者的眼部的皮肤上的色差测定(皮肤色测定)的L*值的测定值和自使用开始后的变化量(ΔL*值)各自示于表10及表11。另外，由受试者的眼部的皮肤上的色差测定的b*值的测定值和自使用开始前的变化量(ΔL*值)各自示于表12及表13。

【表9】

成分	化妆水A(试验液)	化妆水B(对照)
			甘油	2.2	2.2
丁二醇(BG)	2.0	2.0
			PEG-60氢化蓖麻子油	0.2	0.2
聚山梨酯20	0.2	0.2
			在实施例1中得到的含有糖基橙皮素的组合物	0.5	0
柠檬酸	适量	适量
			氢氧化钾	适量	适量
甲基对羟基苯甲酸酯	0.1	0.1
			纯化水	适量	适量
合计	100	100

表中的单位g

【表10】L*值的变化(眼部、测定值)

1)相对于使用开始前的显著差异(对应的有的t检验)

2)相对于化妆水A使用组的显著差异(Student t检验)

※：显著的值的增加

【表11】L*值的变化(眼部、自使用开始前的变化量)

1)相对于使用开始前的显著差异(对应的有的t检验)

2)相对于化妆水A使用组的显著差异(Student t检验)

※：显著的值的增加

【表12】b*值的变化(眼部、测定值)

1)相对于使用开始前的显著差异(对应的有的t检验)

2)相对于化妆水A使用组的显著差异(Student t检验)

※：显著的值的减少

【表13】b*值的变化(眼部、自使用开始前的变化量)

1)相对于使用开始前的显著差异(对应的有的t检验)

2)相对于化妆水A使用组的显著差异(Student t检验)

※：显著的值的减少

<结果>

如表10所示，使用对照的化妆水B的受试者的眼部的皮肤上的L*值的平均值在使用开始前是63.37，在使用4周后是63.77、在使用8周后的时间点示63.70，L*值上确认不到实质上的变化。与此相比，使用含有糖基橙皮素的化妆水A的受试者的眼部的皮肤上的L*值的平均值在使用开始前是63.42，使用4周后的时间点示64.31、使用8周后的时间点示64.27，示与使用开始前比明显高的L*值。另外，如表11所示，使用对照的化妆水B的受试者的L*值的变化量(ΔL*值)以使用开始前的0作为基准，在使用4周后，及使用8周后的时间点，各自为0.40及0.33。与此相比，使用本发明的化妆水A的受试者的ΔL*值以使用开始前的0作为基准，在使用4周后，及使用8周后的时间点，各自为0.90及0.86。这样，作为使用上述化妆水A的受试者的ΔL*值的0.90及0.86均示作为对照的化妆水B的ΔL*值的0.40及0.33的约2倍以上的高值。其中，考虑L*值是皮肤的明亮度的指标，则确证含有本发明的含有糖基橙皮素的组合物的化妆水A有有效改善人的皮肤的明亮度的作用。

另外，如表12所示，使用对照的化妆水B的受试者的眼部的皮肤上的在使用开始前、使用4周后，及使用8周后的b*值各自是17.33、17.03、及17.25，在使用开始前和后确认不到实质上的变化。与此相比，使用含有本发明的糖基橙皮素的化妆水A的受试者的眼部的皮肤上的b*值的平均值在使用开始前是18.41，在使用4周后，及使用8周后的时间点，各自为17.84、及17.70，确认到与使用开始前比显著的减少。进而，该减少的程度如表13所示，使用对照的化妆水B的受试者的b*值的变化量(Δb*值)的平均值是-0.30及-0.08，与此相对，使用含有本发明的含有糖基橙皮素的组合物的化妆水A的受试者的该值在使用4周后及使用8周后的时间点，各自为-0.57及-0.70。这样，使用化妆水A的受试者的Δb*值的变化量与对照的化妆水B的其比，在使用4周后成为约2倍，另外，在使用8周后，成为基本上约9倍。这样，确证化妆水A有极显著地改善人的皮肤上的暗黄的作用。

从本实验结果，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂，将其应用于人的皮肤，则在色差测定(皮肤色测定)中，使作为皮肤的暗黄的指标的b*值显著地降低的同时，改善作为皮肤的明亮度的指标的L*值，所以由本发明的暗黄降低用皮肤外用剂可改善皮肤的暗黄，作为有透明感的健康的色调的皮肤。再者，本发明的暗黄降低用皮肤外用剂发挥的人的皮肤的暗黄改善作用在本剂使用开始前的皮肤的暗黄是高值的受试者中，示更显著地确认的倾向。

<实验4：糖基橙皮素的性质>

作为糖基橙皮素，在后述的实施例2、4、5及6的方法中，除了不使用还原剂之外，与这些实施例中记载的方法同样地调制的4种粉末状糖基橙皮素(受试试样1～4)，和在实施例2的方法中，除了作为还原剂使用0.1、0.09、0.07或0.04％的焦亚硫酸钠之外，使用与实施例2的方法同样地调制的4种粉末状糖基橙皮素(受试试样5～8)。再者，受试试样1由于不使用指定的还原剂而调制，α-葡萄糖基橙皮苷、橙皮苷、及其他成分含量与实施例1中得到的粉末状糖基橙皮素的其大致同等，是与实施例1中得到的粉末状糖基橙皮素同等品。

(1)糠醛的含量

对于受试试样1～8，各自使用下述顺序及装置而求出糠醛含量。

<A.试样的调制>

(A)向50mL容附共栓三角瓶采集0.5g作为受试试样的糖基橙皮素。

(B)接下来，加5.0mL的去离子水而溶解糖基橙皮素，作为替代品物质(分析时，用于研究受试试样的回收率的指标)，加20μL浓度0.0025％的环己醇。

(C)进而，加1.5g氯化钠而溶解，加3mL二乙基醚，以700rpm搅拌10分钟。

(D)将全量移取到分液漏斗，静置10分钟之后，回收二乙基醚相，用硫酸钠脱水后，在氮气流下浓缩至成为约200μL。

(E)采集浓缩液1μL，供于GC/MS分析装置。

(F)作为对照，除了代替糖基橙皮素而使用试剂级糠醛之外，与受试试样同样、进行(A)乃至(E)的处理。

<GC/MS分析条件>

GC/MS分析装置：“Clarus 680GC”及“Claru s SQ8T”(均PerkinElmer公司制)

柱：VF-WAXms[30m(柱长)×0.25mm(内径)、膜厚0.25μm](AGILENT J&W公司制)

检测器：质谱分析器

载体：氦气

线速度35cm/秒

升温条件：于40℃保持3分钟，以5℃/分的比例升温至40℃～80℃，以10℃/分的比例升温至80℃～200℃，于200℃保持7分钟，以10℃/分的比例升温至200℃～220℃，再者，于220℃保持8分钟。

替代品物质：环己醇

内部标准物质：二十一烷

提取溶剂：二乙基醚

<B.试样中的糠醛的定量>

基于对于用GC/MS分析法得到的对照的试剂特级糠醛(和光纯药工业株式会社制)的测定数据制成校准曲线，基于其而求出受试试样的糠醛含量。

(2)4-VA的含量

对于受试试样1～8，各自使用下述试剂、顺序、及装置而测定4-VA含量。再者，其测定基于2006年7月28日、食安基发第0728008号厚生劳动省医药食品局食品安全部基准审查课长通知“对于清凉饮用水中的苯”而进行。

<A.试剂、各种溶液的调制>

(A)氯化钠(水质试验用、和光纯药工业株式会社销售)

(B)环己醇标准原液的调制

将环己醇(试剂一级、片山化学工业株式会社销售)溶解于甲醇(药典一般试验法用)而调制0.01质量％环己醇溶液(以下，称为“环己醇标准原液”)。

(C)内部标准液

使用上述环己醇标准原液和甲醇，调制0.0004质量％环己醇溶液(以下，称为“内部标准液1”)及0.00004质量％环己醇溶液(以下，称为“内部标准液2”)。

(D)标准原液的调制

将4-VA(和光纯药工业株式会社销售)溶解于甲醇，各自调制0.0005质量％4-VA溶液(以下，称为“标准液A”)及0.00005质量％4-VA溶液(以下，称为“标准液B”)。

(E)校准曲线制成用标准原液的调制

使用上述标准液A、B、上述内部标准液1、及甲醇而调制4-VA浓度是0.05、0.1、0.2、0.5或1.0μg/mL的5种校准曲线制成用混合标准原液。

(F)校准曲线制成用标准液的调制

向5瓶20mL容顶部空间瓶各自加10mL超纯水，再加10μL上述5种校准曲线制成用混合标准原液之任一者，再添加氯化钠3.0g，立即密封，搅拌溶解，调制5种校准曲线制成用标准液。

<B.受试试样的调制>

在8瓶20mL容量的顶部空间瓶中精确称取以干燥固体物换算0.20g的受试试样1～8之任一者，向其中加全量超纯水而设为10.0g，搅拌溶解。向得到的水溶液加10μL上述内部标准液2，再添加3.0g氯化钠，立即密封，搅拌溶解，调制含受试试样1～8之任一者的8种受试试样。

<C.4-VA的定量方法>

(A)测定条件

<GC/MS分析条件>

·GC/MS分析装置：“Clarus SQ8TGC/MS”(PerkinElmer公司制)

·顶部空间采样机：“TurboMatrix Trap 40”PerkinElmer公司制)

·柱：VF-WAXms[柱长30m×内径0.25mm、膜厚0.25μm)(AGILENT J&W公司制)

·检测器：质谱分析器

·载体：氦气

·线速度：35cm/秒

·柱注入口温度：200℃

·升温条件：于40℃保持3分钟，以5℃/分的比例升温至40℃～80℃，以10℃/分的比例升温至80℃～200℃，于200℃保持7分钟，以10℃/分的比例升温至200℃～220℃，再者，于220℃保持8分钟。

·瓶烘箱温度：60℃

·针温度：140℃

·转移线温度：205℃

·瓶加热时间：30分钟

<检测法>

·离子化[Electron Impact(EI)]法

·SIM选择离子(Selected Ion Monitoring)

m/z 134，119(4-VA)

m/z 82，57[环己醇(试剂一级、片山化学工业株式会社销售)]

(B)4-VA的定量

基于上述5种校准曲线制成用标准液和上述8种受试试样中的4-VA和内部标准(环己醇)的峰高度比，及另行制成的4-VA的校准曲线，求出在上述受试试样中的4-VA浓度，在基于其而算出受试试样1～8中的4-VA含量。

(3)色调和着色度

对于受试试样1～8的水溶液，各自肉眼观察色调的同时，根据下述顺序求出着色度。即，对于受试试样1～8，各自作为1％水溶液，将其40mL在密闭容器(50mL容积)中于100℃加热30分钟之后，设为27℃，放入宽度1cm的池，由分光光度计(商品名“UV-2600”、株式会社岛津制作所制)测定波长420nm(OD_420nm)及波长720nm(OD_720nm)处的吸光度，求出两波长处的吸光度的差(OD_420nm-OD_720nm)，以该值作为着色度。再者，吸光度差的数值越小，意味着着色度越低。

(4)电导率

接下来，对于这些受试试样1～8，溶解于纯水至各自成为1w/v％水溶液，在密闭容器中于100℃加热30分钟之后，将得到的受试试样1～8的水溶液各自冷却至20℃，由电导率计(商品名“CM-50AT”、东亚DKK株式会社制)测定在20℃的电导率。

(5)离子性化合物的含量

由于对离子性化合物进行定量不容易，作为简便法，由下述方法求出阳离子金属元素的含量。即，对于受试试样1～8，各自在50mL容器(商品名“Falcon管”、日本BectonDickinson株式会社制)中精确称取约0.5g，加热溶解于超纯水20mL，向其添加0.54mL的精密分析用的60％硝酸水溶液，于70℃加热14小时，冷却至室温之后，用超纯水将全量设为50mL，在下述分析装置和测定条件下求出金属元素含量。再者，对照仅使用超纯水。

<装置及测定条件>

·诱导结合等离子体发光分光分析装置：“CIROS-120”(Spectro公司制)

·等离子体电力：1,400W

·等离子体气体(Ar)：13.0L/分

·辅助气体(Ar)：1.0L/分

·喷雾器气体(Ar)：1.0L/分

·泵动作：1.0mL/分

·金属元素含量(ppm)的算出方法：{(受试试样的测定值)-(对照的测定值)}×稀释倍率

上述(1)乃至(5)的结果示于表14。再者，由于受试试样1～8的糖基橙皮素的组成与实施例1、3、4或5中所示的基本上相同，在表14中省略对其组成的记载。

【表14】

*与实施例1的方法中制造的糖基橙皮素同等品

**比作为还原剂非处理品的受试试样1～4所呈的淡黄色淡的色调

如从表14明了，受试试样1～4的糠醛含量均超300ppb，与此相对，受试试样5～8均是约10ppb。另外，受试试样1～4的4-VA含量均是超40ppb，与此相对，受试试样5～8均是约2ppb以下。

另外，如表14所示，受试试样1～4(还原剂非处理品)的水溶液的色调(由肉眼观察)是淡黄色，受试试样5～8(还原剂处理品)的水溶液是与受试试样1～4比明显淡的色调。另外，由分光光度计测量的着色度是，受试试样1～4的水溶液的着色度均是0.24以上，与此相对，受试试样5～8的水溶液均是0.20以下的低值。再者显示，使用的还原剂的量越多，受试试样5～8的着色度越是低值。

再者，如从表14明了，受试试样1～4的水溶液的电导率是约11～约12μS/cm而超10μS/cm，与此相对，受试试样5～8的水溶液是约3～约7μS/cm而不足10μS/cm。

再者，如从表14明了，受试试样5～8的金属元素(钙、钾、镁、及钠)含量是均与受试试样1～4比明显低，结果与电导率的测定结果良好一致。

从以上的结果确证，还原剂处理品与还原剂非处理品比，糠醛含量显著地降低，4-VA含量、着色度、电导率、及金属元素含量也显著地降低。

<实验5：糖基橙皮素的杂味及着色和糠醛及4-VA的含量的关系>

以研究糖基橙皮素的杂味及着色和糠醛及4-VA的含量的关系的目的进行下述的试验。

(1)受试试样的调制

基于后述的实施例5的方法及实施例1的方法，各自调制作为还原剂处理品的糖基橙皮素(以下，称为“试样A”)和作为还原剂非处理品的糖基橙皮素(以下，称为“试样B”)。接下来，为方便起见、将试样A、B以适宜比例配合，调制糠醛含量阶段性地不同的表16中所示的3种糖基橙皮素试样(以下，称为“受试试样9～11”)。

(2)糠醛及4-VA的含量

根据实验4的“(1)糠醛的含量”及“(2)4-VA的含量”中所示的测定方法而各自测定受试试样9～11的糠醛含量和4-VA含量。

(3)着色判断试验

以28～57岁的健康的男女9人(女性2人、男性7人)作为评委，使用受试试样9～11及试样B(以下，称为“对照”)而进行对于着色的评价试验。即，将受试试样9～11及对照各自于室温溶解于蒸馏水至成为1％水溶液，各评委对它们进行肉眼观察，各评委对各受试试样，与对照比，在被评价为“着色降低”时判断为“判断A1”、在被评价为“着色不降低”时判断为“判断B1”，结果示于表15。

(4)感官试验

以上述男女9人作为评委，对于受试试样9～11及对照的杂味进行感官试验。即，将受试试样9～11及对照各自于室温溶解于蒸馏水至成为1％水溶液，各评委对它们进行试饮，各评委对各受试试样，与对照比，在被评价为“杂味改善”时判断为“判断A2”，在被评价为“杂味不改善”时判断为“判断B2”，结果示于表15。

【表15】

注：表中，

“判断A1”表示，在着色判断试验中，各评委与对照比，被评价为“着色降低”，

“判断B1”表示被评价为“着色不降低”。

又、

“判断A2”表示，在感官试验中，各评委与对照比，被评价为“杂味改善”，

“判断B2”表示被评价为“杂味未改善”。

如从表15的结果明了，糖基橙皮素的杂味在糠醛含量在200ppb附近界限时显著地改善，对于4-VA含量以30ppb附近为界限而显著地改善。另外，对于糖基橙皮素的着色也同样。

从这些结果确证，糠醛含量是不足200ppb，4-VA含量是30ppb以下的糖基橙皮素是与以往品比，杂味显著地降低，着色显著地降低的糖基橙皮素。换言之，确证糠醛含量及4-VA含量可作为用于辨别杂味显著地降低，着色显著地降低的糖基橙皮素的指标。即，通过以糠醛含量不足200ppb，4-VA含量是30ppb以下的糖基橙皮素作为指标，可容易地得到本发明的糖基橙皮素。

顺便而言，对于显示既述的实验4的结果的表14、及后述的实施例1～8中所示的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物的杂味和糠醛含量及4-VA含量的关系而综合示于下述表16。表16中，作为还原剂处理品的受试试样5～8(参照上述表14)、及实施例2～8的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物(以下，综合称为“还原剂处理试样”。)的糠醛含量是191ppb以下，4-VA含量是28.7ppb以下，还原剂非处理品特有的杂味显著地降低。与此相比，作为还原剂非处理品的受试试样1～5的粉末状糖基橙皮素(以下，综合称为“还原剂非处理试样”)的糠醛含量是308ppb以上、4-VA含量是40.0ppb以上，有还原剂非处理品特有的杂味。

下述表16中所示的结果与实验4的结果良好一致，基于这些一系列的结果，以糠醛含量及/或4-VA含量作为指标，如辨别糠醛含量不足200ppb及/或4-VA含量不足30ppb，则判断与还原剂非处理品比，可得到杂味显著地降低的糖基橙皮素。

【表16】

注：表中

附“*”的表示是从本说明书中的表14提取的。

又、

“○”表示还原剂非处理品特有的杂味降低，

“×”表示有与还原剂非处理品大致同等的其特有的杂味。

从表16的结果，还原剂处理品由于与还原剂非处理品比，杂味显著地降低，再者，着色或臭气也显著地降低，从而可与本发明涉及的暗黄降低剂适宜地配合而使用。

<实验6：感官试验>

(1)受试试样的调制

使用作为在实验4中使用的还原剂处理品的受试试样5～8之中、糠醛含量、着色度、电导率、及金属元素含量各自示位于中间的值的受试试样6和作为还原剂非处理品的受试试样1～4之中、糠醛含量、着色度、电导率、及金属元素含量示最低值的受试试样1而进行以28～59岁的健康的男女8名(女性2名、男性6名)作为评委的下述(2)中所示的感官试验。即，将还原剂非处理品(受试试样1)和还原剂处理品(受试试样6)各自于室温溶解于RO水(通过逆渗透膜的水)至成为1w/v％水溶液，作为非加热受试试样1、6，将这些在密闭容器中储存至供于下述试验。另外，将非加热受试试样1、6各自放入容器而密闭，在沸腾水浴中加热30分钟，冷却至室温的作为加热受试试样1、6。

(2)感官试验

各评委，对于调整至室温的在上述(1)中得到的非加热受试试样1、6(各10mL)及加热受试试样1、6(各10mL)，在试饮前，各自评价(a)着色和(b)臭气。其后，各评委在试饮各受试试样之前用白开水漱口之后，对于(c)苦味(含涩味，蔹味，收敛味)、(d)后味、及(e)试饮时的臭气而各自进行评价。如评价基准如下述表17所示。再者，相对于非加热受试试样6，以非加热受试试样1作为对照，相对于加热受试试样6，以加热受试试样1作为对照，各评委对于上述(a)乃至(e)的各评价项目进行评价。结果各自示于表18及表19。

(评价基准)

【表17】

(3)感官试验的结果

【表18】(非加热受试试样6(还原剂处理品)的评分分布)

【表19】(加热受试试样6(还原剂处理品)的评分分布)

再者，表18、19中所示的评价结果，对于还原剂非处理品(加热/非加热受试试样1)本身，不显示(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的评价结果，如评价基准所示，表18、19中所示的评价结果是以还原剂非处理品作为基准，评价还原剂处理品，还原剂非处理品本身的评价结果，对于各评价项目，用评价基准中所示的评分(5阶段评价)说，则是中间的“3”。

一方面，如从表18的评价结果明了，非加热受试试样6、即，未加热处理的还原剂处理品是，对于(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的各评价项目，以5阶段评价被评价为最高的“1”的评委数各自是8人中，4人、3人、0人、3人、及4人(合计14人)。一方面，表18的评价结果所示的加热受试试样6、即，加热处理的还原剂处理品是，对于(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的各评价项目，以5阶段评价被评价为“1”的评委数各自是8人中，6人、4人、3人、4人、及5人(合计22人)。结果显示，还原剂处理品是不仅是还原剂非处理品固有的苦味、着色，连臭气也有效降低的高品质的糖基橙皮素。

同样地，如从表19的评价结果明了，非加热受试试样6(未加热处理的还原剂处理品)，对于(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的评价项目，以5阶段评价被评价为最低的“5”及比该最低水平高1阶段的“4”的评委数均是0人(合计0人)。一方面，如从表18的评价结果明了，加热受试试样6(加热处理的还原剂处理品)是，对于(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的评价项目，以5阶段评价被评价为最低的“5”及比该最低水平高1阶段的“4”的评委数均是0人(合计0人)。结果表明，还原剂处理品与还原剂非处理品比，不仅是杂味－着色，是臭气也有效降低的高品质的含有糖基橙皮素的组合物。

从这些结果确证，还原剂处理品与还原剂非处理品比，无论加热/非加热，在还原剂非处理品特有的(a)着色、(b)臭气、(c)苦味、(d)后味、及(e)臭气的全部评价项目中显著地优良的同时，其优劣的差在加热时呈现为更显著的差。

再者，对于上述实验4中所示的受试试样5、7及8也供于本实验6的“(2)感官试验”时，得到了与上述受试试样6大致同等的结果。

这样确证，还原剂处理品是，还原剂非处理品特有的苦味和后味、即，杂味显著地降低的同时，与还原剂非处理品比，着色和臭气也显著地降低。

以下，基于实施例而更详细地说明本发明，但本发明不受这些的限制。

【实施例】

【实施例1】<暗黄降低用皮肤外用剂>

作为原料，与特开平11-346792号公报的实施例A-2中记载的方法同样地，相对于橙皮苷1质量份而使用7质量份糊精(DE20)，每1g糊精加20单位嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearotheromophilus)来源的环麦芽糖糊精－葡聚糖转移酶(株式会社林原制)，维持在pH6.0、75℃，反应24小时，得到糖浆状的含有糖基橙皮素的组合物、向其以每1g含有糖基橙皮素的组合物固体物加100单位葡萄糖淀粉酶(商品名“Glucozyme”、NagaseChemteX株式会社制)，于50℃反应5小时。接下来，减压浓缩得到的糖浆状的含有糖基橙皮素的组合物，粉末化，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而以约60％的收率得到粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。本品含有α-葡萄糖基橙皮苷77.0质量％、橙皮苷15.5质量％、此外的成分7.5质量％。

本品的糠醛含量是310ppb、4-VA含量是40.0ppb、着色度是0.24、及电导率是约11μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约3ppm、约0.2ppm、约0.4ppm、及约1ppm钙、钾、镁、及钠。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。

【实施例2】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将1N氢氧化钠水溶液4质量份加温到80℃，维持此温度而加橙皮苷1质量份及糊精(DE20)7质量份，搅拌30分钟而使溶解，将pH设为9.0，向其以每1g糊精30单位加嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)Tc-91株(独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11273、保藏日：1973年7月30日)来源的CGT酶，维持在pH6.9、50℃而反应18小时，将橙皮苷的约70％变换为α-糖基橙皮苷。接下来，对于得到的酶反应液，添加0.05质量％作为还原剂的焦亚硫酸钠，于100℃加热30分钟的同时，使残留的酶加热失活之后，以每1g酶反应液的固体成分加100单位葡萄糖淀粉酶(商品名“Glucozyme”、Nagase ChemteX株式会社制)，维持在pH5.0、55℃而反应5小时，生成α-葡萄糖基橙皮苷。对得到的酶反应液进行加热而使残留的酶失活，过滤，将滤液以空间速度(SV)2通入填充有多孔性合成吸附剂、商品名“DIAIONHP-10”(三菱化学株式会社销售)的柱。结果，溶液中的α-葡萄糖基橙皮苷和未反应橙皮苷吸附到多孔性合成吸附剂上，D-葡萄糖、盐类等不吸附而流出。接下来，向柱通入纯化水，清洗柱之后，一边阶段性地提高乙醇水溶液浓度，一边进一步通液，采集含有α-葡萄糖基橙皮苷的级分，减压浓缩，粉末化，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而以约70％的收率得到淡黄色的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。其中，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-葡萄糖基橙皮苷80.0质量％、橙皮苷12.3质量％、此外的成分7.7质量％。

本品的糠醛含量是12ppb、4-VA含量是2ppb、着色度是0.19、及电导率是约6μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.4ppm、约0.05ppm、约0.1ppm、及约0.1ppm的钙、钾、镁、及钠。

另外，本品与不使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味和着色显著地降低，臭气也显著地降低，有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟，不仅是杂味－着色，臭气也有效降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在以上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例3】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将1N氢氧化钠水溶液4质量份加温到80℃，维持此温度而向其依次添加橙皮苷1质量份、糊精(DE10)4质量份、及亚硫酸钠0.06质量份，搅拌30分钟而使溶解，用0.01N盐酸溶液中和之后，立即以每1g糊精加20单位嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)Tc-91株(独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11273)来源的CGT酶，维持在pH6.0、75℃，搅拌而反应24小时。采集得到的酶反应液，在用高效液相层析分析时，橙皮苷的约69％变换为α-糖基橙皮苷。接下来，向得到的酶反应液作为还原剂添加焦亚硫酸钠至成为0.03％，于90℃加热120分钟之后，以每1g所述中间生成物加50单位葡萄糖淀粉酶(商品名“Glucozyme”、Nagase ChemteX株式会社制)，维持在pH5.0、55℃而反应10小时，生成α-葡萄糖基橙皮苷。对得到的酶反应液进行加热而使残留的酶失活，过滤，将滤液以SV2通入填充有多孔性合成吸附剂、商品名“DIAIONHP-10”(三菱化学株式会社销售)的柱。结果，溶液中的α-葡萄糖基橙皮苷和未反应橙皮苷吸附到多孔性合成吸附剂上，糖类或盐类等不吸附而流出。接下来，向柱通入纯化水，清洗柱之后，一边阶段性地提高乙醇水溶液浓度，一边进一步通液，采集含有α-葡萄糖基橙皮苷的级分，减压浓缩，粉末化，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而以约68％的收率得到淡黄色的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。再者，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-葡萄糖基橙皮苷79.0％、橙皮苷14.0％、此外的成分7.0％。

本品的糠醛含量是11ppb，4-VA含量是1.5ppb、着色度是0.14、及电导率是约4μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.4ppm、约0.06ppm、约0.1ppm、及约0.1ppm的钙、钾、镁、及钠。

本品与不使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味和着色显著地降低，臭气也显著地降低、有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟，不仅是杂味－着色，臭气也有效降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例4】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将1N氢氧化钠水溶液4质量份加温到80℃，维持此温度而向其依次添加作为还原剂的亚硫酸钠0.1质量份、橙皮苷1质量份、及糊精(DE10)4质量份，搅拌30分钟而使溶解，向其加0.01N盐酸溶液而中和之后，立即以每1g糊精加20单位嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)Tc-91株(独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11273)来源的CGT酶，维持在pH6.0、75℃，搅拌而反应24小时时，橙皮苷的约72％变换为α-糖基橙皮苷。对得到的酶反应液进行加热而使残留的酶失活，过滤，将滤液以SV2通入填充有多孔性合成吸附剂、商品名“DIAIONHP-20”(三菱化学株式会社销售)的柱。结果，溶液中的α-糖基橙皮苷和未反应橙皮苷吸附到多孔性合成吸附剂上，D-葡萄糖、盐类等不吸附而流出。接下来，向柱通入纯化水，清洗柱之后，一边阶段性地提高乙醇水溶液浓度，一边进一步通液，采集含有α-糖基橙皮苷的级分，减压浓缩，粉末化，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而以约71％的收率得到淡黄色的含有粉末状α-糖基橙皮苷的组合物。再者，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-糖基橙皮苷76.0％、橙皮苷18.5％、此外的成分5.5％。

本品的糠醛含量是10ppb、4-VA含量是3.0ppb、着色度是0.17、及电导率是约4μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.3ppm、约0.04ppm、约0.1ppm、及约0.05ppm的钙、钾、镁、及钠。

另外，本品与不使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味和着色显著地降低，臭气也显著地降低之上、有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟，不仅是杂味和着色，臭气也有效降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例5】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将橙皮苷1质量份、糊精(DE8)10质量份、及作为还原剂而焦亚硫酸钠0.05质量份添加到水500质量份中，pH9.5、于90℃加热70分钟，接下来，以每1g糊精30单位加嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)Tc-91株(独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11273)来源的CGT酶，维持在pH8.2、65℃，搅拌而保持40小时，在此酶反应即将结束之前，添加焦亚硫酸钠0.05质量份，于85℃加热，使酶失活之后，向其以每1g酶反应液固体物加100单位葡萄糖淀粉酶(商品名“Glucozyme”、NagaseChemteX株式会社制)，维持在pH5.0、55℃而反应5小时，生成α-葡萄糖基橙皮苷。对得到的酶反应液进行加热而使残留的酶失活。接下来，向得到的酶反应液作为α-L-鼠李糖苷酶添加0.5质量份橙皮苷酶(商名“可溶性橙皮苷酶<田边>2号”、田边制药制)，调整至pH4，于55℃反应24小时，向得到的酶反应液添加焦亚硫酸钠0.01质量份，加热而使酶失活之后，过滤，将滤液以SV2通入填充有多孔性合成吸附剂、商品名“DIAIONHP-10”(三菱化学株式会社销售)的柱。结果，溶液中的α-葡萄糖基橙皮苷、7-O-β-葡萄糖基橙皮素、及未反应橙皮苷吸附到多孔性合成吸附剂上，D-葡萄糖、盐类等不吸附而流出。接下来，向柱通入纯化水，清洗柱之后，一边阶段性地提高乙醇水溶液浓度，一边进一步通液，采集α-葡萄糖基橙皮苷级分，减压浓缩，粉末化，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而以约70％的收率得到淡黄色的将粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。再者，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-葡萄糖基橙皮苷81.9％、橙皮苷0.5％、7-O-β-葡萄糖基橙皮素8.9％、及其他成分8.7％。

本品的糠醛含量是9ppb、4-VA含量是2.0ppb、着色度是0.16、及电导率是约4μS/cm。另外，本品每干燥固体物，钙、钾、镁、及钠各自含有约0.3ppm、约0.03ppm、约0.05ppm、及约0.05ppm。

本品与不使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味和着色显著地降低，臭气也显著地降低，有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟，不仅是杂味和着色，臭气也有效降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例6】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将橙皮苷50质量份和次硫酸钠1质量份于80℃加热溶解于0.25N氢氧化钠水溶液至0.9质量份，添加DE8的糊精150质量份而溶解，调整至pH9.0之后，每1质量份糊精加15单位嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)Tc-91株(独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11273)来源的CGT酶，一边加温至60℃，一边调整至pH8.3，反应6小时。其后，调整至pH7.0，加温到68℃而反应40小时。酶反应结束后，使酶加热失活之后，过滤而得到酶反应液。将酶反应液由高效液相层析(HPLC)分析时，反应前的溶液中的橙皮苷的72％变换为α-葡萄糖基橙皮苷，其余28％是未反应的。向酶反应液作为α-L-鼠李糖苷酶添加2质量份橙皮苷酶(商品名“可溶性橙皮苷酶<田边>2号”、田边制药制)，调整至pH4，于55℃反应24小时之后，加1质量份葡萄糖淀粉酶(商品名“Glucozyme”、Nagase ChemteX株式会社制)，再于55℃反应24小时。酶反应结束后，对得到的酶反应液进行加热而使酶加热失活，经过填充有中间极性多孔性吸附树脂(商品名“AmberliteXAD-7”、Rohm&Haas公司制)的柱，水洗柱，用80v/v％乙醇水溶液溶出树脂吸附成分。除去溶出液中的乙醇之后，冷冻干燥，得到含82.0％的α-葡萄糖基橙皮苷、含8.0％7-O-β-葡萄糖基橙皮素、含1.0％橙皮苷、及含9.0％其他成分的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。

本品的糠醛含量是10ppb、4-VA含量是1.5ppb、着色度是0.15、及电导率是不足10μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.4ppm、约0.04ppm、约0.1ppm、及约0.2ppm的钙、钾、镁、及钠。

本品与不使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比，杂味和着色显著地降低，臭气也显著地降低之上、有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟，不仅是杂味和着色，臭气也有效降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例7】<暗黄降低用皮肤外用剂>

除了对于酶反应液添加0.001％的作为还原剂的偏亚硫酸钾之外，与实施例1同样地，相对于以每固体物原料的橙皮苷质量而约69％的收率得到淡黄色的粉末状糖基橙皮素。再者，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-葡萄糖基橙皮苷79.5％、橙皮苷13.8％、此外的成分6.7％。

本品的糠醛含量是180ppb、4-VA含量是20.0ppb、着色度是0.23、及电导率是不足10μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.5ppm、约0.08ppm、约0.1ppm、及约0.3ppm的钙、钾、镁、及钠。

虽然本品与实施例2～5中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物比差，但与还原剂非处理品比，着色或臭气也显著地降低、在杂味显著地降低的同时，有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟之后，也与还原剂非处理品比，不仅是杂味显著地降低，着色或臭气也有效显著地降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例8】<暗黄降低用皮肤外用剂>

除了用偏亚硫酸钾代替亚硫酸氢钠之外，与实施例7同样地，相对于以每干燥固体物原料的橙皮苷质量而以约65％的收率得到淡黄色的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物。再者，在本例中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物含有α-葡萄糖基橙皮苷77.2％、橙皮苷16.5％、此外的成分6.3％。

本品的糠醛含量是191ppb、4-VA含量是28.7ppb、着色度是0.23、及电导率是不足10μS/cm。另外，本品每干燥固体物各自含有约0.5ppm、约0.07ppm、约0.09ppm、及约0.4ppm的钙、钾、镁、及钠。

虽然本品与实施例2～6中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物的性质比差，但本品与还原剂非处理品比，着色或臭气也显著地降低、杂味显著地降低的同时，有即使在90～100℃的比较高温的条件下加热30分钟之后，也与还原剂非处理品比，不仅是杂味显著地降低，着色或臭气也有效显著地降低的优良的特性。

通过将本品或含有其的化妆品、准药品、及药品外用于人，可有效降低以往被认为困难的已经生成的皮肤的暗黄。另外，本品有可安全并且容易地长期使用的益处。另外，本品即使在上述温度范围或低于其的温度保持或保存数十分钟～数个月时，也发挥不仅是来源于本品的杂味－着色，臭气也有效降低的优良的作用效果。

【实施例9】<暗黄降低用皮肤外用剂>

添加在实施例2～8中得到的7种粉末状的暗黄降低用皮肤外用剂之任一者1质量份、花青苷0.001质量份、纯化水30质量份、及适量的pH调制剂而搅拌，调整至pH7.0，精密过滤，无菌填充到无菌容器中，得到7种本发明的液状的暗黄降低用皮肤外用剂。

本品基本上无着色、异臭，人可日常持续地容易地无不快感地外用。本品通过每一次将约0.01～约0.05mL/cm²日常外用到人的皮肤，有效发挥对已经生成的皮肤的暗黄降低作用。

【实施例10】<暗黄降低用皮肤外用剂>

使实施例2～8中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物之任一者0.01质量份及橙皮素0.0001质量份与纯化水50质量份均一地混合，加热灭菌，填充到无菌容器中，得到7种液状的暗黄降低用皮肤外用剂。

本品均基本上无着色、异臭，人可日常持续地容易地无不快感地外用。本品通过每一次将约0.01～约0.05mL/cm²日常外用到人的皮肤，有效发挥对已经生成的皮肤的暗黄降低作用。

【实施例11】<暗黄降低用皮肤外用剂>

对未使用指定的还原剂而制造的实施例1中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物1质量份合计添加0.0005质量份选自亚硫酸钠、次硫酸钠、焦亚硫酸钾、焦亚硫酸钠、及二氧化硫的1种或2种以上的还原剂，均一地溶解于纯化水50质量份，精密过滤，填充到无菌容器中，得到多种液状的暗黄降低用皮肤外用剂。

本品在室温乃至比较高温的环境下保存数十分钟～数个月后，基本上确认不到源于本品的杂味－着色、臭气的增大乃至变化，保存稳定性及热稳定性优良。

另外，本品基本上无着色、异臭，人可日常持续地容易地无不快感地外用。本品通过每一次将约0.01～约0.05mL/cm²日常外用到人的皮肤，有效发挥对已经生成的皮肤的暗黄降低作用。

【实施例12】<暗黄降低用皮肤外用剂>

将满足化妆品成分基准或化妆品规格的以下的成分根据以下的配方而由常规方法混合，制造8种喷雾剂类型的暗黄降低用皮肤外用剂。

<配方>

在实施例1～8中得到的粉末状的含有糖基橙皮素的组合物之任1种	0.1质量份
		透明质酸钠液(1％、化妆品规格)	15质量份
海藻糖(化妆品规格)	0.5质量份
		L-胱氨酸(化妆品规格)	0.05质量份
鼠尾草提取物(化妆品规格)	1.0质量份
		桃叶提取物(化妆品规格)	0.5质量份
聚氧乙烯(20)聚氧基聚丙烯(8)鲸蜡基醚(化妆品规格)	0.3质量份
		纯化水(化妆品规格)	残余
合计	100质量份

将本品填充到100mL容喷雾剂容器中，得到液状喷雾剂。本喷雾剂是，向想要暗黄降低的期望的皮肤的部位，将其适量以每1天1～5次、连日或隔日经数天至数个月应用，则作为可有效降低已经生成的皮肤的暗黄的同时，向皮肤的水分的渗透性也优良，保持皮肤的保湿性也优良，爽快的使用感的基础化妆品有用。另外，本喷雾剂还显示稳定的清洁作用，所以作为低刺激性的清洁用喷雾剂也有用。

【工业实用性】

由本发明的暗黄降低用皮肤外用剂可有效降低已经生成的皮肤的暗黄。作为在本发明的暗黄降低用皮肤外用剂中使用的糖基橙皮素，特别是，在使用利用指定的还原剂调制的糖基橙皮素时，与不使用指定的还原剂而调制的以往的糖基橙皮素比，着色或不快的臭气也显著地降低，所以人可日常持续地安全并且容易地，而且，无不快感地外用。这样，本发明对本领域的影响甚大，本发明的产业上的利用可能性极大。

Claims (15)

1.用于降低已经生成的皮肤的暗黄的皮肤外用剂，其中含橙皮素及/或糖基橙皮素作为有效成分。

2.权利要求1所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素是选自橙皮苷、α-糖基橙皮苷、及7-O-β-葡萄糖基橙皮素的1种或2种以上。

3.权利要求1或2所述的皮肤外用剂，其特征在于，α-糖基橙皮苷是α-葡萄糖基橙皮苷。

4.权利要求1～3之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素基本上不含糠醛，每干燥固体物含有50质量％以上不足100质量％的糖基橙皮素。

5.权利要求1～4之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素是用GC/MS分析法测定的糠醛含量是每干燥固体物，不足200ppb的糖基橙皮素。

6.权利要求1～5之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素基本上不含4-甲氧基苯乙烯。

7.权利要求6所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素用GC/MS分析法测定的4-甲氧基苯乙烯含量是每干燥固体物，不足30ppb。

8.权利要求1～7之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，每干燥固体物的α-糖基橙皮苷的含量是50质量％以上不足100质量％。

9.权利要求1～8之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素作为1％水溶液，将其在密闭容器中于100℃加热30分钟之后，调整至27℃，放入宽度1cm的池，由分光光度计测定波长420nm及波长720nm处的吸光度之时的两波长处的吸光度的差是不足0.24。

10.权利要求1～9之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素作为1w/v％水溶液，在密闭容器中于100℃加热30分钟之后，作为20℃之时的电导率是不足10μS/cm。

11.权利要求1～10之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，糖基橙皮素用高频率诱导结合等离子体发光分光分析法测定之时的组合物的每干燥固体物的钙、钾、镁、及钠的含量各自是1ppm以下，0.1ppm以下，0.2ppm以下，及0.4ppm以下。

12.权利要求1～11之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，进一步含选自糖质、有机酸、及氨基酸的1种或2种以上。

13.权利要求12所述的皮肤外用剂，其特征在于，有机酸是乳酸、酒石酸、水杨酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸内酯、醋酸、山梨酸、安息香酸、甘氨酸、及谷氨酸钠。

14.权利要求1～13之任一项所述的皮肤外用剂，其中合计含0.0001质量％以上不足100质量％橙皮素及/或糖基橙皮素。

15.权利要求1～14之任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，处于锭剂、颗粒剂、粉剂、喷雾剂、悬浮剂、糊状剂、胶状剂、或者液剂的形态。