CN107843469A

CN107843469A - 一种稳定的生化类复合校准品及其制备方法

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Publication number: CN107843469A
Application number: CN201710832759.XA
Authority: CN
Inventors: 张勇; 蒋琳
Original assignee: Zhongsheng Beikong Biological Science & Technology Co Ltd
Current assignee: Zhongsheng Beikong Biological Science & Technology Co Ltd
Priority date: 2017-09-15
Filing date: 2017-09-15
Publication date: 2018-03-27
Anticipated expiration: 2037-09-15
Also published as: CN107843469B

Abstract

本发明涉及一种稳定的生化类复合校准品及其制备方法，属于生物体外诊断技术领域。本发明生化类复合校准品，由于加入赋形剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂组成的复合保护物质，使得校准品中各分析成分稳定，在室温避光条件下可稳定1个月，在4℃避光下可稳定2年，在‑20℃避光下可稳定3年；本发明的校准品由于在制备过程中采用核黄素光化学法灭活了各种潜在病原微生物，使得校准品无潜在病原微生物危害性；本发明的生化类复合校准品包含的成分多，极大的方便了临床的使用；所述制备方法可溯源至国际或国内参考物质，确保临床检验结果的准确性。

Description

一种稳定的生化类复合校准品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种稳定的生化类复合校准品及其制备方法，属于生物体外诊断技术领域。

背景技术

我国临床诊断试剂的需求量增长较快，要达到小康水平的医疗保健水平还有一定差距，目前我国全年医疗检验费用仅5亿美元，人均只有0.5美元，远远达不到世界卫生组织要求至少应达到每人年平均医疗检验费用为2美元。据统计分析报告，过去五年及未来的五年内，国际体外诊断行业的年增长率为3～5％。国内体外诊断行业的年增长率约15～20％，因此我国生化试剂的潜在市场是相当巨大的，但国内的生化试剂80％依靠进口，生化试剂市场基本都被国外知名的大公司所垄断，自主开发产品尤为迫切。

国产试剂要提高产品质量，保障检测结果的可靠性，以帮助临床诊断及采取事宜的治疗。体外诊断试剂校准品、质控品是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果准确的主要工具，其质量好坏直接关系人类疾病的确诊。校准品是临床使用较多的物质，试剂盒批次的更换、生化分析仪的维护与维修，都要使用校准品给试剂盒重新定标，以确保检验结果的准确性。现有的校准品有液体和冻干粉两种状态，液体校准品相对冻干粉校准品不用复溶，使用方便，但稳定性相对较差；而冻干粉的制备工序繁琐，生产成本高，但其质量稳定。因而配方设计人员不得不在产品性能质量和生产成本之间权衡。

CN 104198733A公开了一种稳定的液体脂类校准品，采用在缓冲溶液中加入蛋白质类稳定剂、电解质NaCl、抗氧化增效剂、糖类稳定剂及蛋白酶抑制剂等，提高了载脂蛋白A1与载脂蛋白B的稳定性，但其稳定期为在2-8℃冷藏一年，稳定周期较短，而且校准品包含分析项目较少。

国外如罗氏公司研发的cfas校准品可以为30多项诊断试剂提供校准，为冻干粉状态，稳定时间可以达到2年，包含生化类项目较多，但其应用成本较高。国内如中生北控生物科技股份有限公司研发的生化多项校准品包含21个项目，2-8℃保存有效期为18个月，且其分析项目较少，这样不包含的项目需要单独提供校准品，给临床检验工作带来极大的不便。

随着各级临床检验中心对临床实验室室内质量控制和室间质量评价的日益重视，检测系统的配套性及检测结果的准确性要求越来越高，国内公司由于受校准品与试剂盒配套及溯源性等因素的限制，大多数三甲医院都相继替换了国产生化试剂而使用项目种类齐全、具有系统性和溯源性的进口产品。因此，打破国外技术垄断，开发品种齐全、成本低廉、存储稳定性好且适合国内需求的自主产品，实现检测结果的准确性和可靠性显得尤其重要。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术中的校准品包含项目少并且保存时间短的缺点，提供一种稳定保存的生化类复合校准品。该稳定的生化类复合校准品的基质为血清，其含有赋形剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂组成的保护物质。

本发明的另一目的在于提供一种稳定的生化类复合校准品的制备方法。

本发明技术方案如下。

一种稳定的生化类复合校准品，其基质为血清，其原料含有如下组分：

1)保护物质：

赋形剂20-150g/L 抗氧化剂0.05-50mmol/L

表面活性剂0.1％-2％(w/v) 稳定剂10-50g/L

防腐剂0.1％-0.5％(w/v)

2)分析成分：

进一步地，所述稳定的生化类复合校准品，其基质为血清，其原料含有如下组分：

1)保护物质：

赋形剂50-100g/L 抗氧化剂1-10mmol/L

表面活性剂0.1％-1％(w/v) 稳定剂10-50g/L

防腐剂0.1％-0.5％(w/v)

2)分析成分：

进一步地，所述赋形剂包含蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、山梨糖醇等中的一种或几种。

进一步地，所述抗氧化剂包含抗坏血酸、叔丁基对苯二酚、硫代二丙酸、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯等中的一种或几种。

进一步地，所述表面活性剂包含tween-20、triton-100(聚乙二醇辛基苯基醚)、聚乙烯吡咯烷酮、烷基糖苷、辛基酚氧乙烯醚等中的一种或几种。

进一步地，所述稳定剂为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白等中的一种或几种。

进一步地，所述防腐剂为NaN₃或Proclin300(SUPELCO公司新一代高效生物防腐剂)。

进一步地，所述稳定的生化类复合校准品为冻干粉。

本发明所述各组分或原料均可市售获得。

本发明还提供上述稳定的生化类复合校准品的制备方法，包括如下步骤：

1)收集血液材料，检测剔除不合格的血液；

2)分离血清(可采用离心等方法)，过滤后作为血清基质；

3)检测分析血清中各质控成分含量；

4)按配比调整血清中各组分含量；

5)采用核黄素光化学法灭活血清中各种潜在病原微生物；

6)按配比加入保护物质，搅拌均匀；

7)过滤(如用0.2μm滤膜)，分装。

进一步地，上述稳定的生化类复合校准品的制备方法还包括将步骤7)过滤后的物料低温冷冻干燥，制成冻干粉。

进一步地，上述稳定的生化类复合校准品的制备方法还包括用参考测量程序分析校准品中各成分含量，并以国际或国内参考物质对校准品进行量值溯源。

本发明可以血库废血、临床检验废血标本或哺乳动物血液等为血液材料。哺乳动物可以是牛、羊或马等。要求血液材料中人类免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2)抗体、丙型肝炎病毒HCV抗体、乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg、梅毒等检测结果均为阴性。

本发明还包括上述方法制备的稳定的生化类复合校准品。

本发明还包括上述稳定的生化类复合校准品在作为体外诊断试剂方面的应用。

本发明的优点：

1)本发明制备的生化类复合校准品，由于加入赋形剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂组成的复合保护物质，使得校准品中各分析成分稳定，在室温避光条件下可稳定1个月，在4℃避光下可稳定2年，在-20℃避光下可稳定3年；

2)本发明的校准品由于在制备过程中采用核黄素光化学法灭活了各种潜在病原微生物，不仅有效防止微生物对校准品分析成分的降解，而且还能降低校准品的病原生物学危害，避免操作者在接触过程中的感染；

3)本发明的生化类复合校准品可以为32项生化试剂提供校准，包含的分析成分多，而且在上述1)和2)的作用下，储存有效期长，极大的方便了临床的使用；所述制备方法可溯源至国际或国内参考物质，确保临床检验结果的准确性。

本发明提供的稳定的生化类复合校准品适于工业化大规模生产，解决校准品保存不稳定的困难，开发的校准品包含项目种类多，方便临床的使用，并且在达到进口产品的质量水平的同时降低了生产成本，另外，由于本校准品可溯源至国内标准物质，更适合中国人群生化项目的诊断，提高了诊断的准确性。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。

实施例1

1)保护物质：

蔗糖含量50g/L，甘露醇含量50g/L 抗坏血酸含量1.0mmol/L

辛基酚氧乙烯醚含量0.50％(w/v) 牛血清白蛋白含量10.0g/L

NaN₃含量0.10％(w/v)

2)分析成分：

该稳定的生化类复合校准品的制备方法，包括如下步骤：

1)收集临床检验废血，要求乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg、丙型肝炎病毒HCV抗体、人类免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2抗体、梅毒皆为阴性；

2)离心分离血清，经过0.2μm滤膜过滤后作为备用血清基质；

3)按常规方法分析测定血清中各校准成分含量；

4)按照校准品的浓度要求，调整各分析成分的含量，加入相应物质，使之达到要求浓度；

5)采用核黄素光化学法灭活各种潜在病原微生物；

6)加入保护物质，其中蔗糖含量50g/L，甘露醇含量50g/L，抗坏血酸含量1.0mmol/L，辛基酚氧乙烯醚含量0.50％(w/v)，牛血清白蛋白含量10g/L，NaN₃含量0.1％(w/v)，搅拌均匀；

7)用0.2μm滤膜过滤后分装；

8)将分装好的校准品进行低温冷冻干燥，制成冻干粉；

9)用参考测量程序分析校准品中各成分含量，并以国际或国内参考物质对校准品进行定值溯源

10)贴标签及包装。

将最终得到的校准物进行稳定性观察，结果见表1。可知，由于采用核黄素光化学法灭活各种潜在病原微生物和保护物质的加入，使得校准品中各分析成分稳定，在室温避光条件下可稳定1个月，在4℃避光条件下可稳定2年，在-20℃避光条件下可稳定3年。

表1不同温度条件下校准品中碱性磷酸酶的实时稳定性

实施例2

1)保护物质：

海藻糖含量50g/L，山梨糖醇含量50g/L 丁基羟基茴香醚含量1.0mmol/L

triton-100含量0.50％(w/v) 牛血清白蛋白含量10.0g/L

NaN₃含量0.10％(w/v)

2)分析成分：

该稳定的生化类复合校准品的制备方法，包括如下步骤：

2)离心分离血清，经过0.2μm滤膜过滤后作为备用血清基质；

3)按常规方法分析测定血清中各校准成分含量；

4)按照校准品的浓度要求，调整各校准成分的含量，加入相应物质，使之达到要求浓度；

5)采用核黄素光化学法灭活各种潜在病原微生物；

6)加入保护物质，其中海藻糖含量50g/L，山梨糖醇含量50g/L，丁基羟基茴香醚含量1.0mmol/L，triton-100含量0.5％(w/v)，牛血清白蛋白含量10g/L，NaN₃含量0.1％(w/v)，搅拌均匀；

7)0.2μm滤膜过滤后分装；

8)将分装好的校准品进行低温冷冻干燥，制成冻干粉；

9)用参考测量程序分析校准品中各成分含量，并以国际或国内参考物质对校准品进行定值溯源；

10)贴标签及包装。

将最终得到的校准物进行稳定性观察，结果见表2。可知，由于采用核黄素光化学法灭活各种潜在病原微生物和保护物质的加入，使得校准物中各分析成分稳定，在室温避光条件下可稳定1个月，在4℃避光条件下可稳定2年，在-20℃避光条件下可稳定3年。

表2不同温度条件下校准品中碱性磷酸酶的实时稳定性

时间(月)	室温	4℃	-20℃
				1	0.78％	0.64％	0.67％
6	3.27％	1.18％	1.12％
				12	5.04％	1.35％	1.24％
18	8.61％	1.74％	1.48％
				24	——	2.36％	1.65％
30	——	4.82％	2.45％
				36	——	6.35％	2.80％
42	——	——	3.50％

实验例

为了研究保护剂对校准品稳定性及产品复溶性的影响，先添加完各分析成分(与实施例1相同)后，设计如下表3中1-8组配方，第9组作为空白对照血清，不添加保护剂，经过冻干、包装，制备产品，分别放在2-8℃冰箱及37℃恒温箱保存。应用中生北控生物科技股份有限公司相应的试剂盒及其校准品测定产品中各成分含量，观察不同保护剂对产品稳定性及复溶性的影响。实验结果见表3、表4和表5。

实验结果表明：加入保护剂的校准品在14天37℃加速试验中，回收率均大于75％，没有保护剂的校准品回收率为64.3％，保护剂明显提高了校准品的稳定性，而且由于表面活性剂的作用，校准品复溶所需时间更短，这也为临床使用节约了时间。

表3保护剂配方优化设计

表4不同配方保护剂制备校准品随时间在37℃加速回收率

组别	1天	4天	7天	10天	14天
						1	99.7％	97.7％	89.4％	84.2％	76.0％
2	98.7％	96.4％	96.0％	92.6％	88.5％
						3	99.7％	97.4％	98.7％	93.7％	87.5％
4	98.0％	96.2％	92.0％	85.1％	78.4％
						5	97.8％	97.1％	95.1％	89.7％	86.3％
6	97.0％	98.3％	93.9％	91.9％	90.2％
						7	97.1％	98.6％	95.8％	91.5％	87.4％
8	99.2％	96.3％	97.5％	92.1％	89.5％
						9	87.9％	81.6％	74.4％	68.5％	64.3％

表5保护剂对校准品复溶性的影响

组别	时间(min)
		1	18.5
2	16.6
		3	17.1
4	15.8
		5	19.2
6	17.6
		7	20.3
8	18.0
		9	34.0

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种稳定的生化类复合校准品，其基质为血清，其原料含有如下组分：

1)保护物质：

赋形剂20-150g/L 抗氧化剂0.05-50mmol/L

表面活性剂0.1％-2％(w/v) 稳定剂10-50g/L

防腐剂0.1％-0.5％(w/v)

2)分析成分：

2.根据权利要求1所述稳定的生化类复合校准品，其特征在于，其原料含有如下组分：1)保护物质：

赋形剂50-100g/L 抗氧化剂1-10mmol/L

表面活性剂0.1％-1％(w/v) 稳定剂10-50g/L

防腐剂0.1％-0.5％(w/v)

2)分析成分：

3.根据权利要求1或2所述稳定的生化类复合校准品，其特征在于，所述赋形剂包含蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、山梨糖醇中的一种或几种；和/或，

所述抗氧化剂包含抗坏血酸、叔丁基对苯二酚、硫代二丙酸、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯中的一种或几种；和/或，

所述表面活性剂包含tween-20、trixon-100、聚乙烯吡咯烷酮、烷基糖苷、辛基酚氧乙烯醚中的一种或几种；和/或，

所述稳定剂为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或几种；和/或，所述防腐剂为NaN₃或Proclin300。

4.根据权利要求1所述稳定的生化类复合校准品，其特征在于，其原料含有如下组分：

1)保护物质：

蔗糖含量50g/L，甘露醇含量50g/L 抗坏血酸含量1.0mmol/L

辛基酚氧乙烯醚含量0.50％(w/v) 牛血清白蛋白含量10.0g/L

NaN₃含量0.10％(w/v)

2)分析成分：

5.根据权利要求1所述稳定的生化类复合校准品，其特征在于，其原料含有如下组分：1)保护物质：

triton-100含量0.50％(w/v) 牛血清白蛋白含量10.0g/L

NaN₃含量0.10％(w/v)

2)分析成分：

6.根据权利要求1-5任一项所述的稳定的生化类复合校准品，其特征在于，其为冻干粉。

7.权利要求1-6任一项所述稳定的生化类复合校准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)收集血液材料，检测剔除不合格的血液；

2)分离血清，过滤后作为血清基质；

3)检测分析血清中各质控成分含量；

4)按配比调整血清中各组分含量；

5)采用核黄素光化学法灭活血清中各种潜在病原微生物；

6)按配比加入保护物质，搅拌均匀；

7)过滤，分装；

或者，进一步地，还包括将步骤7)过滤后的物料低温冷冻干燥，制成冻干粉。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括用参考测量程序分析校准品中各成分含量，并以国际或国内参考物质对校准品进行量值溯源；和/或，

所述血液材料来自血库废血、临床检验废血标本或哺乳动物血液。

9.权利要求7或8所述方法制备的稳定的生化类复合校准品。

10.权利要求1-6、9任一项所述稳定的生化类复合校准品在作为体外诊断试剂方面的应用。