CN110940781A - 一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学领域，具体涉及一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质及其制备方法，参考物质由如下方法制得：先将瘦肉煮熟后粉碎放冷，再将熟肉糜浸泡于浸泡液中进行冷浸泡并搅拌混合均匀，该浸泡液包含一定比例的亚硝酸钠、防腐剂以及抗氧化剂，最后将浸泡后的肉糜预冻后进行冷冻干燥并过筛混匀，制得肉类粉末参考物。本发明提供的参考物质均匀性良好，稳定性强，可在20℃常温下保存12个月以上。而且该参考物质在使用时无需将标准物质加入待测样品，可以避免标准物质与基体结合从而影响检测结果的情况，提高了检测结果的准确性和可靠性，并且该参考物质的适用范围广。
Description
技术领域
本发明属于化学技术领域，具体为一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质及其制备方法。
背景技术
亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，主要指亚硝酸钠。亚硝酸钠是一种白色至淡黄色粉末或颗粒状物质，味微咸，易溶于水，外观及味道都与食盐相似。高浓度的亚硝酸盐不仅可改善肉制品的感观色泽，还可大大缩短肉制品的加工时间。亚硝酸盐作为肉制品护色剂，其在肉制品生产加工中有着广泛的应用，可与肉品中的肌红蛋白反应生成玫瑰色亚硝基肌红蛋白，增进肉的色泽，以维持良好外观；还具有一定的防腐剂作用，肉制品中加入一定浓度的亚硝酸盐，可防止肉毒梭菌的产生，从而延长肉制品的货架期。因此肉制品中亚硝酸盐超标的现象较为普遍，甚至有少数不法经营者将病死猪肉先经双氧水浸泡漂白，再添加大量的亚硝酸盐，最后经过加工而达到正常肉制品的色泽效果；而腊肉中添加大量的亚硝酸盐，经一夜熏烤就可达到正常熏烤十几天的色泽和硬度，并且“格外光鲜”。
亚硝酸盐在酸性条件下为强氧化剂，进入人体后，可将血中低铁血红蛋白氧化，进而成为高铁血红蛋白，使血红蛋白失去运氧功能，导致人体组织缺氧，出现青紫而中毒。研究表明：成人在误食0.3～0.5克亚硝酸盐后会导致食物中毒，误食3克及3克以上，即导致人体死亡。亚硝酸盐同时还是一种致癌物质，据研究，食道癌与患者摄入的亚硝酸盐量呈正相关性；亚硝酸盐在烹调或其他条件下，肉品内的亚硝酸盐可与氨基酸降解反应，生成有强致癌性的亚硝胺，亚硝胺能够透过胎盘进入胎儿体内，对胎儿有致畸作用。6个月以内的婴儿对亚硝酸盐特别敏感，临床上患“高铁血红蛋白症”的婴儿即是食用浓度高的亚硝酸盐食品引起的。
因此欧盟规定亚硝酸盐严禁用于婴儿食品。在2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，在导致内源性亚硝化条件下摄入的硝酸盐或亚硝酸盐在2A类致癌物清单中。鉴于亚硝酸盐在食品安全性方面存在一定的隐患，国家对肉制品中的亚硝酸盐的添加量有严格的限值，GB 2760-2011中规定：肉制品成品中亚硝酸盐残留量(以NaNO2计)不得大于30mg/kg，最大添加量为0.15g/kg。
在实际检测中，需要将标准物质加入到待测样品中，现有的检测手段中的标准物质即为含有预定量的亚硝酸盐的溶液，用该溶液浸泡待检测样品后，在与待检测样品进行比对，存在检测误差，进而无法对待检测样品的质量进行控制，因此需要一种带基体的参考物质来协助检测才能保证检测结果的准确性或满足要求。目前对含有亚硝酸盐的阳性、阴性肉类粉参考物质的制备技术或相近技术无公开文献介绍，因此研制一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质对于检测方法的开发、检测过程的质量控制、实验室能力验证、实验室间比对及在快速检测领域用于快速检测过程中对快检产品进行有效性验证及质量控制等具有重要意义。
发明内容
在实际检测中，需要将标准物质加入到待测样品中，现有的检测手段中的标准物质即为含有预定量的亚硝酸盐的溶液，用该溶液浸泡待检测样品后，在与待检测样品进行比对，存在检测误差，进而无法对待检测样品的质量进行控制，为了解决这一技术问题，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质及其制备方法。本发明要解决的技术问题通过以下技术方案实现：
第一方面，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，包括以下步骤：
获取熟肉糜；
配制浸泡液，所述浸泡液包括：防腐剂、抗氧化剂、亚硝酸钠、高纯水，其中，所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.0-3.0g/kg，所述抗氧化剂与所述熟肉糜质量比值的范围为50-100mg/kg，所述亚硝酸钠的质量为设定量；
将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中并混匀，浸泡预设时间后取出熟肉糜，并其均质混匀，得到浸泡后的熟肉糜；
在预设条件下预冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜；
冷冻干燥所述冷冻熟肉糜，得到冷冻干燥粉，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质。
可选的，所述获取熟肉糜包括：
称取预设量的瘦肉；
将所述瘦肉切块并煮熟，得到煮熟后的瘦肉块；
将所述瘦肉块沥干，并用粉碎机粉碎沥干后的瘦肉块，得到熟肉糜。
可选的，所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.5g/kg；
所述抗氧化剂与所述熟肉糜的质量比值的范围为80mg/kg；
所述亚硝酸钠的纯度大于99.0％，所述亚硝酸钠的质量根据所制备的含亚硝酸盐的肉类粉末参考物的亚硝酸盐含量而定；
将所述防腐剂、所述抗氧化剂、设定量的所述亚硝酸钠溶于预设量的高纯水中，配制得到所述浸泡液，其中，所述预设量的高纯水的质量与所述所述熟肉糜的质量比值为1：1。
可选的，所述预设时间为12-24h。
可选的，将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中并混匀，浸泡预设时间后取出熟肉糜，并将其均质混匀，得到浸泡后的熟肉糜包括：
将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中；
利用搅拌工具不断搅拌所述熟肉糜，直至所述熟肉糜在所述浸泡液分布均匀，之后浸泡放置12h后取出，得到预浸泡熟肉糜；
将所述预浸泡熟肉糜置于混合机混合，得到混合熟肉糜；
将所述混合熟肉糜置于均质机内进行均质，得到浸泡后的熟肉糜。
可选的，冷冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜包括：
将所述浸泡后的熟肉糜置于盛装容器中，将盛装有所述浸泡后的熟肉糜的盛装容器置于冷冻装置内；
将冷冻装置的冷冻温度设置为不高于零下30℃的温度；
冷冻0.5-2.0h后，得到冷冻熟肉糜。
可选的，将所述冷冻熟肉糜冷冻干燥包括：
将所述冷冻熟肉糜置于冷冻机内，将冷冻机的压力范围调整在0.06-0.2Mbar之间、温度调整为不高于零下30℃，进行一次干燥；
将所述冷冻机的温度设置为10-30℃，进行二次干燥；
持续干燥预定时间后取出，得到冷冻干燥后的熟肉糜。
可选的，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质包括：
检测所述冷冻干燥粉的水分，检测标准为在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量大于等于5wt％，则将冷冻干燥粉继续冷冻干燥，直至在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％为止；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量小于5wt％，则利用粉碎机粉碎冷冻干燥粉，得到冷冻后的冻干粉；
将冷冻后的冻干粉置于筛上并反复过筛，过筛次数不少于6次，得到过筛后的冻干粉，其中筛的筛目范围为30-40目；
将过筛后的冻干粉混匀，得到肉类粉末参考物质。
可选的，冷冻干燥所述冷冻熟肉糜，得到冷冻干燥粉，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质之后，还包括：
将所述肉类粉末参考物质进行充氮包装、辐照杀菌，所述辐照杀菌的条件为辐射源为钴60、辐照强度为4kGy、辐照杀菌时间不低于20h。
第二方面，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，该含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质由上述方法制得。
本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质均匀性良好，稳定性强，可在20℃常温下保存12个月以上；其次，本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，在检测过程中，无需将标准物质加入待测样品，可以避免标准物质与基体结合进而影响检测结果，提高了检测结果的准确性和可靠性，而且该标准物质适用范围广，不仅可以用于肉类粉末或肉制品中亚硝酸钠含量的日常分析检测，还可以用于检测方法的开发、实验室能力验证、实验室间比对及在快速检测领域中，用于快速检测进而对快检产品进行质量控制。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例提供的一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法流程图。
图2为本发明实施例提供的另一种有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本发明的专业术语解释：
BHA：丁基羟基茴香醚(BHA)，白色或微黄色结晶状物，熔点48～63℃，沸点264～270℃(98KPa)，高浓度是略有酚味，易溶于乙醇(25g/100mL，25℃)、丙二醇和油脂，不溶于水。BHA对热稳定，在弱碱条件下不易被破坏，与金属离子作用不着色。
BHT：BHT化学名称为2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚，它以对甲酚、异丁醇为原料，以浓硫酸作为催化剂，氧化铝为脱水剂，反应生成2.6-二叔丁基对甲酚，在食品加工中用作抗氧化剂。抗氧剂是指一些能够抑制或者延缓高聚物和其他有机化合物在空气中热氧化的有机化合物，通俗来说，即是能防止聚合物材料因氧化引起变质的物质。
TBHQ：TBHQ即叔丁基对苯二酚，为白色或微红褐色结晶粉末，有一种极淡的特殊香味，几乎不溶于水(约为百分之5)，溶于乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂。是一种强抗氧化剂，能清除自由基。
为了使在实际检测肉类中亚硝酸盐含量的过程中，无需将参考物质加入待测样品，可以直接通过参考物质直接与待检测肉类进行比对，提高检测结果的准确性和可靠性，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质及其制备方法。下面首先对本发明实施例所提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法进行介绍。
需要说明的是，本发明实施例所提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法可以应用于化工行业、质量检测行业。
请参见图1，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，包括以下步骤：
S110.获取熟肉糜。
在本发明实施例中熟肉糜可以是猪肉、牛肉、羊肉等各肉类中的任一种，具体的可以根据用户的实际检测需求来选择肉类，其中，采购的肉类可为生鲜肉，也可为冷冻肉，本发明实施例以猪肉为例，具体的对本发明实施例所提供的技术方案进行阐释。
在本发明实施例中，熟肉糜可以直接获得即直接采购，也可以自己制作，得到猪肉糜后，对其进行粉碎，从而保证后续的浸泡工序中，猪肉糜可以有效且充分的接触浸泡液。
S120.配制浸泡液，所述浸泡液包括：防腐剂、抗氧化剂、亚硝酸钠、高纯水，其中，所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.0-3.0g/kg，所述抗氧化剂与所述熟肉糜质量比值的范围为50-100mg/kg，所述亚硝酸钠的质量为设定量。
在优选的实施方式中，以猪肉糜的质量为基础，防腐剂的质量与猪肉糜的质量比为2.5g/kg，抗氧化剂的质量与猪肉糜的质量比80mg/kg。
在本发明实施例中，将防腐剂、抗氧化剂加入至浸泡液中，并用浸泡液浸泡熟肉糜，起到了防腐以及抗氧化的作用，延长了参考物质的保存时间，其中，防腐剂可以是山梨酸及其钾盐，还可以是苯甲酸及其钠盐，亦或者是其他可以实现防腐功能的物质，其目的是为了实现防腐功能，本发明实施例不对防腐剂的种类进行限定，上述防腐剂的纯度可以是食品级，也可以是纯品级，在具体的实施过程中，需保证防腐剂中的有效物质的质量与熟肉糜质量的比值范围在50-100mg/kg即可；抗氧化剂可以是BHA，也可以是BHT，亦或者是TBHQ，还可以是其他可以实现抗氧化功能的物质，其目的是为了抗氧化功能，本发明实施例不对抗氧化剂的种类进行限定，上述抗氧化剂的纯度可以是食品级，也可以是纯品级，在具体的实施过程中，需保证抗氧化剂中的有效物质的质量与熟肉糜质量的比值范围在50-100mg/kg即可。
在本发明实施例中，亚硝酸钠作为亚硝酸盐加入之浸泡液中，其中，亚硝酸盐的含量为设定量，上述设定量的解释为：如果用户要制备20mg/KG含量的参考物质，需要对批次的猪肉进行失水率的判定，具体的判定方法如下：将同批次的猪肉采用本发明实施例所提供的方法进行预制作，在制作过程中，不加入亚硝酸钠，最后得到不加亚硝酸钠的猪肉粉，称定初始猪肉的重量以及最后得到的猪肉粉的重量，将猪肉粉的重量除以初始猪肉的重量，得到失水率，按照该失水率，即可得知每千克初始猪肉制作完成后得到猪肉粉的重量，例如，初始猪肉重量为1KG，采用本发明实施例所提供的制备方法加工完成后得到0.556KG的猪肉粉，其失水率为75％，因此，在制备1KG含有亚硝酸钠36mg的参考物质时，需要加入20mg的亚硝酸钠。同理，当猪肉糜的质量大于1KG时，按照预定比例，计算得出亚硝酸钠的质量，并将上述质量的亚硝酸钠加入之浸泡液中，由于每一批次的猪肉含水量均不同，所以，在制备过程中，每一批次的猪肉均需要进行失水率的判定。
请参见下表：其中表1为不含有亚硝酸盐的参考物质配方表，表2为含有36mg/KG亚硝酸盐的参考物质配方表。
| 名称 | 规格 | 用量 | 备注 |
| 防腐剂 | 食品 | 2.5g | 防腐剂 |
| 抗氧化剂 | 食品 | 80mg | 抗氧剂 |
| 亚硝酸钠 | 99.0％ | 0.0mg | 原料 |
| 高纯水 | / | 1.5L | 润湿剂 |
| 猪瘦肉糜 | 食品 | 1kg | 辅料 |
| 猪肉粉 | 参考物质 | 0.556 | 最终产品 |
表1含亚硝酸钠(0mg/kg)猪肉粉参考物质配比表
| 名称 | 规格 | 用量 | 备注 |
| 防腐剂 | 食品 | 2.5g | 防腐剂 |
| 抗氧化剂 | 食品 | 80mg | 抗氧剂 |
| 亚硝酸钠 | 99.0％ | 20mg | 原料 |
| 高纯水 | / | 1.5L | 润湿剂 |
| 猪瘦肉糜 | 食品 | 1kg | 辅料 |
表2含亚硝酸钠(36mg/kg)猪肉粉参考物质配比表
S130.将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中并混匀，浸泡预设时间后取出熟肉糜，并其均质混匀，得到浸泡后的熟肉糜。
在本发明实施例中，将粉碎后的猪肉糜浸泡在步骤S120中制备的浸泡液中，持续12小时，可以将猪肉糜在浸泡的过程中，利用搅拌工具搅匀，以保证猪肉糜与浸泡液充分，上述的搅拌工具可以是机械搅拌机，也可以是搅拌棒，亦或者是其他可以实现搅拌功能的工具，本发明实施例不对搅拌工具进行限定，浸泡完成后，将浸泡好的猪肉粉依次经混合机、均质机进行混合、均质实现均匀混合。其中混合采用的混合方式为机械搅拌混合，混匀时的参数为：三维混合机内混合，转速40r/min，混合时间不少于30min；均质时的参数为：采用的是单柱塞或双柱塞高压均质，流量为30L/h。
S140.在预设条件下预冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜。
在本发明实施例中，可将猪肉糜放置在托盘或装量瓶中，并将载有猪肉糜的托盘置于冷冻箱或者冷冻室内进行冷冻，冷冻条件为温度在零下30℃以下，冷冻时间为0.5-2h，具体的，冷冻时间受猪肉糜铺设和填瓶厚度的影响，例如，1KG猪肉糜，预冷冻1小时。
S150.冷冻干燥所述冷冻熟肉糜，得到冷冻干燥粉，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质。
在本发明实施例中，冷冻干燥包括一次干燥，二次干燥，一次干燥即升华干燥时，将冷冻的猪肉糜置于冷冻机内，冷冻机的操作压力控制在0.06～0.2Mbar之间，冷冻干燥的温度设置不超过-30℃，进一步地优选，干燥条件为温度-44℃，压力0.08Mpa，以猪肉糜的铺设和填瓶厚度为基础，干燥时间不少于24h/1kg；二次干燥即解析干燥时，将冷冻机的干燥温度设置在10～30℃，优选的，解析干燥温度设置为20℃，以猪肉糜的质量为基础，干燥时间不少于24h/1kg，即每千克猪肉糜一次干燥和二次干燥的时间总和不小于48h，在上述干燥条件下，猪肉糜的干燥速度快，并且得到的冷冻干燥粉能较好的保持猪肉糜在预冷冻时的原始状态，有利于粉碎，也能提高后期的混合效率。
在本发明实施例中，配置浸泡液的过程中可以不加入防腐剂以及抗氧化剂，也可以仅加入防腐剂，亦或者仅加入抗氧化剂，是否加入防腐剂以及抗氧化剂仅对肉类粉末参考物质的保质期产生影响，并不影响肉类粉末参考物质的制备，因此，在浸泡液的配置过程中，不添加防腐剂和抗氧化剂，或者仅添加防腐剂，亦或者仅添加抗氧化剂均属于本发明的保护范围。
本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质均匀性良好，稳定性强，可在20℃常温下保存12个月以上；其次，本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，在检测过程中，无需将标准物质加入待测样品，可以避免标准物质与基体结合进而影响检测结果，提高了检测结果的准确性和可靠性，而且该标准物质适用范围广，不仅可以用于肉类粉末或肉制品中亚硝酸钠含量的日常分析检测，还可以用于检测方法的开发、实验室能力验证、实验室间比对及在快速检测领域中，用于快速检测进而对快检产品进行质量控制。
在本发明的一种具体实施方式中，步骤S110，可以按以下步骤实现：
称取预设量的瘦肉；
将所述瘦肉切块并煮熟，得到煮熟后的瘦肉块；
将所述瘦肉块沥干，并用粉碎机粉碎沥干后的瘦肉块，得到熟肉糜。
在实际应用中，获取熟肉糜的方式有以下几种：
采购生鲜肉后冷冻肉，以猪肉为例，采购生鲜猪瘦肉或冷冻猪瘦肉；
称量预设量的生鲜猪瘦肉或冷冻猪瘦肉，其中，预设量根据用户的需求而定，可以是1KG，也可以是10KG，具体根据制作成品的质量而定。
将猪瘦肉沥干，并用粉碎机粉碎，得到猪肉糜，其中，粉碎机为现有的粉碎设备，仅实现本发明实施例的粉碎效果即可，本发明实施例不对其具体限定。
在本发明的一种具体实施方式中，所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.5g/kg；
所述抗氧化剂与所述熟肉糜的质量比值的范围为80mg/kg；
所述亚硝酸钠的纯度大于99.0％，所述亚硝酸钠的质量根据所制备的含亚硝酸盐的肉类粉末参考物的亚硝酸盐含量而定；
将所述防腐剂、所述抗氧化剂、设定量的所述亚硝酸钠溶于1L的高纯水中，配制得到所述浸泡液。
在本发明实施例中，溶剂为高纯水，未采用自来水或矿物质水，有效避免了自来水或矿物质水中含有的亚硝酸盐对参考物质中亚硝酸盐含量产生的影响。
在本发明的一种具体实施方式中，所述预设时间为12-24h，此预设时间为熟肉糜浸泡在所述浸泡液中的时间，具体的，预设时间的设定根据熟肉糜的质量而定。
在本发明的一种具体实施方式中，步骤S130可以按照以下步骤实现：
将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中；
利用搅拌工具不断搅拌所述熟肉糜，直至所述熟肉糜在所述浸泡液分布均匀，之后浸泡放置12h后取出，得到预浸泡熟肉糜；
将所述预浸泡熟肉糜置于混合机混合，得到混合熟肉糜
将所述混合熟肉糜置于均质机内进行均质，得到浸泡后的熟肉糜。
在本发明的一种具体实施方式中，步骤冷冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜包括：
将所述浸泡后的熟肉糜置于盛装容器中，将盛装有所述浸泡后的熟肉糜的盛装容器置于冷冻装置内；
将冷冻装置的冷冻温度设置为零下30℃；
冷冻0.5-2.0h后，得到冷冻熟肉糜。
在本发明的一种具体实施方式中，步骤将所述冷冻熟肉糜冷冻干燥可以通过以下步骤实现：
将所述冷冻熟肉糜置于冷冻机内，将冷冻机的压力范围调整在0.06-0.2Mbar之间、温度调整为不高于零下30℃，进行一次干燥；
将所述冷冻机的温度设置为10-30℃，进行二次干燥；
持续干燥预定时间后取出，得到冷冻干燥后的熟肉糜。
在本发明的一种具体实施方式中，步骤将冷冻干燥后的熟肉糜粉碎并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质可以通过以下步骤实现：
检测所述冷冻干燥粉的水分，检测标准为在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量大于等于5wt％，则将冷冻干燥粉继续冷冻干燥，直至在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％为止；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量小于5wt％，则利用粉碎机粉碎冷冻干燥粉，得到冷冻后的冻干粉；
将冷冻后的冻干粉置于筛上并反复过筛，过筛次数不少于6次，得到过筛后的冻干粉，其中筛的筛目范围为30-40目；
将过筛后的冻干粉混匀，得到肉类粉末参考物质。
在本发明实施例中，冷冻干燥处理后的猪肉冻干粉的水分含量＜5wt％。控制冷冻干燥粉的水分小于5wt％，可以防止标准物质在保存是时结块以及确保粉碎后粉末的流动性。粉碎后的冷冻干燥粉还将进行过筛、混匀步骤，过筛使用的筛的目数为30-40目，反复过筛6次以上后混匀。筛的目数为30-40目，可较好的去除大颗粒，且能提高后期的混合效率，筛目数大于40目过筛较困难，效率低，筛目数小于30目，大颗粒物料无法除去，影响标准物质的均匀性。
在本发明的一种具体实施方式中，还包括：
将所述肉类粉末参考物质进行充氮包装、辐照杀菌，所述辐照杀菌的条件为辐射源为为钴60、辐照强度为4kGy、辐照杀菌时间不低于20h。在杀菌之前，可以将得到的参考物质粉末进行封装，用普通西林瓶充氮包装，每瓶装3g。
第二方面，本发明实施例提供了一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，该含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质有上述方法制得。
本发明实施例提供的本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质均匀性良好，稳定性强，可在20℃常温下保存12个月以上；其次，本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，在检测过程中，无需将标准物质加入待测样品，可以避免标准物质与基体结合进而影响检测结果，提高了检测结果的准确性和可靠性，而且该标准物质适用范围广，不仅可以用于肉类粉末或肉制品中亚硝酸钠含量的日常分析检测，还可以用于检测方法的开发、实验室能力验证、实验室间比对及在快速检测领域中，用于快速检测进而对快检产品进行质量控制。
参考物质的品质分析
1.标准物质
含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质。
2.制备工艺中的测定方法
制备过程中，对制得的参考物质进行测定，参照国标GB5009.33-2016《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定第二法分光光度法》。
3.分析仪器条件
分光光度计检测波长为538nm。
4.测定结果及分析
4.1均匀性检验
各浓度项下均匀性检验的总体样本数共200个，顺序编号后按总体样本数N的3×N1/3随机抽取15个样品进行均匀性检验，每个样品在相同条件下重复检测3次为一组，共15组数据，采用单因素方差分析方法对数据进行统计分析，计算组内的均方差与组间均方差，以及各自的自由度，显著性水平α，按方差检验给定的计算方法计算统计量F，通过查JJF1343-2012附录B，找出临界值F，进行比较，做出结论。计算结果见表3。计算公式：
每瓶的测定平均值：
其中n为每瓶测定次数，
总测定平均值：
其中m为测定组数，
组间方差：
组内方差：
组间自由度：f1＝m-1，其中m为测定组数，
组内自由度：f2＝N-m，
组间均方：
组内均方：
由表3结果可以看出，均匀性实验所得的F值均小于Fa(14，30)，表明样品间不存在显著性差异，证明所得的样本是均匀的。
表3亚硝酸盐参考物质均匀性检验结果及方差分析结果
4.2稳定性检验
稳定性检验的样品模拟能力验证样品传递的实际状态保存，采用t检验法对检验结果进行统计处理。
数据统计方法依据JJF1343-2012采用线性拟合方程模型为稳定性研究基本模型，可表示为：
Y＝b0+b1X+ε
式中：
X-时间；
Y--参考物质的特性值；
b0、b1-回归系数；
ε-随机误差分量。
对于稳定性较好质控样品，b0为测定得到的值，b1期望值为0，X与Y之间的线性关系可用t检验法进行检验，具体计算方法如下：
直线斜率的计算：
截距的计算：
与斜率相关的不确定度的计算：
直线上点标准偏差的计算：
计算结果见表4，通过查JJF1343-2012附录G，找出临界值t，得自由度为5，置信水平为0.95的t因子为2.57，由计算结果可以看出，|b1|＜t0.95,5×S(b1)，故斜率是不显著的，因而说明样品在12个月期间未观测的不稳定性。
表4亚硝酸盐参考物质稳定性检验结果及结果分析
4.3定值及不确定度评估
参考物质的定值由10个认可实验室协作完成，定值的检测方法采用标准GB5009.33-2016《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定第二法分光光度法》。每个实验室对同一样品测定三次，检测数据见表5。
对所有数据进行统计分析：
4.31、科克伦检验
先利用科克伦检验，对其标准差的最大值进行检验，查看是否有离群数据，要求所有标准差都是在重复条件下获得，且由相同数目计算结果得出。
科克伦检验统计量：
其结果判定规则为：
实验室数P＝10，每个实验室测定数n＝3，通过查JJF1343-2012附录H，找出临界值科克伦检验5％的临界值为0.4450,1％的临界值为0.5358。
实验结果分析，7号实验室标准偏差最大，科克伦检验统计量计算结果为：0.235。
由以上计算结果可以看出，所检各个浓度指标的检验统计量C≤C(5％)，则10个实验室的检验结果全部通过科克伦检验。
4.32对10个实验室的检测均值进行单值格拉布斯检验
利用单格拉布斯检验分析10个实验室检验结果平均值之间的变异，
格拉布斯检验统计量计算公式Gp为：
式中：
G1P(G11)------平均值中最大值(最小值)统计量；
X(1p)(X(11))-----平均值最大值(最小值)；
s------平均值标准偏差。
其结果判定规则为：
实验室数P＝10，通过查JJF1343-2012附录E，找出临界值格拉布斯检验的临界值表，G(5％)的临界值为2.290,G(1％)的临界值为2.482。
按上述公式计算得：G1p＝0.6948
由以上计算结果可以看出，所检各个浓度向下指标的G1＜C(5％),所有数据的均值可保留参加双值格拉布斯检验。
4.33、对10个实验室的检测均值进行双值格拉布斯检验
双格拉布斯检验量G2P的计算公式为：
其中：G2P是检验最大的两个值是否为离群值，G21是检验最小的两个值是否为离群值，S(P-1，P) 2为P个数据去除最大两个值后的方差，S(1，2) 2为P个数据去除最小两个值后的方差，S0 2为原数组方差。
其结果判定规则为：
实验室数P＝10，查格拉布斯检验的临界值表，G(5％)的临界值为0.1864,G(1％)的临界值为0.1150。
按上述公式计算得：G2P＝0.5882，G21＝0.8824；
由以上计算结果可以看出，所检各个浓度指标的G2p≥G(5％),所有数据均为正确值，均可保留并参与定值。
表5亚硝酸盐参考物质定值结果
5、不确定度评估：
本批参考物质采用的定值方式是由10家实验室协同定值的方案，引入的不确定度主要包括四个方面：1、短期稳定性引入的不确定度；2、测定值的标准不确定度μchar；3、瓶间差异引入的不确定度μbb；4、长期稳定性引入的不确定度μlts。本批参考物质定值方式是协同定值，短期稳定性引入的不确定度已包含在实验室的检测值中，故可忽略不计。
5.1、测定值的标准不确定度
检测数据经科克伦检验与格拉布斯检验分析，所有数据均可保留并参与最终定值，参考物质的定值即为平均值的均值，与平均值的均值有关的合成标准不确定计算方式为：
其中：
Yi-----实验室检测结果平均值；
P------实验室数；
s------平均值标准偏差。
由表5可计算测定值的标准不确定度，计算结果见表6。
5.2、瓶间差异引入的不确定度μbb
在对样品均匀性研究中，瓶间均匀性已被验证，统计方法采用单因素方差分析，由下列公式计算瓶间差异引入的不确定度μbb：
瓶间方差计算：
瓶间标准偏差：
重复性标准偏差：
由瓶间均匀度引入的不确定度：
由表2～表5可计算瓶间差异引入的不确定度，计算结果见表15。
5.3、长期稳定性引入的不确定度μlts
稳定性数据统计采用线性拟合方程模型，由稳定性研究结果表明，在14个月期间样品是稳定均匀的，故由长期稳定性引入的不确定度μlts可按下式计算：
ults＝sb×t
由表4计算的sb带入公式计算得μlts，计算结果见表6。
5.4合成不确定度
合成不确定度是通过是通过对参考物质的定值、均匀性和稳定性对特性值对总不确定度的贡献来计算的，计算方式见下表：
其中置信水平为95％时，k＝2,本批参考物质定值方式是协同定值，短期稳定性引入的不确定度已包含在实验室的检测值中，故此处usts＝0，计算结果见表6。
表6不确定度评定表
| 名称 | μ<sub>char</sub> | μ<sub>bb</sub> | μ<sub>lts</sub> | μ<sub>CRM</sub> |
| 亚硝酸盐质控样 | 0.1230 | 0.05967 | 1.124 | 2.265 |
6、测定结果
本发明参考物质最终确定标准值由定值的总平均值与不确定度组成，结果为亚硝酸盐质控样：36±2.26mg/kg。参考物质的稳定性只研究至12个月，则暂定其保质期为12个月，如材料的稳定性得到进一步证明，则有效期还可延长。
本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质均匀性良好，稳定性强，可在20℃常温下保存12个月以上；其次，本发明提供的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，在检测过程中，无需将标准物质加入待测样品，可以避免标准物质与基体结合进而影响检测结果，提高了检测结果的准确性和可靠性，而且该标准物质适用范围广，不仅可以用于肉类粉末或肉制品中亚硝酸钠含量的日常分析检测，还可以用于检测方法的开发、实验室能力验证、实验室间比对及在快速检测领域中，用于快速检测进而对快检产品进行质量控制。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
获取熟肉糜；
配制浸泡液，所述浸泡液包括：防腐剂、抗氧化剂、亚硝酸钠、高纯水，其中，所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.0-3.0g/kg，所述抗氧化剂与所述熟肉糜质量比值的范围为50-100mg/kg，所述亚硝酸钠的质量为设定量；
将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中并混匀，浸泡预设时间后取出熟肉糜，并其均质混匀，得到浸泡后的熟肉糜；
在预设条件下预冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜；
冷冻干燥所述冷冻熟肉糜，得到冷冻干燥粉，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质。
2.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，所述获取熟肉糜包括：
称取预设量的瘦肉；
将所述瘦肉切块并煮熟，得到煮熟后的瘦肉块；
将所述瘦肉块沥干，并用粉碎机粉碎沥干后的瘦肉块，得到熟肉糜。
3.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，
所述防腐剂与所述熟肉糜质量比值的范围为2.5g/kg；
所述抗氧化剂与所述熟肉糜的质量比值的范围为80mg/kg；
所述亚硝酸钠的纯度大于99.0％，所述亚硝酸钠的质量根据所制备的含亚硝酸盐的肉类粉末参考物的亚硝酸盐含量而定；
将所述防腐剂、所述抗氧化剂、设定量的所述亚硝酸钠溶于预设量的高纯水中，配制得到所述浸泡液，其中，所述预设量的高纯水的质量与所述所述熟肉糜的质量比值为1：1。
4.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，所述预设时间为12-24h。
5.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中并混匀，浸泡预设时间后取出熟肉糜，并将其均质混匀，得到浸泡后的熟肉糜包括：
将所述熟肉糜浸泡在所述浸泡液中；
利用搅拌工具不断搅拌所述熟肉糜，直至所述熟肉糜在所述浸泡液分布均匀，之后浸泡放置12h后取出，得到预浸泡熟肉糜；
将所述预浸泡熟肉糜置于混合机混合，得到混合熟肉糜；
将所述混合熟肉糜置于均质机内进行均质，得到浸泡后的熟肉糜。
6.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，冷冻所述浸泡后的熟肉糜，得到冷冻熟肉糜包括：
将所述浸泡后的熟肉糜置于盛装容器中，将盛装有所述浸泡后的熟肉糜的盛装容器置于冷冻装置内；
将冷冻装置的冷冻温度设置为不高于零下30℃的温度；
冷冻0.5-2.0h后，得到冷冻熟肉糜。
7.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，将所述冷冻熟肉糜冷冻干燥包括：
将所述冷冻熟肉糜置于冷冻机内，将冷冻机的压力范围调整在0.06-0.2Mbar之间、温度调整为不高于零下30℃，进行一次干燥；
将所述冷冻机的温度设置为10-30℃，进行二次干燥；
持续干燥预定时间后取出，得到冷冻干燥后的熟肉糜。
8.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质包括：
检测所述冷冻干燥粉的水分，检测标准为在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量大于等于5wt％，则将冷冻干燥粉继续冷冻干燥，直至在所述冷冻干燥粉中水分含量小于5wt％为止；
若所述冷冻干燥粉中的水分含量小于5wt％，则利用粉碎机粉碎冷冻干燥粉，得到冷冻后的冻干粉；
将冷冻后的冻干粉置于筛上并反复过筛，过筛次数不少于6次，得到过筛后的冻干粉，其中筛的筛目范围为30-40目；
将过筛后的冻干粉混匀，得到肉类粉末参考物质。
9.根据权利要求1所述的含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质制备方法，其特征在于，冷冻干燥所述冷冻熟肉糜，得到冷冻干燥粉，粉碎所述冷冻干燥粉并过筛混匀，得到肉类粉末参考物质之后，还包括：
将所述肉类粉末参考物质进行充氮包装、辐照杀菌，所述辐照杀菌的条件为辐射源为钴60、辐照强度为4kGy、辐照杀菌时间不低于20h。
10.一种含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质，其特征在于，含有亚硝酸盐的肉类粉末参考物质由权利要求1-9所述的制备方法制得。
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