CN113049839A

CN113049839A - 一种稳定的肝功能类复合质控品

Info

Publication number: CN113049839A
Application number: CN201911376143.1A
Authority: CN
Inventors: 黄艳妮; 李维利
Original assignee: Guilin Anglo American Institute Of Biotechnology
Current assignee: Guilin Anglo American Institute Of Biotechnology
Priority date: 2019-12-27
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2021-06-29
Anticipated expiration: 2039-12-27
Also published as: CN113049839B

Abstract

本发明公开了一种稳定的肝功能类复合质控品，包括缓冲液、稳定剂、还原剂、激活剂、防腐剂、牛血清白蛋白、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、r‑谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、胆碱酯酶和胆红素及胆酸钠，所述稳定的肝功能类复合质控品能够同时用于白蛋白、总蛋白、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、r‑谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、胆碱酯酶、总胆汁酸、总胆红素、间接胆红素生化项目检测过程的质量控制，有效提高肝功能类生化项目联测时进行质量控制的准确性，为临床肝功能相关疾病的辅助诊断提供准确的依据，同时所述稳定的肝功能类复合质控品具有较好的稳定性，适用于临床领域的推广和发展。

Description

一种稳定的肝功能类复合质控品

技术领域

本发明涉及临床体外检测技术领域，尤其涉及一种稳定的肝功能类复合质控品。

背景技术

用于临床上肝功能疾病辅助诊断的重要检测指标主要为血清中丙氨酸氨基转移酶(简称ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(简称AST)、r-谷氨酰转移酶(简称 AST)、碱性磷酸酶(简称ALP)、胆碱酯酶(简称CHE)、总胆汁酸(简称 TBA)、总胆红素(简称TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)及白蛋白/球蛋白(简称A/G) 的含量，其中间接胆红素(IBIL)、球蛋白(GLB)及白蛋白/球蛋白(简称A/G)含量值并非直接检测出，其可通过换算结果得到，其余指标需通过相应生化试剂盒于生化分析仪上检测得出。

肝功能类质控品，指的是在开展肝功能类检测项目的临床检测过程中对检测系统进行质量控制的物质，其在生化临床检测中的应用十分广泛。目前常用的肝功能检测用质控品多为单一的质控品，或者是含有太多其他非肝功能类项目复合的质控品，前者在多个肝功能项目同时检测时因种类多，操作复杂，工作量大，效率低，且单一配套质控品叠加成本也相对较高，而后者会造成不必要同时检测项目附加的成本压力和因项目过多质控品体系平衡不易而造成的质控品项目稳定性差的隐患，而将肝功能检测项：丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、r-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、胆碱酯酶、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、总蛋白、白蛋白十项复合的质控品很少有，这十项复合最难的就是胆红素和酶的稳定性问题，胆红素见光极易降解，其他各个酶性能不相同，其稳定条件也不尽相同，要同时保证胆红素和酶同时稳定很困难。

因此如何提供一种稳定的肝功能类复合质控品，已成为本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的肝功能类复合质控品，不仅能够同时用于丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、r-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、胆碱酯酶、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、总蛋白、白蛋白十项检测过程的质量控制，有效提高肝功能类项目联测时的效率和准确性，为临床肝功能类相关疾病的诊断提供准确的依据；同时还具有稳定性好，保存时间长的优势，适用于临床领域的推广。

为实现上述目的，本发明提供了一种稳定的肝功能类复合质控品，包括缓冲液50mmol/L、稳定剂、还原剂0.005wt％-0.015wt％、激活剂0.05wt％-5wt％、防腐剂0.05wt％-1wt％、牛血清白蛋白4wt％-10wt％、丙氨酸氨基转移酶 40U/L-150U/L、天门冬氨酸氨基转移酶40U/L-150U/L、r-谷氨酰转移酶 40U/L-150U/L、碱性磷酸酶100U/L-500U/L、胆碱酯酶3000U/L-10000U/L、胆红素40-150μmol/L、胆酸钠20-50μmol/L，所述稳定剂包括糖类5wt％-10wt％、透明质酸钠0.05wt％-2wt％、甘油磷酸胆碱0.1wt％-10wt％、PEG400.01wt％-1wt％、PVK30 0.01-1wt％、EDTA二钠盐0.8wt％、β-环糊精 0.1wt％-3wt％。

其中，所述缓冲液为25℃，pH为8.3±0.5的50mmol/L的HEFES缓冲液、 MES缓冲液、PIPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液中的一种。

其中，所述稳定剂中的糖类为普鲁兰多糖、菊糖、蔗糖、海藻糖中的一种或多种组合。

其中，所述还原剂为DL-二硫苏糖醇、硫脲、亚硫酸氢钠或1-硫代甘油中的一种或多种组合。

其中，所述激活剂为醋酸镁、醋酸钙、氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾中的一种或多种组合。

其中，所述防腐剂为proclin300、NaN₃、硫酸庆大霉素、杰马115中的一种或多种组合。

其中，所述胆红素为二牛磺酸胆红素钠盐。

本发明的一种稳定的肝功能类复合质控品为冻干粉制剂，其通过对混合液体进行冷冻处理得到，冷冻处理时冷阱的温度为-40℃至-80℃，冻干过程为4h 预冻，30h抽干，抽干时的压强为0.1-6Pa，质控品适用于生化检测使用。

本发明的一种稳定的肝功能类复合质控品，通过缓冲液能有效的起到缓冲效果，又不干扰检测体系；牛血清白蛋白既作为分析组分又能对质控品中的添加物起保护作用，同时起到一定人血清基质效果；稳定剂中的糖类、甘油磷酸胆碱、透明质酸钠作为冻干过程的赋形剂和保护剂；PEG40、PVK 30属于表面活性剂，能使各物质兼容，增加稳定性；EDTA二钠盐发挥络合阳离子作用，以降低体系中其他杂阳离子干扰作用，β-环糊精主要对胆红素具有络合稳定作用。还原剂主要是保护胆红素和酶在冻干及液体状态过程不被快速氧化失效的作用，激活剂主要是对质控品中酶活性中心起激活作用，以保持各酶的活性，从而形成稳定的肝功能类复合质控品。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，本发明实施例1提供一种稳定的肝功能类复合质控品，所述稳定的肝功能类复合质控品的组成成分为HEFES缓冲液 50mmol/L，稳定剂：普鲁兰多糖3wt％、菊糖5wt％、透明质酸钠0.1wt％、甘油磷酸胆碱8wt％、PEG40 0.1wt％、PVK300.1wt％、EDTA二钠盐0.8wt％、β-环糊精1.5wt％，还原剂：DL-二硫苏糖醇0.005wt％、1-硫代甘油0.005wt％，激活剂：四水合醋酸镁0.025wt％、醋酸钙0.05wt％、氯化钠0.9wt％、硫酸钾 2.5wt％，防腐剂：proclin300 0.05wt％、硫酸庆大霉0.05wt％，分析组分：牛血清白蛋白6wt％、丙氨酸氨基转移酶40U/L、天门冬氨酸氨基转移酶40U/L、r- 谷氨酰转移酶40U/L、碱性磷酸酶150U/L、胆碱酯酶4000U/L、二牛磺酸胆红素钠盐40μmol/L、胆酸钠25μmol/L，其余为纯化水。

所述稳定的肝功能类复合质控品为冻干粉制剂，将以上组分充分溶解，用纯化水定容到配制量后，将得到的混合溶液进行冷冻处理，冷冻处理时冷阱的温度为-40℃至-80℃，冻干过程为4h预冻，30h抽干，抽干时的压强为0.2Pa, 所得到的质控品为实施例1对应的肝功能类质控品。

将实施例1得到的肝功能类质控品分别对应各自的生化试剂进行检测验证，分别检测出靶值和标准差，建立起靶值范围，见表1-1：

表1-1

实施例1得到的质控品在避光前提下：质控品分别于37℃负荷保存5d、2-8℃保存半年的稳定性偏差见表1-2，质控品复溶后分别于室温18-25℃保存16h、 2-8℃保存7d及-20℃冰冻保存30d的稳定性偏差见表1-3。

表1-2

表1-3

本发明实施例2提供一种稳定的肝功能类复合质控品，所述稳定的肝功能类复合质控品的组成成分为缓冲液：HEPES 50mmol/L，稳定剂：普鲁兰多糖 5wt％、菊糖3wt％、透明质酸钠0.15wt％、甘油磷酸胆碱5wt％、PEG40 0.1wt％、 PVK30 0.1wt％、EDTA二钠盐0.8wt％、β-环糊精3wt％，还原剂：DL-二硫苏糖醇0.01wt％、1-硫代甘油0.002wt％，激活剂：四水合醋酸镁0.05wt％、醋酸钙0.1wt％、氯化钠0.9wt％、硫酸钾1.2wt％，防腐剂：proclin300 0.05wt％、硫酸庆大霉0.05wt％，分析组分：牛血清白蛋白9wt％、丙氨酸氨基转移酶140U/L、天门冬氨酸氨基转移酶140U/L、r-谷氨酰转移酶140U/L、碱性磷酸酶400U/L、胆碱酯酶8000U/L、二牛磺酸胆红素钠盐100μmol/L、胆酸钠45μmol/L，其余为纯化水。

所述稳定的肝功能类复合质控品为冻干粉制剂，将以上组分充分溶解，用纯化水定容到配制量后，将得到的质控品混合液进行冷冻处理，冷冻处理时冷阱的温度为-40℃至-80℃，冻干过程为4h预冻，30h抽干，抽干时的压强为3Pa，所得到的质控品为实施例2对应的肝功能类质控品。

将实施例2得到的肝功能类质控品分别对应各自的生化试剂进行检测验证，分别检测出靶值和标准差，建立起靶值范围，见表2-1：

表2-1

项目	单位	靶值	下限	上限	方法学
						TP	g/L	90.0	72	108	双缩脲法
ALB	g/L	64.2	51.4	77.0	溴甲酚绿法
						ALT	U/L	140	112	168	丙氨酸底物法
AST	U/L	140	112	168	天门冬氨酸底物法
						GGT	U/L	140	112	168	GCANA底物法
ALP	U/L	400	320	480	NPP底物-AMP缓冲液法
						CHE	U/L	8000	6400	9600	丁酰硫代胆碱底物法
TBIL	μmol/L	100.0	80.0	120.0	钒酸盐氧化法
						DBIL	μmol/L	54.0	43.2	64.8	钒酸盐法
TBA	μmol/L	45.0	36.0	54.0	酶循环法

实施例2得到的质控品在避光前提下：质控品分别于37℃负荷保存5d、2-8℃保存半年的稳定性偏差见表2-2，质控品复溶后分别于室温18-25℃保存16h、 2-8℃保存7d及-20℃冰冻保存30d的稳定性偏差见表2-3。

表2-2

表2-3

结果表明，本发明提供的一种肝功能类复合质控品在避光条件下，未复溶质控品冻干品于37℃负荷保存5d或2-8℃保存半年后其各项测定值相对靶值偏差均未超过±10％，质控品复溶后于室温18-25℃保存16h或2-8℃保存7d或 -20℃冰冻保存30d后其各项测定值相对靶值偏差均未超过±10％。由此可知，本发明专利提供的肝功能类复合质控品在复溶前或复溶后均具有优良的稳定性，能满足临床检测需求。

本发明的所述稳定的肝功能类复合质控品选择的缓冲体系，HEFES缓冲液、 MES缓冲液、PIPES缓冲液或Tris-HCl缓冲液，优选为HEPES缓冲液，能有效的起到缓冲效果，又不干扰检测体系；牛血清白蛋白既作为分析组分又能对质控品中的添加物起保护作用，同时起到一定人血清基质效果；稳定剂中糖类，优选为普鲁兰多糖和菊糖组合，甘油磷酸胆碱、透明质酸钠作为冻干过程的赋形剂和保护剂；PEG40、PVK 30属于表面活性剂，能使各物质兼容，增加稳定性；EDTA二钠盐发挥络合阳离子作用，以降低体系中其他杂阳离子干扰作用，β-环糊精主要对胆红素具有络合稳定作用。还原剂主要是保护胆红素和酶在冻干及液体状态过程不被快速氧化失效的作用，优选为DL-二硫苏糖醇、1-硫代甘油组合；激活剂主要是对质控品中酶活性中心起激活作用，以保持各酶的活性，优选为醋酸镁、醋酸钙、氯化钠、硫酸钾组合。

以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

Claims

1.一种稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

包括缓冲液50mmol/L、稳定剂、还原剂0.005wt％-0.015wt％、激活剂0.05wt％-5wt％、防腐剂0.05wt％-1wt％、牛血清白蛋白4wt％-10wt％、丙氨酸氨基转移酶40U/L-150U/L、天门冬氨酸氨基转移酶40U/L-150U/L、r-谷氨酰转移酶40U/L-150U/L、碱性磷酸酶100U/L-500U/L、胆碱酯酶3000U/L-10000U/L、胆红素40-150μmol/L、胆酸钠20-50μmol/L，所述稳定剂包括糖类5wt％-10wt％、透明质酸钠0.05wt％-2wt％、甘油磷酸胆碱0.1wt％-10wt％、PEG40 0.01wt％-1wt％、PVK30 0.01-1wt％、EDTA二钠盐0.8wt％、β-环糊精0.1wt％-3wt％。

2.如权利要求1所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述缓冲液为25℃，pH为8.3±0.5的50mmol/L的HEFES缓冲液、MES缓冲液、PIPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液中的一种。

3.如权利要求2所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述糖类为普鲁兰多糖、菊糖、蔗糖、海藻糖中的一种或多种组合。

4.如权利要求3所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述还原剂为DL-二硫苏糖醇、硫脲、亚硫酸氢钠或1-硫代甘油中的一种或多种组合。

5.如权利要求4所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述激活剂为醋酸镁、醋酸钙、氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾中的一种或多种组合。

6.如权利要求5所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述防腐剂为proclin300、NaN₃、硫酸庆大霉素、杰马115中的一种或多种组合。

7.如权利要求6所述的稳定的肝功能类复合质控品，其特征在于，

所述胆红素为二牛磺酸胆红素钠盐。