CN113655214A - 一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生化检测试剂技术领域，特别涉及一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒。本发明所述的特殊生化复合质控品包括基质和特殊生化4项，所述的基质包括：80％‑40％质量份的组分A和20％‑60％质量份的血清；所述组分A包括缓冲液、酪蛋白、糖类、冻干赋型剂、表面活性剂、盐、酶抑制剂、防腐剂；所述特殊生化4项为β‑羟丁酸、5’‑核苷酸酶、α‑L‑岩藻糖苷酶和腺苷脱氨酶。本发明的复合质控品的稳定性和互换性较好，在未开瓶2‑8℃可稳定储存24个月，复溶后在2‑8℃可稳定储存15天，复溶后‑20℃可稳定储存30天，在不同系统中测值的一致性较好。

Description

一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒

技术领域

本发明涉及生化检测试剂技术领域，特别涉及一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒。

背景技术

质控品是专门用于质量控制目的的标本或溶液，质控品对稳定性、瓶间差要求高。一个生物源性质控样本需要符合以下标准，1.它在批内是均一的，以排除样本和样本之间的差距；2.批内个体数量尽可能扩大，在定靶值、稳定性检测合格的情况下使成本降至最低；3.材料应该足够稳定，不会出现任何变化，可以长期储存；4.质控标本的通性与患者样本相同。

目前市面上大多是针对单个检测项目的质控品，然而单项质控品的使用会给操作和使用上带来一定的不便。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种特殊生化复合质控品，该特殊生化复合质控品中包括β-羟丁酸(β-Hb)、5’-核苷酸酶(5’-NT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和腺苷脱氨酶(ADA)特殊生化4项，该复合质控品具有极好的开瓶稳定性和冻存稳定性，且在不同的系统中具有极佳的一致性。

为了实现上述目的，本发明具体采用如下技术方案：

一种特殊生化复合质控品，包括基质和特殊生化4项，所述的基质包括：

80％-40％体积份的组分A和20％-60％体积份的血清；

所述组分A包括10mM-100mM的缓冲液、2％-5％的酪蛋白、5％-15％的糖类、1％-10％的冻干赋型剂、0.01％-0.1％表面活性剂、0.1％-0.9％盐、0.1％-0.5％酶抑制剂、0.1％-0.5％的防腐剂；前述百分比均为与组分A的质量体积百分比；

所述特殊生化4项为β-羟丁酸、5’-核苷酸酶、α-L-岩藻糖苷酶和腺苷脱氨酶。

前述组分A中的10mM-100mM的缓冲液指的是在组分A中的浓度为10mM～100mM，以甘氨酸水溶液为例，例如想要配置500ml的组分A，那么甘氨酸在组分A中的浓度为10mM～100mM，也即加入的甘氨酸的量为5mmol～50mmol，加入的酪蛋白的量为10g～25g，其他依次类推，然后余量用水补足；如果缓冲液改为PB(加入NaH₂PO₄-2H₂O&Na₂HPO₄-12H₂O)，例如想要配置500ml的组分A，那么NaH₂PO4-2H₂O和Na₂HPO₄-12H₂O在组分A中的浓度的和为10mM～100mM，也即加入的NaH₂PO₄-2H₂O和Na₂HPO₄-12H₂O的物质的量总和为5mmol～50mmol。

优选的，所述的缓冲液选自PB、Na₂HPO₄、HEPES、Tris-Hcl、MES、柠檬酸或甘氨酸。此处的PB指的是NaH₂PO₄-2H₂O&Na₂HPO₄-12H₂O；HEPES指的是4-羟乙基哌嗪乙磺酸；Tris-Hcl指的是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐；MES指的是2-(N-吗啉)乙磺酸。

优选的，所述的糖类选自蔗糖、海藻糖、葡萄糖或乳糖中的一种或多种。

优选的，所述的冻干赋形剂为甘露醇。

优选的，所述的表面活性剂选自TW-20、TW-80、Triton X-100、NP40或SKL。

优选的，所述的盐选自NaCl或KCl；所述的酶抑制剂选自EDTA；所述的防腐剂选自P300、叠氮钠或K500中的一种或几种。所述的EDTA指的是乙二胺四乙酸，P300全称为Proclin300(厂家：Sigma-Aldrich)，K500全称为KroVin 500(厂家：西宝生物)。

优选的，所述的血清选自人血清、小牛血清、马血清或羊血清。

优选的，所述的特殊生化复合质控品中特殊生化4项的含量为0.1mM-4.5mM的β-羟丁酸、5U/L-300U/L的5’-核苷酸酶、3U/L-120U/L的α-L-岩藻糖苷酶和0-150U/L的腺苷脱氨酶。此处的含量指的是对应特殊生化4项在整个特殊生化复合质控品中的浓度。

前述所述的特殊生化复合质控品的制备方法，包括如下步骤：

将处方量的酪蛋白加入缓冲液中，后调节溶液pH至11.0～13.0，待溶解完全后，继续加入处方量的糖类、冻干赋形剂、表面活性剂、盐、酶抑制剂以及防腐剂，调节溶液pH为7.0～8.0得到组分A；

将处方量的组分A和血清混合得到基质；

在基质中加入特殊生化4项即得特殊生化复合质控品。

一种试剂盒，包括前述任一项所述的特殊生化复合质控品。

本发明上述技术方案中所涉及的数值范围均包括端值。

有益效果

本发明特殊生化复合质控品复合项目多，包括β-羟丁酸(β-Hb)、5’-核苷酸酶(5’-NT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和腺苷脱氨酶(ADA)特殊生化4项；

本发明复合质控品具有极好的开瓶稳定性和冻存稳定性，在未开瓶(未复溶)2-8℃可稳定储存24个月，复溶后在2-8℃可稳定储存15天，复溶后-20℃可稳定储存30天，在不同系统中测值的一致性(即互换性)较好(稳定性和一致性较好的判定标准均为与对照比偏差在±10％以内)。

具体实施方式

下面将结合本发明的具体实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

下面结合实施例对本发明进行详细说明，以方便本领域技术人员理解本发明。

下述实施例所用材料来源如下：

PB购自 南京化学试剂股份有限公司

酪蛋白购自 Sigma-Aldrich

β-羟丁酸购自 TCI

5’-核苷酸酶购自 上海蓝园生物工程有限公司

α-L-岩藻糖苷酶购自 北京阿匹斯生物科技有限公司

腺苷脱氨酶购自 北京阿匹斯生物科技有限公司

小牛血清购自 浙江天杭生物科技股份有限公司

人血清购自 上海信帆生物科技有限公司

实施例1

步骤(1)：先配制1000ml复合质控品的基质：先准确称量50mM的PB(0.7800g的NaH₂PO₄-2H₂O和7.1628g的Na₂HPO₄-12H₂O，两者的物质的量的和为25mmol)溶于400ml的纯化水中，溶解完全后再准确称量3％酪蛋白缓慢加入上述溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，再用5mol/L的氢氧化钠调节溶液pH至12.0，待溶液至澄清透明且无未溶杂质后加入8％海藻糖、5％甘露醇、0.05％TW-20、0.5％氯化钠、0.3％EDTA和0.1％P300，混匀无杂质后用1mol/L的盐酸调PH至7.4，最后定容至500ml得到组分A备用，在配制特殊生化复合质控之前用50％体积配制的溶液和50％体积小牛血清混合均匀作为质控品的基质使用，也即500ml的组分A和500ml的小牛血清混合；前述步骤中的百分比均为质量体积比，也即g/ml所得比，如组分A的体积500ml，8％海藻糖的质量即为40g，其他以此类推。

步骤(2)：配制3个浓度特殊生化质控品的液态中间品(L1-L3)，在基质中加入以上特殊生化4项的原料，使得四项的浓度分别达到如下的浓度：

项目	LI	L2	L3
				5’-NT(U/L)	11.47	23.86	39.26
ADA(U/L)	16.01	50.12	86.39
				D3-H(mmol/L)	0.47	0.92	1.59
AFU(U/L)	31.82	53.11	86.45

步骤(3)：将配制好的液态中间品分装到西林瓶中(1ml/瓶)进行冷冻干燥为冻干粉。

将得到的冻干粉进行如下实验：

表1.a：开瓶(复溶)稳定性：复溶后放置2-8℃

表1.b：冻存稳定性：复溶后冻存于-20℃

表1.c：不同系统中测值的一致性(以下数据全部为新复溶的质控品测试得到的数据)

从上述实施例可以看出本发明的特殊生化复合质控品的开瓶(复溶)、冻存稳定性较好，且在不同系统中测值的一致性(即互换性)较好。

实施例2

将实施例1中所加入的酪蛋白换成牛血清白蛋白，用量不变，且加入的海藻糖含量改为4％，其他材料、用量及操作均不变，最终得到冻干粉。对本实施例所得到的冻干粉进行检测，检测结果如下：

表2.a：开瓶(复溶)稳定性：复溶后放置2-8℃

表2.b：冻存稳定性：复溶后冻存于-20℃

从上述检测结果可以看出，若将酪蛋白替换，且含糖量过低，则会导致产品的开瓶(复溶)和冻存稳定性大幅下降。

实施例3

将实施例1中的50％小牛血清替换为50％的纯化水，其他材料、用量及操作均不变，最终得到冻干粉。对本实施例所得到的冻干粉进行检测，不同系统中测值的一致性检测结果如下：

表3.c不同系统中测值的一致性

从上表可以看出，本发明的体系中的血清不可或缺，一旦不含有血清，会导致产品在不同系统中测值的一致性大幅下降。

实施例4

步骤(1)：先配制1000ml复合质控品的基质：先准确称量10mM的Tris-Hcl(即8mmol的Tris-Hcl)于700ml的纯化水中，溶解完全后再准确称量2％酪蛋白缓慢加入上述溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，再用5mol/L的氢氧化钠调节溶液pH至11.0，待溶液至澄清透明且无未溶杂质后加入15％蔗糖、10％甘露醇、0.1％Triton X-100、0.1％氯化钾、0.1％EDTA和0.5％叠氮钠，混匀无杂质后用1mol/L的盐酸调PH至7.0，最后定容至800ml备用，在配制特殊生化复合质控之前用80％配制的溶液和20％人血清混合均匀作为质控品的基质使用；

步骤(2)：配制3个浓度特殊生化质控品的液态中间品(L1-L3)，在基质中加入以上特殊生化4项的原料，使得特殊生化4项的浓度分别达到如下的浓度：

步骤(3)：将配制好的液态中间品分装到西林瓶中(5ml/瓶)进行冷冻干燥为冻干粉。

以上得到的质控品的开瓶(复溶)、冻存稳定性较好，且在不同系统中测值的一致性(即互换性)较好。

表4.a：开瓶(复溶)稳定性：复溶后放置2-8℃

表4.b：冻存稳定性：复溶后冻存于-20℃

表4.c：不同系统中测值的一致性(以下数据全部为新复溶的质控品测试得到的数据)

实施例5

步骤(1)：先配制1000ml复合质控品的基质：先准确称量100mM的甘氨酸(即40mmol的甘氨酸)于300ml的纯化水中，溶解完全后再准确称量5％酪蛋白缓慢加入上述溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，再用5mol/L的氢氧化钠调节溶液pH至13.0，待溶液至澄清透明且无未溶杂质后加入5％葡萄糖、1％甘露醇、0.01％NP40、0.9％氯化钠、0.5％EDTA和0.1％K500，混匀无杂质后用1mol/L的盐酸调PH至7.0，最后定容至400ml备用，在配制特殊生化复合质控之前用40％配制的溶液和60％人血清混合均匀作为质控品的基质使用；

步骤(2)：配制3个浓度特殊生化质控品的液态中间品(L1-L3)，在基质中加入以上特殊生化4项的原料，使得四项的浓度分别达到如下的浓度：

步骤(3)：将配制好的液态中间品分装到西林瓶中(0.5ml/瓶)进行冷冻干燥为冻干粉。

以上得到的质控品的开瓶(复溶)、冻存稳定性较好，且在不同系统中测值的一致性(即互换性)较好。

表5.a：开瓶(复溶)稳定性：复溶后放置2-8℃

表5.b：冻存稳定性：复溶后冻存于-20℃

表5.c：不同系统中测值的一致性(以下数据全部为新复溶的质控品测试得到的数据)

从上述几个实施例可以看出，本发明的特殊生化复合质控品是一个稳定的组合整体，其中的组成成分相辅相成，从而使得本发明的特殊生化复合质控品具有极好的开瓶稳定性和冻存稳定性，以及具有较好的一致性。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种特殊生化复合质控品，其特征在于，包括基质和特殊生化4项，所述的基质包括：

80％-40％体积份的组分A和20％-60％体积份的血清；

所述组分A包括10mM-100mM的缓冲液、2％-5％的酪蛋白、5％-15％的糖类、1％-10％的冻干赋型剂、0.01％-0.1％表面活性剂、0.1％-0.9％盐、0.1％-0.5％酶抑制剂、0.1％-0.5％的防腐剂；前述百分比均为与组分A的质量体积百分比；

所述特殊生化4项为β-羟丁酸、5’-核苷酸酶、α-L-岩藻糖苷酶和腺苷脱氨酶。

2.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的缓冲液选自PB、Na₂HPO₄、HEPES、Tris-Hcl、MES、柠檬酸或甘氨酸。

3.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的糖类选自蔗糖、海藻糖、葡萄糖或乳糖中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的冻干赋形剂为甘露醇。

5.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的表面活性剂选自TW-20、TW-80、Triton X-100、NP40或SKL。

6.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的盐选自NaCl或KCl；所述的酶抑制剂选自EDTA；所述的防腐剂选自P300、叠氮钠或K500中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的血清选自人血清、小牛血清、马血清或羊血清。

8.根据权利要求1所述的特殊生化复合质控品，其特征在于，所述的特殊生化复合质控品中特殊生化4项的含量为0.1mM-4.5mM的β-羟丁酸、5U/L-300U/L的5’-核苷酸酶、3U/L-120U/L的α-L-岩藻糖苷酶和0.1-150U/L的腺苷脱氨酶。

9.权利要求1-8任一项所述的特殊生化复合质控品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将处方量的酪蛋白加入缓冲液中，后调节溶液pH至11.0～13.0，待溶解完全后，继续加入处方量的糖类、冻干赋形剂、表面活性剂、盐、酶抑制剂以及防腐剂，调节溶液pH为7.0～8.0得到组分A；

将处方量的组分A和血清混合得到基质；

在基质中加入特殊生化4项即得特殊生化复合质控品。

10.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的特殊生化复合质控品。