CN115704749A - 用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒及制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及生物技术领域，具体公开了用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒、糖化血红蛋白质控品的制备方法以及试剂盒。该用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒，包括：细胞洗涤液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂；糖化液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、葡萄糖；溶血剂，包括：缓冲剂、第一表面活性剂；冻干保护剂，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、稳定剂、第二表面活性剂。通过上述方式，该糖化血红蛋白质控品具有成本低，准确性高、均一性好、稳定性强的特点，使用该糖化血红蛋白质控品，可以满足对适配的糖化血红蛋白仪系统进行质量控制的目的，所得结果准确可靠。

Description

用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒及制备方法

技术领域

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒、糖化血红蛋白质控品的制备方法以及试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白HbA1c是世界卫生组织推荐的糖尿病诊断标准(2011年)，还是糖尿病血糖控制的“金标准”，也是评估糖尿病微血管、大血管并发症的有效指标。

糖化血红蛋白的准确测定需要一个稳定质控品来监控仪器状态及试剂的好坏。但是目前许多厂家的质控品生产工艺不够完善，制造出的质控品稳定性较差，存在基质效应，性能不够稳定，无法满足对糖化血红蛋白检测系统质量控制的目的，使得质控品的应用受到了制约，影响质控品的售卖及使用。

发明内容

本申请旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

在本申请的第一个方面，本申请提出了一种用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒，包括：细胞洗涤液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂；糖化液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、葡萄糖；溶血剂，包括：缓冲剂、第一表面活性剂；冻干保护剂，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、稳定剂、第二表面活性剂。

在本申请的第二个方面，本申请提出了一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，该制备方法基于前述的试剂盒，该制备方法包括以下步骤：按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对红细胞进行清洗；按照配方称取糖化液，并采用糖化液对清洗后的红细胞进行体外糖基化处理，直至红细胞内的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度；按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对体外糖基化处理后的红细胞进行洗涤，进行去糖基化；按照配方称取溶血剂，并采用溶血剂处理红细胞，以得到糖化血红蛋白；按照配方称取冻干保护剂，并采用冻干保护剂对糖化血红蛋白进行冻干处理，以得到糖化血红蛋白质控品。

在本申请的第三个方面，本申请提出了一种试剂盒，试剂盒包括：盒体；盒体内设有校准品区、质控品区和试剂区，其中，质控品区安置用于储存质控品的试剂瓶，质控品为如前述方法制备得到的质控品。

本申请实施例提供的技术方案可以带来如下有益效果：

相较于现有技术，本申请用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒包括：细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂，糖化液可以与含低浓度的糖化血红蛋白的抗凝全血发生体外糖基化反应，进而制备不同浓度的糖化血红蛋白质控品，避免了以往技术中使用不易获得的糖尿病患者抗凝全血样本制备糖化血红蛋白质控品，在一定程度上减少了制备原料的限制，并降低了制备成本；同时，冻干保护剂能够提高糖化血红蛋白质控品的运输便利性和储存稳定性。该糖化血红蛋白质控品具有成本低，准确性高、均一性好、稳定性强的特点，使用该糖化血红蛋白质控品，可以满足对适配的糖化血红蛋白仪系统进行质量控制的目的，所得结果准确可靠。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。其中：

图1示出了本申请糖化血红蛋白质控品的制备方法的第一流程示意图；

图2示出了本申请糖化血红蛋白质控品的制备方法的第二流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

本申请提供一种用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒，该试剂盒包含独立包装的细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂。

其中，细胞洗涤液包括：磷酸盐缓冲液、氯化钠。

细胞洗涤液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂；

糖化液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、葡萄糖；

溶血剂，包括：缓冲剂、第一表面活性剂；

冻干保护剂，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、稳定剂、第二表面活性剂。

具体而言，糖化液用于与红细胞内的血红蛋白发生体外糖基化反应，以得到糖化血红蛋白。溶血剂用于处理红细胞，以释放糖化血红蛋白。冻干保护剂用于提高糖化血红蛋白在室温条件下的运输和保存期限。

缓冲剂用于调节溶液的pH值。渗透压维持剂用于调节溶液的离子强度，避免引起细胞渗透压的改变。葡萄糖用于与红细胞内的血红蛋白发生体外糖基化反应，以得到糖化血红蛋白。

第一表面活性剂可以为阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂，在其它实施例中，第一表活性剂也可以为其它类型的表面活性剂。其中，阴离子表面活性剂既有破裂细胞和溶解红细胞的作用，又可以与血红蛋白结合形成稳定的复合物，阴离子表面活性剂可以选自烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐中的一种。非离子表面活性剂既可以参与红细胞的溶解，又可以加速血红蛋白复合物的形成，增加阴离子表面活性剂溶解能力，防止其在低温下析出，增强血红蛋白复合物的稳定性。非离子表面活性剂可以为聚氧乙烯醚类，具体为Tween-20、Span-40。

稳定剂用于稳定糖化血红蛋白，以防止糖化血红蛋白保存过程中的氧化反应。稳定剂可以选自BSA、海藻糖、蔗糖或HSA中的至少一种。

第二表面活性剂可以选用甘露醇和聚乙二醇，其中，甘露醇可以作为填充剂，也含有多个羟基，可以替代水与糖化血红蛋白的亲水基团形成氢键，保护好糖化血红蛋白的空间结构及避免凝聚。聚乙二醇能够提供框架结构，提高冻干后的韧性，有利于维持冻干后的形态。

相较于现有技术，本申请用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒包括：细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂，糖化液可以与含低浓度的糖化血红蛋白的抗凝全血发生体外糖基化反应，进而制备不同浓度的糖化血红蛋白质控品，避免了以往技术中使用不易获得的糖尿病患者抗凝全血样本制备糖化血红蛋白质控品，在一定程度上减少了制备原料的限制，并降低了制备成本；同时，冻干保护剂能够提高糖化血红蛋白质控品的运输便利性和储存稳定性。

在一实施例中，糖化液、细胞洗涤液、溶血剂、冻干保护剂中的至少一种还包括：防腐剂。可选地，防腐剂为苯甲酸钠、叠氮钠、山梨酸钾、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、Proclin-300中的至少一种。

在一实施例中，缓冲剂选自甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液中的至少一种。渗透压维持剂选自NaCl、KCl、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的至少一种。第一表面活性剂选自Tween-20、Span-40中的至少一种。稳定剂选自BSA、海藻糖、蔗糖或HSA中的至少一种。第二表面活性剂选自聚乙二醇、甘氨酸中的至少一种。

在一实施例中，细胞洗涤液包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，细胞洗涤液的pH值为7.2～7.4。优选地，细胞洗涤液包括：三羟甲基氨基甲烷100mmol/L、氯化钠0.09％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，细胞洗涤液的pH值为7.4。

在一实施例中，糖化液包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、葡萄糖2～6％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述糖化液的pH值为7.2～7.4。优选地，糖化液包括：三羟甲基氨基甲烷100mmol/L、氯化钠0.09％(质量百分比浓度)、葡萄糖3％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述糖化液的pH值为7.4。

在一实施例中，溶血剂包括：三羟甲基氨基甲烷20～50mmol/L、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、Tween-20 0.1～0.5％(质量百分比浓度)、Span-40 0.1～0.5％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述溶血剂的pH值为7.2～7.4。优选地，溶血剂包括：三羟甲基氨基甲烷50mmol/L、Proclin-300 0.03％(质量百分比浓度)、Tween-200.2％(质量百分比浓度)、Span-40 0.1％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述溶血剂的pH值为7.4。

在一实施例中，冻干保护剂包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、海藻糖1～10％(质量百分比浓度)Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、甘氨酸3～5％(质量百分比浓度)、聚乙二醇-8000 1～2％(质量百分比浓度)、BSA1～5％(质量百分比浓度)、余量为纯化水。优选地，冻干保护剂包括：三羟甲基氨基甲烷100mmol/L、氯化钠0.09％(质量百分比浓度)、海藻糖5％(质量百分比浓度)Proclin-300 0.03％(质量百分比浓度)、甘氨酸5％(质量百分比浓度)、聚乙二醇-80001％(质量百分比浓度)、BSA1％(质量百分比浓度)、余量为纯化水。

本申请还提出一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，该制备方法基于如前述的试剂盒，该制备方法包括以下步骤：

S10：按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对红细胞进行清洗。

上述步骤10中，清洗次数为3～6次，每次清洗时，细胞洗涤液与红细胞的体积比为2:1～8:1，每次清洗后进行离心处理并去除上清液，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为5～10min。

具体而言，按照细胞洗涤液与红细胞体积比为4:1，在4℃下，采用3000rpm离心5min，对红细胞清洗3次，以去除杂质，得到纯度更高的红细胞。

S20：按照配方称取糖化液，并采用糖化液对清洗后的红细胞进行体外糖基化处理，直至红细胞内的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度。

上述步骤20中，糖化液与红细胞的体积比为1:1～3:1，糖基化处理的温度为35～45℃，糖基化处理的反应时间为24h～72h，采用DM糖化血红蛋白分析系统实时监测红细胞内的糖化血红蛋白浓度。

具体而言，在清洗后的红细胞中加入糖化液进行体外糖基化处理，糖化液与红细胞的体积比为1:1，糖基化处理的温度为37℃。糖基化处理的过程中，可以分别在第12小时、24小时、36小时、42小时、48小时采用DM糖化血红蛋白分析系统(HPLC法)实时监测红细胞内的糖化血红蛋白浓度，直至形成的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度时，进入步骤S30。其中，预设浓度可以为：糖化血红蛋白的质量百分比浓度为8～11％。

S30：按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对体外糖基化处理后的红细胞进行洗涤，进行去糖基化。

上述步骤30中，清洗次数为3～6次，每次清洗时，所述细胞洗涤液与所述红细胞的体积比为2:1～6:1，每次清洗后进行离心处理并去除上清液，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为5～10min。

具体而言，按照细胞洗涤液与红细胞体积比为4:1，在4℃下，采用3000rpm离心5min，对红细胞清洗3次以去除葡萄糖并防止血红蛋白进一步糖基化。

S40：按照配方称取溶血剂，并采用溶血剂处理红细胞，以得到糖化血红蛋白。

上述步骤40中，溶血剂与红细胞的体积比为1:1。

具体而言，加入与红细胞等体积的溶血剂，混匀后静置5～10min，在4℃下，采用3000rpm离心5min，保留含糖化血红蛋白的上清液。

S50：按照配方称取冻干保护剂，并采用冻干保护剂对糖化血红蛋白进行冻干处理，以得到糖化血红蛋白质控品。

具体而言，向步骤S40得到的上清液中添加冻干保护剂后，进行冻干处理，冻干结束后，可以得到糖化血红蛋白质控品。

其中，冻干处理包括以下步骤：

S501：预冻。本步骤中，预冻时间设定为60～90min，板层温度为-30～50℃，持续时间为180～240min。

S502：一次干燥。本步骤中，一次干燥时间设定为20～40min，板层温度为-30～20℃，真空度为0.10～0.20mBar，持续时间为900～1200min。

S503：解析干燥。本步骤中，解析干燥时间设定为300min，板层温度为20～30℃，真空度为0.10～0.20mBar，持续时间为240～360min。

本申请还提出一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，该制备方法基于如前述的试剂盒，该制备方法包括以下步骤：

S60：提供抗凝全血样本，其中，抗凝全血样本中糖化血红蛋白的质量百分比浓度小于糖化血红蛋白质控品中糖化血红蛋白的质量百分比浓度。

其中，在抗凝全血样本中，红细胞计数为3.5×10¹²～5.5×10¹²/L，血红蛋白浓度为12～16g/L，糖化血红蛋白的质量百分比浓度为4.0～5.0％。

S70：对抗凝全血进行离心处理，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为10～15min，得到红细胞。

具体而言，在抗凝全血样本的生物安全性检验合格后，在4℃下，采用3000rpm离心5min，保留最下端的红色沉淀，得到红细胞。

S10：按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对红细胞进行清洗。

S20：按照配方称取糖化液，并采用糖化液对清洗后的红细胞进行体外糖基化处理，直至红细胞内的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度。

S30：按照配方称取细胞洗涤液，并采用细胞洗涤液对体外糖基化处理后的红细胞进行洗涤，进行去糖基化。

S40：按照配方称取溶血剂，并采用溶血剂处理红细胞，以得到糖化血红蛋白。

S50：按照配方称取冻干保护剂，并采用冻干保护剂对糖化血红蛋白进行冻干处理，以得到糖化血红蛋白质控品。

下面结合具体实施例对本申请进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本申请，但不以任何形式限制本申请。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本申请的保护范围。

实验例1

制备低浓度水平的糖化血红蛋白质控品，具体方法如下：

步骤101：收集EDTA抗凝全血样本(EDTA抗凝全血样本在2～8℃储存不超过24小时，且抗凝全血样本中，红细胞计数为3.5×10¹²～5.5×10¹²/L，血红蛋白浓度为12～16g/L，糖化血红蛋白的质量百分比浓度为4.0～5.0％)，在抗凝全血样本的生物安全性检验合格后，在6℃下，采用2500rpm离心15min，保留最下端的红色沉淀，得到红细胞。

步骤102：按照细胞洗涤液与红细胞体积比为5:1，在6℃下，采用3500rpm离心10min，对红细胞清洗5次，以去除杂质，得到纯度更高的红细胞。

步骤103：加入与红细胞等体积的溶血剂，混匀后静置15min，采用DM糖化血红蛋白分析系统(HPLC法)测定糖化血红蛋白的浓度，糖化血红蛋白的质量百分比浓度应在4.0～6.0％的范围内，在6℃下，采用2500rpm离心10min，保留含糖化血红蛋白的上清液。

步骤104：向上清液中添加冻干保护剂后，进行冻干处理，冻干结束后，可以得到低浓度水平的糖化血红蛋白质控品。

表1实施例1所用细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂的成分及浓度

注：“/”表示不含此成分。

步骤104中冻干工艺参数如表2所示。

表2冻干工艺参数

实施例2

制备高浓度水平HbA1c质控品的糖化血红蛋白质控品，具体方法如下：

步骤201：收集EDTA抗凝全血样本(EDTA抗凝全血样本在2～8℃储存不超过24小时，且抗凝全血样本中，红细胞计数为3.5×10¹²～5.5×10¹²/L，血红蛋白浓度为12～16g/L，糖化血红蛋白的质量百分比浓度为4.0～5.0％)，在抗凝全血样本的生物安全性检验合格后，在6℃下，采用2500rpm离心15min，保留最下端的红色沉淀，得到红细胞。

步骤202：按照细胞洗涤液与红细胞体积比为5:1，在6℃下，采用3500rpm离心10min，对红细胞清洗5次，以去除杂质，得到纯度更高的红细胞。

步骤203：在清洗后的红细胞中加入糖化液进行体外糖基化处理，体外糖基化温度为40℃，糖化液与红细胞的体积比为1:1，糖基化过程中，采用DM糖化血红蛋白分析系统(HPLC法)实时监测红细胞内的糖化血红蛋白浓度，分别在第12h，24h，36h，42h，48h监测红细胞内的糖化血红蛋白浓度，在第42h时，糖化血红蛋白的质量百分比浓度应在8～11％的范围内。

步骤204：按照细胞洗涤液与红细胞体积比为5:1，在6℃下，采用2500rpm离心10min，对红细胞清洗5次以去除葡萄糖并防止血红蛋白进一步糖基化。

步骤205：加入与红细胞等体积的溶血剂，混匀后静置10min，在6℃下，采用3000rpm离心10min，保留含糖化血红蛋白的上清液。

步骤206：向步骤205得到的上清液中添加冻干保护剂后，进行冻干处理，冻干结束后，可以得到高浓度水平的糖化血红蛋白质控品。

表3实施例2所用细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂的成分及浓度

注：“/”表示不含此成分。

步骤206中冻干工艺参数如表4所示。

表4冻干工艺参数

实施例3

低浓度水平和高浓度水平质控品的性能参数测试

1.准确度

使用正常值国家标准品和异常值国家标准品定标后，在糖化血红蛋白检测系统上测定低浓度水平质控品和高浓度水平质控品，准确度的测试结果如表5所示。

表5准确度测试结果

由表5结果可知，实施例1和2分别制得的低浓度水平和高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的实测浓度均在参考范围内，因此，满足准确度的要求。

2.均一性

要求瓶间均一性变异系数(CV_瓶间)应不大于3.0％，CV瓶内均一性变异系数(CV_瓶内)应不大于1.5％。低浓度水平的糖化血红蛋白质控品的均一性测试结果如表6所示，高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的均一性测试结果如表7所示。

表6低浓度水平的糖化血红蛋白质控品的均一性测试结果

表7高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的均一性测试结果

由表6和7结果可知，实施例1和2分别制得的低浓度水平和高浓度水平的糖化血红蛋白质控品均满足均一性的要求。

3.稳定性

37℃加速条件下，放置16天；复溶后置于2～8℃中，放置40～60天，要求所得测试结果与标示值的相对偏差在±10％范围内。低浓度水平的糖化血红蛋白质控品的加速稳定性测试结果如表8所示，高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的加速稳定性测试结果如表9所示。低浓度水平的糖化血红蛋白质控品复溶后的开瓶稳定性测试结果如表10所示，高浓度水平的糖化血红蛋白质控品复溶后的开瓶稳定性测试结果如表11所示。

表8低浓度水平的糖化血红蛋白质控品的加速稳定性测试结果

表9高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的加速稳定性测试结果

表10低浓度水平的糖化血红蛋白质控品的复溶后开瓶稳定性测试结果

表11高浓度水平的糖化血红蛋白质控品的复溶后开瓶稳定性测试结果

由表8～11结果可知，实施例1和2中制备的低浓度水平和高浓度水平的糖化血红蛋白质控品均满足稳定性的要求。

相较于现有技术，本申请试剂盒包括：细胞洗涤液、糖化液、溶血剂以及冻干保护剂，糖化液可以与健康正常人抗凝全血样本中的红细胞发生体外糖基化反应，进而制备不同浓度糖化血红蛋白质控品，避免了以往技术中使用不易获得的糖尿病患者抗凝全血样本制备糖化血红蛋白质控品，在一定程度上减少了制备原料的限制，并降低了制备成本。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (12)

1.一种用于制备糖化血红蛋白质控品的试剂盒，其特征在于，包括：

细胞洗涤液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂；

糖化液，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、葡萄糖；

溶血剂，包括：缓冲剂、第一表面活性剂；

冻干保护剂，包括：缓冲剂、渗透压维持剂、稳定剂、第二表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞洗涤液、所述糖化液、所述溶血剂、所述冻干保护剂中的至少一种还包括：防腐剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，

所述防腐剂为苯甲酸钠、叠氮钠、山梨酸钾、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、Proclin-300中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

所述缓冲剂选自甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液中的至少一种；

所述渗透压维持剂选自NaCl、KCl、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的至少一种；

第一表面活性剂选自Tween-20、Span-40中的至少一种；

所述稳定剂选自BSA、海藻糖、蔗糖或HSA中的至少一种；

所述第二表面活性剂选自聚乙二醇、甘氨酸中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，

所述细胞洗涤液包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述细胞洗涤液的pH值为7.2～7.4；

所述糖化液包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、葡萄糖2～6％(质量百分比浓度)、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述糖化液的pH值为7.2～7.4；

所述溶血剂包括：三羟甲基氨基甲烷20～50mmol/L、Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、Tween-20 0.1～0.5％(质量百分比浓度)、Span-40 0.1～0.5％(质量百分比浓度)、余量为纯化水，其中，所述溶血剂的pH值为7.2～7.4；

所述冻干保护剂包括：三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L、氯化钠0.05～0.1％(质量百分比浓度)、海藻糖1～10％(质量百分比浓度)Proclin-300 0.03～0.05％(质量百分比浓度)、甘氨酸3～5％(质量百分比浓度)、聚乙二醇-8000 1～2％(质量百分比浓度)、BSA 1～5％(质量百分比浓度)、余量为纯化水。

6.一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于，所述制备方法基于如权利要求1～5任一项所述的试剂盒，所述制备方法包括以下步骤：

按照配方称取细胞洗涤液，并采用所述细胞洗涤液对红细胞进行清洗；

按照配方称取糖化液，并采用所述糖化液对清洗后的所述红细胞进行体外糖基化处理，直至所述红细胞内的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度；

按照配方称取所述细胞洗涤液，并采用所述细胞洗涤液对体外糖基化处理后的所述红细胞进行洗涤，进行去糖基化；

按照配方称取溶血剂，并采用所述溶血剂处理所述红细胞，以得到糖化血红蛋白；

按照配方称取冻干保护剂，并采用所述冻干保护剂对所述糖化血红蛋白进行冻干处理，以得到糖化血红蛋白质控品。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述按照配方称取细胞洗涤液，并采用所述细胞洗涤液对红细胞进行清洗的步骤之前，所述方法还包括：

提供抗凝全血样本，所述抗凝全血样本中糖化血红蛋白的质量百分比浓度小于糖化血红蛋白质控品中糖化血红蛋白的质量百分比浓度；

对所述抗凝全血进行离心处理，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为10～15min，得到所述红细胞；

其中，在所述抗凝全血样本中，红细胞计数为3.5×10¹²～5.5×10¹²/L，血红蛋白浓度为12～16g/L，糖化血红蛋白的质量百分比浓度为4.0～5.0％。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述按照配方称取细胞洗涤液，并采用所述细胞洗涤液对红细胞进行清洗的步骤中，清洗次数为3～6次，每次清洗时，所述细胞洗涤液与所述红细胞的体积比为2:1～8:1，每次清洗后进行离心处理并去除上清液，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为5～10min。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述按照配方称取糖化液，并采用所述糖化液对清洗后的所述红细胞进行糖基化处理，直至所述红细胞内的糖化血红蛋白浓度达到预设浓度的步骤中，所述糖化液与所述红细胞的体积比为1:1～3:1，所述体外糖基化处理的温度为35～45℃，所述糖基化处理的反应时间为24h～72h，采用DM糖化血红蛋白分析系统实时监测所述红细胞内的糖化血红蛋白浓度。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述按照配方称取所述细胞洗涤液，并采用所述细胞洗涤液对所述红细胞进行清洗以去除葡萄糖并防止血红蛋白进一步糖基化的步骤中，清洗次数为3～6次，每次清洗时，所述细胞洗涤液与所述红细胞的体积比为2:1～6:1，每次清洗后进行离心处理并去除上清液，其中，离心转速为2000～3000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间为5～10min。

11.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述按照配方称取冻干保护剂，并采用所述冻干保护剂对所述糖化血红蛋白进行冻干处理，以得到糖化血红蛋白质控品的步骤中，所述溶血剂与所述红细胞的体积比为1:1。

12.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

盒体；

所述盒体内设有校准品区、质控品区和试剂区，其中，所述质控品区安置用于储存质控品的试剂瓶，所述质控品为如权利要求6～11任一项所述方法制备得到的质控品。

Images