CN108152519A - 用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法 - Google Patents
用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,包括:在牛血浆中加入0.6‑1.0%的胆固醇硫酸钠盐,加入0.02‑0.06%磷酸二氢钾;在水中依次加入0.04‑0.08%的十二水合硫酸铁铵,0.5‑0.9%的氯化钙,0.2‑0.6%的七水合硫酸镁,0.6‑1%的脲,9‑13%的氯化钠,0.01‑0.03%的七水合硫酸锌,0.01‑0.03%的五水合硫酸铜,0.06‑0.2%的甘氨胆酸,2‑4%的葡萄糖,0.03‑0.06%的肌酐,0.08‑0.2%的尿酸,0.07‑0.11%的三油酸甘油酯;上述所得溶液混合均匀;加入乙二醇、蔗糖、曲拉通X‑100,混合均匀;依次加入牛血清白蛋白、叠氮钠、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、脂肪酶和肌酸激酶,混匀、冷冻干燥。本发明具有原料来源充足,易获得,最大限度地避免可能发生的基质效应,及防止原料沉淀析出的优点。
Description
技术领域
本发明属于医学检验技术领域,具体涉及一种用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法。
背景技术
医学检验是临床医学中一个重要部分,检验结果是临床医生对于病人疾病诊断、治疗监测、预后判断等工作的重要数据支持,是现代医学中不可或缺的手段。在我国,随着国家经济的高速发展,社会的不断进步,人口总量的增加及人口素质的提高,使得公众对自身健康的关注也日益重视,同时,社会的发展也对公共健康体系提出了更高的要求。在医学检验领域,随着新技术、新理念和新思维的不断引入,使得医学检验技术呈现两大发展趋势。一方面是在疾病诊断治疗及维护人体健康过程中,需要掌握的个人健康信息量越来越大,使得医学临床检验向大型化、高精度分析的自动化检验设备方向发展。大型化全自动化的检验设备在大型医院得到普及,对于维护民众健康及医学研究方面发挥了重要的作用。另一方面,健康理念的深入普及,自我保护意识的增强,对于普通人群,特别是亚健康人群和慢性病患者,对于及时了解身体及疾病进展情况的需求也日益提升,这些需求促使了检验仪器、试剂向携带便捷,操作方便,结果快速可得的方向发展。
现代POCT技术是实现医学检验设备小型化、现场化及智能化的有效方法。POCT技术,通常理解为即时检验,是从上世纪中期发展起来的包含许多高新分析技术的快速临床检验技术,特别是上世纪九十年代后,成为临床化学中最具应用前景的发展方向。POCT 不需要专业的临床检验师操作,可以省去诸多标本预处理步骤,以及大型仪器设备检测、数据处理及传输等大量繁琐的过程,直接快速地得到可靠的结果,为医师进一步诊治赢得宝贵的时间,显示出良好的临床应用价值。POCT的技术平台主要包括:干化学技术、免疫层析技术、传感器技术、生物芯片技术和离心式微流控芯片技术。POCT仪器的发展趋势应是小型化、现场化和智能化的,操作简单,无需专业人员,直接注入体液样本,即可迅速得到诊断结果,并将信息上传至远程监控中心。在这几大平台上,目前医学检验的主流思想都比较一致的认为,要实现POCT技术的临床化,离心式微流控芯片技术是最适合产业化技术平台。
离心式微流控芯片技术是建立在微电子技术、生物与化学技术、检测分析技术等多学科基础上的一项划时代的分析科学技术,我们可以把离心式微流控芯片看作是一种微型化了的分析科学仪器,它是一种用来处理和控制微量液体的科学技术系统,它在一块最大也不超过厘米级大小的表面上,集成管道、微阀、混合器、泵等多种元器件从而实现芯片上的样品处理、生化反应和结果检测等三个典型的分析检验步骤,完成对多种生化试样的微尺度检测,从而使得POCT设备的小型化需求成为可能。
微流控分析芯片已经广泛应用于生化分析、免疫分析、蛋白分析以及核酸检测等临床检测的各个方面。近年来,离心式生化离心式微流控芯片已逐渐在临床领域得到应用,该类芯片检测时,通过毛细管作用和检测芯片转动时的离心力,将未计量的血液样本转换成多等份精确稀释的血浆,从而实现自动化完成全血定量、血球血浆分离、血浆稀释的功能,并通过反应孔的光学检测同时进行多种化学成分的分析。目前,此类芯片可检测的项目已涵盖肝功能、肾功能、血糖、血脂、离子等多个领域。目前中级以上医院已具备良好的软硬件设施,但是基层医疗机构特别是卫生院、卫生所等单位其全自动生化检验仪器设施普遍不足,也没有足够数目的检验专业人员。而提供一种可用于上述离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明针对现有技术的上述不足,提供一种用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,该方法具有原料来源充足,易获得,最大限度地避免可能发生的基质效应,及防止原料沉淀析出的优点。
为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:一种用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,制备步骤包括:
(1)在牛血浆中加入0.6-1.0%(质量百分比)的胆固醇硫酸钠盐(CAS号:2864-50-8),加热至55-70℃,待完全溶解后,冷却至室温;
(2)在步骤(1)所得的溶液中加入0.02-0.06%(质量百分比)磷酸二氢钾;
(3)在水中依次加入0.04-0.08%(质量百分比)的十二水合硫酸铁铵,0.5-0.9%(质量百分比)的氯化钙,0.2-0.6%(质量百分比)的七水合硫酸镁,0.6-1%(质量百分比)的脲,9-13%(质量百分比)的氯化钠,0.01-0.03%(质量百分比)的七水合硫酸锌,0.01-0.03% (质量百分比)的五水合硫酸铜,0.06-0.2%(质量百分比)的甘氨胆酸,2-4%(质量百分比)的葡萄糖,0.03-0.06%(质量百分比)的肌酐,0.08-0.2%(质量百分比)的尿酸,0.07-0.11%(质量百分比)的三油酸甘油酯;
(4)将步骤(2)和步骤(3)所得溶液混合均匀;
(5)在步骤(4)所得溶液中加入10-15%(体积比)乙二醇,2-5%(质量百分比) 蔗糖,0.1-0.2%(体积比)曲拉通X-100,混合均匀;
(6)在步骤(5)所得的溶液中依次加入4-6%(质量百分比)的牛血清白蛋白,0.2%(质量百分比)的叠氮钠,40-60U/L的丙氨酸氨基转移酶,40-60U/L的天冬氨酸氨基转移酶,100-200U/L的碱性磷酸酶,40-60U/L的脂肪酶,150-200U/L的肌酸激酶,混合均匀后,分装,冷冻干燥即可。
本发明步骤(2)和步骤(3)所得溶液采用体积比为1:1进行混匀。
本发明步骤(3)中添加的十二水合硫酸铁铵,氯化钙,七水合硫酸镁,脲,氯化钠,七水合硫酸锌,五水合硫酸铜,甘氨胆酸,葡萄糖,肌酐,尿酸,三油酸甘油酯按照上述顺序依次添加,且采用上一成分完全溶解之后再添加下一组分;此处添加顺序很重要,不然容易产生沉淀析出。
本发明上述各组分的添加量是以最终各个成分在相应的溶液中的终浓度来界定的含量。
步骤(3)所述的水为蒸馏水。
本发明的优点和有益效果:
1、由于全血样本加入离心式生化微流控芯片后最终分离得到的样本为血浆,因此采用牛血浆为材料较常规血清质控更具代表性。
2、选用牛血浆为材料,不仅来源充足,易获得,并且由于全血样本加入离心式生化微流控芯片后最终分离得到的样本为血浆,从而最大限度地避免了可能发生的基质效应。
3、采用特定顺序加入原料,以及含不同原料的溶液按比例混合的方式制备质控品,避免了原料,尤其是金属物质原料的沉淀析出。
具体实施方式
下面将通过下述非限制性实施例进一步说明本发明,本领域技术人员公知,在不背离本发明精神的情况下,可以对本发明作出许多修改,这样的修改也落入本发明的范围。
下述实验方法如无特别说明,均为常规方法,所使用的实验材料如无特别说明,均可容易地从商业公司获取。
本发明下述实施例的各成分含量均是添加该成分之后构成的溶液中该成分的终浓度。
实施例1
1、在牛血浆中加入0.6%(质量百分比)的胆固醇硫酸钠盐,加热至65℃,待完全溶解后,冷却至室温;
2、在步骤1所得溶液中加入0.02%(质量百分比)磷酸二氢钾;
3、在蒸馏水中依次加入0.04%(质量百分比)的十二水合硫酸铁铵,0.5%(质量百分比) 的氯化钙,0.2%(质量百分比)的七水合硫酸镁,0.6%(质量百分比)的脲(尿素),9%(质量百分比)的氯化钠,0.01%(质量百分比)的七水合硫酸锌,0.01%(质量百分比)的五水合硫酸铜,0.06%(质量百分比)的甘氨胆酸,2%(质量百分比)的葡萄糖, 0.03%(质量百分比)的肌酐,0.08%(质量百分比)的尿酸,0.07%(质量百分比)的三油酸甘油酯,上一物质溶解完成混合均匀后再加入下一物质;
4、将步骤2和步骤3所得溶液按1:1(体积比)混合均匀;
5、在步骤4所得溶液中加入10%(体积比)乙二醇,2%(质量百分比)蔗糖,0.1%(体积比)曲拉通X-100,混合均匀;
6、在步骤5所得溶液中依次加入4%(质量百分比)的牛血清白蛋白,0.2%(质量百分比)的叠氮钠,40U/L的丙氨酸氨基转移酶,40U/L的天冬氨酸氨基转移酶,100U/L 的碱性磷酸酶,40U/L的脂肪酶,150U/L的肌酸激酶,上一物质溶解完成混合均匀后再加入下一物质,混合均匀后,分装,冷冻干燥即可。
实施例2
1、在牛血浆中加入1.0%(质量百分比)的胆固醇硫酸钠盐,加热至65℃,待完全溶解后,冷却至室温;
2、在步骤1所得溶液中加入0.06%(质量百分比)磷酸二氢钾;
3、在蒸馏水中依次加入0.08%(质量百分比)的十二水合硫酸铁铵,0.9%(质量百分比) 的氯化钙,0.6%(质量百分比)的七水合硫酸镁,1%(质量百分比)的脲,13%(质量百分比)的氯化钠,0.03%(质量百分比)的七水合硫酸锌,0.03%(质量百分比)的五水合硫酸铜,0.2%(质量百分比)的甘氨胆酸,4%(质量百分比)的葡萄糖,0.06%(质量百分比)的肌酐,0.2%(质量百分比)的尿酸,0.11%(质量百分比)的三油酸甘油酯,上一物质溶解完成混合均匀后再加入下一物质;
4、将步骤2和步骤3所得溶液按1:1(体积比)混合均匀;
5、在步骤4所得溶液中加入15%(体积比)乙二醇,5%(质量百分比)蔗糖,0.2%(体积比)曲拉通X-100,混合均匀;
6、在步骤5所得溶液中依次加入6%(质量百分比)的牛血清白蛋白,0.2%(质量百分比)的叠氮钠,60U/L的丙氨酸氨基转移酶,60U/L的天冬氨酸氨基转移酶,200U/L 的碱性磷酸酶,60U/L的脂肪酶,200U/L的肌酸激酶,上一物质溶解完成混合均匀后再加入下一物质,混合均匀后,分装,冷冻干燥即可。
对上述实施例1和实施例2中的血浆质控品进行效能检测:1.质控品的赋值:利用美康生物科技股份有限公司生产的试剂盒TP ALB TCH Fe Ca Mg BUN CL Zn Cu TBA GLUCR UA TG ALT AST ALP LPS CK和美康多项生化质控品水平1、水品2在H7100仪器上进行室内质控测试使其在控并保证仪器处于良好状态,随机抽取上述实施例1和实施例2的质控品各1瓶,复溶,2-8℃放置30min摇匀后使用,每种质控品连续检测20次,计算各自的平均值和标准差,以平均值作为其测值,以3倍标准差作为可接受范围。
表1实施例1和实施例2的血浆质控品效能检测
2.质控品的均一性检测:随机抽取上述实施例1和实施例2的质控品各10瓶,复溶,2-8℃放置30min摇匀后使用。在H7100仪器上,每种质控品每瓶测定一次,计算10 个数据的X1、标准差S1和变异系数CV1。再取其中1瓶,检测20次,计算前10个数据的均值X2、标准差S2,按照公式和计算CV瓶间。如果测得精密度CV1和CV瓶间≤6.0%,则认为该批质控品每瓶的差异可接受,反之,则该批质控品不可用;
表2实施例1和实施例2的质控品的均一性检测
3.质控品的保存与稳定性检测:将上述实施例1和实施例2的质控品保存于4℃条件下备用,于第0d 1M 3M 5M 7M 9M 15M 18M 21M取出,复溶,2-8℃放置30min摇匀后在H7100仪器上面进行检测,每种质控品重复测定2次,取平均值,结果应在其规定范围内。
表3实施例1质控品的保存与稳定性检测
表4实施例2质控品的保存与稳定性检测
从上述实验数据可知,实施例1和实施例2血浆质控品的均一性和稳定性均符合预期的要求。
Claims (4)
1.一种用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,其特征在于:制备步骤包括:
(1)在牛血浆中加入0.6-1.0%的胆固醇硫酸钠盐,加热至55-70℃,待完全溶解后,冷却至室温;
(2)在步骤(1)所得的溶液中加入0.02-0.06%磷酸二氢钾;
(3)在水中依次加入0.04-0.08%的十二水合硫酸铁铵,0.5-0.9%的氯化钙,0.2-0.6%的七水合硫酸镁,0.6-1%的脲,9-13%的氯化钠,0.01-0.03%的七水合硫酸锌,0.01-0.03%的五水合硫酸铜,0.06-0.2%的甘氨胆酸,2-4%的葡萄糖,0.03-0.06%的肌酐,0.08-0.2%的尿酸,0.07-0.11%的三油酸甘油酯;
(4)将步骤(2)和步骤(3)所得溶液混合均匀;
(5)在步骤(4)所得溶液中加入体积比10-15%的乙二醇,质量百分比2-5%的蔗糖,体积比0.1-0.2%的曲拉通X-100,混合均匀;
(6)在步骤(5)所得的溶液中依次加入质量百分比4-6%的牛血清白蛋白,质量百分比0.2%的叠氮钠,40-60U/L的丙氨酸氨基转移酶,40-60U/L的天冬氨酸氨基转移酶,100-200U/L的碱性磷酸酶,40-60U/L的脂肪酶,150-200U/L的肌酸激酶,混合均匀后,分装,冷冻干燥即可。
2.根据权利要求1所述的用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,其特征在于:步骤(2)和步骤(3)所得溶液采用体积比为1:1进行混匀。
3.根据权利要求1所述的用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,其特征在于:步骤(3)中添加的十二水合硫酸铁铵,氯化钙,七水合硫酸镁,脲,氯化钠,七水合硫酸锌,五水合硫酸铜,甘氨胆酸,葡萄糖,肌酐,尿酸,三油酸甘油酯按照上述顺序依次添加,且采用上一成分完全溶解之后再添加下一组分。
4.根据权利要求1所述的用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法,其特征在于:步骤(3)所述的水为蒸馏水。
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