CN109708946A - 用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，步骤包括：收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性，血清一分为二；在其中一份血清中加入0.8‑1.0％的胆固醇硫酸酯钠盐，加热至55‑65℃，待完全溶解后，冷却至室温；在另一份血清中依次加入0.2‑0.5％脲，0.02‑0.05％肌酐，0.03‑0.05％尿酸，0.8‑1.2％葡萄糖，0.02‑0.05％甘氨胆酸，0.08‑0.12％三油酸甘油酯；溶液混合，加入4‑6％的牛血清白蛋白，500‑800U/L的丙氨酸氨基转移酶，500‑800U/L的天冬氨酸氨基转移酶。本发明的方法制备的混合线性高值用于离心式微流控芯片的线性范围性能评价，实现了一组测试可以同时评估多个项目的技术效果，减少了试剂盘的用量，节约了测试时间，降低了测试成本。

Description

用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及到一种用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，也可以称为用于评估离心式微流控芯片的混合线性范围的样本的制备方法。

背景技术

试剂分析性能评价是临床检验质量管理的重要内容，其中包含试剂的线性范围。线性范围是整个检测系统对应于分析物浓度的仪器最终输出信号间是否呈恒定比例的性能，是一个很重要的性能指标，是保证临床检测结果准确性的重要砝码。

传统的线性范围验证往往是单个项目进行的，即用接近该项目线性范围上限的高浓度样本和接近线性范围下限的低浓度样本按照一定比例混合成至少5个稀释浓度，准备好的样本分别用试剂盒进行测试，并对测试结果进行分析统计，是否达到产品性能要求。

微流控技术已经广泛的应用于生化分析、免疫分析、蛋白分析以及核酸检测等临床检测的各个方面。近年来，离心式微流控芯片已逐渐在医学检验技术领域得到应用，通过毛细管作用和离心力，将未计量的血液样本转换成等份精确稀释的样本，从而实现自动化血球血浆分离、定量、稀释的功能，并通过试剂孔的光学特性同时检测多个项目的分析技术。目前此类芯片已涵盖肝功能、肾功能、血糖、血脂等多个领域。

对于离心式微流控芯片同样需要进行线性范围评估，以保证临床检验的可靠性。但是目前的线性高值试剂往往是单项的，不能一组测试同时评估多个项目的线性范围，因此不能很好的发挥离心式微流控芯片一次测试可以同时检测多个项目的优势。所以，开发一种混合线性高值用于评估离心式微流控芯片试剂的线性范围，降低测试成本，成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明针对现有的技术的上述不足，提供一种用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，该合线性高值能实现一组测试可以同时评估多个项目的线性范围，因此降低了测试成本；该试剂以冻干粉末形式存在，较为稳定；以人源性基础血清为基质，接近人源样本，降低基质效应；适用于离心式微流控芯片的线性范围评估，大大减少测试用的芯片数量、测试时间，节约了成本。

为解决上述技术问题，本发明的具体方案为：一种用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，制备的具体步骤包括：

(1)收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性，血清一分为二；

(2)在其中一份血清中加入0.8-1.0％的胆固醇硫酸酯钠盐(即胆固醇硫酸酯钠盐，在加入后的血清中质量百分含量为0.8-1.0％)，加热至55-65℃，待完全溶解后，冷却至室温；

(3)在另一份血清中依次加入0.2-0.5％脲，0.02-0.05％肌酐，0.03-0.05％尿酸，0.8-1.2％葡萄糖，0.02-0.05％甘氨胆酸，0.08-0.12％三油酸甘油酯(上述各组分的含量为在加入后的血清中的质量百分比含量)；

(4)将步骤(2)和步骤(3)所得溶液混合；

(5)在步骤(4)所得混合溶液里加入4-6％(质量百分含量)的牛血清白蛋白，500-800U/L的丙氨酸氨基转移酶，500-800U/L的天冬氨酸氨基转移酶(即上述各组分在加入后的混合溶液中的含量)。

作为优选，上述步骤还包括：在步骤(5)所得的溶液里加入5-10％的冻干保护剂，0.1-0.2％防腐剂(即上述各组分在加入后的溶液中质量百分含量)；充分溶解混匀后，分装，冷冻干燥即可。

作为优选，所述的冻干保护剂包含：蔗糖、甘露醇、吐温80中的一种或几种。

作为优选，所述的防腐剂包含叠氮钠、PC300(proClin 300防腐剂)中的一种。

作为优选，步骤(1)中所述的血清一分为二为按照体积等分为两份。

本发明所收集的健康体检血清，要保证各种疾病项目检测为阴性，即不会带有病原的健康血清；如乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性。

本发明的优点和有益效果：

1.本发明的方法制备的混合线性高值用于离心式微流控芯片的线性范围性能评价，实现了一组测试可以同时评估多个项目的技术效果，减少了试剂盘的用量，节约了测试时间，降低了测试成本。

2.本发明的混合线性高值以冻干粉末形式存在，较为稳定；以人源性基础血清为基质，接近人源样本，降低基质效应；适用于离心式微流控芯片的线性范围评估，大大减少测试用的芯片数量、测试时间，节约了成本。

3.本发明的混合线性高值用于评价试剂盘(微流控芯片)的线性范围这个指标，具有很好稳定性和多项目同时检测的优点，节约了检测次数，提高了检测效率。

附图说明

图1实施例2的混合线性高值的稳定性检测结果图。

图2用实施例3的混合线性高值评价离心式微流控芯片第一组项目(6个)的线性范围结果图。

图3用实施例3的混合线性高值评价离心式微流控芯片第二组项目(6个)的线性范围结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细阐述本发明，但本发明并不限于下述实施例。

实施例1

(1)、收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性，血清一分为二(体积等分)；

(2)、在其中一份血清中加入0.80％的胆固醇硫酸酯钠盐，加热至55℃，待完全溶解后，冷却至室温；

(3)、在另一份血清中依次加入0.25％脲，0.025％肌酐，0.035％尿酸，0.85％葡萄糖，0.025％甘氨胆酸，0.08％三油酸甘油酯；

(4)、将步骤(2)和步骤(3)所得溶液混合；

(5)、在步骤(4)所得的溶液里加入4.5％的牛血清白蛋白，500U/L的丙氨酸氨基转移酶，500U/L的天冬氨酸氨基转移酶；

(6)、在步骤(5)所得的溶液里加入5.0％甘露醇，0.1％叠氮钠；充分溶解混匀后，分装，冷冻干燥即可。

对上述实施例的混合线性高值(样本)进行测值，并评估其瓶间差。

随机抽取1瓶混合线性高值，复溶，2-8℃静置30分钟，混合均匀后，用日立7100仪器对其进行测试，连续测定10次，计算平均值和标准差，以平均值作为此批混合线性高值的测定值，以标准偏差在5％以内作为可接受范围，具体数值如下表1所示：

表1

从上表1可知，标准偏差均在5％以内。

随机抽取10瓶混合线性高值，复溶，2-8℃静置30分钟，混合均匀后，用日立7100仪器对其进行测试，每瓶测定1次，计算标准差，以标准偏差在6％以内作为瓶间差可接受范围，具体数值如下表2所示：

表2

从上表2可知，标准偏差均在6％以内。

实施例2

1、收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性，血清一分为二(体积等分)；

2、在其中一份血清中加入0.9％的胆固醇硫酸酯钠盐，加热至60℃，待完全溶解后，冷却至室温；

3、在另一份血清中依次加入0.3％脲，0.03％肌酐，0.04％尿酸，0.9％葡萄糖，0.04％甘氨胆酸，0.09％三油酸甘油酯；

4、将步骤2和步骤3所得溶液混合；

5、在步骤4所得的溶液里加入5％的牛血清白蛋白，700U/L的丙氨酸氨基转移酶，750U/L的天冬氨酸氨基转移酶；

6、在步骤5所得的溶液里加入6％吐温80，0.15％PC300；充分溶解混匀后，分装，冷冻干燥即可。

对上述实施例的混合线性高值进行稳定性考察。分别于第0、1、2、4和6个月进行测试，每次测试时取1瓶混合线性高值，复溶，2-8℃静置30分钟，混合均匀后，用日立7100仪器对其进行测试，重复2次取平均值。从附图1的检测结果显示稳定性没有明显的下降趋势，至少可以使用6个月。

实施例3

1、收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体等均为阴性，血清一分为二(体积等分)；

2、在其中一份血清中加入1.0％的胆固醇硫酸酯钠盐，加热至65℃，待完全溶解后，冷却至室温；

3、在另一份血清中依次加入0.5％脲，0.05％肌酐，0.05％尿酸，1.2％葡萄糖，0.05％甘氨胆酸，0.12％三油酸甘油酯；

4、将步骤2和步骤3所得溶液混合；

5、在步骤4所得的溶液里加入6％的牛血清白蛋白，800U/L的丙氨酸氨基转移酶，800U/L的天冬氨酸氨基转移酶；

6、在步骤5所得的溶液里加入5％蔗糖，0.5％吐温80，0.2％叠氮钠；充分溶解混匀后，分装，冷冻干燥即可。

对上述实施例的混合线性高值，用于评价离心式微流控芯片的线性范围。取1瓶混合线性高值，复溶，2-8℃静置30分钟，混合均匀后用工艺用水进行稀释成5个梯度，备用。用美康保生生物医学工程有限公司生产的MP1搭配配套的生化十二项微流控芯片测试准备好的样本，一轮测试同时评价12个项目的线性范围，结果显示附图2-3所示为试剂线性范围的评估：如果将12个项目均做在一张图上，由于坐标轴刻度的原因，导致线性范围小的项目会看不清楚；因此本发明将其分为附图2-3两幅图来表示。从附图2-3的结果说明，制备的混合线性高值一轮测试就可以很好的评价试剂盘(微流控芯片)的线性范围，不需要一个个项目来测，即工作量从原来的72次测试减少为6次测试。

通过上述实施例和检测结果可知：本发明的混合线性高值稳定性好，能适用于离心式微流控芯片的线性范围评估，大大减少测试用的芯片数量、测试时间、测试次数，节约了成本。

Claims (5)

1.一种用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，其特征在于：制备的具体步骤包括：

(1)收集健康体检血清，乙肝表面抗体、甲肝抗体、丙肝抗体、HIV抗体检测均为阴性，血清一分为二；

(2)在其中一份血清中加入0.8-1.0％的胆固醇硫酸酯钠盐，加热至55-65℃，待完全溶解后，冷却至室温；

(3)在另一份血清中依次加入0.2-0.5％脲，0.02-0.05％肌酐，0.03-0.05％尿酸，0.8-1.2％葡萄糖，0.02-0.05％甘氨胆酸，0.08-0.12％三油酸甘油酯；

(4)将步骤(2)和步骤(3)所得溶液混合；

(5)在步骤(4)所得混合溶液里加入4-6％的牛血清白蛋白，500-800U/L的丙氨酸氨基转移酶，500-800U/L的天冬氨酸氨基转移酶。

2.根据权利要求1所述的用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，其特征在于：步骤还包括向步骤(5)所得的溶液里加入5-10％的冻干保护剂，0.1-0.2％防腐剂；充分溶解混匀后，分装，冷冻干燥即可。

3.根据权利要求2所述的用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，其特征在于：所述的冻干保护剂包括蔗糖、甘露醇、吐温80中的一种或几种。

4.根据权利要求2所述的用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，其特征在于：所述的防腐剂包含叠氮钠、PC300中的一种。

5.根据权利要求1所述的用于离心式微流控芯片的混合线性高值的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的血清一分为二为按照体积等分为两份。