JPH03215748A - 脂質標準水溶液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は脂質標準水溶液、更に詳細には、コレステロー
ル、リン脂質及びトリグリセリドの３種の脂質を含有し
、体液に類似した物性を示し、しかも長期間安定な脂質
標準水溶液に関する。

〔従来の技術〕

近年、動脈硬化症、高脂血症等を診断するために、血清
中のコレステロール、リン脂質及びトリグリセリド濃度
を測定することが行われている。

これらの測定法としては一般に化学的及び酵素的方法が
採用されているが、これらの方法では、測定結果を評価
するにあたり、一定既知量の脂質を含有する標準液を必
要とする。

斯かる標準液としては、従来、例えば１ｏＶ　／　Ｖ％
のオキシボリエトキシドデカン、１０ｖ／ｖ％の低級ア
ルコール及び０．１ｗ／ｖ％のアルキルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロリドを含有する水溶液にコレステリ
ンを溶解した標準溶液が報告されている（特公昭５４−
１１９７号）。

しかし、この標準溶液は、特關昭５５−３９０９５号公
報に記載の如く、多量のアルコールを含有するため、血
清試料に比べ蒸発が早く、そして蒸発によりアルコール
含量が下がると、脂質の沈澱が生ずると共に、界面活性
剤濃度が増加して望ましくない高粘度をもたらすという
欠点があった。従って、特開昭５５−３９０９５号の発
明では、オキシポリエトキシドデカン等の非イオン性界
面活性剤に加えて、アルキルジメチルベンジルアンモニ
ウムクロリド等のイオン性界面活性剤を０．５〜１０ｗ
／ｗ％と比較的高濃度で使用することによって、アルコ
ールを使用することなく、脂質を安定に溶解した脂質標
準溶液を得る方法を報告している。

しかしながら、特開昭５５−３９０９５号の発明も、高
濃度のイオン性界面活性剤を含むたｔ、試料として体液
を使用すると、体液中の蛋白成分の変性を起すおそれが
あり好ましくない。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、コレステロール、リン脂質及びトリグリセリド
の３種の脂質が含有されており、物性が体液に類似して
おり、かつ長期間安定な脂質標準溶液の開発が望まれて
いた。

〔課頚を解決するための手段〕

斯かる実状において、本発明者は鋭意研究を行った結果
、直鎮アルコールポリエトキシレートと低級アルコール
を限られた範囲の濃度で含有する水溶液を用いると、イ
オン性界面活性剤を含まずとも、上記３種の脂質を安定
に溶解できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、コレステロール、リン脂質及びト
リグリセリドを、直鎖アルコールポリエトキシレート３
〜ｌＱｗ／ｖ％及び低級アルコール３〜１０ｖ／ｖ％を
含有する水溶液に溶解したことを特徴とする脂質標準水
溶液を提供するものである。

本発明において溶解補助剤として使用する直鎮アルコー
ルボリエトヰシレートは ＣＨ．　（ＣＬ）　．，ＣＨ．　（ＱＣ｝Ｉ２ＣＨ２）
．０１｛で表わされるもので、その中でも平均分子量が
約６１２のものが好ましい。これは、例えば旭電化工業
■から「ＴデカトールＬＯＪの商品名で供給されている
。

また、低級アルコールとしては、例えばエタノール、イ
ンプロパノール、ブタノール等が挙げられる。

直鎮アルコールポリエトキシレートの濃度は３〜ＩＯＷ
／Ｖ％、好ましくは５〜７　ｗ　／　ｖ％であり、濃度
が１０ｗ／ｖ％を超えると一旦溶解した脂質が保存中に
層分離を起こして析出し、また３Ｗ　／　Ｖ％未満であ
ると脂質を溶解することができない。低級アルコールの
濃度は３〜１　０　ｖ／ｖ％、好ましくは５〜７ｖ／ｖ
％であり、この濃度が３ｖ　／　ｖ％未満でもまた１０
ｖ／ｖ％を超えても脂質を溶解することができない。そ
の中でも、両者の最も好ましい組合せは、直鎖アルコー
ルポリエトキシレートが５ｗ／ｖ％のとき、低級アルコ
ールは５〜６　ｖ　／　ｖ％、直鎮アルコールポリエト
キシレートが６〜７ｗ／ｖ％のとき、低級アルコールは
５〜７ｖ／ｖ％である。

本発明脂質標準水溶液は、必要に応じて、緩衝剤を加え
てｐＨを７〜９に調整することができる。

緩衝剤としては、トリス、リン酸塩、イミダゾール、ト
リエタノールアミン、バルビツール酸塩又はグッドの緩
衝剤を１０〜１００ｍＭの範囲で使用するのが好ましく
、特にトリス緩衝剤を２５ｍＭの濃度で使用してｐＨ７
．０〜７．６に調整するのが好ましい。

更に、本発明脂質標準水溶液には、細菌の発生を防止す
るために、防腐剤を添加することができる。好適な防腐
剤としては、例えばアルカリ金属アジド０．００１　〜
０．１％（ｗ／ｖ）又はクロルヘキシジン０．００１　
〜０．１％（ｗ／ｖ）が挙げられ、特にクロルヘキシジ
ン０．　００３％（Ｗ／Ｖ）を添加するのが好ましい。

本発明の脂質標準水溶液を製造するには、先ずコレステ
ロール、リン脂質及びトリグリセリドの３種の脂質を一
定量秤り取り、これに直鎖アルコールポリエトキシレー
ト及び低級アルコールを添加し、室温もしくは、必要で
あれば５０℃下で攪拌下溶解する。これに至適量の蒸留
水を、必要であればわずかに加温して加える。好ましく
は、至適量の蒸留水を加えるとき、適当な時点で緩衝剤
を添加してｐｌ｛値を調整し、更に防腐剤を添加する。

また加える蒸留水に直接緩衝剤を溶解したものを至適量
加えることも可能である。

〔発明の効果〕

叙上の如く、本発明の脂質標準水溶液はコレステロール
、リン脂質及びトリグリセリドの３種を含有しており、
その物性は体液に近似しており、しかも長期間の保存に
おいて安定であるという特長を有するので、臨床におけ
る標準液として極めて有利である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１ コレステロール２，　Ｏｇ，レシチン２．　０ｇ及びト
リオレイン２．０ｇの混合物をγデカトールＬＯ−９　
Ｃ旭電化工業■製〕６０ｇとイソブロバノール６〇一に
て室温下溶解する。蒸留水５　０　０ｍｊ！を加えて混
和後、トリス緩衝剤３．０３ｇを添加し、ＩＮＨＩＪで
ｐＨ値を７．３に調整する。更にクロルヘキシジンを終
濃度０．　００３％（Ｗ／Ｖ）となるように添加した後
、蒸留水を加えて総量を１ｌとして脂質標準水溶液を得
た。

斯くして得た脂質標準水溶液を４℃で保存したときの安
定性は第１表に示すとおりであり、１年以上安定であっ
た。

また、この脂質標準水溶液について、次のようにして酵
素的に脂質を測定した。

コレステロールの酵素的測定法は、コレステロール才キ
シダーゼにより酸化され、生じた過酸化水素を、更にバ
ーオキシダーゼの存在下、４−アミノアンチピリン（４
−ＡＡ）　とＮ．Ｎ−ジエチル−ｍ−｝ルイジンを酸化
縮合させ、生成する紫色色素を波長５４５ｎｍで、吸光
度を測定して定量した。

レシチンの酵素的測定法は、先ずホスホリバーゼＤによ
り、加水分解させてコリンを遊離させる。

このコリンはコリンオキシダーゼにより酸化され、生じ
た過酸化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づ
いて反応させ、最終的に吸光度測定によって定量した。

トリオレインの酵素的測定法は、先ずリポプロテインリ
パーゼにより加水分解し、遊離したグリセロールをＴデ
ノシン−３−リン酸（ＡＴＰ）　の存在下グリセロール
キナーゼの作用によりグリセロール−３−リン酸へ変換
する。このグリセロ−ルー３−リン酸は、グリセロール
−３−リン酸オキシダーゼにより酸化され、生じた過酸
化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づいて反
応させ、最終的に吸光度測定によって定量する。

その結果は第１図の（１）〜（３）のとおりであり、コ
ントロール血清及び人血清と同等の反応性を示し、標準
液として至適な処方であることを確認した。

実施例２ コレステロール２、Ｏｇ１　レシチン２．０ｇ及びトリ
オレイン２．０ｇの混合物をアデカトールＬＯ−９７０
ｇ及びエタノール６０艷にて、約５０℃の水浴中で加温
下溶解した。室温にもどした後に、２５ｍＭのトリスー
ＨＣｉ緩衝液（ｐＨ７．　３）を加えて１ｌとじ脂買標
準水溶液を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図（イ）、第１図（口）及び第１図（ハ）は本発明
の脂質標準水溶液、コントロール血清及び人血清につい
て酵素的にそれぞれコレステロール、トリオレイン及び
レシチンを測定したときの反応タイムコースを示す図で
ある。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、コレステロール、リン脂質及びトリグリセリドを、
   直鎖アルコールポリエトキシレート３〜１０ｗ／ｖ％及
   び低級アルコール３〜１０ｖ／ｖ％を含有する水溶液に
   溶解したことを特徴とする脂質標準水溶液。