JPH03215748A - 脂質標準水溶液 - Google Patents
脂質標準水溶液Info
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- JPH03215748A JPH03215748A JP998290A JP998290A JPH03215748A JP H03215748 A JPH03215748 A JP H03215748A JP 998290 A JP998290 A JP 998290A JP 998290 A JP998290 A JP 998290A JP H03215748 A JPH03215748 A JP H03215748A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は脂質標準水溶液、更に詳細には、コレステロー
ル、リン脂質及びトリグリセリドの3種の脂質を含有し
、体液に類似した物性を示し、しかも長期間安定な脂質
標準水溶液に関する。
ル、リン脂質及びトリグリセリドの3種の脂質を含有し
、体液に類似した物性を示し、しかも長期間安定な脂質
標準水溶液に関する。
近年、動脈硬化症、高脂血症等を診断するために、血清
中のコレステロール、リン脂質及びトリグリセリド濃度
を測定することが行われている。
中のコレステロール、リン脂質及びトリグリセリド濃度
を測定することが行われている。
これらの測定法としては一般に化学的及び酵素的方法が
採用されているが、これらの方法では、測定結果を評価
するにあたり、一定既知量の脂質を含有する標準液を必
要とする。
採用されているが、これらの方法では、測定結果を評価
するにあたり、一定既知量の脂質を含有する標準液を必
要とする。
斯かる標準液としては、従来、例えば1oV / V%
のオキシボリエトキシドデカン、10v/v%の低級ア
ルコール及び0.1w/v%のアルキルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロリドを含有する水溶液にコレステリ
ンを溶解した標準溶液が報告されている(特公昭54−
1197号)。
のオキシボリエトキシドデカン、10v/v%の低級ア
ルコール及び0.1w/v%のアルキルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロリドを含有する水溶液にコレステリ
ンを溶解した標準溶液が報告されている(特公昭54−
1197号)。
しかし、この標準溶液は、特關昭55−39095号公
報に記載の如く、多量のアルコールを含有するため、血
清試料に比べ蒸発が早く、そして蒸発によりアルコール
含量が下がると、脂質の沈澱が生ずると共に、界面活性
剤濃度が増加して望ましくない高粘度をもたらすという
欠点があった。従って、特開昭55−39095号の発
明では、オキシポリエトキシドデカン等の非イオン性界
面活性剤に加えて、アルキルジメチルベンジルアンモニ
ウムクロリド等のイオン性界面活性剤を0.5〜10w
/w%と比較的高濃度で使用することによって、アルコ
ールを使用することなく、脂質を安定に溶解した脂質標
準溶液を得る方法を報告している。
報に記載の如く、多量のアルコールを含有するため、血
清試料に比べ蒸発が早く、そして蒸発によりアルコール
含量が下がると、脂質の沈澱が生ずると共に、界面活性
剤濃度が増加して望ましくない高粘度をもたらすという
欠点があった。従って、特開昭55−39095号の発
明では、オキシポリエトキシドデカン等の非イオン性界
面活性剤に加えて、アルキルジメチルベンジルアンモニ
ウムクロリド等のイオン性界面活性剤を0.5〜10w
/w%と比較的高濃度で使用することによって、アルコ
ールを使用することなく、脂質を安定に溶解した脂質標
準溶液を得る方法を報告している。
しかしながら、特開昭55−39095号の発明も、高
濃度のイオン性界面活性剤を含むたt、試料として体液
を使用すると、体液中の蛋白成分の変性を起すおそれが
あり好ましくない。
濃度のイオン性界面活性剤を含むたt、試料として体液
を使用すると、体液中の蛋白成分の変性を起すおそれが
あり好ましくない。
従って、コレステロール、リン脂質及びトリグリセリド
の3種の脂質が含有されており、物性が体液に類似して
おり、かつ長期間安定な脂質標準溶液の開発が望まれて
いた。
の3種の脂質が含有されており、物性が体液に類似して
おり、かつ長期間安定な脂質標準溶液の開発が望まれて
いた。
斯かる実状において、本発明者は鋭意研究を行った結果
、直鎮アルコールポリエトキシレートと低級アルコール
を限られた範囲の濃度で含有する水溶液を用いると、イ
オン性界面活性剤を含まずとも、上記3種の脂質を安定
に溶解できることを見出し、本発明を完成した。
、直鎮アルコールポリエトキシレートと低級アルコール
を限られた範囲の濃度で含有する水溶液を用いると、イ
オン性界面活性剤を含まずとも、上記3種の脂質を安定
に溶解できることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、コレステロール、リン脂質及びト
リグリセリドを、直鎖アルコールポリエトキシレート3
〜lQw/v%及び低級アルコール3〜10v/v%を
含有する水溶液に溶解したことを特徴とする脂質標準水
溶液を提供するものである。
リグリセリドを、直鎖アルコールポリエトキシレート3
〜lQw/v%及び低級アルコール3〜10v/v%を
含有する水溶液に溶解したことを特徴とする脂質標準水
溶液を提供するものである。
本発明において溶解補助剤として使用する直鎮アルコー
ルボリエトヰシレートは CH. (CL) .,CH. (QC}I2CH2)
.01{で表わされるもので、その中でも平均分子量が
約612のものが好ましい。これは、例えば旭電化工業
■から「TデカトールLOJの商品名で供給されている
。
ルボリエトヰシレートは CH. (CL) .,CH. (QC}I2CH2)
.01{で表わされるもので、その中でも平均分子量が
約612のものが好ましい。これは、例えば旭電化工業
■から「TデカトールLOJの商品名で供給されている
。
また、低級アルコールとしては、例えばエタノール、イ
ンプロパノール、ブタノール等が挙げられる。
ンプロパノール、ブタノール等が挙げられる。
直鎮アルコールポリエトキシレートの濃度は3〜IOW
/V%、好ましくは5〜7 w / v%であり、濃度
が10w/v%を超えると一旦溶解した脂質が保存中に
層分離を起こして析出し、また3W / V%未満であ
ると脂質を溶解することができない。低級アルコールの
濃度は3〜1 0 v/v%、好ましくは5〜7v/v
%であり、この濃度が3v / v%未満でもまた10
v/v%を超えても脂質を溶解することができない。そ
の中でも、両者の最も好ましい組合せは、直鎖アルコー
ルポリエトキシレートが5w/v%のとき、低級アルコ
ールは5〜6 v / v%、直鎮アルコールポリエト
キシレートが6〜7w/v%のとき、低級アルコールは
5〜7v/v%である。
/V%、好ましくは5〜7 w / v%であり、濃度
が10w/v%を超えると一旦溶解した脂質が保存中に
層分離を起こして析出し、また3W / V%未満であ
ると脂質を溶解することができない。低級アルコールの
濃度は3〜1 0 v/v%、好ましくは5〜7v/v
%であり、この濃度が3v / v%未満でもまた10
v/v%を超えても脂質を溶解することができない。そ
の中でも、両者の最も好ましい組合せは、直鎖アルコー
ルポリエトキシレートが5w/v%のとき、低級アルコ
ールは5〜6 v / v%、直鎮アルコールポリエト
キシレートが6〜7w/v%のとき、低級アルコールは
5〜7v/v%である。
本発明脂質標準水溶液は、必要に応じて、緩衝剤を加え
てpHを7〜9に調整することができる。
てpHを7〜9に調整することができる。
緩衝剤としては、トリス、リン酸塩、イミダゾール、ト
リエタノールアミン、バルビツール酸塩又はグッドの緩
衝剤を10〜100mMの範囲で使用するのが好ましく
、特にトリス緩衝剤を25mMの濃度で使用してpH7
.0〜7.6に調整するのが好ましい。
リエタノールアミン、バルビツール酸塩又はグッドの緩
衝剤を10〜100mMの範囲で使用するのが好ましく
、特にトリス緩衝剤を25mMの濃度で使用してpH7
.0〜7.6に調整するのが好ましい。
更に、本発明脂質標準水溶液には、細菌の発生を防止す
るために、防腐剤を添加することができる。好適な防腐
剤としては、例えばアルカリ金属アジド0.001 〜
0.1%(w/v)又はクロルヘキシジン0.001
〜0.1%(w/v)が挙げられ、特にクロルヘキシジ
ン0. 003%(W/V)を添加するのが好ましい。
るために、防腐剤を添加することができる。好適な防腐
剤としては、例えばアルカリ金属アジド0.001 〜
0.1%(w/v)又はクロルヘキシジン0.001
〜0.1%(w/v)が挙げられ、特にクロルヘキシジ
ン0. 003%(W/V)を添加するのが好ましい。
本発明の脂質標準水溶液を製造するには、先ずコレステ
ロール、リン脂質及びトリグリセリドの3種の脂質を一
定量秤り取り、これに直鎖アルコールポリエトキシレー
ト及び低級アルコールを添加し、室温もしくは、必要で
あれば50℃下で攪拌下溶解する。これに至適量の蒸留
水を、必要であればわずかに加温して加える。好ましく
は、至適量の蒸留水を加えるとき、適当な時点で緩衝剤
を添加してpl{値を調整し、更に防腐剤を添加する。
ロール、リン脂質及びトリグリセリドの3種の脂質を一
定量秤り取り、これに直鎖アルコールポリエトキシレー
ト及び低級アルコールを添加し、室温もしくは、必要で
あれば50℃下で攪拌下溶解する。これに至適量の蒸留
水を、必要であればわずかに加温して加える。好ましく
は、至適量の蒸留水を加えるとき、適当な時点で緩衝剤
を添加してpl{値を調整し、更に防腐剤を添加する。
また加える蒸留水に直接緩衝剤を溶解したものを至適量
加えることも可能である。
加えることも可能である。
叙上の如く、本発明の脂質標準水溶液はコレステロール
、リン脂質及びトリグリセリドの3種を含有しており、
その物性は体液に近似しており、しかも長期間の保存に
おいて安定であるという特長を有するので、臨床におけ
る標準液として極めて有利である。
、リン脂質及びトリグリセリドの3種を含有しており、
その物性は体液に近似しており、しかも長期間の保存に
おいて安定であるという特長を有するので、臨床におけ
る標準液として極めて有利である。
次に実施例を挙げて説明する。
実施例1
コレステロール2, Og,レシチン2. 0g及びト
リオレイン2.0gの混合物をγデカトールLO−9
C旭電化工業■製〕60gとイソブロバノール6〇一に
て室温下溶解する。蒸留水5 0 0mj!を加えて混
和後、トリス緩衝剤3.03gを添加し、INHIJで
pH値を7.3に調整する。更にクロルヘキシジンを終
濃度0. 003%(W/V)となるように添加した後
、蒸留水を加えて総量を1lとして脂質標準水溶液を得
た。
リオレイン2.0gの混合物をγデカトールLO−9
C旭電化工業■製〕60gとイソブロバノール6〇一に
て室温下溶解する。蒸留水5 0 0mj!を加えて混
和後、トリス緩衝剤3.03gを添加し、INHIJで
pH値を7.3に調整する。更にクロルヘキシジンを終
濃度0. 003%(W/V)となるように添加した後
、蒸留水を加えて総量を1lとして脂質標準水溶液を得
た。
斯くして得た脂質標準水溶液を4℃で保存したときの安
定性は第1表に示すとおりであり、1年以上安定であっ
た。
定性は第1表に示すとおりであり、1年以上安定であっ
た。
また、この脂質標準水溶液について、次のようにして酵
素的に脂質を測定した。
素的に脂質を測定した。
コレステロールの酵素的測定法は、コレステロール才キ
シダーゼにより酸化され、生じた過酸化水素を、更にバ
ーオキシダーゼの存在下、4−アミノアンチピリン(4
−AA) とN.N−ジエチル−m−}ルイジンを酸化
縮合させ、生成する紫色色素を波長545nmで、吸光
度を測定して定量した。
シダーゼにより酸化され、生じた過酸化水素を、更にバ
ーオキシダーゼの存在下、4−アミノアンチピリン(4
−AA) とN.N−ジエチル−m−}ルイジンを酸化
縮合させ、生成する紫色色素を波長545nmで、吸光
度を測定して定量した。
レシチンの酵素的測定法は、先ずホスホリバーゼDによ
り、加水分解させてコリンを遊離させる。
り、加水分解させてコリンを遊離させる。
このコリンはコリンオキシダーゼにより酸化され、生じ
た過酸化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づ
いて反応させ、最終的に吸光度測定によって定量した。
た過酸化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づ
いて反応させ、最終的に吸光度測定によって定量した。
トリオレインの酵素的測定法は、先ずリポプロテインリ
パーゼにより加水分解し、遊離したグリセロールをTデ
ノシン−3−リン酸(ATP) の存在下グリセロール
キナーゼの作用によりグリセロール−3−リン酸へ変換
する。このグリセロ−ルー3−リン酸は、グリセロール
−3−リン酸オキシダーゼにより酸化され、生じた過酸
化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づいて反
応させ、最終的に吸光度測定によって定量する。
パーゼにより加水分解し、遊離したグリセロールをTデ
ノシン−3−リン酸(ATP) の存在下グリセロール
キナーゼの作用によりグリセロール−3−リン酸へ変換
する。このグリセロ−ルー3−リン酸は、グリセロール
−3−リン酸オキシダーゼにより酸化され、生じた過酸
化水素を上記コレステロールと同様の原理に基づいて反
応させ、最終的に吸光度測定によって定量する。
その結果は第1図の(1)〜(3)のとおりであり、コ
ントロール血清及び人血清と同等の反応性を示し、標準
液として至適な処方であることを確認した。
ントロール血清及び人血清と同等の反応性を示し、標準
液として至適な処方であることを確認した。
実施例2
コレステロール2、Og1 レシチン2.0g及びトリ
オレイン2.0gの混合物をアデカトールLO−970
g及びエタノール60艷にて、約50℃の水浴中で加温
下溶解した。室温にもどした後に、25mMのトリスー
HCi緩衝液(pH7. 3)を加えて1lとじ脂買標
準水溶液を得た。
オレイン2.0gの混合物をアデカトールLO−970
g及びエタノール60艷にて、約50℃の水浴中で加温
下溶解した。室温にもどした後に、25mMのトリスー
HCi緩衝液(pH7. 3)を加えて1lとじ脂買標
準水溶液を得た。
第1図(イ)、第1図(口)及び第1図(ハ)は本発明
の脂質標準水溶液、コントロール血清及び人血清につい
て酵素的にそれぞれコレステロール、トリオレイン及び
レシチンを測定したときの反応タイムコースを示す図で
ある。
の脂質標準水溶液、コントロール血清及び人血清につい
て酵素的にそれぞれコレステロール、トリオレイン及び
レシチンを測定したときの反応タイムコースを示す図で
ある。
Claims (1)
- 1、コレステロール、リン脂質及びトリグリセリドを、
直鎖アルコールポリエトキシレート3〜10w/v%及
び低級アルコール3〜10v/v%を含有する水溶液に
溶解したことを特徴とする脂質標準水溶液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP998290A JP2847552B2 (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 脂質標準水溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP998290A JP2847552B2 (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 脂質標準水溶液 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03215748A true JPH03215748A (ja) | 1991-09-20 |
JP2847552B2 JP2847552B2 (ja) | 1999-01-20 |
Family
ID=11735107
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP998290A Expired - Fee Related JP2847552B2 (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 脂質標準水溶液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2847552B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108152519A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-06-12 | 宁波美康保生生物医学工程有限公司 | 用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法 |
-
1990
- 1990-01-19 JP JP998290A patent/JP2847552B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN108152519A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-06-12 | 宁波美康保生生物医学工程有限公司 | 用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法 |
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Publication number | Publication date |
---|---|
JP2847552B2 (ja) | 1999-01-20 |
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