JP2847552B2

JP2847552B2 - 脂質標準水溶液

Info

Publication number: JP2847552B2
Application number: JP998290A
Authority: JP
Inventors: 明近藤; 満久真鍋
Original assignee: Daiichi Kagaku Yakuhin Co Ltd
Current assignee: Daiichi Kagaku Yakuhin Co Ltd
Priority date: 1990-01-19
Filing date: 1990-01-19
Publication date: 1999-01-20
Anticipated expiration: 2014-01-20
Also published as: JPH03215748A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は脂質標準水溶液、更に詳細には、コレステロ
ール、リン脂質及びトリグリセリドの３種の脂質を含有
し、体液に類似した物性を示し、しかも長期間安定な脂
質標準水溶液に関する。

〔従来の技術〕

近年、動脈硬化症、高脂血症等を診断するために、血
清中のコレステロール、リン脂質及びトリグリセリド濃
度を測定することが行われている。これらの測定法とし
ては一般に化学的及び酵素的方法が採用されているが、
これらの方法では、測定結果を評価するにあたり、一定
既知量の脂質を含有する標準液を必要とする。

斯かる標準液としては、従来、例えば10v/v％のオキ
シポリエトキシドデカン、10v/v％の低級アルコール及
び0.1w/v％のアルキルジメチルベンジルアンモニウムク
ロリドを含有する水溶液にコレステリンを溶解した標準
溶液が報告されている（特公昭54−1197号）。

しかし、この標準溶液は、特開昭55−39095号公報に
記載の如く、多量のアルコールを含有するため、血清試
料に比べ蒸発が早く、そして蒸発によりアルコール含量
が下がると、脂質の沈澱が生ずると共に、界面活性剤濃
度が増加して望ましくない高粘度をもたらすという欠点
があった。従って、特開昭55−39095号の発明では、オ
キシポリエトキシドデカン等の非イオン性界面活性剤に
加えて、アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリ
ド等のイオン性界面活性剤を0.5〜10w/w％と比較的高濃
度で使用することによって、アルコールを使用すること
なく、脂質を安定に溶解した脂質標準溶液を得る方法を
報告している。

しかしながら、特開昭55−39095号の発明も、高濃度
のイオン性界面活性剤を含むため、試料として体液を使
用すると、体液中の蛋白成分の変性を起すおそれがあり
好ましくない。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、コレステロール、リン脂質及びトリグリセリ
ドの３種の脂質が含有されており、物性が体液に類似し
ており、かつ長期間安定な脂質標準溶液の開発が望まれ
ていた。

〔課題を解決するための手段〕

斯かる実状において、本発明者は鋭意研究を行った結
果、直鎖アルコールポリエトキシレートと低級アルコー
ルを限られた範囲の濃度で含有する水溶液を用いると、
イオン性界面活性剤を含まずとも、上記３種の脂質を安
定に溶解できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、コレステロール、リン脂質及び
トリグリセリドを、直鎖アルコールポリエトキシレート
５〜7w/v％及び低級アルコール５〜7v/v％を含有し、胆
汁酸又はその塩を含有しない水溶液に溶解したことを特
徴とする脂質標準水溶液を提供するものである。

本発明において溶解補助剤として使用する直鎖アルコ
ールポリエトキシレートはCH₃（CH₂）_nCH₂（OCH₂CH₂）_m
OHで表わされるもので、その中でも平均分子量が薬612
のものが好ましい。これは、例えば旭電化工業（株）か
ら「アデカトールLO」の商品名で供給されている。

また、低級アルコールとしては、例えばエタノール、
イソプロパノール、ブタノール等が挙げられる。

直鎖アルコールポリエトキシレートの濃度は５〜7w/v
％であることが必要であり、また低級アルコールの濃度
は５〜7v/v％であることが必要であるが、その中でも、
両者の最も好ましい組合せは、直鎖アルコールポリエト
キシレートが5w/v％のとき、低級アルコールは５〜6v/v
％、直鎖アルコールポリエトキシレートが６〜7w/v％の
とき、低級アルコールは５〜7v/v％である。

本発明脂質標準水溶液は、必要に応じて、緩衝剤を加
えてpHを７〜９に調整することができる。緩衝剤として
は、トリス、リン酸塩、イミダゾール、トリエタノール
アミン、バルビツール酸塩又はグッドの緩衝剤を10〜10
0mMの範囲で使用するのが好ましく、特にトリス緩衝剤
を25mMの濃度で使用してpH7.0〜7.6に調整するのが好ま
しい。

更に、本発明脂質標準水溶液には、細菌の発生を防止
するために、防腐剤を添加することができる。好適な防
腐剤としては、例えばアルカリ金属アジド0.001〜0.1％
（w/v）又はクロルヘキシジン0.001〜0.1％（w/v）が挙
げられ、特にクロルヘキシジン0.003％（w/v）を添加す
るのが好ましい。

本発明の脂質標準水溶液を製造するには、先ずコレス
テロール、リン脂質及びトリグリセリドの３種の脂質を
一定量秤り取り、これに直鎖アルコールポリエトキシレ
ート及び低級アルコールを添加し、室温もしくは、必要
であれば50℃下で撹拌下溶解する。これに至適量の蒸留
水を、必要であればわずかに加温して加える。好ましく
は、至適量の蒸留水を加えるとき、適当な時点で緩衝剤
を添加してpH値を調整し、更に防腐剤を添加する。また
加える蒸留水に直接緩衝剤を溶解したものを至適量加え
ることも可能である。

〔発明の硬化〕

叙上の如く、本発明の脂質標準水溶液はコレステロー
ル、リン脂質及びトリグリセリドの３種を含有してお
り、その物性は体液に近似しており、しかも長期間の保
存において安定であるという特長を有するので、臨床に
おける標準液として極めて有利である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１コレステロール2.0g、レシチン2.0g及びトリオレイン
2.0gの混合物をアデカトールLO−９〔旭電化工業（株）
製〕60gとイソプロパノール60mlにて室温下溶解する。
蒸留水500mlを加えて混和後、トリス緩衝剤3.03gを添加
し、IN HClでpH値を7.3に調整する。更にクロルヘキシ
ジンを終濃度0.003％（w/v）となるように添加した後、
蒸留水を加えて総量を１として脂質標準水溶液を得
た。

斯くして得た脂質標準水溶液を４℃で保存したときの
安定性は第１表に示すとおりであり、１年以上安定であ
った。

また、この脂質標準水溶液について、次のようにして
酸素的に脂質を測定した。

コレステロールの酸素的測定法は、コレステロールオ
キシダーゼにより酸化され、生じた過酸化水素を、更に
パーオキシダーゼの存在下、４−アミノアンチピリン
（４−AA）とN,N−ジエチル−ｍ−トルイジンを酸化縮
合させ、生成する紫色色素を波長545nmで、吸光度を測
定して定量した。

レシチンの酵素的測定法は、先ずホスホリパーゼＤに
より、加水分解させてコリンを遊離させる。このコリン
はコリンオキシダーゼにより酸化され、生じた過酸化水
素を上記コレステロールと同様の原理に基づいて反応さ
せ、最終的に吸光度測定によって定量した。

トリオレインの酵素的測定法は、先ずリポプロテイン
リバーゼにより加水分解し、遊離したグリセロールをア
デノシン−３−リン酸（ATP）の存在下グリセロールキ
ナーゼの作用によりグリセロール−３−リン酸へ変換す
る。このグリセロール−３−リン酸は、グリセロール−
３−リン酸オキシダーゼにより酸化され、生じた過酸化
水素を上記コレステロールと同様の原理に基づいて反応
させ、最終的に吸光度測定によって定量する。

その結果は第１図の（１）〜（３）のとおりであり、
コントロール血清及び人血清と同等の反応性を示し、標
準液として至適な処方であることを確認した。

実施例２コレステロール2.0g、レシチン2.0g及びトリオレイン
2.0gの混合物をアデカトールLO−970g及びエタノール60
mlにて、約50℃の水浴中で加温下溶解した。室温にもど
した後に、25mMのトリス−HCl緩衝液（pH7.3）を加えて
１とし脂質標準水溶液を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図（イ）、第１図（ロ）及び第１図（ハ）は本発明
の脂質標準水溶液、コントロール血清及び人血清につい
て酵素的にそれぞれコレステロール、トリオレイン及び
レシチンを測定したときの反応タイムコースを示す図で
ある。

フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) G01N 33/96 G01N 33/92 G01N 33/50

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】コレステロール、リン脂質及びトリグリセ
リドを、直鎖アルコールポリエトキシレート５〜7w/v％
及び低級アルコール５〜7v/v％を含有し、胆汁酸又はそ
の塩を含有しない水溶液に溶解したことを特徴とする脂
質標準水溶液。