CN110031638B - 一种心肌酶复合质控品 - Google Patents
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Abstract
本申请提供一种心肌酶复合质控品，包括缓冲液、还原剂、糖类、LDH酶、CK酶、以及CK‑MB酶。该质控品不仅能够同时用于LDH、α‑HBDH、CK、以及CK‑MB四项心肌酶检测过程的质量控制，有效提高心肌酶联检时进行质量控制的准确性，为临床心肌相关疾病的诊断提供准确的依据；同时，本申请提供的质控品还具有稳定性好，保存时间长的优势，适用于在临床领域的推广和发展。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测技术领域，特别涉及一种心肌酶复合质控品。
背景技术
心肌酶是存在于心肌的多种酶的总称，一般有乳酸脱氢酶(LDH)、α- 羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)、以及肌酸激酶MB同工酶 (CK-MB)。由于这几种酶均具有较高的阳性率和特异性，所以常被用于诊断心肌梗死。
心肌酶质控品，指的是在开展心肌酶检测项目的临床检测使用过程中对检测系统进行把握和控制的一种质量控制物质，其在生化临床检测中的应用十分广泛。目前常用的心肌酶质控品多为一对一的单项质控品，很少有将 LDH、α-HBDH、CK、CK-MB四项复合的复合质控品。相较于一对一的单项质控品，四项联检更能提高诊断的效率及准确率。但是由于不同的心肌酶的性能各不相同，其稳定条件也不尽相同，尤其是CK-MB，由于其存在的形态是二聚体，极其不稳定，所以无法长期保存。
因此如何提供一种稳定的心肌酶复合质控品，已经成为本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种心肌酶复合质控品，该质控品不仅能够同时用于LDH、α-HBDH、CK、以及CK-MB四项心肌酶检测过程的质量控制，有效提高心肌酶联检时进行质量控制的准确性，为临床心肌相关疾病的诊断提供准确的依据；同时，本发明提供的质控品还具有稳定性好，保存时间长的优势，适用于在临床领域的推广和发展。
本发明所述的一种心肌酶复合质控品，包括缓冲液、还原剂、糖类、 LDH酶、CK酶、以及CK-MB酶。
需要说明的是，由于LDH酶中同时包含LDH酶和α-HBDH酶两种酶，所以本发明中LDH酶和α-HBDH酶两者共用LDH酶一种原料。即，本发明所述的心肌酶复合质控品中实际包括LDH酶、CK酶、α-HBDH酶、以及 CK-MB酶四种酶。
优选的，所述缓冲液的浓度为25-120mmol/L，所述还原剂的浓度为 0.05-5mmol/L，所述糖类浓度为1％-10％，所述LDH酶的浓度为80-500U/L，所述CK酶的浓度为100-800U/L，所述CK-MB酶的浓度为20-300U/L。
优选的，所述缓冲液的浓度为100mmol/L，所述还原剂的浓度为 2mmol/L，所述糖类浓度为5％。
优选的，所述缓冲液为HEPES缓冲液、MES缓冲液、PIPES缓冲液、 Tris-HCl缓冲液中的一种。
优选的，所述缓冲液的PH值为7.4±0.05。
优选的，所述缓冲液为HEPES缓冲液，其浓度为100mmol/L，PH值为 7.4。
优选的，所述还原剂为DL-二硫苏糖醇、谷胱甘肽、二巯基乙烷磺酸钠、1-硫代甘油中的一种或几种。
优选的，所述还原剂为DL-二硫苏糖醇，其浓度为2mmol/L。
优选的，所述糖类为蔗糖、海藻糖、乳糖中的一种或几种。
优选的，所述糖类为蔗糖，其浓度为5％。
优选的，所述心肌酶复合质控品中还包括牛血清白蛋白、EDTA二钠、防腐剂中的一种或几种。其中，牛血清白蛋白的加入可以有效改善复合质控品的基质效应、赋形等；EDTA二钠能有效螯合金属离子，防止一些杂质离子对检测反应引起不必要的干扰，具有辅助稳定质控品的作用；防腐剂则具有抑菌作用，防腐剂的加入有利于保证质控品的稳定性，使质控品可以长时间储存待用而不变质。
优选的，所述牛血清白蛋白的浓度为0.1％-8％，和/或，所述EDTA二钠的浓度为0.035％-0.5％，和/或，所述防腐剂的浓度为0.05％-0.2％。
优选的，所述牛血清白蛋白的浓度为2％，和/或，所述EDTA二钠的浓度为0.1％，和/或，所述防腐剂的浓度为0.1％。
优选的，所述防腐剂为叠氮钠、proclin 300、硫柳汞中的一种或几种。
优选的，所述质控品为冻干粉制剂。相较于液态复合质控品而言，冻干粉制剂不容易发生衰减或交叉反应，能够长期保存，且本发明提供的质控品复溶稳定性良好，具有非常好的临床实用性，适用于在临床领域的推广和发展。
本发明提供的心肌酶复合质控品包括缓冲液、还原剂、糖类、LDH酶、 CK酶、以及CK-MB酶，其中各物质的选择依据如下：
缓冲液，主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，确保检测结果不会受到波动和影响；还原剂，主要防止CK酶和CK-MB酶被氧化，起到辅助稳定的作用；糖类，既能提高质控品的稳定性，当质控品为干粉制剂时，还可作为质控品干粉的赋形剂，实验证明，添加糖类保护剂的质控品比未加糖类保护剂的质控品冻干后的形态更好，无萎缩、无裂纹；LDH酶、CK酶、以及CK-MB酶，作为反应底物参与反应，用于调整质控品的浓度。
本发明提供的复合质控品具有良好的稳定性，能够长期保存。当其为冻干粉制剂时，该冻干粉能在37度加速热稳定试验条件下稳定保存10天；而将该冻干粉直接复溶后，其复溶品能在18-25℃的室温条件下稳定放置4天， 2-8℃的温度条件下稳定放置保存28天。相较于同类质控品而言，本发明提供的复合质控品的复溶稳定性优异，保存时间长。例如，已上市A厂家的肌酸激酶MB同工酶质控品在-20℃的条件下只能保存7天；已上市A厂家的多项生化质控品，CK酶/LDH酶/α-HBDH酶项目在2-8℃的条件下只能保存7天。
本发明提供的心肌酶复合质控品，同时复合了LDH酶、α-HBDH酶、 CK酶、以及CK-MB酶，不仅能够同时用于四项心肌酶检测过程的质量控制，有效提高心肌酶联检时进行质量控制的准确性，为临床心肌相关疾病的诊断提供准确的依据；同时，本发明提供的质控品还具有稳定性好，保存时间长的优势，适用于在临床领域的推广和发展。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合具体实施例对本申请进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例1
本实施例1提供的一种心肌酶复合质控品由以下组分组成：
浓度为25mmol/L的HEPES缓冲液，PH值为7.4；DL-二硫苏糖醇 0.05mmol/L，蔗糖1％，LDH酶80U/L，CK酶100U/L，CK-MB酶20U/L。
实施例2
本实施例2提供的一种心肌酶复合质控品由以下组分组成：
浓度为120mmol/L的MES缓冲液，PH值为7.35；谷胱甘肽5mmol/L，海藻糖10％，LDH酶500U/L，CK酶800U/L，CK-MB酶300U/L。
实施例3
本实施例3提供的一种心肌酶复合质控品由以下组分组成：
浓度为80mmol/L的PIPES缓冲液，PH值为7.45；二巯基乙烷磺酸钠 2.5mmol/L，乳糖5％，LDH酶250U/L，CK酶400U/L，CK-MB酶150U/L，牛血清白蛋白0.1％，EDTA二钠0.035％。
实施例4
本实施例4提供的一种心肌酶复合质控品由以下组分组成：
浓度为100mmol/L的PIPES缓冲液，PH值为7.43；二巯基乙烷磺酸钠 0.5mmol/L，1-硫代甘油3mmol/L，乳糖2％，蔗糖5％，LDH酶150U/L，CK 酶200U/L，CK-MB酶80U/L，牛血清白蛋白的浓度为8％，EDTA二钠的浓度为0.5％，叠氮钠0.2％。
实施例5
本实施例5提供的一种心肌酶复合质控品由以下组分组成：
浓度为100mmol/L的HEPES缓冲液，PH值为7.4；DL-二硫苏糖醇 2mmol/L，蔗糖5％，LDH酶300U/L，CK酶500U/L，CK-MB酶250U/L，牛血清白蛋白的浓度为2％，EDTA二钠的浓度为0.1％，硫柳汞0.1％。
实施例6：不同PH条件下的心肌酶复合质控品的稳定性分析
表1：HEPES缓冲液
表2：MES缓冲液(pH6.0)
表3：PIPES缓冲液
表4：Tris-HCl缓冲液
表5：未加缓冲成分
本实施例配制了不同PH值的缓冲液，分别为MES缓冲液(PH6.0)、PIPES 缓冲液(PH6.8)、HEPES缓冲液(PH7.4)、以及Tris-HCl缓冲液(PH8.0)。本实施例利用这四种缓冲液配制心肌酶复合质控品，将冻干后的复合质控品放置在37度烘箱中加速10天，取出后平衡至室温，加入复溶液复溶；同时将在2-8度条件下保存的复合质控品作为对照组(不同配方的复合质控品均对应有放置在2-8度条件下保存的对照样)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表6：
表6稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加缓冲成分的复合质控品)，质控品LDH和α -HBDH加速后测值升高，质控品CK和CK-MB加速后测值下降。由此可知，缓冲体系的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种缓冲体系中，HEPES缓冲液(pH7.4)的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在2-8度条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在2-8 度的冰箱内分别放置0天、14天、28天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表7：
表7.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加缓冲成分的复合质控品)，质控品LDH、α -HBDH、CK、CK-MB在2-8度保存后复溶测值均下降。由此可知，缓冲体系的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种缓冲体系中， HEPES缓冲液(pH7.4)的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在室温条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在室温平衡箱内分别放置0天、2天、4天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表8：
表8.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加缓冲成分的复合质控品)，质控品LDH和α -HBDH加速后测值升高，质控品CK和CK-MB加速后测值下降。由此可知，缓冲体系的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种缓冲体系中，HEPES缓冲液(pH7.4)的稳定性效果最好。
实施例7：不同种类还原剂的稳定性分析
表9：DL-二硫苏糖醇
表10：谷胱甘肽
表11：二巯基乙烷磺酸钠
表12：1-硫代甘油
表13：未加还原剂
本实施例分别采用DL-二硫苏糖醇、谷胱甘肽、二巯基乙烷磺酸钠、1- 硫代甘油四种还原剂配制心肌酶复合质控品，各还原剂的浓度均为2mmol/L。配制完成后，将经过冻干处理的复合质控品放置在37度烘箱中加速10天，取出后平衡至室温，加入复溶液复溶，同时以在2-8度条件下保存的复合质控品作为对照组(不同配方的复合质控品均对应有放置在2-8度条件下保存的对照样)，用已上市试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表14：
表14.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加还原剂的复合质控品)，质控品LDH、α-HBDH、 CK、CK-MB加速后测值均明显下降。由此可知，还原剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种还原剂中，DL-二硫苏糖醇的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在2-8度条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在2-8 度的冰箱内分别放置0天、14天、28天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表15：
表15.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加还原剂的复合质控品)，质控品LDH、α-HBDH、 CK、CK-MB在2-8度保存后复溶测值均下降。由此可知，还原剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种还原剂中，DL-二硫苏糖醇的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在室温条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在室温平衡箱内分别放置0天、2天、4天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表16：
表16.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加还原剂的复合质控品)，质控品LDH、α-HBDH、 CK、CK-MB在室温下保存后复溶测值均下降。由此可知，还原剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这四种还原剂中，DL-二硫苏糖醇的稳定性效果最好。
实施例8：不同种类糖类保护剂的稳定性分析
表17：蔗糖
表18：海藻糖
表19：乳糖
表20：未加糖
本实施例分别采用蔗糖、海藻糖、乳糖三种糖类保护剂配制心肌酶复合质控品，各糖类保护剂的浓度均为5％。配制完成后，将经过冻干处理的复合质控品放置在37度烘箱中加速10天，取出后平衡至室温，加入复溶液复溶，同时以在2-8度条件下保存的复合质控品作为对照组(不同配方的复合质控品均对应有放置在2-8度条件下保存的对照样)，用已上市试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表21：
表21.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加糖类保护剂的复合质控品)，质控品LDH、α -HBDH、CK、CK-MB加速后测值均明显下降。由此可知，糖类保护剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这三种糖类保护剂中，蔗糖的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在2-8度条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在2-8 度的冰箱内分别放置0天、14天、28天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表22：
表22.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加糖类的复合质控品)，质控品LDH、α-HBDH、 CK、CK-MB在2-8度保存后复溶测值均下降。由此可知，糖类保护剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这三种糖类保护剂中，蔗糖的稳定性效果最好。
除此之外，为检测本实施例配置的各复合质控品在室温条件下的稳定性。本实施例还将配置好的各复合质控品直接复溶，将复溶后各质控品在室温平衡箱内分别放置0天、2天、4天(0天即对照)，用已上市的试剂盒在全自动生化分析仪上检测，最终计算测试结果的相对偏差。结果见表23：
表23.稳定性测试结果
结果表明，对比组中(未加糖类保护剂的复合质控品)，质控品LDH、α -HBDH、CK、CK-MB在室温下保存后复溶测值均下降。由此可知，糖类保护剂的加入对于提高质控品的稳定性具有积极效果。而在这三种糖类保护剂中，蔗糖的稳定性效果最好。
综上所述，由各实验结果可知，本发明提供的复合质控品具有良好的稳定性，能够长期保存。当其为干粉制剂时，在37度加速热稳定试验条件下能稳定保存10天；直接复溶后在18-25℃的室温条件下可放置4天，2-8℃的温度条件下可保存28天。相较于同类质控品而言，本发明提供的复合质控品的复溶稳定性优异，保存时间长(例如，已上市A厂家肌酸激酶MB同工酶质控品在-20℃的条件下只能保存7天；已上市A厂家多项生化质控品，CK酶 /LDH酶/α-HBDH酶项目在2-8℃的条件下只能保存7天)。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (4)
1.一种心肌酶复合质控品，其特征在于，包括缓冲液25-120mmol/L、还原剂0.05-5mmol/L、糖类1％-10％、LDH酶80-500U/L、CK酶100-800U/L、以及CK-MB酶20-300U/L；
还包括牛血清白蛋白0.1％-8％、EDTA二钠0.035％-0.5％、防腐剂0.05％-0.2％；
所述缓冲液为HEPES缓冲液；所述还原剂为DL-二硫苏糖醇；所述糖类为蔗糖。
2.根据权利要求1所述的心肌酶复合质控品，其特征在于，所述缓冲液的PH值为7.4±0.05。
3.根据权利要求1所述的心肌酶复合质控品，其特征在于，所述防腐剂为叠氮钠、proclin 300、硫柳汞中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的心肌酶复合质控品，其特征在于，所述质控品为冻干粉制剂。
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