CN109799358A - 一种生化校准仪的校准及其生化试剂复合校准的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生化试剂复合校准技术领域，本发明提高了临床检验质量和速度，减轻检验人员的劳动强度节约样品和试剂，提高检测精密度减小误差，并有利于临床检验标准化的实现，本发明通过一系列实验，探索出不同分子量的生物膜对不同物质、不同时间渗透不同，通过生物膜血清浓缩提高每种物质在血清中的含量，通过不同分子量的生物膜能够渗透出不同分子量的物质，达到高浓度复合校准目标物质，然后将不同物质混合一起，达到复合校准里面各个项目所需的浓度，很好的解决了总胆红素、胆汁酸、甘油三酯、尿酸等特殊物质的溶解和定值问题，解决了校准不稳定的问题，解决了临床的沟状效应，使得临床测值更接近真实值。

Description

一种生化校准仪的校准及其生化试剂复合校准的制备方法

技术领域

本发明涉及生化试剂复合校准技术领域，具体为一种生化校准仪的校准及其生化试剂复合校准的制备方法。

背景技术

生化试剂在临床应用已经普及，其溯源校准技术门槛较高，由于其项目多，添加物质复杂，定值更困难，目前我们通常还是使用进口朗道、罗氏或者伯乐的校准品。国产的要么不能生产，生产出来有的项目不全，项目全了定值又不准导致无法实现临床使用。例如：单纯的总胆红素不溶解于水基质，溶解于氯仿，但氯仿加入后又会破坏血清里面蛋白质。直接胆红素见光分解，在生产和储存过程中都容易导致最终值的变化。

对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。全自动生化分析仪测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与其他实验室的可比性，应该自己建立一个标准测定系统。在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，各仪器厂家均有自己的标准测定系统。在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室(定量测定)室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的(配套的)标准品/校准品，如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质，对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率”，这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种生化校准仪的校准及其生化试剂复合校准的制备方法，达到对生化校准仪根据不同的分析项目及其特性确立各自的校准频率，同时提供一种稳定性高的生化试剂复合校准制备方法的目的。

本发明提供如下技术方案：一种生化校准仪的校准方法，包括生化校准仪，包括以下步骤：

1)选定校准品和质控品

①校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的，校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差，因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差；

②质控品只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定，前者是校准其值而后者是控制误差用的；

2)进行空白调节

①系统运行试剂空白的新的测量；

②在新的测量中获得的试剂空白吸光率值取代在先前测量中获得的值；

③基于在试剂空白中的变更，上调或下调曲线；

3)进行校准前的准备

①正常开机以后检查冲洗用水装置是否正常、各项分析试剂是否充足、各种清洗剂是否足够，以及样品针试剂针和搅拌棒是否清洁；

②确认要进行校准的项目，确认要做的质控批号及项目，以及校准品、质控品是否足够；

③了解仪器的基本性能(灯泡已使用多久检查飘移是否合乎要求比色杯的清洁及磨损情况等),用清洁剂泡洗管道使仪器校准处于最佳的状态生化分析仪的校准；

4)全自动生化分析仪在样品分析之前都要对该分析项目进行校准(即定标)得出一个该项目的校准系数(K)，校准前必须在反应程序里设定有关校准的参数，如校准液的浓度等、执行校准程序、检测得到该校准品的吸光度值，再根据校准浓度计算校准系数(K＝校准品浓度/校准品吸光度)；

①校准方式

有单点校准、两点校准和多点校准，大多数检测项目的校准曲线呈直线且通过原点用单个浓度的校准液，即可若校准曲线呈直线但不通过原点，则需要用两个浓度的校准夜做两点校准，当校准曲线不呈直线而为正真的曲线时，应做多点校准并按其线形选择不同的曲线方程进行拟和，如双曲线、抛物线、幂函数、指数函数、对数函数等方程等，多数生化分析仪已设置有数种曲线方程，可将多点校准的结果自动进行数据处理，得到曲线拟和方程样品的检测吸光度，便可通过此方程计算结果；

②对校准品的要求

A选择合适的校准品包括校准品的数目、类型和浓度，如有可能校准品应溯源到参考方法和参考物质；

B确定校准的频率，根据检测项目方法和试剂的稳定性不同而确定不同的校准频率，如每日校准、每周校准、每月校准等，根据仪器项目检测结果而确定相应的校准频率；

C不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，因此不能用定值质控血清代替校准品作校准用；

D如有下列情况发生时，必须对仪器进行校正；

a改变试剂的种类，或者批号更换了.如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行了一次大的预防性维护或者更换了重要的部件，这些都可以影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或者偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后不能识别和纠正问题时；

6)关于酶活性测定校准问题

酶具有极高的催化效率，酶在体液中含量极微，仅为ng/L水平，临床大都采用酶活性测定，以酶活性间接表示酶量。酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量；

酶活力计算公式如下：

酶活力(u/l)＝△A/min×V总×106/(ε×v标×1)令k＝V总×106/(ε×v标×1),则酶活力(u/l)＝△A/min×k；

常用K值有以下几种：

a理论K值，根据理论摩尔吸光系数(ε)来计算，如NADH的E为6.22X103；

b实测K值，由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值；

c厂家给的K值厂家生产试剂盒说明书上提供的K值(有的厂家提供6.3X10)；

d校准K值：通过校准物直接校准得到的K值；

临床最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1、必须使用配套的试剂；2、必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性，但由于酶校准品不稳定且有效期很短，目前酶类还没有相应的校准品，因此对于酶类现在还是使用实测的K值进行求酶活力；

6)拟订校准计划

校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化，按照“临床实验室质量控制(QC)的要求(草案)”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

①建立校准方法

选择合适(配套)的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；确定校准的频度，至少每六个月进行一次校准；如有下列情况发生时，必须进行校准；

a改变试剂的种类，或者批号更换了，如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行-次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；

②每个实验室对每台仪器必需要有校准计划，每次校准必须有详情的记录和分析，每次校准记录必须保存备查。

一种生化试剂复合校准的制备方法，基质为血清，包括以下步骤：

①100KD生物膜透析70min和2000KD生物膜透析60min一比一混合；

②选取适当的生物透析袋将血清灌致袋中；

③将透析袋放置托盘中，并用PEG8000包埋，静止相应时间；

④取出透析过的血清进行各个项目测量；

⑤如果某些项目不在定值范围适当添加小部分相应物质达到定值范围为止。

本发明提供了一种生化校准仪的校准及其生化试剂复合校准的制备方法。具备以下有益效果：

(1)、本发明通过所制定的生化校准仪的校准方法，提高了临床检验质量和速度，减轻检验人员的劳动强度节约样品和试剂，增加检验项目，提高检测精密度减小误差，并有利于临床检验标准化的实现，同时生化分析仪对人员的综合素质要求提高，合理的参数设置是检验结果可靠性的保障。

(2)、本发明通过生化试剂复合校准的制备方法，解决校准品保存不稳定的困难，开发的校准品包含项目种类多，方便临床的使用，并且在达到进口产品的质量水平的同时降低了生产成本，另外，由于本校准品可溯源至国内标准物质，更适合中国人群生化项目的诊断，提高了诊断的准确性。

(3)、本发明通过一系列实验，探索出不同分子量的生物膜对不同物质、不同时间渗透不同，通过生物膜血清浓缩提高每种物质在血清中的含量，通过不同分子量的生物膜能够渗透出不同分子量的物质，达到高浓度复合校准目标物质，然后将不同物质混合一起，达到复合校准里面各个项目所需的浓度，很好的解决了总胆红素、胆汁酸、甘油三酯、尿酸等特殊物质的溶解和定值问题，解决了校准不稳定的问题，解决了临床的沟状效应，使得临床测值更接近真实值。

附图说明

图1为本发明各项生化复合校准物质以及添加物质的实验结果对照图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示，本发明提供一种技术方案：一种生化校准仪的校准方法，包括生化校准仪，包括以下步骤：

1)选定校准品和质控品

①校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的，校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差，因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差；

②质控品只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定，前者是校准其值而后者是控制误差用的；

2)进行空白调节

①系统运行试剂空白的新的测量；

②在新的测量中获得的试剂空白吸光率值取代在先前测量中获得的值；

③基于在试剂空白中的变更，上调或下调曲线；

3)进行校准前的准备

①正常开机以后检查冲洗用水装置是否正常、各项分析试剂是否充足、各种清洗剂是否足够，以及样品针试剂针和搅拌棒是否清洁；

②确认要进行校准的项目，确认要做的质控批号及项目，以及校准品、质控品是否足够；

③了解仪器的基本性能(灯泡已使用多久检查飘移是否合乎要求比色杯的清洁及磨损情况等),用清洁剂泡洗管道使仪器校准处于最佳的状态生化分析仪的校准；

4)全自动生化分析仪在样品分析之前都要对该分析项目进行校准(即定标)得出一个该项目的校准系数(K)，校准前必须在反应程序里设定有关校准的参数，如校准液的浓度等、执行校准程序、检测得到该校准品的吸光度值，再根据校准浓度计算校准系数(K＝校准品浓度/校准品吸光度)；

①校准方式

有单点校准、两点校准和多点校准，大多数检测项目的校准曲线呈直线且通过原点用单个浓度的校准液，即可若校准曲线呈直线但不通过原点，则需要用两个浓度的校准夜做两点校准，当校准曲线不呈直线而为正真的曲线时，应做多点校准并按其线形选择不同的曲线方程进行拟和，如双曲线、抛物线、幂函数、指数函数、对数函数等方程等，多数生化分析仪已设置有数种曲线方程，可将多点校准的结果自动进行数据处理，得到曲线拟和方程样品的检测吸光度，便可通过此方程计算结果；

②对校准品的要求

A选择合适的校准品包括校准品的数目、类型和浓度，如有可能校准品应溯源到参考方法和参考物质；

B确定校准的频率，根据检测项目方法和试剂的稳定性不同而确定不同的校准频率，如每日校准、每周校准、每月校准等，根据仪器项目检测结果而确定相应的校准频率；

C不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，因此不能用定值质控血清代替校准品作校准用；

D如有下列情况发生时，必须对仪器进行校正；

a改变试剂的种类，或者批号更换了，如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行了一次大的预防性维护或者更换了重要的部件，这些都可以影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或者偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后不能识别和纠正问题时；

6)关于酶活性测定校准问题

酶具有极高的催化效率，酶在体液中含量极微，仅为ng/L水平，临床大都采用酶活性测定，以酶活性间接表示酶量。酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量；

酶活力计算公式如下：

酶活力(u/l)＝△A/min×V总×106/(ε×v标×1)令k＝V总×106/(ε×v标×1),则酶活力(u/l)＝△A/min×k；

常用K值有以下几种：

a理论K值，根据理论摩尔吸光系数(ε)来计算，如NADH的E为6.22X103；

b实测K值，由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值；

c厂家给的K值厂家生产试剂盒说明书上提供的K值(有的厂家提供6.3X10)；

d校准K值：通过校准物直接校准得到的K值；

临床最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1、必须使用配套的试剂；2、必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性，但由于酶校准品不稳定且有效期很短，目前酶类还没有相应的校准品，因此对于酶类现在还是使用实测的K值进行求酶活力；

6)拟订校准计划

校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化，按照“临床实验室质量控制(QC)的要求(草案)”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

①建立校准方法

选择合适(配套)的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；确定校准的频度，至少每六个月进行一次校准；如有下列情况发生时，必须进行校准；

a改变试剂的种类，或者批号更换了，如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行-次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；

②每个实验室对每台仪器必需要有校准计划，每次校准必须有详情的记录和分析，每次校准记录必须保存备查。

一种生化试剂复合校准的制备方法，基质为血清，包括以下步骤：

①100KD生物膜透析70min和2000KD生物膜透析60min一比一混合；

②选取适当的生物透析袋将血清灌致袋中；

③将透析袋放置托盘中，并用PEG8000包埋，静止相应时间；

④取出透析过的血清进行各个项目测量；

⑤如果某些项目不在定值范围适当添加小部分相应物质达到定值范围为止。

本发明的有益效果是：本发明通过所制定的生化校准仪的校准方法，提高了临床检验质量和速度，减轻检验人员的劳动强度节约样品和试剂，增加检验项目，提高检测精密度减小误差，并有利于临床检验标准化的实现，同时生化分析仪对人员的综合素质要求提高，合理的参数设置是检验结果可靠性的保障，本发明通过生化试剂复合校准的制备方法，解决校准品保存不稳定的困难，开发的校准品包含项目种类多，方便临床的使用，并且在达到进口产品的质量水平的同时降低了生产成本，另外，由于本校准品可溯源至国内标准物质，更适合中国人群生化项目的诊断，提高了诊断的准确性，本发明通过一系列实验，探索出不同分子量的生物膜对不同物质、不同时间渗透不同，通过生物膜血清浓缩提高每种物质在血清中的含量，通过不同分子量的生物膜能够渗透出不同分子量的物质，达到高浓度复合校准目标物质，然后将不同物质混合一起，达到复合校准里面各个项目所需的浓度，很好的解决了总胆红素、胆汁酸、甘油三酯、尿酸等特殊物质的溶解和定值问题，解决了校准不稳定的问题，解决了临床的沟状效应，使得临床测值更接近真实值。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (2)

1.一种生化校准仪的校准方法，包括生化校准仪，其特征在于，包括以下步骤：

1)选定校准品和质控品

①校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的，校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差，因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差；

②质控品只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定，前者是校准其值而后者是控制误差用的；

2)进行空白调节

①系统运行试剂空白的新的测量；

②在新的测量中获得的试剂空白吸光率值取代在先前测量中获得的值；

③基于在试剂空白中的变更，上调或下调曲线；

3)进行校准前的准备

①正常开机以后检查冲洗用水装置是否正常、各项分析试剂是否充足、各种清洗剂是否足够，以及样品针试剂针和搅拌棒是否清洁；

②确认要进行校准的项目，确认要做的质控批号及项目，以及校准品、质控品是否足够；

③了解仪器的基本性能(灯泡已使用多久检查飘移是否合乎要求比色杯的清洁及磨损情况等),用清洁剂泡洗管道使仪器校准处于最佳的状态生化分析仪的校准；

4)全自动生化分析仪在样品分析之前都要对该分析项目进行校准(即定标)得出一个该项目的校准系数(K)，校准前必须在反应程序里设定有关校准的参数，如校准液的浓度等、执行校准程序、检测得到该校准品的吸光度值，再根据校准浓度计算校准系数(K＝校准品浓度/校准品吸光度)；

①校准方式

有单点校准、两点校准和多点校准，大多数检测项目的校准曲线呈直线且通过原点用单个浓度的校准液，即可若校准曲线呈直线但不通过原点，则需要用两个浓度的校准夜做两点校准，当校准曲线不呈直线而为正真的曲线时，应做多点校准并按其线形选择不同的曲线方程进行拟和，如双曲线、抛物线、幂函数、指数函数、对数函数等方程等，多数生化分析仪已设置有数种曲线方程，可将多点校准的结果自动进行数据处理，得到曲线拟和方程样品的检测吸光度，便可通过此方程计算结果；

②对校准品的要求

A选择合适的校准品包括校准品的数目、类型和浓度，如有可能校准品应溯源到参考方法和参考物质；

B确定校准的频率，根据检测项目方法和试剂的稳定性不同而确定不同的校准频率，如每日校准、每周校准、每月校准等，根据仪器项目检测结果而确定相应的校准频率；

C不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，因此不能用定值质控血清代替校准品作校准用；

D如有下列情况发生时，必须对仪器进行校正；

a改变试剂的种类，或者批号更换了.如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行了一次大的预防性维护或者更换了重要的部件，这些都可以影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或者偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后不能识别和纠正问题时；

6)关于酶活性测定校准问题

酶具有极高的催化效率，酶在体液中含量极微，仅为ng/L水平，临床大都采用酶活性测定，以酶活性间接表示酶量。酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量；

酶活力计算公式如下：

酶活力(u/l)＝△A/min×V总×106/(ε×v标×1)令k＝V总×106/(ε×v标×1),则酶活力(u/l)＝△A/min×k；

常用K值有以下几种：

a理论K值，根据理论摩尔吸光系数(ε)来计算，如NADH的E为6.22X103；

b实测K值，由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值；

c厂家给的K值厂家生产试剂盒说明书上提供的K值(有的厂家提供6.3X10)；

d校准K值：通过校准物直接校准得到的K值；

临床最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1、必须使用配套的试剂；2、必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性，但由于酶校准品不稳定且有效期很短，目前酶类还没有相应的校准品，因此对于酶类现在还是使用实测的K值进行求酶活力；

6)拟订校准计划

校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化，按照“临床实验室质量控制(QC)的要求(草案)”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

①建立校准方法

选择合适(配套)的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；确定校准的频度，至少每六个月进行一次校准；如有下列情况发生时，必须进行校准；

a改变试剂的种类，或者批号更换了，如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；

b仪器或者检验系统进行-次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；

c质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；

②每个实验室对每台仪器必需要有校准计划，每次校准必须有详情的记录和分析，每次校准记录必须保存备查。

2.一种生化试剂复合校准的制备方法，其特征在于基质为血清，包括以下步骤：

①100KD生物膜透析70min和2000KD生物膜透析60min一比一混合；

②选取适当的生物透析袋将血清灌致袋中；

③将透析袋放置托盘中，并用PEG8000包埋，静止相应时间；

④取出透析过的血清进行各个项目测量；

⑤如果某些项目不在定值范围适当添加小部分相应物质达到定值范围为止。