CN107841575B - 一种区分四种血清型禽腺病毒i群的纳米多重pcr方法 - Google Patents

一种区分四种血清型禽腺病毒i群的纳米多重pcr方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法，根据GenBank公布的4、8a、8b和11型禽腺病毒I群六邻体基因序列，设计合成各型特异性引物；提取基因后进行纳米多重PCR扩增，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃30s，53℃退火1min，72℃1min49s，30个循环；72℃延伸10min；纳米多重PCR扩增反应结束后，取PCR产物，以DL2000为Maker，1％琼脂糖凝胶电泳，观察扩增片段大小，确定病毒的血清型。本发明方法明显缩短检测时间；加入纳米颗粒，在同时检测到四种血清型病毒的情况下，敏感性较普通多重PCR至少提高10倍；特异性强、敏感性高、稳定性好，能快速、敏感、准确地对我国主要流行血清型的禽腺病毒I群进行分型。

Description

一种区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法
技术领域
本发明涉及一种纳米多重PCR方法，特别是涉及一种区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法，属于动物病毒检测技术领域。
背景技术
禽腺病毒（Fowl adenovirus ，FAdV）I群主要包括12个血清型，Changjing Li 等（2016）对我国2006年-2016年来临床禽腺病毒I群的分离毒株Hexon基因进行了测序分析，表明我国主要流行的血清型有4、8a、8b和11型，禽腺病毒I群对肉鸡的高感染率和高死亡率给养鸡业造成了严重的经济损失。这四种血清型禽腺病毒均引起肉鸡出现严重的肝脏炎症反应，引起的临床症状极为相似，这为临床不同血清型禽腺病毒I群感染的检测带来困难。此外，不同血清型禽腺病毒Ⅰ群之间不能形成交叉保护，故建立临床禽腺病毒Ⅰ群感染的检测方法并对感染病毒进行分型，对禽腺病毒Ⅰ群感染的预防与控制具有十分重要的意义。
血清学检测方法是禽腺病毒I群分型的常规方法，但缺乏标准抗血清，使得本方法应用受限。目前主要通过分子生物学方法进行分型，主要包括：PCR结合测序，通过比较分析基因序列对毒株进行基因分型；根据病毒基因组限制性酶切图谱分析分为不同的基因型；高分辨熔解曲线的基因进行分型。这三种方法中，其中第一种为目前最常用的分型方法，但这三种方法都需要通过PCR对基因进行扩增后，进行测序、酶切和荧光等相关分析，故由于费时、需要特殊仪器及价格昂贵等原因，不适合于临床大量样品中禽腺病毒I群的分型鉴定。
建立简便、快速的临床禽腺病毒I群感染的分型检测方法，关键在于缩短检测时间、去除繁琐的后续分析、且能一次性准确确定感染病毒的血清型。目前，有关禽腺病毒I群的通用检测方法已有报道，但现有方法中中尚未见有对我国主要流行的4、8a、8b和11型禽腺病毒I群的快速简便的分型检测方法的公开。
多重PCR分型方法可通过一次PCR扩增即可确定血清型，是一种快速、准确的分型方法。为提高普通多重PCR检测的敏感性，加入纳米颗粒，建立纳米多重PCR分型方法，可用于临床禽腺病毒I群的分型确定。
发明内容
本发明的目的在于克服现有禽腺病毒I群分型方法中的繁琐、需特殊仪器、敏感性差等方面存在的缺陷，寻求提供一种快速、简便、准确的区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法。鉴于目前我国禽腺病毒I群主要流行的为4、8a、8b和11型，建立针对这四种血清型的多重PCR区分方法可以快速简便进行分型，为进一步提高分型方法的敏感性，将多重PCR分型方法中加入纳米颗粒，建立纳米多重PCR的分型方法，以提高检测的敏感性。
为了实现上述目的，本发明的一种区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法按照以下步骤操作：
一、纳米多重PCR引物设计：
根据 GenBank 公布的4、8a、8b和11型禽腺病毒I群六邻体基因序列，设计合成各型特异性引物；4型禽腺病毒I群引物（F:5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’ R:5’-AAGAGGCCCGGGCAATGC-3’）；8a型禽腺病毒I群引物（F:5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’ R:5’-AATGTTTGACGAGCTGATGGG -3’）；8b型禽腺病毒I群引物(F: 5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’R: 5’- ATGCTGCAGCTGTTGCCGTAG -3’）；11型禽腺病毒I群引物(F:5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’ R:5’- ACTGCCGTCGTCTCGTCTAAG -3’）；
二、基因的提取：
取4、8a、8b和11型禽腺病毒I群标准毒株（购自中国兽药监察所）细胞研磨液400μL于1.5mLEP管中，加入400μL氯仿、600μL裂解液，混匀后4℃沉淀10min，之后12000r/min离心，取上清600μL，加入异丙醇800μL,4℃沉淀30min后12000r/min离心，弃上清后干燥，用20μL去离子水溶解；所述裂解液的组成为：硫氰酸胍9.456g，硫氰酸胺3.044g，醋酸钠13.60g，甘油5ml，苯酚38ml，水57ml；
三、纳米多重PCR扩增:
1、PCR反应体系：2×Nano-QPCRmix6μL（上海户实医药科技有限公司），Taq enzyme0.2μL（大连宝生物工程有限公司），上、下游混合引物各1μL，模板（制备的DNA溶液）0.5μL，去离子水3.3μL；所述上、下游混合引物同第一步；
2、PCR反应条件：95℃预变性5min，94℃30s，53℃退火1min，72℃ 1min49s，30个循环；72℃延伸10min；
四、琼脂糖凝胶电泳：
纳米多重PCR扩增反应结束后，取PCR产物8μL，以DL2000为Maker，质量百分比为1%的琼脂糖凝胶电泳，观察扩增片段大小，确定病毒的血清型；扩增片段为2193bp为4型禽腺病毒I群，扩增片段为1045bp为8a型禽腺病毒I群，扩增片段为371bp为8b型禽腺病毒I群，扩增片段为453bp为11型禽腺病毒I群。
纳米多重PCR特异性试验：应用上述建立的纳米多重PCR方法分别对传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合症病毒（EDSV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）和新城疫（NDV）的cDNA进行检测，验证该方法的特异性。试验结果均未扩增出条带，仅扩增出4、8a、8b和11型四种血清型禽腺病毒I群的特异性条带，说明引物特异性良好。
敏感性试验：应用4、8a、8b和11型禽腺病毒I群标准毒株六邻体全基因建立的阳性质粒为模板，进行10倍系列稀释，进行纳米多重PCR和普通多重PCR最小检测浓度测定。在四种血清型病毒都同时检出的情况下，纳米多重PCR的敏感性比普通多重PCR至少提高10倍。
临床样品检测：取实验室分离保存的、并进行测序确定血清型的禽腺病毒I群临床毒株，进行纳米多重PCR分型检测。检测结果显示，纳米多重PCR分型结果与测序结果相一致，表明本研究建立的纳米多重PCR方法能够用于临床大量样本的检测。
本发明与现有技术相比，采用简便的多重PCR分型方法，无需对PCR产物进行繁琐的特殊处理和特殊仪器分析，明显缩短检测时间；加入纳米颗粒，在同时检测到四种血清型病毒的情况下，敏感性较普通多重PCR至少提高10倍；且不能扩增传染性支气管炎病毒、减蛋综合症病毒、H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒等临床感染鸡的主要病毒。纳米多重PCR方法特异性强、敏感性高、稳定性好，能快速、敏感和特异性地对我国主要流行血清型的禽腺病毒I群进行分型。
附图说明
图1为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的单一纳米PCR预设条件确定图；
图2为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR反应条件优化图；
图3为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR的特异性检测图；
图4为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的多重PCR的敏感性检测图；
图5为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR的敏感性检测图；
图6为本发明的四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR的稳定性检测图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施例对本发明方法作进一步阐述。
实施例1、
一、纳米多重PCR引物合成：
根据表1中设计的4、8a、8b和11型禽腺病毒I群分型检测引物序列，合成各型特异性引物；4型禽腺病毒I群引物（F:5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’ R:5’-AAGAGGCCCGGGCAATGC-3’）；8a型禽腺病毒I群引物（F:5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’ R:5’-AATGTTTGACGAGCTGATGGG -3’）；8b型禽腺病毒I群引物(F: 5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’R: 5’- ATGCTGCAGCTGTTGCCGTAG -3’）；11型禽腺病毒I群引物(F:5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’ R:5’- ACTGCCGTCGTCTCGTCTAAG -3’）；
二、基因的提取：
取4、8a、8b和11型禽腺病毒I群标准毒株（购自中国兽药监察所）细胞研磨液400μL于1.5mLEP管中，加入400μL氯仿、600μL裂解液，混匀后4℃沉淀10min；之后12000r/min离心10min，取上清600μL，加入异丙醇800μL,4℃沉淀30min后12000r/min离心10min；弃上清后干燥，用20μL去离子水溶解；所述裂解液的组成为：硫氰酸胍9.456g，硫氰酸胺3.044g，醋酸钠13.60g，甘油5ml，苯酚38ml，水57ml；
三、纳米多重PCR扩增:
1、PCR反应体系：2×Nano-QPCRmix6μL（上海户实医药科技有限公司），Taq enzyme0.2μL（大连宝生物工程有限公司），上、下游混合引物各1μL，模板（制备的DNA溶液）0.5μL，去离子水3.3μL；所述上、下游混合引物同第一步；
2、PCR反应条件：95℃预变性5min，94℃30s，53℃退火1min，72℃ 1min49s，30个循环；72℃延伸10min；
4、8a、8b和11型禽腺病毒I群单一纳米PCR预设条件扩增结果如图1所示，M:DNAmaker2000；1: FAdV-8a；2:FAdV-4； 3:FAdV-11； 4:FAdV-8b；
纳米多重PCR反应条件优化如图2所示，M:2000 maker；1-4:50℃；5-8:53℃；9-12:54℃；13-16:54℃；17-20:56℃；
四、琼脂糖凝胶电泳：
纳米多重PCR扩增反应结束后，取PCR产物8μL，以DL2000为Maker，质量百分比为1%的琼脂糖凝胶电泳，观察扩增片段大小，确定病毒的血清型；扩增片段为2193bp为4型禽腺病毒I群，扩增片段为1045bp为8a型禽腺病毒I群，扩增片段为371bp为8b型禽腺病毒I群，扩增片段为453bp为11型型禽腺病毒I群。
表1. 4、 8a 、8b和 11型禽腺病毒Ⅰ群分型纳米多重PCR引物
Figure DEST_PATH_IMAGE002
实施例2、纳米多重PCR特异性试验：
应用上述建立的纳米多重PCR方法分别对传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合症病毒（EDSV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）和新城疫（NDV）的cDNA进行检测，验证该方法的特异性。
如图3所示，M: 2000 maker，1: 四种血清型禽腺病毒I群阳性样品混合物，2:IBV，3:EDSV，4:AIV-H9，5: NDV。
试验结果均未扩增出条带，仅扩增出四种血清型禽腺病毒-I群的特异性条带，说明引物特异性良好。
实施例3、敏感性试验：
应用4、8a、8b和11型禽腺病毒I群标准毒株六邻体全基因建立的阳性质粒为模板，进行10倍系列稀释，进行纳米多重PCR和普通多重PCR最小检测浓度测定 。
如图4所示，多重PCR浓度梯度：M:2000maker ，1：原浓度质粒 ，2：10×101倍稀释质粒， 3：10×102倍稀释质粒， 4：10×103倍稀释质粒， 5：10×104倍稀释质粒， 6：10×105倍稀释质粒， 7：10×106倍稀释质粒 ，8：10×107倍稀释质粒。普通多重PCR检测最小浓度分别为：FAdV-4为 5.14×107拷贝·μL-1、FAdV-8a为2.87×107拷贝·μL-1、FAdV-8b为1.71×106拷贝·μL-1、FAdV-11为4.35×107拷贝·μL-1。
如图5所示，纳米多重PCR浓度梯度：M:2000maker， 1：原浓度质粒， 2：10×101倍稀释质粒 ，3：10×102倍稀释质粒， 4：10×103倍稀释质粒， 5：10×104倍稀释质粒， 6：10×105倍稀释质粒， 7：10×106倍稀释质粒， 8：10×107倍稀释质粒， 9：10×108倍稀释质粒，10：10×109倍稀释质粒。纳米多重PCR检测最小浓度分别为：FAdV-4为 5.14×106拷贝·μL-1、FAdV-8a为2.87×104拷贝·μL-1、FAdV-8b为1.71×104拷贝·μL-1、FAdV-11为4.35×105拷贝·μL-1。
结果显示，在四种血清型病毒都同时检出的情况下，纳米多重PCR的敏感性比普通多重PCR至少提高10倍。
实施例4、临床样品检测：
取实验室分离保存的、并进行测序确定血清型的禽腺病毒I群临床毒株，进行纳米多重PCR分型检测。
如图6所示，M：2000maker；1: 四种血清型禽腺病毒I群阳性样品混合物；2: 空白对照；3、4：8a型禽腺病毒I群；5、8：11型禽腺病毒I群；6、7、9、10、12、13：4型禽腺病毒I群；11：8b型禽腺病毒I群。
检测结果显示，纳米多重PCR分型结果与测序结果相一致，表明本研究建立的纳米多重PCR方法能够用于临床大量样本的检测。

Claims (1)

1.一种非诊断目的的区分四种血清型禽腺病毒I群的纳米多重PCR方法，其特征在于：按照以下步骤操作：
第一步，纳米多重PCR引物设计：根据 GenBank 公布的4、8a、8b和11型禽腺病毒I群六邻体基因序列，设计合成各型特异性引物；4型禽腺病毒I群引物F：5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’，4型禽腺病毒I群引物R：5’-AAGAGGCCCGGGCAATGC-3’；8a型禽腺病毒I群引物F：5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’，8a型禽腺病毒I群引物R：5’-AATGTTTGACGAGCTGATGGG -3’；8b型禽腺病毒I群引物F：5’- CAARTTCAGRCAGACGGT -3’，8b型禽腺病毒I群引物R：5’- ATGCTGCAGCTGTTGCCGTAG -3’；11型禽腺病毒I群引物F：5’-CAARTTCAGRCAGACGGT-3’，11型禽腺病毒I群引物R：5’- ACTGCCGTCGTCTCGTCTAAG -3’；
第二步，基因的提取：取4、8a、8b和11型禽腺病毒I群标准毒株细胞研磨液400μL于1.5mL EP管中，加入400μL氯仿、600μL裂解液，混匀后4℃沉淀10min，之后12000r/min离心，取上清600μL，加入异丙醇800μL，4℃沉淀30min后12000r/min离心，弃上清后干燥，用20μL去离子水溶解；所述裂解液的组成为：硫氰酸胍9.456g，硫氰酸胺3.044g，醋酸钠13.60g，甘油5ml，苯酚38ml，水57ml；
第三步，纳米多重PCR扩增：PCR反应体系：2×Nano-QPCRmix6μL，Taq酶 0.2μL，第一步中设计的4种引物F的混合物1μL，第一步中设计的4种引物R的混合物1μL，模板0.5μL，去离子水3.3μL；PCR反应条件：95℃预变性5min，94℃30s，53℃退火1min，72℃ 109 s，30个循环；72℃延伸10min；
第四步，琼脂糖凝胶电泳：纳米多重PCR扩增反应结束后，取PCR产物8μL，以DL2000为Maker，质量百分比为1%的琼脂糖凝胶电泳，观察扩增片段大小，确定病毒的血清型；扩增片段为2193bp为4型禽腺病毒I群，扩增片段为1045bp为8a型禽腺病毒I群，扩增片段为371bp为8b型禽腺病毒I群，扩增片段为453bp为11型禽腺病毒I群。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136407B (zh) * 2018-09-21 2021-11-16 青岛农业大学 一种快速检测禽腺病毒-i群的pcr方法
CN110066890A (zh) * 2019-06-03 2019-07-30 广西大学 一种快速检测ibv二温式纳米pcr试剂盒及应用
CN110373496A (zh) * 2019-06-13 2019-10-25 温氏食品集团股份有限公司 用于i亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法
CN111218526B (zh) * 2019-12-09 2024-01-09 温氏食品集团股份有限公司 一种快速鉴别i亚群血清11型禽腺病毒的pcr引物对和探针及其应用
CN111549181B (zh) * 2020-05-20 2023-08-25 广西壮族自治区兽医研究所 一种检测禽腺病毒4型的纳米pcr方法、试剂盒及应用
CN111575412A (zh) * 2020-06-23 2020-08-25 青岛易邦生物工程有限公司 一种区分禽腺病毒i群四种血清型的方法
CN114196786A (zh) * 2021-11-11 2022-03-18 佛山科学技术学院 禽腺病毒4型、8型双重荧光定量pcr快速检测试剂盒及方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003039593A1 (en) * 2001-11-08 2003-05-15 Akzo Nobel N.V. Fowl adenovirus vaccine
CN101151377A (zh) * 2004-05-13 2008-03-26 安妮塔·戈艾尔 纳米-pcr:进行核酸扩增和检测的方法及装置
CN104651532A (zh) * 2015-02-13 2015-05-27 河北农业大学 用于新城疫病毒检测的纳米pcr试剂盒及其应用
CN105886502A (zh) * 2016-05-19 2016-08-24 浙江大学 一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7494791B2 (en) * 2004-05-13 2009-02-24 Nanobiosym, Inc. Nano-PCR: methods and devices for nucleic acid amplification and detection
CN105483292B (zh) * 2016-01-20 2019-05-28 河北农业大学 禽腺病毒4型pcr检测试剂盒及其检验方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003039593A1 (en) * 2001-11-08 2003-05-15 Akzo Nobel N.V. Fowl adenovirus vaccine
CN101151377A (zh) * 2004-05-13 2008-03-26 安妮塔·戈艾尔 纳米-pcr:进行核酸扩增和检测的方法及装置
CN104651532A (zh) * 2015-02-13 2015-05-27 河北农业大学 用于新城疫病毒检测的纳米pcr试剂盒及其应用
CN105886502A (zh) * 2016-05-19 2016-08-24 浙江大学 一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CDV和CPV及CCV多重纳米PCR检测方法的建立与应用;罗亚坤 等;《中国兽医科学》;20161030;第46卷(第10期);摘要，第1208页左栏第3段、右栏倒数第2段-1209页的左栏第1段、结果和图1-图5 *
Classification of fowl adenovirus serotypes by use of high-resolution melting-curve analysis of the hexon gene region;Penelope A Steer 等;《J Clin Microbiol》;20081126;第47卷(第2期);摘要，第311页左栏最后1段和右栏第1段，第312页右栏第2段-4段、表2，第313页左栏第1-4段，第314页左栏第2段，315页的图5，第316页左栏最后1段 *
PCR-RFLP 技术对Ⅰ群禽腺病毒12个血清型;唐熠 等;《中国兽医科学》;20091030;第39卷(第10期);摘要，第887-889页的材料方法和结果 *

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