CN107748267A - 一种测定活化部分凝血活酶时间（aptt）的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种测定活化部分凝血活酶时间的试剂盒，包含R1：激活剂、部分凝血活酶、稳定剂、防腐剂和缓冲液；和R2：氯化钙溶液。所述稳定剂包括右旋糖酐。在R1中，激活剂的浓度为0.05‑0.2mM；部分凝血活酶的含量为0.1‑0.5wt %；防腐剂的含量为0.01‑0.02wt%，右旋糖酐的含量为2‑4wt%。本发明的检测试剂盒的组成均为液体且稳定的试剂，避免了制备和使用过程中因冻干和复溶过程造成的试剂的瓶间差异，从而避免测定结果之间的较大差异。本发明试剂无需冻干，即可保证试剂的稳定性，确保了开瓶后试剂的最优有效性持续至少一个月，避免了实验结果间的较大差异，同时节约了试剂的用量，开瓶即用，操作起来更加快捷简便。

Description

一种测定活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种测定血液中活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒。

背景技术

活化部分凝血活酶时间（APTT）测定是凝血功能检测的一项重要指标，也是术前检查的重要指标。APTT测定是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，也可作为内源性途径及共同途径凝血因子的定量试验，可检测除Ⅶ因子外的其他血浆凝血因子，特别是用于因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ和前激肽释放酶的测定。同时，APTT测定可用于肝素治疗监控。APTT延长：见于凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ减低，纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，抗凝物质存在（如血内肝素含量增加及口服抗凝剂），是监控肝素治疗的重要指标。APTT缩短：见于高凝状态，血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症。

目前APTT的测定均已运用半自动化或自动化的仪器，检测原理是将部分凝血活酶加入待测血浆中，再加入适当的钙离子，在Ca²⁺参与下纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，从而出现凝固。测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）。由于使用测定APTT的试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成检测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。因此，APTT试剂的质量成了获得准确结果及诊断的关键。然而目前市场上试剂随时间推移质量变化较大，导致有效期内不同时间段检测结果相差悬殊；有的冻干试剂，需复溶后使用，造成试剂的瓶间差异较大，导致测定结果之间存在较大差异。因此，研制一种有效可靠、使用方便的活化部分凝血活酶时间（APTT）测定试剂无疑是必要的。

发明内容

针对现有检测活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒质量不稳定，测定结果之间差异大等问题，本发明提供一种试剂为液体且能稳定存在的活化部分凝血活酶时间测定试剂盒，不同批次试剂盒测定结果差异小。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种测定活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒，包含

R1：激活剂、部分凝血活酶、稳定剂、防腐剂和缓冲液；

和R2：氯化钙溶液。

可选地，激活剂在R1中的浓度为0.05-0.2mM；优选为0.1-0.2mM。

可选地，激活剂为白陶土、鞣花酸或硅藻土中的任一种；优选为鞣花酸，所述鞣花酸是指鞣花酸、鞣花酸的盐或鞣花酸的金属螯合物。

可选地，部分凝血活酶在R1中的含量为0.1-0.5wt %。

可选地，部分凝血活酶选自动物来源的磷脂，优选为兔脑或牛脑来源的磷脂。

可选地，稳定剂至少包括右旋糖酐；所述右旋糖酐的平均分子量优选为小于10万，如右旋糖酐70、右旋糖酐40、右旋糖酐20或右旋糖酐10；更优选为平均分子量为小于5万的右旋糖酐，如右旋糖酐40、右旋糖酐20或右旋糖酐10。

可选地，右旋糖酐在R1中的含量为2-4wt%。

可选地，稳定剂中还含有为牛血清蛋白、聚乙二醇和Tween 20中的至少一种；Tween 20也可以替换为Tween 80或Triton X-100。

优选地，稳定剂为右旋糖酐、牛血清蛋白、聚乙二醇和Tween 20的混合。

优选地，牛血清蛋白在R1中的含量为0.5-2wt%。

优选地，聚乙二醇分子量为4000-8000；在R1中含量为0.05-0.2wt%。

优选地，Tween 20在R1中含量为0.1-0.5wt %。

可选地，防腐剂在R1中含量为0.01-0.02wt%。

可选地，防腐剂为叠氮化钠、硫柳汞、山梨酸钾和ProClin 300的任一种，优选为ProClin 300或硫柳汞，最优选为ProClin 300。

可选地，缓冲液的pH为6.0-8.0；优选为7.0-8.0。

可选地，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、Hepes缓冲液、PBS缓冲液或MPOS缓冲液中任一种；优选为Tris-HCl缓冲液，更优选地，Tris在R1中浓度为20-40mM。

可选地，氯化钙在R2中浓度为10-50mM。

作为优选，R2试剂中还含有防腐剂，防腐剂在R2试剂中含量为0.01-0.02wt%。

更为优选地，防腐剂为叠氮化钠、硫柳汞和ProClin 300中的任一种。

作为优选，上述测定活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒，包含

R1：鞣花酸、兔脑磷脂、牛血清蛋白、右旋糖酐、聚乙二醇、Tween 20、防腐剂和缓冲液；

和R2：氯化钙溶液。

更为优选地，上述测定活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒，由下列成分组成：

R1：鞣花酸、兔脑磷脂、牛血清蛋白、右旋糖酐、聚乙二醇、Tween 20、ProClin 300和Tris-HCl缓冲液；

和R2：氯化钙溶液和硫柳汞。

将本发明中部分凝血活酶加入待测血浆中，再加入适当的钙离子，在Ca²⁺参与下纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，从而出现凝固。测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）。

本发明具有以下优点：

本发明所述检测试剂盒的组成均为液体且稳定的试剂，避免了制备和使用过程中试剂的瓶间差异，从而避免测定结果之间的较大差异。本发明试剂无需冻干，即可保证试剂的稳定性，确保了开瓶后试剂的最优有效性持续至少一个月，避免了实验结果间的较大差异，同时节约了试剂的用量，开瓶即用，操作起来更加快捷简便。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。

实施例1 测定活化部分凝血活酶时间（APTT）试剂盒的制备

配方：

R1试剂：0.1mM鞣花酸，0.25%兔脑磷脂，3%右旋糖酐20，0.5%Tween20，1%牛血清白蛋白，20mMpH 7.6Tris-HCl缓冲液，0.02%ProClin 300。

R2试剂：25mM氯化钙，0.01%硫柳汞。

配制：

（1）分别称取兔脑磷脂，右旋糖酐20，Tween20，牛血清白蛋白、ProClin 300溶于20mMpH7.6Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀后加入鞣花酸至所需浓度配制成R1试剂；

（2）分别称取氯化钙和硫柳汞加入无菌水中，配制成R2试剂。

实施例2活化部分凝血活酶时间检测

采用实施例1的试剂盒与市售试剂以全自动血凝仪测定同样的血浆样本，仪器主要参数设定见表1；记录下活化部分凝血活酶时间，本发明试剂与市售试剂重复性比较结果见表2。由表中数据可知，本发明试剂与市售试剂相比，变异系数值较小，重复性好。

将本发明试剂和市售试剂同时开瓶，市售试剂为冻干粉复溶后使用，本发明试剂直接使用，在相同的凝血仪上做质控测试，记录随开瓶后日期的变化本发明试剂和市售试剂的质控结果，二者稳定性比较如表3。数据表明，本发明试剂连续测定30天结果仍较稳定，而市售试剂在第12天时就开始变化。这一结果对临床检验科来说非常重要，因为它可以减少浪费，从而降低成本。

表1 血凝仪参数设置

表2 活化部分凝血活酶时间测定结果

表3 本发明试剂与市售试剂测定APTT稳定性比较

Claims (9)

1.一种测定活化部分凝血活酶时间（APTT）的试剂盒，其特征在于，包含R1：激活剂、部分凝血活酶、稳定剂、防腐剂和缓冲液；

和R2：氯化钙溶液；

所述稳定剂包括右旋糖酐。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在R1中，激活剂的浓度为0.05-0.2mM；部分凝血活酶的含量为0.1-0.5wt%；防腐剂的含量为0.01-0.02wt%；右旋糖酐的含量为2-4wt%。

3.根据权利要求1或2任一所述的试剂盒，其特征在于，激活剂为鞣花酸，所述鞣花酸是指鞣花酸、鞣花酸的盐或鞣花酸的金属螯合物。

4.根据权利要求1或2任一所述的试剂盒，其特征在于，部分凝血活酶为兔脑或牛脑来源的磷脂。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，稳定剂为右旋糖酐、牛血清蛋白、聚乙二醇和Tween 20的混合。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，缓冲液为Tris-HCl缓冲液，pH为6.0-8.0。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，R2试剂中还含有防腐剂，含量为0.01-0.02wt%。

8.根据权利要求1或8所述的试剂盒，其特征在于，防腐剂为ProClin 300或硫柳汞。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，由下列成分组成：

R1：鞣花酸、兔脑磷脂、牛血清蛋白、右旋糖酐、聚乙二醇、Tween 20、ProClin 300和Tris-HCl缓冲液；

和R2：氯化钙溶液和硫柳汞。