CN111638375B - 一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述原料制成：活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水。本发明的用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，使用方便，在保证APTT检测试剂的准确性和灵敏性的基础上，提高APTT检测试剂的稳定性，使该体外诊断试剂盒在临床上广泛应用，使APTT检验实现标准化。

Description

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒

技术领域

本发明涉及临床诊断试剂领域，特别涉及一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒。

背景技术

凝血功能正常与否关系着人体生理健康状态，凝血功能的评估实验对多种疾病的诊断、治疗和预后判断有重要意义。凝血过程复杂，检测指标多样，主要分为外源性凝血途径和内源性凝血途径。凝血时间是衡量凝血状态的状态的重要指标，对于判断机体止血和凝血系统的病理性变化、术前凝血性疾病筛查等具有重要意义。其中，活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplatin time，APTT)是凝血时间检测中内源性凝血功能检测的重要指标。APTT延长的原因常见于凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ减低、纤维蛋白原缺乏症、纤溶活力增强、抗凝物质存在(如血内肝素含量增加及口服抗凝剂)。APTT缩短的原因常见于高凝状态、血栓性疾病(如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症)。因此通过对APTT的检测可以了解血液中内源、外源性凝血系统中凝血因子的大致变化，如果部分内源性凝血因子缺乏，就会导致APTT延长；也可广泛用于疾病术前、出血性疾病的诊疗效果观察，用于抗凝血药物肝素用量的监测，是监控肝素治疗的重要指标。

目前APTT的测定均已运用半自动化或自动化的仪器，检测原理是将部分凝血活酶加入待测血浆中，再加入适当的钙离子，在钙离子参与下纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，从而出现凝固。测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。由于使用的APTT的检测试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成检测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。因此，APTT检测试剂的质量成了获得准确结果及诊断的关键。然而目前市场上APTT检测试剂随时间推移质量变化较大，导致有效期内不同时间段检测结果相差悬殊；有的冻干试剂，需复溶后使用，造成试剂的瓶间差异较大，导致测定结果之间存在较大差异。

因此，如何研制一种稳定性高、使用方便的活化部分凝血活酶时间APTT检测试剂，已经成为本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，使用方便，在保证APTT检测试剂的准确性和灵敏性的基础上，提高APTT检测试剂的稳定性，使该体外诊断试剂盒在临床上广泛应用，使APTT检验实现标准化。

为本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述原料制成：活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水。

进一步地，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.3～1.0％，tris0.1～8％，氯化钠0.1～10％，甘露醇1～3％，聚乙二醇1～20％，牛血清白蛋白1～10％，丙氨酸0.5～10％，石炭酸0.1～2％，proclin300 0.5～1％，余量为水。

进一步地，所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为15-30mmol/L。

进一步地，所述脑磷脂溶液由脑磷脂和生理盐水配制而成。

进一步地，所述脑磷脂为兔脑脑磷脂或牛脑脑磷脂。

进一步地，所述活化剂为白陶土、鞣花酸、和硅藻土中的任一种。

进一步地，所述聚乙二醇的聚合度为4000－8000。

进一步地，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：(5～15)。

进一步地，所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂。

本发明具有如下有益效果：

本发明中，创造性地采用活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，和proclin300配制缓冲液，与脑磷脂溶液相互配合，协同作用，可以有效解决活化剂及脑磷脂存在的容易沉淀的问题，在保证APTT检测试剂的准确性和灵敏性的基础上，提高APTT检测试剂的稳定性。

现有的用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒中，通常采用玻璃瓶盛放APTT检测试剂，本发明改变传统，采用塑料瓶盛放APTT检测试剂，不仅可以保证运输产品的安全性，而且出乎意料地可以提高APTT检测试剂的稳定性。

本发明的APTT检测试剂具有良好的稳定性，37℃下可稳定至少10天，试剂开瓶后于5±3℃下至少稳定30天以上。

本发明的APTT检测试剂生产过程简化，生产设备简单，无冻干过程，生产成本低。

本发明的APTT检测试剂为即开即用型，不需复溶，操作方便。

具体实施方式

本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。

如无特殊说明，本说明书中的术语的含义与本领域技术人员一般理解的含义相同，但如有冲突，则以本说明书中的定义为准。

本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由…组成”和“基本上由…组成”。本发明的组合物和方法/工艺包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组分、步骤或限制项组成。

在说明书和权利要求书中使用的涉及组分量、工艺条件等的所有数值或表述在所有情形中均应理解被“约”修饰。涉及相同组分或性质的所有范围均包括端点，该端点可独立地组合。由于这些范围是连续的，因此它们包括在最小值与最大值之间的每一数值。还应理解的是，本申请引用的任何数值范围预期包括该范围内的所有子范围。

正如背景技术所描述的，现有技术中存在APTT检测试剂随时间推移质量变化较大，APTT检测试剂的稳定性不好，导致有效期内不同时间段检测结果相差悬殊的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶。

所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成。

所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成。

所述缓冲液由下述原料制成：活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水。

部分凝血活酶试剂中含有脑磷脂和活化剂，活化剂及脑磷脂存在容易沉淀的问题，且在制备以及存储过程中容易受环境因素影响，因此APTT检测试剂的稳定性不高，不同批次此APTT检测试剂的生物活性存在差异，影响血液样品的检测结果的一致性。本发明从整体技术方案的综合性能考虑，基于与其他材料相互之间的影响与配合，选择了特定的缓冲液，该缓冲液与脑磷脂溶液相容性好。本发明中，创造性地采用活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，和proclin300配制缓冲液，与脑磷脂溶液相互配合，协同作用，可以有效解决活化剂及脑磷脂存在的容易沉淀的问题，在保证APTT检测试剂的准确性和灵敏性的基础上，提高APTT检测试剂的稳定性。

更具体地，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.3～1.0％，tris0.1～8％，氯化钠0.1～10％，甘露醇1～3％，聚乙二醇1～20％，牛血清白蛋白1～10％，丙氨酸0.5～10％，石炭酸0.1～2％，proclin300 0.5～1％，余量为水。

所述活化剂的重量百分比为0.3～1.0％，例如为0.3％、0.5％、0.6％、0.8％或1％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。本发明对所述活化剂的种类没有特别限制，以本领域技术人员熟知的制备APTT检测试剂中的活化剂即可，作为优选，所述活化剂为白陶土、鞣花酸、和硅藻土中的任一种，更优选地，所述活化剂为鞣花酸。

所述Tris为2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇。所述tris的重量百分比为0.1～8％，例如为0.1％、1％、2％、5％或8％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述氯化钠的重量百分比为0.1～10％，例如为0.1％、0.5％、2％、5％、8％或10％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述甘露醇的重量百分比为1～3％，例如为1％、1.5％、2％、2.5％或3％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述聚乙二醇的重量百分比为1～20％，例如为1％、5％、10％、15％或20％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。所述聚乙二醇的聚合度为4000－8000，更优选地，所述聚乙二醇的聚合度为6000。

所述牛血清白蛋白的重量百分比为1～10％，例如为1％、2％、5％、8％或10％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述丙氨酸的重量百分比为0.5～10％，例如为0.5％、1％、5％、8％或10％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述石炭酸的重量百分比为0.1～2％，例如为0.1％、0.3％、0.8％、1.2％、1.5％或2％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述proclin300的重量百分比为0.5～1％，例如为0.5％、0.6％、0.7％、0.8％或1％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

所述脑磷脂溶液由脑磷脂和生理盐水配制而成。更具体地，所述脑磷脂溶液包括以下重量百分比的组分：脑磷脂0.5-10％，余量为生理盐水。

所述脑磷脂优选但不限定为兔脑脑磷脂或牛脑脑磷脂。

所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：(5～15)，更优选地，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：10。

具体地，所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂。

所述钙盐是在测定APTT时使用的测定样品中形成钙离子的盐即可。作为钙盐，可举出氯化钙、硫酸钙、亚硝酸钙、碳酸钙、乳酸钙、酒石酸钙等，但不特别限定。这些钙盐可单独使用，也可将2种以上混合而使用。更优选地，所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为15-30mmol/L，更优选地，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为25mmol/L。

现有的用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒中，通常采用玻璃瓶盛放APTT检测试剂，本发明改变传统，创造性地采用塑料瓶盛放APTT检测试剂，不仅可以保证运输产品的安全性，使得产品在生产和运输过程中不易出现损坏，而且发明人出乎意料地发现，采用塑料瓶盛放APTT检测试剂可以提高APTT检测试剂的稳定性。

本发明中，对所述塑料瓶的材质不作特别限定，可以采用现有技术中已有的各种塑料瓶，作为举例，所述塑料瓶的材质为PET、PVC、HDPE、LDPE、PP、或PS，更优选地，所述塑料瓶的材质为PET。

目前国内大多APTT检测试剂为冻干粉制剂形式，使用前需对试剂进行复溶，操作比较麻烦，且容易因复溶液体积不准等造成测定结果出现误差。本发明中，APTT检测试剂为即开即用型，不需复溶，操作方便。

本发明中，所述用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒的检测方法为：部分凝血活酶试剂在37℃孵育；然后向孵育后的部分凝血活酶试剂中加入待测血浆，37℃孵育后再加入钙盐溶液，记录凝固时间，即为活化部分凝血活酶时间。

为了更好的理解上述技术方案，下面将结合具体的实施例对上述技术方案进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限定。

实施例1

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.5％，tris 3％，氯化钠5％，甘露醇2％，聚乙二醇8％，牛血清白蛋白5％，丙氨酸6％，石炭酸1％，proclin300 0.8％，余量为水。

所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为25mmol/L。

所述脑磷脂为兔脑脑磷脂；所述活化剂为鞣花酸；所述聚乙二醇的聚合度为6000。

所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂；其中，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：10。

实施例2

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.3％，tris 0.1％，氯化钠0.1％，甘露醇1％，聚乙二醇1％，牛血清白蛋白1％，丙氨酸0.5％，石炭酸0.1％，proclin300 0.5％，余量为水。

所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为15mmol/L；所述脑磷脂为牛脑脑磷脂；所述活化剂为白陶土；所述聚乙二醇的聚合度为4000。

所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂；其中，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：5。

实施例3

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂1.0％，tris 8％，氯化钠10％，甘露醇3％，聚乙二醇20％，牛血清白蛋白10％，丙氨酸10％，石炭酸2％，proclin300 1％，余量为水。

所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为30mmol/L；所述脑磷脂为兔脑脑磷脂；所述活化剂为硅藻土；所述聚乙二醇的聚合度为8000。

所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂；其中，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：15。

实施例4

一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.4％，tris 0.1％，氯化钠10％，甘露醇2％，聚乙二醇8％，牛血清白蛋白1％，丙氨酸10％，石炭酸0.8％，proclin300 0.8％，余量为水。

所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为20mmol/L；所述脑磷脂为牛脑脑磷脂；所述活化剂为鞣花酸；所述聚乙二醇的聚合度为6000。

所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂；其中，所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：10。

对比例1

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例1中采用玻璃瓶盛放所述APTT检测试剂。

对比例2

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例2的缓冲液中不含有tris。

对比例3

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例3的缓冲液中不含有氯化钠。

对比例4

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例4的缓冲液中不含有甘露醇。

对比例5

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例5的缓冲液中不含有聚乙二醇。

对比例6

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例6的缓冲液中不含有牛血清白蛋白。

对比例7

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例7的缓冲液中不含有丙氨酸。

对比例8

基于实施例1，不同之处仅在于：本对比例8的缓冲液中不含有石炭酸。

测试例

为验证本发明产品性能，对实施例1－4和对比例1－8所制得的用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒分别进行了相关性能测试。

所述用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒的检测方法为：

取用塑料瓶盛放的APTT检测试剂，用sysmex CS－1300凝血分析仪对从siemens购买的质控血浆(正常质控血浆N：24.2－32.8s)进行测试，具体的测试方法为：

加入50uL部分凝血活酶试剂，在37℃孵育1min；然后向孵育后的部分凝血活酶试剂中加入50uL样本，37℃孵育2min后再加入50uL钙盐溶液，记录凝固时间，即为活化部分凝血活酶时间。

稳定性测试1：将实施例1－4和对比例1－8中的体外诊断试剂盒在37℃保存，sysmex CS－1300凝血分析仪上测定同一批正常质控血浆N，检测10天内APTT检测试剂的稳定性，结果见表1。

	第0天	第3天	第7天	第10天	变化幅度
						实施例1	28.5	28.7	29.0	29.1	2％
实施例2	28.4	28.6	29.1	29.3	3.2％
						实施例3	28.6	28.8	29.0	29.2	2.1％
实施例4	28.5	28.9	29.2	29.4	3.2％
						对比例1	28.5	29.5	30.9	31.8	11.6％
对比例2	28.4	30.5	31.2	32.0	12.7％
						对比例3	28.5	29.6	30.5	31.1	9％
对比例4	28.3	29.5	30.8	31.5	11.3％
						对比例5	28.5	28.9	30.6	31.2	9.5％
对比例6	28.4	30.2	31.0	31.8	12％
						对比例7	28.6	29.4	31.1	31.9	11.5％
对比例8	28.5	29.1	29.6	32	12.3％

稳定性测试2：将实施例1－4和对比例1－8中的体外诊断试剂盒开瓶后再2－8℃下保存，sysmex CS－1300凝血分析仪上测定同一批正常质控血浆N，检测30天内APTT检测试剂的稳定性，结果见表2。

准确性测试

用实施例1的体外诊断试剂盒测试了50例临床样本，检测仪器为sysmex CS－1300凝血分析仪，同时用与仪器配套的市售APTT试剂(siemens)进行对照，检测结果表明，实施例1中的APTT检测试剂的测试结果与现有可靠的市售试剂(siemens)测试结果相关性良好，两者偏差较小。

以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应落在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，其特征在于，其包括APTT检测试剂和用于盛放所述APTT检测试剂的塑料瓶；所述APTT检测试剂由部分凝血活酶试剂和钙盐溶液组成，所述部分凝血活酶试剂由脑磷脂溶液和缓冲液配制而成，所述缓冲液由下述重量百分比的原料制成：活化剂0.3～1.0％，tris 0.1～8%，氯化钠0.1～10％，甘露醇1～3％，聚乙二醇1～20%，牛血清白蛋白1～10%，丙氨酸0.5～10%，石炭酸0.1～2％，proclin300 0.5～1%，余量为水；所述脑磷脂溶液由脑磷脂和生理盐水配制而成，所述脑磷脂为兔脑脑磷脂或牛脑脑磷脂；所述活化剂为鞣花酸；所述脑磷脂溶液和缓冲液的体积比为1：（5～15）；所述钙盐溶液为氯化钙溶液，所述氯化钙溶液中氯化钙的浓度为15-30mmol/L；所述聚乙二醇的聚合度为4000-8000。

2.如权利要求1所述的用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，其特征在于，所述部分凝血活酶试剂的制备方法如下：

称取0.5～10g脑磷脂，用5～10mL生理盐水分散混匀，获得脑磷脂溶液；

将活化剂，tris，氯化钠，甘露醇，聚乙二醇，牛血清白蛋白，丙氨酸，石炭酸，proclin300和水混合均匀，获得缓冲液；

将所述脑磷脂溶液加入到所述缓冲液中，获得部分凝血活酶试剂。