CN113341164B

CN113341164B - 活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN113341164B
Application number: CN202110825479.2A
Authority: CN
Inventors: 吴岸峰; 景振辉; 赖远强; 孔繁格; 朱海科; 杨斌
Original assignee: Guangzhou Wondfo Biotech Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Wondfo Biotech Co Ltd
Priority date: 2021-07-21
Filing date: 2021-07-21
Publication date: 2022-11-01
Anticipated expiration: 2041-07-21
Also published as: CN113341164A

Abstract

本发明涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂卡，所述试剂卡包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区和第二反应区分别为将第一反应试剂和第二反应试剂分别均匀涂布于基材表面，干燥后得到；通过采用鞣花酸和白陶土这两种激活剂分别与适宜浓度的羟丙基甲基纤维素、无机盐配制形成两种反应试剂，并涂布在基材表面干燥后制备而成一种用于检测APTT的干式试剂卡，其对肝素敏感性高，检测结果更准确，从而可有效应用于临床肝素治疗评价中，并避免了市售常规冻干粉或液体试剂，由于剂型原因，对保存条件要求高的情况，使用更方便，稳定性强，更利于试剂在实际临床检测中的广泛应用，为实际APTT的检测提供便利。

Description

活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用。

背景技术

人体凝血途径分为内源性凝血途径和外源性途径，而活化部分凝血酶活时间(APTT)是用于检测人体内源性途径是否正常的一个重要指标，如果部分内源性凝血因子缺乏，就会导致APTT延长。APTT是临床最常用的反应内源性凝血系统凝血活性的敏感筛选试验，其主要的测定原理是：在37℃条件下，以激活剂激活Ⅻ，以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板第三因子，在Ca²⁺参与下，观察血浆凝固所需的时间，即为活化部分凝血活酶时间。在内源性凝血因子缺陷和相关抑制物的检测、肝素治疗的监测、DIC的早期诊断及临床检查中有着广泛的用途。不同试剂中激活剂及磷脂种类的不同会导致其对肝素、狼疮抗凝因子等缺乏症的敏感性不同，国内商品试剂凡未标明其对肝素敏感者其结果可信均存在肝素敏感性不良的情况，换言之，普通的APTT试剂盒，可能对用肝素治疗的人群，测试结果不准确，影响判断。

目前国内APTT试剂大多数为冻干粉制剂，保存条件高，敏感性比较差，测试结果与大型生化分析仪差异比较大。目前国内用的大多为进口产品，价格昂贵。APTT试剂的组分不同会导致肝素对其产生的效果不同，很多小型仪器不可以反应出对肝素浓度的变化。正常全血在没有添加肝素时的APTT正常范围是0-40S之间，肝素在临床上使用的血液浓度在0.2-0.8U/ML之间，目前市面上的APTT试剂质量不同，或者冻干粉的制剂的复溶不同，使得同一患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成监测结果的不一致，不能够灵敏反应血液中的肝素浓度变化，从而失去临床评价肝素治疗效果意义。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提出一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡。

包括如下技术方案：

一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡，其包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区由第一反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到，所述第二反应区由第二反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到；

所述第一反应试剂包括0.5w/v％-1.6w/v％白陶土、0.5w/v％-1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.2w/v％-0.8w/v％磷脂、0.05w/v％-0.15w/v％抗氧化剂和0.05w/v％-0.15w/v％无机盐；

所述第二反应试剂包括0.2w/v％-2.0w/v％鞣花酸、0.5w/v％-1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.6w/v％-1.6w/v％氯化钙、0.05w/v％-0.15w/v％抗氧化剂。

本发明的目的之一还在于提出一种上述干式试剂卡的制备方法。

包括如下技术方案：

(1)获得上述第一、二反应试剂；

(2)将所述第一反应试剂滴加至基材第一反应区，将所述第二反应试剂滴加至第二反应区；

(3)将基材进行烘烤干燥，即得。

本发明的目的之一还在于提出一种活化部分凝血活酶时间的检测方法。

包括如下技术方案：

一种活化部分凝血活酶时间测定方法，其包括如下步骤：

获取待测血液样本；

血液样本于上述干式试剂的第一反应区与第一反应试剂反应后，再与第二反应区的第二反应试剂反应；

检测血液样本凝固所需的时间。

本发明的发明人发现现有的APTT试剂不能灵敏地反应出样本中肝素浓度变化，对用肝素治疗的病人测试的值偏差比较大，并且冻干粉试剂在使用前的复溶步骤，对检测结果的一致性及稳定性均会产生影响，进而对APTT试剂的研制进行大量研究，发现通过改变常规APTT检测试剂的剂型，将液态改进为固态，形成干式试剂卡，采用鞣花酸和白陶土这两种激活剂分别与适宜浓度的羟丙基甲基纤维素、无机盐(Mn₃O₄、Mn₅O₈)配制成两种反应试剂，并涂布在基材表面干燥后制备而成一种用于检测APTT的干式试剂卡，这种干式试剂卡基于光化学检测原理，对样本中肝素敏感性高，检测结果更准确，从而可有效应用于临床肝素治疗评价中，并避免了市售常规冻干粉或液体试剂，由于剂型原因而具有严苛保存条件限制的情况。而且使用更方便，稳定性强，更利于在实际临床检测中的广泛应用，为实际APTT的检测提供便利。

附图说明

图1为实施例1中试剂卡的制备流程图。

图2为实施例1中试剂卡的基板结构图。其中标记说明为：10、测试卡；100、基板；110、加样区(也为第一反应区)；120、第二反应区；130、固定槽；200、固定座；210、让位槽；220、卡槽；300、转动件；310、转盘；320、转轴；330、钩爪；400、手柄。

图3为实施例2中采用不同稳定剂的配方配制的APTT试剂点胶后的第二反应区对比图，其中图3A为羟丙基甲基纤维素，图3B为明胶，图3C为BSA，图3D为甘露醇，图3E为海藻糖。

具体实施方式

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

在整个说明书和权利要求书中，以下术语具有与本文明确相关的含义，除非上下文另有明确规定。在本发明中使用的短语“在一个实施方案中”不一定指代相同的实施方案，尽管其可能是。此外，在本发明中使用的短语“在另一实施方案中”不一定指代不同的实施方案，尽管其可能是。因此，如下所述，可以容易地组合本发明的各个实施方案，而不脱离本发明的范围或精神。

此外，如本发明所使用的，术语“或”是包含性的“或”符号，并且等同于术语“和/或”，除非上下文另有明确规定。术语“基于”不是排他性的，并且允许基于未描述的其他因素，除非上下文另有明确规定。此外，在整个说明书中，“一个”、“一种”和“所述/该”的含义包括复数指示物。“在......中”中的含义包括“在......中”和“在......上”。

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

本发明的一些实施例提供了活化部分凝血活酶时间测定干式试剂卡，其特征在于，所述干式试剂卡包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区由第一反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到，所述第二反应区由第二反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到；所述第一反应试剂包括0.5w/v％-1.6w/v％白陶土、0.5w/v％-1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.2w/v％-0.8w/v％磷脂、0.05w/v％-0.15w/v％抗氧化剂和0.05w/v％-0.15w/v％无机盐；所述第二反应试剂包括0.2w/v％-2.0w/v％鞣花酸、0.5w/v％-1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.6w/v％-1.6w/v％氯化钙、0.05w/v％-0.15w/v％抗氧化剂。

在其中一些实施例中，血液样本分别与第一反应试剂中的白陶土和第二反应试剂中的鞣花酸分别接触后，激活内源性凝血途径，在钙离子及磷脂的参与下，纤维蛋白原，转变为不溶性的纤维蛋白，血液凝固形成凝块。同时，试剂中添加的稳定剂成分羟丙基甲基纤维素可以提高稳定性，以及对肝素的敏感性。

在其中一些实施例中，上述无机盐选自Mn₃O₄或Mn₅O₈；其中选用含有锰离子的无机盐Mn₃O₄或Mn₅O₈可以提高APTT检测试剂对肝素的敏感性。

在其中一些实施例中，上述第一反应试剂和所述第二反应试剂中，所述抗氧化剂分别独立选自丁基羟基茴香醚或没食子酸丙酯。其中抗氧化剂选用丁基羟基茴香醚或没食子酸丙酯可以降低溶液被氧化，以及细菌侵蚀的风险，还可以提高溶液点胶前，液态形式的稳定性。

在其中一些实施例中，上述第一反应试剂还包括0.05w/v％-2.0w/v％增稠剂；所述增稠剂选自甘露醇、环糊精和黄原胶中的至少一种。其中增稠剂的加入有利于第一反应试剂在基材上进行较好的固定，同时选用甘露醇、环糊精和黄原胶还可降低检测试剂对血液的负溶解，提高试剂在常温下的稳定性。

在其中一些实施例中，上述第一反应试剂所包括的增稠剂为甘露醇、环糊精和黄原胶。

在其中一些实施例中，上述第一反应试剂包括：0.6w/v％-1.5w/v％白陶土、0.6w/v％-1.5w/v％羟丙基甲基纤维素、0.4w/v％-0.6w/v％磷脂、0.05w/v％-0.15w/v％丁基羟基茴香醚、0.5w/v％-1.5w/v％甘露醇、0.1w/v％-0.3w/v％环糊精、0.05w/v％-0.15w/v％黄原胶和0.05w/v％-0.15w/v％Mn₃O₄。

在其中一些实施例中，上述第一反应试剂包括：0.7w/v％-1.3w/v％白陶土、0.7w/v％-1.2w/v％羟丙基甲基纤维素、0.45w/v％-0.55w/v％磷脂、0.07w/v％-0.13w/v％丁基羟基茴香醚、0.6w/v％-1.4w/v％甘露醇、0.15w/v％-0.25w/v％环糊精、0.06w/v％-0.12w/v％黄原胶和0.07w/v％-0.12w/v％Mn₃O₄。

在其中一些实施例中，上述第二反应试剂包括：0.4w/v％-1.5w/v％鞣花酸、0.6w/v％-1.5w/v％羟丙基甲基纤维素、0.7w/v％-1.4w/v％氯化钙和0.05w/v％-0.15w/v％没食子酸丙酯。

在其中一些实施例中，上述第二反应试剂包括：0.4w/v％-1.4w/v％鞣花酸、0.5w/v％-1.4w/v％鞣花酸、0.7w/v％-1.3w/v％羟丙基甲基纤维素、0.8w/v％-1.2w/v％氯化钙和0.08w/v％-0.13w/v％没食子酸丙酯。

在其中一些实施例中，上述第一、二反应试剂还包括0.05w/v％-0.15w/v％防腐剂；在所述第一反应试剂和所述第二反应试剂中，所述防腐剂分别独立选自山梨酸钾或脱氢乙酸及其钠盐。选用食用防腐剂山梨酸钾或脱氢乙酸及其钠盐可以减少试剂被细菌侵蚀的风险。

在其中一些实施例中，上述基材由高分子聚合物制得。

本发明的一些实施例还提供了上述干式试剂卡的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)获得上述第一、二反应试剂；

(3)将基材进行烘烤干燥，即得。

在其中一些实施例中，上述步骤(2)中，所述第一反应试剂滴加2μl-6μl至第一反应区；所述第二反应试剂滴加2μl-6μl至第二反应区。

在其中一些实施例中，上述步骤(3)中，所述烘烤干燥为，置于60℃-70℃的烘箱中，烘烤20-40分钟。

本发明的一些实施例还提供了一种活化部分凝血活酶时间的检测方法，具体包括如下步骤：

获取待测血液样本；

血液样本于上述干式试剂卡的第一反应区与第一反应试剂反应后，再与第二反应区的第二反应试剂反应；

检测血液样本凝固所需的时间。

在其中一些实施例中，上述血液样本滴加量为15-25μL，进一步优选为20μL。

实施例1试剂卡的配制及检测

试剂卡的组成：

本发明活化部分凝血活酶时间测定试剂卡作为干式试剂卡，通过将第一反应试剂和第二反应试剂分别均匀涂布于基材表面，干燥后得到。

其中，试剂卡制备过程如图1所示，具体如下：

第一反应试剂组成：

缓冲液：0.5M pH 7.3Tris-HCl 1000ml；

激活剂：10g白陶土；

稳定剂：1％羟丙基甲基纤维素；

磷脂：5g兔脑磷脂；

抗氧化剂：0.1％丁基羟基茴香醚；

增稠剂：1％甘露醇，0.2％环糊精，0.1％黄原胶；

灭菌剂：0.1％戊二醛；

防腐剂：0.1％山梨酸钾；

无机盐：0.1％Mn₃O₄。

第二反应试剂组成：

缓冲液：0.5M pH 7.3Tris-HCl 1000ml；

激活剂：1％鞣花酸；

稳定剂：1％羟丙基甲基纤维素；

10g氯化钙；

抗氧化剂：0.1％没食子酸丙酯；

防腐剂：0.1％山梨酸钾。

第一反应试剂的配制：

在1000mL的0.5M的pH 7.3的Tris-HCl缓冲液中，加入10g白陶土，搅拌30min；然后加入5g磷脂，混合搅拌30分钟。然后加入1％羟丙基甲基纤维素；0.1％丁基羟基茴香醚，1％甘露醇，0.2％环糊精，0.1％黄原胶混合均匀，再依次加入0.1％戊二醛，0.1％山梨酸钾，0.1％Mn₃O₄混合均匀，得到第一反应试剂。

第二反应试剂的配制：

在1000mL的0.5M的pH 7.3的Tris-HCl缓冲液中，加入10g氯化钙，搅拌30min；然后加入1％鞣花酸，1％羟丙基甲基纤维素，0.1％没食子酸丙酯，0.1％山梨酸钾，得到第二反应试剂。

取试剂卡基材，其结构如图2所示，该装置包括基板100、固定座200以及转动件300。该装置详细结构参见文件(CN 206818728 U)。

取配制好的第一反应试剂4μl滴加至第一反应区，第二反应试剂4μl滴加至第二反应区，待试剂滴加点胶完成后，放在65℃的烘箱中，烘烤30分钟。

烘干后在第一、二反应区之间卡上齿轮，进行外膜包装，得到试剂卡。

检测方法和原理：全血样本与检测卡中含有白陶土等组份的第一反应试剂的第一反应区110，含有鞣花酸等组份的第二反应试剂的第二反应区120分别接触反应后，检测仪上的驱动部件驱动转轴320带动转盘310转动，所述钩爪330能够勾起所述反应区120内的凝血块；检测仪上的检测部件发出检测光线，当检测光线被凝血块挡住时，说明钩爪330上已经勾起了凝血块，凝血块已经将检测光线遮挡，说明已经凝血成功。当检测光线未被遮挡，说明钩爪330上没有凝血块，也即反应区120内没有凝血。血液凝固所需的时间即为待测样本的活化部分凝血活酶时间。

检测步骤如下：

1打开血凝分析仪(即时凝血分析仪，OCG-102，万孚生物)，按照仪器提示插入检测卡。

2仪器自动进入预热状态，待预热结束后，吸取20ul的全血样本，滴加到绿灯指示的加样孔处。

3.仪器将自动进入检测状态。

4.读取/打印检测结果。

5.将用过的检测卡，从仪器中取出，并和多余的移液枪头，吸管等按照传染物品进行处理。

6.质控：建议使用西门子凝血质控品进行质控。在产品每批次首次试用时进行质控，并在后续每个月进行一次质控。

其中关于待测样本需满足如下要求：

1、新鲜静脉全血与0.109mol/l枸橼酸钠抗凝剂按9：1轻轻颠倒混均。

2、不宜使用EDTA，肝素，草酸盐作为抗凝剂。

3、样本采集，贮存必须使用一次性塑料制品或者硅化的玻璃管。

判读标准：

(1)检查正常的全血样本活化部分凝血活酶时间为22.2s-37.9s；

(2)当样本活化部分凝血活酶时间(APTT)延长(>37.9s)：见于凝血因子2,3,4,5.6,减低，纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，抗凝物质存在(如血内肝素含量增加以及口服康宁)，是监测肝素质量的重要指标。

(3)当样本活化部分凝血活酶时间缩短(<22.2s)：见于高凝状态，血栓性疾病，如心肌梗塞，不稳定性心绞痛脑血管病变，肺梗死，深静脉血栓形成，妊娠高血压综合征和肾病综合症。

当测定结果出现异常时，应该检测系统的每个组成，如检测卡，样本，仪器等，必要时，重新测定。

实施例2试剂卡组成优化

2.1稳定剂

(1)对检测重复性影响：

为研究本发明试剂中稳定剂选择对检测效果的影响，分别选用等量(1.0w/v％)的BSA、聚乙二醇、甘露醇、海藻糖、明胶和羟丙基甲基纤维素作为稳定剂加入本发明实施例1中第一、二反应试剂的配制(配方中其他组成相同)，形成得到的不同APTT干式试剂，针对低浓度凝血因子血液样本和中高浓度凝血因子血液样本(即正常和异常样本，样本来源于中山三院，分别已知APTT为20-30s，60-70s)各1例进行重复10次检测，检测结果分别如下表2-1、2-2所示。

其中，上表中偏差为平均偏差，是数列中各项数值与其算术平均数的离差绝对值的算术平均数。

通过上述检测结果可知，当APTT试剂中添加羟丙基甲基纤维素后，在中高浓度质控品中检测的重复性更好。且在干式试剂制备的过程中发现，在进行试剂点胶滴加处理时，添加羟丙基甲基纤维素的底座扩散情况比较好，采用其它稳定剂(如等量明胶、BSA、甘露醇、海藻糖)配制的试剂在进行点胶处理时，会产生扩散情况不均一，反应区中反应试剂无法均匀有效分布，具体如图3所示。

(2)羟丙基甲基纤维素对检测的影响

为研究本发明试剂中稳定剂羟丙基甲基纤维素的使用对试剂及其检测效果的影响，分别采用常温下(25℃)及55℃下存放4周的加速稳定性实验对试剂的检测结果进行比较，其中实验组试剂为本发明实施例1中配方。对照组为不含1％羟丙基甲基纤维素，其他组成及配制均与实施例1中试剂相同，分别采用正常人血液样本(样本来源于中山三院)、质控液Sysmex–Siemens(已知APTT为60-70s)、正常人血液+0.3U/L肝素样本、正常人血液+0.4U/L肝素样本各1例进行重复10次检测，检测结果分别如下表2-3、2-4、2-5、2-6所示；

根据上表结果可知，在活化部分凝血活酶时间检测试剂中添加1％羟丙基甲基纤维素后，形成的本发明实施例1所述活化部分凝血活酶时间检测试剂，在测试血液样本中含有0.3U/L-0.4U/L肝素的时候，稳定性会比较好，而不添加羟丙基甲基纤维素配方对肝素的敏感性降低，说明本发明活化部分凝血活酶时间检测试剂中1％羟丙基甲基纤维素的添加能在有助于提高试剂稳定性的同时，提高APTT试剂对肝素的敏感性，能更为灵敏地反映出肝素浓度的变化。

2.2试剂配方优化对肝素敏感性影响

由于不同的APTT试剂，其测量的0U/mL肝素浓度APTT值或其它浓度肝素的APTT值，具体数值上存在较大差异，只用某个肝素浓度下的APTT值来体现APTT试剂对肝素的敏感性不够准确；例如，可能某个APTT试剂测定的肝素浓度0.4U/mL时的APTT值同样可以达到本申请大于60秒以上的测试结果水平，但是，其0U/mL肝素浓度的APTT值本身也比较高，不能说明其对肝素敏感。

因此，本例为研究不同试剂配方对肝素敏感性影响，采用0U/mL肝素浓度样本(临床健康人样本2例)与0.4U/mL肝素浓度样本(临床健康人样本2例各分别按0.4U/mL加入肝素)同时检测来评价表2-7中的不同APTT试剂配方对肝素的敏感性，通过3次重复平行测试，检测结果如下表2-8所示，其中对标值为医院测试值(采用太平洋TS400C血凝仪检测得到)。

表2-7

通过上述反应结构统计分析可知，对比配方3、4的检测结果可知，未加入1％羟丙基甲基纤维素，会使得检测结果的稳定性下降，且对肝素的敏感性降低；对比配方2、4的检测结果可知，未加入无机盐(0.1％Mn₃O₄)，也会对肝素的敏感性降低。

2.3试剂的使用方式对检测稳定性的影响

分别采用常温下(25℃)及55℃下存放4周的加速稳定性实验对试剂的检测结果进行比较，其中实验组试剂为本发明实施例1中的活化部分凝血活酶时间检测干式试剂卡，对照组为本发明实施例1中的活化部分凝血活酶时间检测第一、二反应试剂，不经过实施例1中制备步骤中的干燥处理，直接使用。分别采用正常人血液样本、质控液Sysmex-Siemens(已知APTT为60-70s)各1例进行重复10次检测，检测结果分别如下表2-9、2-10所示：

上述实验结果表明，加速稳定性实验与常规实验中本发明活化部分凝血活酶时间检测干式试剂卡的测试结果基本相同，测试结果显示偏差比较小，且明显优于液体状试剂。本发明制备的APTT试剂的检测结果经测试都处于正常范围，说明试剂稳定性强。

实施例3试剂卡的性能检测

3.1重复性检测

为研究本发明试剂的重复性，采用本发明实施例1所述活化部分凝血活酶时间检测试剂，对正常人血液样本、质控液Sysmex-Siemens(已知APTT为60-70s)进行重复10次检测，检测结果分别如下表3-1所示；

表3-1

	正常人血液样本	质控液Sysmex-Siemens
			1	32.1	62.1
2	30.2	61.2
			3	30.5	62.3
4	32.1	60.3
			5	29.8	62.3
6	32.6	59.6
			7	28.9	58.6
8	29.6	62.4
			9	32.1	62.6
10	31.6	58.9
			AVERAGE	30.95	61.03
s'd	1.300641	1.554956
			c'v	4.20％	2.55％

根据上表结果可知，本发明活化部分凝血活酶时间检测的测试重复性＜5％。

实施例4试剂卡的临床检测应用

4.1常规临床样本测试

分别采用本发明实施例1中活化部分凝血活酶时间检测试剂卡与市售产品S(太平洋TS400C血凝仪及其配套试剂)，检测步骤分别参考实施例1和市售产品说明书，在常规光学凝血仪上，对200份临床样本(于2019-2020年期间，在中山三院等多家医院进行样本收集得到)进行APTT的测试，并将测试结果与医院测试值(生化分析仪器SYSMEX CS-2000i血凝仪测试结果)进行比对，结果统计如下表4-1所示：

表4-1

其中，规定范围是指：以医院测试值为对照，样本APTT值为50s以下，偏差为±5s；样本APTT值为50s以上，偏差±10s；百分比为对应样本数量/9批样本总数×100％得到。

根据上表结果分析显示，采用本发明活化部分凝血活酶时间检测试剂的测试结果与生化分析仪器SYSMEX CS-2000i血凝仪测试结果相关性约达90％，临床检测效果好，APTT结果明显延长，具有显著差异，和市售产品S的检测结果相比，测试结果的相关性更强。

4.2肝素敏感性测试

本例采用0U/mL肝素浓度样本(临床健康人样本5例)与0.4U/mL肝素浓度样本(临床健康人样本5例，以及在其基础上各分别按0.4U/mL加入肝素的样本)同时检测来评价本发明活化部分凝血活酶时间检测试剂卡与参考文件CN101221189A自行配制的冻干型试剂A，对待测样本中肝素的敏感性。其中自行配制的冻干型试剂A使用前需用一定体积的蒸馏水轻摇溶解成悬液，置于37℃预温。其检测方法，也参考CN101221189A文件中，以太平洋TS400C血凝仪为例，操作步骤如下表4-2所示：

表4-2

检测结果如下表4-3、4-4所示，其中对标值为医院测试值(生化分析仪器SYSMEXCS-2000i血凝仪测试结果)。

4-4、冻干型试剂A肝素敏感性测试

对标值	33.4	83.6	43.2	146.9	36.8	96.7	35.6	81.3	38.4	103.9
											其他配方值	33.2	36.9	44.2	51.3	36.7	42.3	34.8	49.3	38.4	45.6
偏差百分比	-0.6％	-55.9％	2.3％	-65.1％	-0.3％	-56.3％	-2.2％	-39.4％	0.0％	-56.1％

根据上表检测分析结果可知，本发明活化部分凝血活酶时间检测试剂卡对肝素很敏感，并且在正常的临床样本中添加了肝素后的测试结果也显示器检测结果具有良好的准确性；而从冻干型试剂A的检测结果可看出，对肝素测试不够敏感，测试偏差大，说明其对用肝素治疗的病人测试的值偏差比较大，测试结果无法具有有效临床参考价值，且其在检测过程中，需要人为加入蒸馏水进行溶解后方能进行后续检测，其溶解过程中水质及其加入量的影响都将对检测结果的准确性和重复性产生影响，且检测操作过程较本发明试剂卡而言也更为繁琐。因此本发明试剂卡使用更便利，更利于在实际临床检测中的广泛应用，为实际APTT的检测提供便利。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡，其特征在于，所述干式试剂卡包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区由第一反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到，所述第二反应区由第二反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到；

所述第一反应试剂包括：0.6w/v%-1.5w/v%白陶土、0.6w/v%-1.5w/v%羟丙基甲基纤维素、0.4w/v%-0.6w/v%磷脂、0.05w/v%-0.15w/v%丁基羟基茴香醚、0.5w/v%-1.5w/v%甘露醇、0.1w/v%-0.3w/v%环糊精、0.05w/v%-0.15w/v%黄原胶和0.05w/v%-0.15w/v%Mn₃O₄；

所述第二反应试剂包括：0.4w/v%-1.5w/v%鞣花酸、0.6w/v%-1.5w/v%羟丙基甲基纤维素、0.7w/v%-1.4w/v%氯化钙和0.05w/v%-0.15w/v%没食子酸丙酯。

2.根据权利要求1所述干式试剂卡，其特征在于，所述第一反应试剂包括：0.7w/v%-1.3w/v%白陶土、0.7w/v%-1.2w/v%羟丙基甲基纤维素、0.45w/v%-0.55w/v%磷脂、0.07w/v%-0.13w/v%丁基羟基茴香醚、0.6w/v%-1.4w/v%甘露醇、0.15w/v%-0.25w/v%环糊精、0.06w/v%-0.12w/v%黄原胶和0.07w/v%-0.12w/v%Mn₃O₄。

3.根据权利要求1或2所述干式试剂卡，其特征在于，所述第二反应试剂包括：0.5w/v%-1.4w/v%鞣花酸、0.7w/v%-1.3w/v%羟丙基甲基纤维素、0.8w/v%-1.2w/v%氯化钙和0.08w/v%-0.13w/v%没食子酸丙酯。

4.根据权利要求1-2任一项所述干式试剂卡，其特征在于，所述第一、二反应试剂还包括分别独立选自0.05w/v%-0.15w/v%的山梨酸钾或脱氢乙酸及其钠盐作为防腐剂。

5.根据权利要求1所述试剂卡，其特征在于，所述基材由高分子聚合物制得。

6.权利要求1-5任一项所述干式试剂卡的制备方法，其特征在于，所述干式试剂卡的制备方法包括如下步骤：

（1）获得权利要求1-4任一项所述第一、二反应试剂；

（2）将所述第一反应试剂滴加至基材第一反应区，将所述第二反应试剂滴加至第二反应区；

（3）将基材进行烘烤干燥，即得。

7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述第一反应试剂滴加2μl-6μl至第一反应区；所述第二反应试剂滴加2μl-6μl至第二反应区。

8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述烘烤干燥为，置于60℃-70℃的烘箱中，烘烤20-40分钟。