CN111856037B

CN111856037B - Unc45a与hsp10的比值在pop早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品

Info

Publication number: CN111856037B
Application number: CN202010757270.2A
Authority: CN
Inventors: 牛晓宇; 王涛; 高林波; 梅玲; 崔陶; 陈悦悦; 魏冬梅; 张月婷; 罗晓雷
Original assignee: West China Second University Hospital of Sichuan University
Current assignee: West China Second University Hospital of Sichuan University
Priority date: 2020-07-31
Filing date: 2020-07-31
Publication date: 2021-06-22
Anticipated expiration: 2040-07-31
Also published as: CN111856037A

Abstract

本发明公开了UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品，首次将检测UNC45A与HSP10比值的物质用于制备POP早期预警、诊断、预后评估的产品，操作方法简单，以血液为检测样品，可实现快速、批量的检测，UNC45A与HSP10比值的表达可通过现有免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法等方法实现，具有高灵敏度、高特异性、高准确度以及高精确度的特点。

Description

UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品

技术领域

本发明是属于生物技术和医学领域，具体的说，是UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品。

背景技术

女性盆底器官脱垂（Pelvic Organ Prolapse，POP）是女性盆底功能障碍性疾病（Pelvic Floor Dysfunction，PFD）中最为常见、危害面最广的类型，常伴盆腔支持组织的结构和功能缺陷，全球发病率高达20%且呈逐年升高趋势。POP的早发现早治疗，能够改善成年女性生命质量和身心健康，对于提高POP流行病学防控效果具有重要的指导意义，是切实践行健康中国2030规划纲要目标的重要举措之一。

目前POP的诊断主要通过临床表型、病史和相关功能性检查，缺乏能反映长期病理过程的功能分子作为早期识别、干预和评价指标和标靶。王凤玫等在“骨形态发生蛋白-1在盆底器官脱垂患者阴道组织中的表达及意义”，《实用妇科杂质》2012年11月第28卷第11期，954-956，中通过手术中获取患者阴道前壁组织，采用免疫印迹方法检测BMP-1的蛋白表达，可以推测出盆底器官脱垂患者阴道组织中BMP-1的含量降低，对前胶原蛋白的剪切能力降低，引起细胞外基质代谢障碍，从而使盆底组织中胶原含量降低，最终引起盆底器官脱垂。但该研究仍存在补足之处，如所取标本仅来源于阴道组织，标本数量较少，还需进一步实验结果验证，另外，标本需进行手术才能获取，无法实现快速判断。我们知道，盆底器官脱垂与多种因素有关，为实现POP的预判和快速诊断，势必需要找一种快速准确的检测指标。

UNC45A/HSP10是Duchenne肌营养不良（Duchenne musclal dystrophy，DMD）的相关蛋白，陈素秀等在“UNC45A/HSP10与Duchenne肌营养不良”《医师进修杂质》第2005年10月第28卷第10期上半月，53-54，中揭示了可以通过增加内源UNC45A/HSP10的表达量来达到对DMD患者治疗的目的，但并未有研究报告UNC45A/HSP10在POP及其相关产品中的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，首次将UNC45A与HSP10比值的检测指标用于辅助诊断POP及早期预警和预后评估，可实现高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度的检测和判断。

本发明的另一目的在于提供一种用于POP早期预警、诊断、预后评估的产品，通过用于检测UNC45A与HSP10比值的物质实现POP的批量、快速检测。

本发明通过下述技术方案实现：UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品，用于检测UNC45A与HSP10比值的物质在制备POP早期预警、诊断、预后评估产品中的应用。

所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自全血或血浆。

所述用于检测UNC45A与HSP10比值的物质是用于在蛋白水平上检测UNC45A与HSP10比值的物质。

所述物质在蛋白水平上检测UNC45A与HSP10比值的方法包括：免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法。

所述POP早期预警、诊断、预后评估产品包括试剂盒、试纸或其他医学上可实现的产品。

一种用于POP早期预警、诊断、预后评估的产品，包括用于检测UNC45A与HSP10比值的物质。

设置检测限为标准值，当检测到的UNC45A与HSP10的比值高于或等于标准值时，判断为阳性，表明患有POP；当检测到的UNC45A与HSP10的比值低于标准值时，判断为阴性，表明未患有POP。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

（1）本发明通过研究首次发现，由于POP患者的盆腔肌组织功能障碍，导致女性POP患者血浆中UNC45A与HSP10的比值显著高于健康对照女性，因此，基于这一研究基础，首次将UNC45A与HSP10的比值作为POP的诊断与预测指标。目前尚未发现以血液样本中的UNC45A/HSP10含量作为盆底器官脱垂的检测指标的报道，也未发现以血液样本中的UNC45A/HSP10含量为检测指标的盆底器官脱垂检测试剂盒及其制备方法的相关报道。

（2）本发明方法将检测UNC45A/HSP10水平的物质用于制备POP早期预警、诊断、预后评估的产品，如检测试剂盒等，操作方法简单，以血液为检测样品，可实现快速、批量的检测，UNC45A/HSP10水平的表达可通过现有免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法等方法实现，具有高灵敏度、高特异性、高准确度以及高精确度的特点。

附图说明

图1为实施例2中涉及的A450值- UNC45A浓度标准曲线。

图2为实施例2中涉及的A450值- HSP10浓度标准曲线。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

本实施例是以UNC45A与HSP10的比值（UNC45A/HSP10）为检测指标的盆底器官脱垂检测试剂盒。主要是将检测UNC45A和HSP10水平的物质用于制备盆底器官脱垂检测试剂盒，以辅助POP诊断、早期预警和/或预后评估。

具体制备工艺步骤如下：

（1）制备包被有鼠抗人UNC45A单克隆抗体（购自：santa cruz公司，货号 SC-376313）的多孔板。

用pH＝9的碳酸盐缓冲液将鼠抗人UNC45A单克隆抗体稀释为浓度10 μg /mL的稀释液，在抗体稀释液中加入无水甲醇，无水甲醇的加入量以其浓度达到3 mL/100 mL为限，然后将所述含甲醇的鼠抗人UNC45A单克隆抗体稀释液按100μL/孔的量加入96孔板的各孔内，在4℃包被12小时；包被时间届满后，将浓度1g/100 mL的牛血清白蛋白溶液按120μL/孔的量加入多孔板上的各孔并在37℃进行封闭反应，反应时间为1小时；封闭反应结束后，用pH＝7.2、浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤多孔板，当多孔板上的未反应物被去除后即获得包被有鼠抗人UNC45A单克隆抗体的多孔板，然后将其置于4℃冰箱中保存备用。

（2）制备生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体（购自：Invitrogen公司，货号PA5-79415）（Biotin-UNC45AAb）检测液。

以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，生物素酰-N羟基丁二酰亚胺酯为溶质配制浓度为50μg/μL的酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，以pH＝9.6、浓度为1 mol/L的碳酸盐缓冲液为溶剂、兔抗人UNC45A多克隆抗体为溶质配制浓度为24mg/mL的兔抗人UNC45A多克隆抗体溶液，按酰-N羟基丁二酰亚胺酯与兔抗人UNC45A多克隆抗体的质量比＝1∶7量取所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人UNC45A多克隆抗体溶液形成混合液，将所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人UNC45A多克隆抗体的混合液在搅拌下（磁力搅拌器，搅拌速度200转/分）于室温反应4小时，即获得生物素标记的鼠抗人UNC45A单克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）；反应结束后，将含生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）的反应液装入透析袋中，用pH＝9.2、浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液在4℃进行透析，透析时间为12小时，其间更换透析液3次；继后在透析后的所述反应液中加入牛血清白蛋白，所述牛血清白蛋白的加入量以其浓度达到4 g/100 mL为限。

将上述过程制备的含生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）和牛血清白蛋白的透析后反应液与甘油按体积比1∶1计量，在室温下混合均匀即形成生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）检测液，其保存温度为－20℃。

（3）制备包被有鼠抗人HSP10单克隆抗体（购自：santa cruz公司，货号 SC-376313）的多孔板。

用pH＝9的碳酸盐缓冲液将鼠抗人HSP10单克隆抗体稀释为浓度10 μg /mL的稀释液，在抗体稀释液中加入无水甲醇，无水甲醇的加入量以其浓度达到3 mL/100 mL为限，然后将所述含甲醇的鼠抗人HSP10单克隆抗体稀释液按100μL/孔的量加入96孔板的各孔内，在4℃包被12小时；包被时间届满后，将浓度1g/100 mL的牛血清白蛋白溶液按120μL/孔的量加入多孔板上的各孔并在37℃进行封闭反应，反应时间为1小时；封闭反应结束后，用pH＝7.2、浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤多孔板，当多孔板上的未反应物被去除后即获得包被有鼠抗人HSP10单克隆抗体的多孔板，然后将其置于4℃冰箱中保存备用。

（4）制备生物素标记的兔抗人HSP10多克隆抗体（购自：Invitrogen公司，货号PA5-79415）（Biotin-HSP10Ab）检测液。

以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，生物素酰-N羟基丁二酰亚胺酯为溶质配制浓度为50μg/μL的酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，以pH＝9.6、浓度为1 mol/L的碳酸盐缓冲液为溶剂、兔抗人HSP10多克隆抗体为溶质配制浓度为24mg/mL的兔抗人HSP10多克隆抗体溶液，按酰-N羟基丁二酰亚胺酯与兔抗人HSP10多克隆抗体的质量比＝1∶7量取所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人HSP10多克隆抗体溶液形成混合液，将所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人HSP10多克隆抗体的混合液在搅拌下（磁力搅拌器，搅拌速度200 转/分）于室温反应4小时，即获得生物素标记的鼠抗人HSP10单克隆抗体（Biotin-HSP10Ab）；反应结束后，将含生物素标记的兔抗人HSP10多克隆抗体（Biotin-HSP10Ab）的反应液装入透析袋中，用pH＝9.2、浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液在4℃进行透析，透析时间为12小时，其间更换透析液3次；继后在透析后的所述反应液中加入牛血清白蛋白，所述牛血清白蛋白的加入量以其浓度达到4 g/100 mL为限。

将上述过程制备的含生物素标记的兔抗人HSP10多克隆抗体（Biotin-HSP10Ab）和牛血清白蛋白的透析后反应液与甘油按体积比1∶1计量，在室温下混合均匀即形成生物素标记的兔抗人HSP10多克隆抗体（Biotin-HSP10Ab）检测液，其保存温度为－20℃。

（5）每个试剂盒配备亲和素-辣根过氧化物酶12 mL、显色底物3',3',5,5'-四甲基联苯胺12 mL、UNC45A蛋白标准品（UNC45A的浓度为10 ng/mL）1 mL、HSP10蛋白标准品（HSP10的浓度为10 ng/mL）1 mL和样本稀释液30 mL，样本稀释液是在浓度0.02 mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris缓冲液，TBS）中加入牛血清白蛋白配制而成，所述牛血清白蛋白的加入量以其浓度达到2 g/100 mL为限；所述亲和素-辣根过氧化物酶与生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体检测液和生物素标记的兔抗人HSP10多克隆抗体检测液的体积比为1∶1∶1。

实施例2：

本实施例是以实施例1制备的盆底器官脱垂检测试剂盒对待测样本进行检测。

1、检测样本中UNC45A和HSP10的浓度

（1）标样准备

将实施例1所述试剂盒中配备的UNC45A蛋白标准品设为含UNC45A浓度最高的标样，命名为标样1，其UNC45A的浓度为40ng/mL，然后用实施例1所述试剂盒中配备的样本稀释液将所述UNC45A蛋白标准品分别稀释成UNC45A浓度为40 ng/mL、20 ng/mL、10 ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25 ng/mL、0.63 ng/mL的标样，依次命名为标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6和标样7，共计有7个标样。

将实施例1所述试剂盒中配备的HSP10蛋白标准品设为含HSP10浓度最高的标样，命名为标样1，其HSP10的浓度为8000 pg/mL，然后用实施例1所述试剂盒中配备的样本稀释液将所述HSP10蛋白标准品分别稀释成HSP10浓度为8000 pg/mL、4000 pg/mL、2000 pg/mL、1000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL的标样，依次命名为标样8、标样9、标样10、标样11、标样12、标样13和标样14，共计有7个标样。

（2）试样

以四川大学华西第二医院门诊及住院的女性为实验对象，根据现有诊断方法将实验对象分为盆底脱垂组和健康对照组，收集两组女性的抗凝血样本作为试样，共计40个试样，其中，试样1-20取自于盆底脱垂组，试样21-40取自于健康对照组。

（3）空白对照

实施例1所述试剂盒中配备的样本稀释液——为空白对照。

2、样本检测

（1）检测前将试剂盒的所有试剂、待测样本缓慢均衡至室温（18~25℃）；

（2）将步骤1所准备的标样1～7、空白对照、试样1～40分别加入包被有鼠抗人UNC45A单克隆抗体的96孔板上的相应加样孔中，各标样、空白对照、试样均设复孔对照；各加样孔中的加样量为100μL。用胶膜遮盖所述96孔板，并将所述96孔板置于振摇仪上在振摇状态下室温孵育2.5小时，振摇速度为100转/分。

（3）孵育时间届满后，吸尽各加样孔中的液体，在自动洗板机上设置清洗程序，以400 μL/孔洗液（浓度0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液或浓度为0.02 mol/L的Tris缓冲液）将每个加样孔清洗两次，每次清洗时，洗液需在孔中停留10～15秒；清洗完毕后，将96孔板翻转，使各加样孔孔口向下，在吸水滤纸上轻拍使各加样孔中残留的洗液完全去除。

（4）向96孔板上的各加样孔中分别加入100 μL生物素标记的兔抗人UNC45A多克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）检测液，然后用胶膜遮盖所述96孔板，并将所述96孔板置于振摇仪上在振摇状态下室温孵育1.5小时，振摇速度为100转/分；孵育时间届满后，吸尽各加样孔中的液体，按步骤（3）所述方法清洗所述96孔板。

（5）向所述96孔板上的各加样孔中分别加入100μL亲和素-辣根过氧化物酶，然后用胶膜遮盖所述96孔板，并将所述96孔板置于振摇仪上在振摇状态下室温孵育1.5小时，振摇速度为100转/分；孵育时间届满后，吸尽各加样孔中的液体，按步骤（3）所述方法清洗所述96孔板。

（6）向所述96孔板上的各加样孔中分别加入100μL 3',3',5,5'-四甲基联苯胺，然后在室温避光孵育10分钟，孵育时间届满后，向各加样孔中分别加入100μL终止液，所述终止液为硫酸和亚硫酸钠配制的水溶液，硫酸的浓度为2 mol/L，亚硫酸钠的浓度为0.1 mol/L。

（7）将所述96孔板放置在酶标仪中，用酶标仪测各孔的A450值（光密度值或吸光度值），所测结果见下表（表中的A450值为两孔的加权平均值）。空白对照的A450值为0.1344。

表1：标样的A450值

表2：试样1～20的A450值

表3：试样21～40的A450值

（8）根据各标样的A450值与各标样中UNC45A的浓度，制作A450值- UNC45A浓度标准曲线（见图1），并得到计算公式y=((max/(x-min)-1)^(-1/Hillslope))*EC50（见表6），式中，y为被测样品的A450值，x为被测样品中UNC45A的含量。

（9）根据所测各试样的A450值，用公式y=((max/(x-min)-1)^(-1/Hillslope))*EC50（见表6）计算各试样中UNC45A的浓度，计算结果见下表：

表4：试样1～20的计算结果（UNC45A浓度单位：ng/mL）

表5：试样21～40的计算结果（UNC45A浓度单位：ng/mL）

表6四参数法的公式与参数

重复样本检测步骤（1）～（7），将标样1～7替换为标样8～14，包被有鼠抗人UNC45A单克隆抗体替换为包被有鼠抗人HSP10单克隆抗体，兔抗人UNC45A多克隆抗体（Biotin-UNC45AAb）检测液替换为兔抗人HSP10多克隆抗体（Biotin-HSP10Ab）检测液，制备96孔板，将所述96孔板放置在酶标仪中，用酶标仪测各孔的A450值（光密度值或吸光度值），所测结果见下表（表中的A450值为两孔的加权平均值）。空白对照的A450值为0.0575。

表7：标样8～14的A450值

表8：试样1～20的A450值

表9：试样21～40的A450值

根据各标样的A450值与各标样中HSP10的浓度，制作A450值- HSP10浓度标准曲线（见图2），并得到计算公式y = 0.0008x + 0.0067，式中，y为被测样品的A450值，x为被测样品中HSP10的含量。

根据所测各试样的A450值，用公式y=((max/(x-min)-1)^(-1/Hillslope))*EC50（见表12）计算各试样中HSP10的浓度，计算结果见下表：

表10：试样1～20的计算结果（HSP10浓度单位：pg/mL）

表11：试样21～40的计算结果（HSP10浓度单位：pg/mL）

表12 四参数法的公式与参数

3、UNC45A/HSP10比值计算

表13：试样1～20的计算结果

表14：试样21～40的计算结果

计算表13中试样1～20的UNC45A/HSP10平均浓度比值，其计算结果为5.76±7.37。计算表14中试样21～40的UNC45A/HSP10平均比值，其计算结果为0.29±0.45。从计算结果可以看出，取自于盆底脱垂组的试样1～20中的UNC45A/HSP10平均浓度比值与取自于健康对照组的试样21～40中的UNC45A/HSP10平均浓度比值的差异具有统计学意义。

根据健康对照组的均数±2×标准差的计算结果设为检测限，因此，本发明所述设置的UNC45A/HSP10检测限为0.855，即待测样本中 UNC45A/HSP10浓度比值高于或等于0.855判定为阳性（即患有女性盆底器官脱垂）， UNC45A/HSP10浓度比值低于0.855判定为阴性（即未患女性有盆底器官脱垂）。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 四川大学华西第二医院

<120> UNC45A与HSP10的比值在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品

<130> 2020

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 944

<212> PRT

<213> UNC45A

<400> 1

Met Thr Val Ser Gly Pro Gly Thr Pro Glu Pro Arg Pro Ala Thr Pro

1 5 10 15

Gly Ala Ser Ser Val Glu Gln Leu Arg Lys Glu Gly Asn Glu Leu Phe

20 25 30

Lys Cys Gly Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ala Ala Tyr Thr Gln Ala Leu

35 40 45

Gly Leu Asp Ala Thr Pro Gln Asp Gln Ala Val Leu His Arg Asn Arg

50 55 60

Ala Ala Cys His Leu Lys Leu Glu Asp Tyr Asp Lys Ala Glu Thr Glu

65 70 75 80

Ala Ser Lys Ala Ile Glu Lys Asp Gly Gly Asp Val Lys Ala Leu Tyr

85 90 95

Arg Arg Ser Gln Ala Leu Glu Lys Leu Gly Arg Leu Asp Gln Ala Val

100 105 110

Leu Asp Leu Gln Arg Cys Val Ser Leu Glu Pro Lys Asn Lys Val Phe

115 120 125

Gln Glu Ala Leu Arg Asn Ile Gly Gly Gln Ile Gln Glu Lys Val Arg

130 135 140

Tyr Met Ser Ser Thr Asp Ala Lys Val Glu Gln Met Phe Gln Ile Leu

145 150 155 160

Leu Asp Pro Glu Glu Lys Gly Thr Glu Lys Lys Gln Lys Ala Ser Gln

165 170 175

Asn Leu Val Val Leu Ala Arg Glu Asp Ala Gly Ala Glu Lys Ile Phe

180 185 190

Arg Ser Asn Gly Val Gln Leu Leu Gln Arg Leu Leu Asp Met Gly Glu

195 200 205

Thr Asp Leu Met Leu Ala Ala Leu Arg Thr Leu Val Gly Ile Cys Ser

210 215 220

Glu His Gln Ser Arg Thr Val Ala Thr Leu Ser Ile Leu Gly Thr Arg

225 230 235 240

Arg Val Val Ser Ile Leu Gly Val Glu Ser Gln Ala Val Ser Leu Ala

245 250 255

Ala Cys His Leu Leu Gln Val Met Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gly Val

260 265 270

Lys Lys Gly Phe Arg Gly Lys Glu Gly Ala Ile Ile Val Asp Pro Ala

275 280 285

Arg Glu Leu Lys Val Leu Ile Ser Asn Leu Leu Asp Leu Leu Thr Glu

290 295 300

Val Gly Val Ser Gly Gln Gly Arg Asp Asn Ala Leu Thr Leu Leu Ile

305 310 315 320

Lys Ala Val Pro Arg Lys Ser Leu Lys Asp Pro Asn Asn Ser Leu Thr

325 330 335

Leu Trp Val Ile Asp Gln Gly Leu Lys Lys Ile Leu Glu Val Gly Gly

340 345 350

Ser Leu Gln Asp Pro Pro Gly Glu Leu Ala Val Thr Ala Asn Ser Arg

355 360 365

Met Ser Ala Ser Ile Leu Leu Ser Lys Leu Phe Asp Asp Leu Lys Cys

370 375 380

Asp Ala Glu Arg Glu Asn Phe His Arg Leu Cys Glu Asn Tyr Ile Lys

385 390 395 400

Ser Trp Phe Glu Gly Gln Gly Leu Ala Gly Lys Leu Arg Ala Ile Gln

405 410 415

Thr Val Ser Cys Leu Leu Gln Gly Pro Cys Asp Ala Gly Asn Arg Ala

420 425 430

Leu Glu Leu Ser Gly Val Met Glu Ser Val Ile Ala Leu Cys Ala Ser

435 440 445

Glu Gln Glu Glu Glu Gln Leu Val Ala Val Glu Ala Leu Ile His Ala

450 455 460

Ala Gly Lys Ala Lys Arg Ala Ser Phe Ile Thr Ala Asn Gly Val Ser

465 470 475 480

Leu Leu Lys Asp Leu Tyr Lys Cys Ser Glu Lys Asp Ser Ile Arg Ile

485 490 495

Arg Ala Leu Val Gly Leu Cys Lys Leu Gly Ser Ala Gly Gly Thr Asp

500 505 510

Phe Ser Met Lys Gln Phe Ala Glu Gly Ser Thr Leu Lys Leu Ala Lys

515 520 525

Gln Cys Arg Lys Trp Leu Cys Asn Asp Gln Ile Asp Ala Gly Thr Arg

530 535 540

Arg Trp Ala Val Glu Gly Leu Ala Tyr Leu Thr Phe Asp Ala Asp Val

545 550 555 560

Lys Glu Glu Phe Val Glu Asp Ala Ala Ala Leu Lys Ala Leu Phe Gln

565 570 575

Leu Ser Arg Leu Glu Glu Arg Ser Val Leu Phe Ala Val Ala Ser Ala

580 585 590

Leu Val Asn Cys Thr Asn Ser Tyr Asp Tyr Glu Glu Pro Asp Pro Lys

595 600 605

Met Val Glu Leu Ala Lys Tyr Ala Lys Gln His Val Pro Glu Gln His

610 615 620

Pro Lys Asp Lys Pro Ser Phe Val Arg Ala Arg Val Lys Lys Leu Leu

625 630 635 640

Ala Ala Gly Val Val Ser Ala Met Val Cys Met Val Lys Thr Glu Ser

645 650 655

Pro Val Leu Thr Ser Ser Cys Arg Glu Leu Leu Ser Arg Val Phe Leu

660 665 670

Ala Leu Val Glu Glu Val Glu Asp Arg Gly Thr Val Val Ala Gln Gly

675 680 685

Gly Gly Arg Ala Leu Ile Pro Leu Ala Leu Glu Gly Thr Asp Val Gly

690 695 700

Gln Thr Lys Ala Ala Gln Ala Leu Ala Lys Leu Thr Ile Thr Ser Asn

705 710 715 720

Pro Glu Met Thr Phe Pro Gly Glu Arg Ile Tyr Glu Val Val Arg Pro

725 730 735

Leu Val Ser Leu Leu His Leu Asn Cys Ser Gly Leu Gln Asn Phe Glu

740 745 750

Ala Leu Met Ala Leu Thr Asn Leu Ala Gly Ile Ser Glu Arg Leu Arg

755 760 765

Gln Lys Ile Leu Lys Glu Lys Ala Val Pro Met Ile Glu Gly Tyr Met

770 775 780

Phe Glu Glu His Glu Met Ile Arg Arg Ala Ala Thr Glu Cys Met Cys

785 790 795 800

Asn Leu Ala Met Ser Lys Glu Val Gln Asp Leu Phe Glu Ala Gln Gly

805 810 815

Asn Asp Arg Leu Lys Leu Leu Val Leu Tyr Ser Gly Glu Asp Asp Glu

820 825 830

Leu Leu Gln Arg Ala Ala Ala Gly Gly Leu Ala Met Leu Thr Ser Met

835 840 845

Arg Pro Thr Leu Cys Ser Arg Ile Pro Gln Val Thr Thr His Trp Leu

850 855 860

Glu Ile Leu Gln Ala Leu Leu Leu Ser Ser Asn Gln Glu Leu Gln His

865 870 875 880

Arg Gly Ala Val Val Val Leu Asn Met Val Glu Ala Ser Arg Glu Ile

885 890 895

Ala Ser Thr Leu Met Glu Ser Glu Met Met Glu Ile Leu Ser Val Leu

900 905 910

Ala Lys Gly Asp His Ser Pro Val Thr Arg Ala Ala Ala Ala Cys Leu

915 920 925

Asp Lys Ala Val Glu Tyr Gly Leu Ile Gln Pro Asn Gln Asp Gly Glu

930 935 940

<210> 2

<211> 102

<212> PRT

<213> HSP10

<400> 2

Met Ala Gly Gln Ala Phe Arg Lys Phe Leu Pro Leu Phe Asp Arg Val

1 5 10 15

Leu Val Glu Arg Ser Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Gly Gly Ile Met

20 25 30

Leu Pro Glu Lys Ser Gln Gly Lys Val Leu Gln Ala Thr Val Val Ala

35 40 45

Val Gly Ser Gly Ser Lys Gly Lys Gly Gly Glu Ile Gln Pro Val Ser

50 55 60

Val Lys Val Gly Asp Lys Val Leu Leu Pro Glu Tyr Gly Gly Thr Lys

65 70 75 80

Val Val Leu Asp Asp Lys Asp Tyr Phe Leu Phe Arg Asp Gly Asp Ile

85 90 95

Leu Gly Lys Tyr Val Asp

100

Claims

1.用于检测UNC45A与HSP10比值的物质在制备女性盆底器官脱垂的早期预警或诊断产品中的应用，其特征在于：针对受试者的全血或血浆，在蛋白水平上检测其UNC45A与HSP10的浓度比值。

2.根据权利要求1所述的用于检测UNC45A与HSP10比值的物质在制备女性盆底器官脱垂的早期预警或诊断产品中的应用，其特征在于：所述检测的方法包括：免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法。

3.根据权利要求1所述的用于检测UNC45A与HSP10比值的物质在制备女性盆底器官脱垂的早期预警或诊断产品中的应用，其特征在于：所述产品包括试剂盒、试纸或其他医学上可实现的产品。