CN110208552A - 凝血酶时间检测试剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种凝血酶时间检测试剂，所述凝血酶时间检测试剂包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL～10U/mL，4‑羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水。本发明还公开了一种凝血酶时间检测试剂的制备方法。本发明制备的凝血酶时间检测试剂重复性好、稳定性高，且与已上市的凝血酶时间检测试剂具有很高的相关性，能够提高凝血酶时间检测的结果稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及凝血酶时间检测试剂及其制备方法。
背景技术
凝血酶时间(Thrombin time，TT)是在待测血浆加入一定量的凝血酶试剂，纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间。TT是检测凝血、抗凝及纤维蛋白溶解系统功能的一个简便试验，广泛应用于监控治疗高分子量肝素以及纤维蛋白溶解治疗，筛选纤维蛋白原紊乱及一些严重的纤维蛋白原缺乏病症，对临床各科的疾病诊断具有重要意义。
凝血酶时间(TT)检测的原理是适量的凝血酶将血浆样品中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，凝固所需的时间即为凝血酶时间(TT)。试剂的质量是凝血酶时间检测是否准确的关键因素，目前的凝血酶时间检测试剂普遍存在稳定性能较差的问题，致使检测结果不稳定。
上述内容仅用于辅助理解本发明的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种凝血酶时间检测试剂及其制备方法，以解决目前的凝血酶时间检测试剂普遍存在稳定性能较差的问题，致使检测结果不稳定。
为实现上述目的，本发明提供一种凝血酶时间检测试剂，所述凝血酶时间检测试剂包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL～10U/mL，4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水。
优选地，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种。
优选地，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种。
优选地，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种。
优选地，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种。
优选地，所述凝血酶时间检测试剂使用塑料容器装载，其中，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、高密度聚乙烯、低密度聚乙烯、聚丙烯和聚苯乙烯中的一种。
此外，为实现上述目的，本发明还提供一种凝血酶时间检测试剂的制备方法，所述凝血酶时间检测试剂的制备方法包括以下步骤：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液，其中，所述缓冲液中各原料质量百分数分别为4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种；
向所述缓冲液中加入牛凝血酶冻干粉，得到凝血酶时间检测试剂，其中，所述凝血酶时间检测试剂中牛凝血酶的活性浓度为1U/mL～10U/mL。
优选地，所述称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液的步骤包括：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到混合溶液；
将所述混合溶液利用0.22um的滤膜过滤，取滤液得到所述缓冲液。
优选地，所述称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液的步骤包括：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到混合溶液；
将所述混合溶液的PH调节至7.4～7.6，得到所述缓冲液。
优选地，所述凝血酶时间检测试剂的制备方法还包括：
将制备得到的所述凝血酶时间检测试剂分装至塑料容器，其中，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、高密度聚乙烯、低密度聚乙烯、聚丙烯和聚苯乙烯中的一种。
本发明实施例提出的一种凝血酶时间检测试剂及其制备方法，所述凝血酶时间检测试剂包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL～10U/mL，4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水。本发明还公开了一种凝血酶时间检测试剂的制备方法。本发明制备的凝血酶时间检测试剂重复性好、稳定性高，且与已上市的凝血酶时间检测试剂具有很高的相关性，能够提高凝血酶时间检测的结果稳定性。
附图说明
图1为本发明实施例1中凝血酶时间检测试剂1和已上市凝血酶时间检测试剂的相关性曲线图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
首先，对本发明实施例提供的凝血酶时间检测试剂及其制备方法进行简要概述。
本发明提供的凝血酶时间检测试剂的制备方法包括以下步骤：
缓冲液的制备：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到混合溶液，所述混合溶液即可直接作为缓冲液，其中，所述缓冲液中各原料质量百分数分别为4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％(10mmol/L～50mmol/L)，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种。
优选地，上述混合液中可能会存在杂质，为了提高最终制备得到的凝血酶时间检测试剂的质量，进一步地，可利用0.22um的滤膜过滤对所述混合溶液进行过滤，以去除杂质。
优选地，为了进一步提高最终制备得到的凝血酶时间检测试剂的性能，本发明实施例中，还进一步对所述缓冲液的pH值进行调节，具体地，将所述混合溶液的pH值调节值7.4～7.6(7.5±0.1)；可以理解的是，调节pH的方式可以通过向所述缓冲溶液中加入酸或碱进行调节所述酸可以是盐酸，所述碱可以为氢氧化钠。
制备得到的缓冲溶液放置于4℃下保存待用。
凝血酶时间检测试剂：
向所述缓冲液中加入牛凝血酶冻干粉，得到凝血酶时间检测试剂，其中，所述凝血酶时间检测试剂中牛凝血酶的活性浓度为1U/mL～10U/mL。
制备得到的凝血酶时间检测试剂利用塑料容器(例如塑料瓶)分装，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、高密度聚乙烯、低密度聚乙烯、聚丙烯和聚苯乙烯中的一种。
根据上述方案制备得到的凝血酶时间检测试剂所述凝血酶时间检测试剂包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL～10U/mL，4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水。
优选地，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种。
优选地，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种。
优选地，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种。
优选地，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种。
优选地，所述凝血酶时间检测试剂使用塑料容器装载，其中，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate，PET)，聚氯乙烯(Polyvinylchloride，PVC)，高密度聚乙烯(High Density Polyethylene，HDPE)，低密度聚乙烯(LowDensity Polyethylene，LDPE)，聚丙烯(Polypropylene，PP)和聚苯乙烯(Polystyrene，PS)中的一种。
凝血酶时间(TT)检测试剂的检测方法：
取100uL血液样本37℃温育1分钟，加入200uL试剂混合后，利用CS1300血凝仪(日本Sysmex公司产品)测定凝固时间。
实施例1
称取4.0g HEPES，15g牛血清白蛋白，1ml proclin300防腐剂，9g氯化钠，20g甘氨酸，20g甘露醇和3g海藻糖，向上述原料中加水定容至1L，调整PH至7.5±0.1，然后通过0.22um滤膜过滤，取滤液得到缓冲液1，将缓冲液1放置到4℃下保存待用。
向缓冲液1中加入牛凝血酶冻干粉，控制牛凝血酶的活性浓度为4U/mL，得到凝血酶时间检测试剂1。
制备得到的凝血酶时间检测试剂1利用XX塑料瓶分装。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂1包括下述含量的组分：牛凝血酶4U/mL，HEPES 0.4wt％，牛血清白蛋白1.5wt％，proclin300防腐剂0.1wt％，氯化钠0.9wt％，甘氨酸2wt％，甘露醇2wt％，海藻糖0.3wt％，余量为水。
性能检测：
(1)重复性测试
取100uL血液样本37℃温育1分钟，加入200uL凝血酶时间检测试剂1混合后，利用CS1300血凝仪(日本Sysmex公司产品)测定凝固时间。
测试的重复性是凝血酶时间检测试剂的重要指标，因此，首先，选用两种血液样本(表1中的样本1和样本2)，分别利用凝血酶时间检测试剂1进行10次测试，测试结果如表1所示。
表1凝血酶时间检测试剂1重复性测试结果
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 平均值 | 标准差 | CV％ | |
| 样本1 | 18.8 | 19.2 | 18.5 | 18.9 | 18.8 | 18.8 | 18.8 | 18.7 | 18.8 | 18.8 | 18.81 | 0.173 | 0.919 |
| 样本2 | 25.5 | 25 | 25.3 | 25.5 | 25.8 | 25.7 | 25.6 | 25.5 | 25.7 | 25.5 | 25.51 | 0.228 | 0.895 |
由表1结果显示，血液样本1利用凝血酶时间检测试剂1进行10次测试的CV值为0.919％，血液样本2利用凝血酶时间检测试剂1进行10次测试的CV值0.895％，均小于1％，说明凝血酶时间检测试剂1的重复性较高。
(2)准确度验证
将实施例1制备得到的凝血酶时间检测试剂1作为实验组，已经上市的凝血酶时间检测试剂作为对照组进行检测，对20个临床血清样本进行检测，获得了两种试剂的相关性曲线，结果如图1所示，结果表明，实施例1制备得到的凝血酶时间检测试剂1和已经上市的凝血酶时间检测试剂的相关系数为0.995，两者相关性比较好。说明本发明实施例1制备得到的凝血酶时间检测试剂1具有较好的测试准确度。
(3)稳定性测试
分别对凝血酶时间检测试剂1进行开封和不开封条件下保存时进行稳定性检测，结果如表2、表3和表4所示；其中，表2为凝血酶时间检测试剂1开封2-8℃贮藏条件下的稳定性测试结果，表3表3凝血酶时间检测试剂1开封37℃贮藏条件下的稳定性测试结果，表4为凝血酶时间检测试剂1不开封2～8℃贮藏条件下的稳定性测试结果。
表2凝血酶时间检测试剂1开封2-8℃贮藏条件下的稳定性测试结果
表3凝血酶时间检测试剂1开封37℃贮藏条件下的稳定性测试结果
表4凝血酶时间检测试剂1不开封2～8℃贮藏条件下的稳定性测试结果
由表2数据可以得出，凝血酶时间检测试剂1在开封2-8℃贮藏条件下，30天之内正常质控血浆L-1测值在正常值范围内，且变化不大，第30天测试结果相对于第一天偏差仅为4％；由表2数据可以得出，凝血酶时间检测试剂1在开封37℃贮藏条件下，7天之内正常质控血浆L-1测值在正常值范围内，第7天测试结果相对于第一天偏差仅为6％，变化不大；由表3数据可以得出，凝血酶时间检测试剂1在不开封2-8℃贮藏条件下，18个月之内正常质控血浆L-1测值在正常值范围内，第18个月测试结果相对于第0月(即制备时)的偏差仅为9％，变化不大。因此，表2～表4结果可以得出，本实施例制备的凝血酶时间检测试剂1PET塑料存放后稳定性较好。
综上，以上结果可以得出，本实施例制备的凝血酶时间检测试剂1重复性好，与已经上市的凝血酶时间检测试剂相关性高，且用PET塑料存放后的凝血酶时间检测试剂1稳定性好，本实施例制备的凝血酶时间检测试剂1能够提高凝血酶时间检测的结果稳定性。
实施例2
称取12g HEPES，5g牛血清白蛋白，1ml proclin300防腐剂，20g硫酸钠，8g丙氨酸，2g山梨醇和5g蔗糖，向上述原料中加水定容至1L，调整PH至7.5±0.1，然后通过0.22um滤膜过滤，取滤液得到缓冲液2，将缓冲液2放置到4℃下保存待用。
置到4℃下保存待用。
向缓冲液2中加入牛凝血酶冻干粉，控制牛凝血酶的活性浓度为1U/mL，得到凝血酶时间检测试剂2。
制备得到的凝血酶时间检测试剂2利用聚氯乙烯塑料瓶分装。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂2包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL，HEPES 1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％，proclin300防腐剂0.1wt％，硫酸钠2wt％，丙氨酸0.8wt％，山梨醇0.2wt％，蔗糖0.5wt％，余量为水。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂2的重复性测试结果、与已上市的凝血酶时间检测试剂的相关性结果以及稳定性测试结果与实施例1制备的凝血酶时间检测试剂1相当。
实施例3
称取9.0g HEPES，10g牛血清白蛋白，2ml proclin300防腐剂，16g氯化钠，15g亮氨酸，5g甘露醇和4g麦芽糖，向上述原料中加水定容至1L，调整PH至7.5±0.1，然后通过0.22um滤膜过滤，取滤液得到缓冲液3，将缓冲液3放置到4℃下保存待用。
向缓冲液3中加入牛凝血酶冻干粉，控制牛凝血酶的活性浓度为2U/mL，得到凝血酶时间检测试剂3。
制备得到的凝血酶时间检测试剂3利用高密度聚乙烯塑料瓶分装
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂3包括下述含量的组分：牛凝血酶2U/mL，HEPES 0.9wt％，牛血清白蛋白1wt％，proclin300防腐剂0.2wt％，氯化钠1.6wt％，亮氨酸1.5wt％，甘露醇0.5wt％，麦芽糖0.4wt％，余量为水。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂3的重复性测试结果、与已上市的凝血酶时间检测试剂的相关性结果以及稳定性测试结果与实施例1制备的凝血酶时间检测试剂1相当。
实施例4
称取6.0g HEPES，18g牛血清白蛋白，2ml proclin300防腐剂，6g硫酸钠，18g脯氨酸，10g甘露醇和2g海藻糖，向上述原料中加水定容至1L，调整PH至7.5±0.1，然后通过0.22um滤膜过滤，取滤液得到缓冲液4，将缓冲液4放置到4℃下保存待用。
向缓冲液4中加入牛凝血酶冻干粉，控制牛凝血酶的活性浓度为7U/mL，得到凝血酶时间检测试剂4。
制备得到的凝血酶时间检测试剂4利用聚丙烯塑料瓶分装
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂4包括下述含量的组分：牛凝血酶7U/mL，HEPES 0.6wt％，牛血清白蛋白1.8wt％，proclin300防腐剂0.2wt％，硫酸钠0.6wt％，脯氨酸1.8wt％，甘露醇1wt％，海藻糖0.2wt％，余量为水。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂4的重复性测试结果、与已上市的凝血酶时间检测试剂的相关性结果以及稳定性测试结果与实施例1制备的凝血酶时间检测试剂1相当。
实施例5
称取2.4g HEPES，20g牛血清白蛋白，3ml proclin300防腐剂，3g氯化钠，10g苯丙氨酸，15g山梨醇和3g蔗糖，向上述原料中加水定容至1L，调整PH至7.5±0.1，然后通过0.22um滤膜过滤，取滤液得到缓冲液5，将缓冲液5放置到4℃下保存待用。
向缓冲液5中加入牛凝血酶冻干粉，控制牛凝血酶的活性浓度为10U/mL，得到凝血酶时间检测试剂5。
制备得到的凝血酶时间检测试剂5利用聚苯乙烯塑料瓶分装
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂5包括下述含量的组分：牛凝血酶10U/mL，HEPES 0.24wt％，牛血清白蛋白2wt％，proclin300防腐剂0.3wt％，氯化钠0.3wt％，苯丙氨酸1wt％，山梨醇1.5wt％，蔗糖0.3wt％，余量为水。
本实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂5的重复性测试结果、与已上市的凝血酶时间检测试剂的相关性结果以及稳定性测试结果与实施例1制备的凝血酶时间检测试剂1相当。
由以上实施例结果可以看出，上述任一实施例制备得到的凝血酶时间检测试剂本实施例制备的凝血酶时间检测试剂重复性好，与已经上市的凝血酶时间检测试剂相关性高，稳定性好，因此能够凝血酶时间测试的稳定性，适合临床使用。且用PET，PVC，HDPE，LDPE，PP和PS中的一种为材料的塑料瓶存放后的凝血酶时间检测试剂稳定性好，塑料瓶不会影响凝血酶时间检测试剂的稳定性，且由于塑料容器(塑料瓶)相对于目前常用的玻璃瓶具有不易破碎的优点，能够降低在生产、运输过程中出现的损坏。
需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者系统中还存在另外的相同要素。
另外，在本申请中涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书和附图内容所作的等效物品或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述凝血酶时间检测试剂包括下述含量的组分：牛凝血酶1U/mL～10U/mL，4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水。
2.如权利要求1所述的凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种。
3.如权利要求1所述的凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种。
4.如权利要求1所述的凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种。
5.如权利要求1所述的凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种。
6.如权利要求1-5任一项所述的凝血酶时间检测试剂，其特征在于，所述凝血酶时间检测试剂使用塑料容器装载，其中，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、高密度聚乙烯、低密度聚乙烯、聚丙烯和聚苯乙烯中的一种。
7.一种凝血酶时间检测试剂的制备方法，其特征在于，所述凝血酶时间检测试剂的制备方法包括以下步骤：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液，其中，所述缓冲液中各原料质量百分数分别为4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.24wt％～1.2wt％，牛血清白蛋白0.5wt％～2wt％，proclin300防腐剂0.1wt％～0.3wt％，无机钠盐0.3wt％～2wt％，非极性甘氨酸0.8wt％～2wt％，糖醇0.2wt％～2wt％，多糖0.2wt％～0.5wt％，余量为水，所述无机钠盐包括氯化钠和硫酸钠中的一种，所述非极性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸和苯丙氨酸中的一种，所述糖醇包括甘露醇和山梨醇中的一种，所述多糖包括海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种；
向所述缓冲液中加入牛凝血酶冻干粉，得到凝血酶时间检测试剂，其中，所述凝血酶时间检测试剂中牛凝血酶的活性浓度为1U/mL～10U/mL。
8.如权利要求7所述的凝血酶时间检测试剂的制备方法，其特征在于，所述称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液的步骤包括：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到混合溶液；
将所述混合溶液利用0.22um的滤膜过滤，取滤液得到所述缓冲液。
9.如权利要求7所述的凝血酶时间检测试剂的制备方法，其特征在于，所述称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到缓冲液的步骤包括：
称取下述原料：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，牛血清白蛋白，proclin300防腐剂，无机钠盐，非极性氨基酸，糖醇和多糖，向称取的原料中加水混合得到混合溶液；
将所述混合溶液的pH值调节至7.4～7.6，得到所述缓冲液。
10.如权利要求7-9任一项所述的凝血酶时间检测试剂的制备方法，其特征在于，所述凝血酶时间检测试剂的制备方法还包括：
将制备得到的所述凝血酶时间检测试剂分装至塑料容器，其中，所述塑料容器的材料包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、高密度聚乙烯、低密度聚乙烯、聚丙烯和聚苯乙烯中的一种。
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