CN109239374A - 一种液体型凝血酶时间检测试剂 - Google Patents

一种液体型凝血酶时间检测试剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种液体型凝血酶时间检测试剂，属于医学体外诊断领域。本发明的液体型凝血酶时间检测试剂由下列组分组成：牛凝血酶2‑4U/mL；Tris 10～66mM；明胶0.1～3％；PEG 60000.1～2％；BSA 0.1～5％；氯化钠0.1～1.5％；苄脒盐酸盐2mM～12mM；防腐剂ProClin300 0.5～3‰；余量为水。本发明通过研究凝血反应机制，提供了一种液体型凝血酶时间检测试剂，该检测试剂采用独特的缓冲体系稳定凝血酶活性，使凝血酶时间检测试剂稳定性和重复性验证准确度更高，方便于临床应用，且降低医疗成本，互利于医疗与病患，避免资源浪费。本发明的液体型凝血酶时间检测试剂，应用于抗凝物质存在或者纤维蛋白原溶解系统异常和凝血异常监测治疗，最终将凝血酶液体试剂广泛应用于临床检测，使凝血酶时间检测更加方便、准确、标准化。

Description

一种液体型凝血酶时间检测试剂
技术领域
本发明属于医学体外诊断领域，具体涉及一种液体型凝血酶时间检测试剂。
背景技术
凝血酶是作用于凝血过程中的一种蛋白，与血浆中游离的纤维蛋白原相结合，将其转变为不可溶的纤维蛋白，从而使血液凝固。凝血酶时间(TT)是指在血浆中加入适量的凝血酶血液凝固的时间。正常的凝血时间位于12.0s-18.0s，与正常值差别3秒以上即为异常。凝血酶时间的检验方便易操作，是检查受试者血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力的过筛实验，也是临床检测凝血、抗凝及纤维蛋白原溶解系统功能的简便试验。
在临床上，TT延长常见于肝素增多或类肝素物质存在，SLE，肝病，肾病，纤维蛋白原降解产物(FDP)增多及DIC、(低)纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症，异常球蛋白血症或免疫球蛋白增多等疾病；TT缩短见于血液中有钙离子存在或血液呈酸性等。所以TT的检测对疾病的防治有很重要的意义。TT时间检测测定过程受多种因素的影响，其中检测试剂的质量是关键因素，由于目前国内的凝血试剂普遍存在产品质量不稳定、敏感性差的问题，致使检测结果不稳定，不同的临床检验之间测得的结果难以比较，尽管采用WHO标准参照品，但仍然难以把误差降低到可接受的水平。
发明内容
本发明为解决现有技术中的技术问题，提供一种准确度高、稳定性能好、使用方便的液体型凝血酶时间检测试剂，应用于抗凝物质存在或者纤维蛋白原溶解系统异常和凝血异常监测治疗，本发明的液体型凝血酶时间检测试剂可广泛应用于临床检测，使凝血酶时间检测更加方便、准确、标准化。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：
一种液体型凝血酶时间检测试剂，是由牛凝血酶、缓冲液和防腐剂组成；各组分含量如下：
牛凝血酶2-4U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 10～66mM；
明胶0.1～3％；
PEG 6000 0.1～2％；
BSA0.1～5％；
氯化钠0.1～1.5％；
苄脒盐酸盐2mM～12mM；
防腐剂：
ProClin300 0.5～3‰；
余量为水。
在上述技术方案中，所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 33mM；
明胶0.8％；
PEG 6000 0.5％；
BSA0.2％；
氯化钠0.1％；
苄脒盐酸盐8mM；
防腐剂：
ProClin300 1.5‰；
余量为水。
在上述技术方案中，所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 66mM；
明胶2％；
PEG 6000 1.5％；
BSA 1.5％；
氯化钠0.8％；
苄脒盐酸盐12mM；
防腐剂：
ProClin300 2‰；
余量为水。
在上述技术方案中，所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 50mM；
明胶1.2％；
PEG 6000 1.0％；
BSA 0.5％；
氯化钠0.4％；
苄脒盐酸盐6mM；
防腐剂：
ProClin300 1‰；
余量为水。
在上述技术方案中，所述液体型凝血酶时间检测试剂冻干后的pH为6.5～8.0。
在上述技术方案中，所述液体型凝血酶时间检测试剂的pH为7.35。
本发明的有益效果是：
本发明通过研究凝血反应机制，提供了一种液体型凝血酶时间检测试剂，该检测试剂采用独特的缓冲体系(由Tris 10～66mM；明胶0.1～3％；PEG 6000 0.1～2％；BSA 0.1～5％；氯化钠0.1～1.5％；和苄脒盐酸盐2mM～12mM组成)稳定凝血酶活性，使凝血酶时间检测试剂稳定性和重复性验证准确度更高，方便于临床应用，且降低医疗成本，互利于医疗与病患，避免资源浪费。
本发明的液体型凝血酶时间检测试剂，应用于抗凝物质存在或者纤维蛋白原溶解系统异常和凝血异常监测治疗，最终将凝血酶液体试剂广泛应用于临床检测，使凝血酶时间检测更加方便、准确、标准化。
具体实施方式
本发明提供一种液体型凝血酶时间检测试剂，是由牛凝血酶、缓冲液和防腐剂组成；各组分含量如下：牛凝血酶2-4U/mL；缓冲液由下列含量的组分组成：Tris 10～66mM；明胶0.1～3％；PEG 6000 0.1～2％；BSA 0.1～5％；氯化钠0.1～1.5％；苄脒盐酸盐2mM～12mM；防腐剂：ProClin300 0.5～3‰；余量为水。所述液体型凝血酶时间检测试剂冻干后的pH为6.5～8.0。
优选所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：牛凝血酶3.5U/mL；缓冲液由下列含量的组分组成：Tris 33mM；明胶0.8％；PEG 6000 0.5％；BSA 0.2％；氯化钠0.1％；苄脒盐酸盐8mM；防腐剂：ProClin300 1.5‰；余量为水。
优选所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：牛凝血酶3.5U/mL；缓冲液由下列含量的组分组成：Tris 66mM；明胶2％；PEG 6000 1.5％；BSA 1.5％；氯化钠0.8％；苄脒盐酸盐12mM；防腐剂：ProClin300 2‰；余量为水。
优选所述液体型凝血酶时间检测试剂各组分含量如下：牛凝血酶3.5U/mL；缓冲液由下列含量的组分组成：Tris 50mM；明胶1.2％；PEG 6000 1.0％；BSA 0.5％；氯化钠0.4％；苄脒盐酸盐6mM；防腐剂：ProClin300 1‰；余量为水。
优选所述液体型凝血酶时间检测试剂的pH为7.35。
实施例1
1、液体型凝血酶时间检测试剂的原理：
待测血浆中加入适量的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需要的时间，即为凝血酶时间。
2、不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂的制备
按照表1所示的配比配制缓冲液和防腐剂试剂：
表1不同配比试剂配制
3、液体型凝血酶时间检测试剂的制备：
将牛凝血酶冻干粉(1000/mL，1mL/瓶)在室温下复温30min，分别用上述不同配比的试剂按预期稀释比例稀释至使用终浓度为3.5U/mL，4℃保存贮藏备用。
实施例2：不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂测试流程：
测试流程：取待测血浆100μL，37℃预温3min，然后分别加入实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂100μL；测试仪器：SYSMEX CA7000凝血分析仪；测试样本：质控品血浆(靶值：10～16s)；具体比对验证结果详见具体实施例。
实施例3：本发明的液体型凝血酶时间检测试剂与市售凝血酶时间测定试剂高温稳定性比较
将实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂，置于37℃恒温箱中，按照测试流程，在SYSMEX CA7000凝血分析仪进行测试验证试剂高温稳定性，测试样本为质控品血浆(靶值：10～16s)，并选用市售试剂(市售试剂为上海太阳生物技术有限公司TT试剂)进行同步对比测试验证，结果见表2。
表2与市售TT试剂高温稳定性测定结果比较
注意事项：
1.测试样本应无气泡、溶血、黄疸、脂血；使用一次性塑料管或者硅化玻璃容器；
2.样本采集应选用枸橼酸钠抗凝剂；
3.测定温度在37℃±0.5℃，需验证温度控件的准确稳定；
4.确保实验环境清洁，无污染。
实施例4：本发明的液体型凝血酶时间检测试剂与市售凝血酶时间测定试剂开封稳定性比较
将实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂，按照测试流程，在SYSMEX CA7000凝血分析仪进行测试验证，每两天取出测定一次质控品血浆(靶值：10～16s)，连续测定45天，并选用市售试剂(市售试剂为上海太阳生物技术有限公司TT试剂)进行同步对比测试验证，结果见表3。
表3与市售TT试剂开封稳定性测定结果比较
小结：本发明所述实例配方B的2-8℃开封稳定性明显高于对比验证市售试剂，且对比验证市售试剂在30多天衰减率相当于本发明试剂开封45天试剂。说明本发明在试剂稳定性上有了大幅度提到，节约使用单位试剂成本，避免试剂浪费。
实施例5：本发明的液体型凝血酶时间检测试剂与市售凝血酶时间测定试剂机载稳定性比较
将实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂，与市售试剂均机载条件下保存，按照测试流程，在SYSMEX CA7000凝血分析仪进行机载稳定性测试验证，试剂开盖放置于试剂仓，每天取出测定一次质控品血浆(靶值：10～16s)，然后继续放置试剂仓不予取出，连续测定7天，并选用市售试剂(市售试剂为上海太阳生物技术有限公司TT试剂)进行同步对比测试验证，结果见表4。
表4与市售TT试剂机载稳定性测定结果比较
小结：本发明所述实例在SYSMEX CA7000全自动凝血分析仪(试剂仓温度15±2℃)机载稳定性明显优于市售试剂，这对于医院测试样本量大，需要长时间保持试剂机载状态下测值准确具有重要意义。
实施例6：本发明的液体型凝血酶时间检测试剂与市售凝血酶时间测定试剂重复性比较
将实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂，按照测试流程，在SYSMEX CA7000凝血分析仪进行重复性测试验证，测定质控品血浆(靶值：10～16s)，重复测试10次，并选用市售试剂(市售试剂为上海太阳生物技术有限公司TT试剂)进行同步对比测试验证，结果见表5。
表5与市售TT试剂重复性测定结果比较
小结：本发明所述实例配方B的重复性测试数据一定程度上优于对比验证市售试剂。
实施例7：本发明的液体型凝血酶时间检测试剂与市售凝血酶时间测定试剂抗干扰特异性比较
将实施例1制备的不同配比的液体型凝血酶时间检测试剂，2-8℃条件下保存。取质控血浆样本，加入干扰物质血红蛋白(游离)1000mg/dL，然后稀释成不同浓度作为测定标本，另设不加干扰物的血浆作为对照标本，连续测试3次取平均值，计算相对偏差，比较偏差的结果见表6。市售试剂为上海太阳生物技术有限公司TT试剂。
表6与市售TT试剂抗干扰特异性测定结果比较
小结：本发明所述实例配方B对血红蛋白的抗干扰较强，这对于被测样本的要求降低，可一定程度上降低了样本中血红蛋白对试剂测值的干扰。
综上所述，本发明中的液体型凝血酶时间检测试剂具有机载、开封、高温稳定性能及抗血红蛋白干扰均优于市售试剂，为临床应用提供方便，有利于保证临床测值准确性，更好的辅助医生做出合理诊断。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (6)

1.一种液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，是由牛凝血酶、缓冲液和防腐剂组成；各组分含量如下：
牛凝血酶 2-4U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 10～66mM；
明胶 0.1～3％；
PEG 6000 0.1～2％；
BSA 0.1～5％；
氯化钠 0.1～1.5％；
苄脒盐酸盐 2mM～12mM；
防腐剂：
ProClin300 0.5～3‰；
余量为水。
2.根据权利要求1所述的液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 33mM；
明胶 0.8％；
PEG 6000 0.5％；
BSA 0.2％；
氯化钠 0.1％；
苄脒盐酸盐 8mM；
防腐剂：
ProClin300 1.5‰；
余量为水。
3.根据权利要求1所述的液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 66mM；
明胶 2％；
PEG 6000 1.5％；
BSA 1.5％；
氯化钠 0.8％；
苄脒盐酸盐 12mM；
防腐剂：
ProClin300 2‰；
余量为水。
4.根据权利要求1所述的液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，各组分含量如下：
牛凝血酶3.5U/mL；
缓冲液由下列含量的组分组成：
Tris 50mM；
明胶 1.2％；
PEG 6000 1.0％；
BSA 0.5％；
氯化钠 0.4％；
苄脒盐酸盐 6mM；
防腐剂：
ProClin300 1‰；
余量为水。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，其冻干后的pH为6.5～8.0。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的液体型凝血酶时间检测试剂，其特征在于，其pH为7.35。
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