CN111929449A - 一种aptt检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及APTT检测技术领域，尤其涉及一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.05‑0.08mM；兔脑磷脂的含量为0.25‑0.5wt％；橙皮苷的含量为0.8‑1.2wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.2‑2wt％；柠檬酸锌的含量为0.5‑1wt％；防腐剂的含量为0.3‑0.5wt％，发明在试剂R1中添加橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌，橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌在协同作用下能够有效的提高试剂的稳定性，使得试剂的热稳定性高，试剂反复冻融或者长时间加热后，其血凝活性基本不受影响，便于试剂在不同环境下进行运输。

Description

一种APTT检测试剂盒
技术领域
本发明涉及APTT检测技术领域，尤其涉及一种APTT检测试剂盒。
背景技术
活化部分凝血活酶时间(APTT)测定是凝血功能检测的一项重要指标，也是术前检查的重要指标。APTT测定是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，也可作为内源性途径及共同途径凝血因子的定量试验，可检测除VII因子外的其他血浆凝血因子，特别是用于因子VIII、IX、XI、XII和前激肽释放酶的测定。同时，APTT测定可用于肝素治疗监控。APTT延长：见于凝血因子II、V、VIII、IX、XI、XII减低，纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，抗凝物质存在(如血内肝素含量增加及口服抗凝剂)，是监控肝素治疗的重要指标。APTT缩短：见于高凝状态，血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症。
目前APTT的测定均已运用半自动化或自动化的仪器，检测原理是将部分凝血活酶加入待测血浆中，再加入适当的钙离子，在Ca2+参与下纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，从而出现凝固。测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。现有的APTT的试剂一般热稳定性较差，反复冻融时会影响其血凝活性，在寒冷地区运输时比较麻烦。
因此，我们提出了一种APTT检测试剂盒用于解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种APTT检测试剂盒。
一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.05-0.08mM；兔脑磷脂的含量为0.25-0.5wt％；橙皮苷的含量为0.8-1.2wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.2-2wt％；柠檬酸锌的含量为0.5-1wt％；防腐剂的含量为0.3-0.5wt％。
优选的，所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
优选的，所述防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
优选的，所述试剂R2中，氯化钙的含量为0.2-0.5wt％。
优选的，所述试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为1-5wt％。
优选的，所述APTT检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：
S1、试剂的准备：对于试剂R1，用前从冰箱中取出平衡至室温，即可使用；对于试剂R2，用前将其37℃预热5分钟，即可使用；
S2、血浆的准备：静脉采血，然后用0.109mol/L(3.2％)枸橼酸钠与全血按1：9体积比迅速混匀，在3000r/min的转速下离心15min，收集上层血浆，即为待测血浆；
S3、进行检测：取待测血浆和平衡至室温的试剂R1各50μl，混匀，37℃准确温育3min，立即加入已预温至37℃的氯化钙溶液50μl，记录凝固时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间。
优选的，所述S3中，还可以采用全自动血凝仪或者半自动血凝仪对凝血时间进行检测。
优选的，所述S3中，还包括质量控制程序，所述质量控制程序包括以下步骤：每天测定时，都应用正常和异常质控品来评价操作技术、仪器及试剂，若质控品所得数据不在参照范围内，则该批样本检测结果无效。
优选的，所述S1中，对于试剂R2，在预热及使用后及时加盖防止蒸发。
本发明的有益效果是：
1、发明在试剂R1中添加橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌，橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌在协同作用下能够有效的提高试剂的稳定性，使得试剂的热稳定性高，试剂反复冻融或者长时间加热后，其血凝活性基本不受影响，便于试剂在不同环境下进行运输。
2、发明在试剂R2中添加少量的三酰甘油，与R1试剂混合后，三酰甘油一定程度上能够加快兔脑磷脂恢复活性，使得反应能够及时进行，便于试剂的使用。
3、本发明提出的剂盒试剂是由鞣花酸、磷脂和二价金属离子等组成的纳米级颗粒悬浮剂，外观呈透明溶液，可以用0.22μm滤膜过滤，该试剂即使长期处于静置状态，也不会有“绿色絮凝物”出现，且该试剂对肝素的敏感性，随着血浆肝素含量的增加，活化部分凝血活酶时间明显延长，该特点为口服肝素抗凝剂治疗提供了可靠的监控手段。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.05mM；兔脑磷脂的含量为0.25wt％；橙皮苷的含量为0.8wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.2wt％；柠檬酸锌的含量为0.5wt％；防腐剂的含量为0.3wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.2wt％。
进一步的，试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为1wt％。
实施例2中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.08mM；兔脑磷脂的含量为0.5wt％；橙皮苷的含量为1.2wt％；淫羊藿黄酮的含量为2wt％；柠檬酸锌的含量为1wt％；防腐剂的含量为0.5wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.5wt％。
进一步的，试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为5wt％。
实施例3中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.06mM；兔脑磷脂的含量为0.4wt％；橙皮苷的含量为1wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.5wt％；柠檬酸锌的含量为0.7wt％；防腐剂的含量为0.4wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.3wt％。
进一步的，试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为3wt％。
对比例1中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.06mM；兔脑磷脂的含量为0.4wt％；橙皮苷的含量为1wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.5wt％；柠檬酸锌的含量为0.7wt％；防腐剂的含量为0.4wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.3wt％。
对比例2中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.06mM；兔脑磷脂的含量为0.4wt％；防腐剂的含量为0.4wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.3wt％。
进一步的，试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为3wt％。
对比例3中，一种APTT检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.06mM；兔脑磷脂的含量为0.4wt％；防腐剂的含量为0.4wt％。
进一步的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
进一步的，防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
进一步的，试剂R2中，氯化钙的含量为0.3wt％。
APTT检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：
S1、试剂的准备：对于试剂R1，用前从冰箱中取出平衡至室温，即可使用；对于试剂R2，用前将其37℃预热5分钟，即可使用；
S2、血浆的准备：静脉采血，然后用0.109mol/L(3.2％)枸橼酸钠与全血按1：9体积比迅速混匀，在3000r/min的转速下离心15min，收集上层血浆，即为待测血浆；
S3、进行检测：取待测血浆和平衡至室温的试剂R1各50μl，混匀，37℃准确温育3min，立即加入已预温至37℃的氯化钙溶液50μl，记录凝固时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间。
进一步的，S3中，还可以采用全自动血凝仪或者半自动血凝仪对凝血时间进行检测。
进一步的，S3中，还包括质量控制程序，所述质量控制程序包括以下步骤：每天测定时，都应用正常和异常质控品来评价操作技术、仪器及试剂，若质控品所得数据不在参照范围内，则该批样本检测结果无效。
进一步的，S1中，对于试剂R2，在预热及使用后及时加盖防止蒸发。
检测试剂盒使用时，具体的样本要求：
静脉采血，0.109mol/L(3.2％)枸橼酸钠与全血按1：9体积比迅速混匀，2500g(或3000r/min)离心15min，收集上层血浆，2h内检测完毕(如不能2小时完成检测，样本置4℃冰箱保存应不超过4小时、-20℃下可放置2周、-70℃下可放置6个月，测定前将血浆37℃下快速融化)。
采血、贮血及测定必须使用一次性塑料器具或硅化玻璃器具，不宜使用普通玻璃试管，以免凝血因子活化。
采血时止血带不可束缚过紧，且不宜超过5min，否则将导致凝血及纤溶因子活化。
不宜使用EDTA·Na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。
红细胞比容超过55％或小于20％时应调整抗凝剂用量，抗凝剂体积(ml)＝0.00185×血液体积(ml)×(100－比容)。
样本采集避免溶血、组织液污染。抽血要顺利，抗凝要充分，决不可有凝血块，否则将影响测定的准确性。
样本暴露于空气中pH值会升高，须加塞保存或运输，避免出现泡沫。
血浆温育不宜超过10min。
检验结果的说明：
1、测定温度为37℃±1℃，需经常检查加热元件温度。温度低于36℃或高于38℃均导致APTT延长。
2、口服避孕药、雌激素、妊娠、香豆素类药物、肝素、天冬酰氨酶、纳络酮会影响APTT检测结果。
3、APTT延长：见于凝血因子II，V，VIII，IX，XI，XII减低，纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，抗凝物质存在(如血内肝素含量增加及口服抗凝剂)，是监控肝素治疗的重要指标。
4、APTT缩短：见于高凝状态，血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症等。
5、当测定结果与临床不相符时，应检查仪器、试剂、样本、质控等检测系统的每个组成部分，必要时重新测定。
对于实施例1-3以及对比例1-3，将试剂在41℃的条件下，持续加热15天-30天，然后再对正常的血浆样本进行检测。凝血时间如表1所示；
表1：经过41℃热处理后试剂对正常的血浆样本的凝血时间
Figure BDA0002654879500000101
从表1中，可以看出，实施例1-3的热稳定性高，对比例2和对比例3中未添加橙皮苷、淫羊藿黄酮和柠檬酸锌，其在加热15天后凝血时间明显变长，其在加热22天后，凝血时间相对于对比例2和对比例3的未加热组，差不多翻了一倍，试剂已经无法正常的使用，而对比例1中，添加了橙皮苷、淫羊藿黄酮和柠檬酸锌。其在加热30天后凝血时间未明显变长，说明了橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌在协同作用下能够有效的提高试剂的稳定性，使得试剂的热稳定性高。
对于实施例1-3以及对比例1-3，将试剂反复冻融，其中冷冻温度为-30℃，融化温度为5℃，然后再对正常的血浆样本进行检测。
凝血时间如表2所示；
表2：经过反复冻融处理后试剂对正常的血浆样本的凝血时间
Figure BDA0002654879500000111
从表2中，可以看出，实施例1-3的抗冻效果好，对比例2和对比例3中未添加橙皮苷、淫羊藿黄酮和柠檬酸锌，其在冻融6次后凝血时间明显变长，其在冻融12次，凝血时间相对于对比例2和对比例3的未冻融组，差不多翻了一倍，试剂已经无法正常的使用，而对比例1中，添加了橙皮苷、淫羊藿黄酮和柠檬酸锌。其在冻融12次后凝血时间稍微变长，说明了橙皮苷和淫羊藿黄酮和柠檬酸锌在协同作用下能够有效的提高试剂的稳定性，试剂具有一定程度的抗冻能力。
在表1和表2中，对比例1和实施例1相比对可以看出，三酰甘油对试剂具有一定的活化作用，实施例1一定程度上略微优于对比例1。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种APTT检测试剂盒，其特征在于，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含鞣花酸、兔脑磷脂和附加剂，R2包含氯化钙溶液；
所述附加剂包括橙皮苷、淫羊藿黄酮、柠檬酸锌、防腐剂和缓冲液；
在试剂R1中，鞣花酸的浓度为0.05-0.08mM；兔脑磷脂的含量为0.25-0.5wt％；橙皮苷的含量为0.8-1.2wt％；淫羊藿黄酮的含量为1.2-2wt％；柠檬酸锌的含量为0.5-1wt％；防腐剂的含量为0.3-0.5wt％。
2.根据权利要求1所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸钠盐缓冲液、碳酸钠缓冲液和MPOS缓冲液中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂选自叠氮钠、ProClin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，氯化钙的含量为0.2-0.5wt％。
5.根据权利要求4所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，还包括三酰甘油，三酰甘油的含量为1-5wt％。
6.根据权利要求1-5任一所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述APTT检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：
S1、试剂的准备：对于试剂R1，用前从冰箱中取出平衡至室温，即可使用；对于试剂R2，用前将其37℃预热5分钟，即可使用；
S2、血浆的准备：静脉采血，然后用0.109mol/L(3.2％)枸橼酸钠与全血按1：9体积比迅速混匀，在3000r/min的转速下离心15min，收集上层血浆，即为待测血浆；
S3、进行检测：取待测血浆和平衡至室温的试剂R1各50μl，混匀，37℃准确温育3min，立即加入已预温至37℃的氯化钙溶液50μl，记录凝固时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间。
7.根据权利要求6所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述S3中，还可以采用全自动血凝仪或者半自动血凝仪对凝血时间进行检测。
8.根据权利要求6所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述S3中，还包括质量控制程序，所述质量控制程序包括以下步骤：每天测定时，都应用正常和异常质控品来评价操作技术、仪器及试剂，若质控品所得数据不在参照范围内，则该批样本检测结果无效。
9.根据权利要求6所述的一种APTT检测试剂盒，其特征在于，所述S1中，对于试剂R2，在预热及使用后及时加盖防止蒸发。
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