CN111175357A - 一种凝血酶原时间的检测试条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种凝血酶原时间的检测试条及其制备方法,试条包括:亲水层,设置于亲水层下的扩散层,设置于亲水层与扩散层之间的第一粘接层,设置于扩散层下的红细胞分离层,设置于红细胞分离层下的试剂层,设置于试剂层下的电极层,设置于电极层下的基板,固定试剂层并位于第一粘接层与基板之间的第二粘接层;按照本发明的方法制备出的检测试条采用单孔单试剂法测试凝血酶原时间,能够适用于不同红细胞压积的样本测试,配合干式多功能化分析仪配套使用检测快速,得到的检测结果具有高准确性。
Description
技术领域
本发明涉及检测领域,特别是一种凝血酶原时间的检测试条及其制备方法。
背景技术
凝血是一种比较常见的检查项目,特别是一些血栓性疾病病人更需要做凝血的检查,这种检查项目也是手术前必须要做的,另外一些疾病需要口服抗凝药物之前也需要病人做凝血的检查。做凝血的检查作用很大,检查的结果可以及时的了解到病人是否有一些止血功能的障碍,这样以便于手术之前做好各种可能出现的应急措施,还具有防治手术大出血的作用。
凝血项目属于检验科临检检查项目之一,归属于血栓性疾病检查。为手术前必查项目、血栓前检查项目及监控临床口服抗凝药物患者。患者住院做手术前,医生总会要求患者取血做凝血4项检查,凝血四项包括凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)。其中凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)是指在缺乏血小板的血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子,凝血酶原转化为凝血酶,导致血浆凝固所需的时间。凝血酶原时间是反映血浆中凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ活性的指标。凝血酶原时间测定是检查机体外源性凝血系统功能有无障碍的过筛试验,也是临床抗凝治疗的重要监测指标。凝血酶原时间试验不仅适用于外源性凝血途径的先天性凝血疾病及获得性出血性疾病的诊断,同时对诊断重症肝炎及早期肝硬化有重要意义,也是临床上口服抗凝药物治疗监控的首选试验指标。正常的凝血酶原时间(PT)秒数为11-14秒,需与正常对照超过3s以上异常。
目前PT的临床检测多采用Quick法,其原理为在缺乏血小板的血浆内加入组织促凝血酶原激酶(组织因子)和Ca2+后凝血酶原转变为凝血酶,通过产生的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,用于检测该项目的主要为大型的血凝分析仪及其配套的生化液体试剂。其主要缺点是操作复杂而且专业,成本比较高,仪器贵重,不适合用于急救车或者户外等的检测。
虽然个别专利有描叙采用检测卡及配套的仪器测试,如CN 106680339A有提到采用电化学方法检测凝血酶原时,但由于采用两孔两试剂形式,导致测试结果因为材料问题或其他工艺问题很难实现工艺化,并且对于过高过低的细胞的压积干扰无法排除,使测试结果的准确性降低。
市场需要一种单孔单试剂法测试凝血酶原时间,且适用于不同红细胞压积的样本测试,准确性高的检测试条及其制备方法。
发明内容
为解决现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种凝血酶原时间的检测试条及其制备方法,本发明采用单孔单试剂法测试凝血酶原时间,能够适用于不同红细胞压积的样本测试,配合干式多功能化分析仪配套使用检测快速,得到的检测结果具有高准确性。
为了实现上述目标,本发明采用如下的技术方案:
一种凝血酶原时间的检测试条,包括:亲水层,设置于亲水层下的扩散层,设置于亲水层与扩散层之间的第一粘接层,设置于扩散层下的红细胞分离层,设置于红细胞分离层下的试剂层,设置于试剂层下的电极层,设置于电极层下的基板,固定试剂层并位于第一粘接层与基板之间的第二粘接层。
前述的一种凝血酶原时间的检测试条,第一粘接层组成有:第一粘接层本体,设置于第一粘接层本体上的第一通孔,设置于第一粘接层本体上的并联通第一通孔和外界的第一通道。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,第二粘接层组成有:第二粘接层本体,设置于第二粘接层本体上的第二通孔,设置于第二粘接层本体上的并联通第二通孔和外界的第二通道。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,电极层组成有:工作电极,对电极。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,试剂层由载体膜和吸附在载体膜上的反应试剂组成;反应试剂的配方按照质量份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,反应试剂的配方按照质量份数包括:5份组织因子,0.5份磷脂酰胆碱,2份羟乙基纤维素,2份牛血清白蛋白,1份海藻糖,1份聚乙二醇6000,0.1份Proclin300,0.5份triton X-405,2份氯化钙。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,成膜剂包括:羟乙基纤维素,羟甲基纤维素,羟丙基纤维素,聚乙烯吡咯烷酮,聚乙烯醇,壳聚糖,环糊精,硫酸葡萄糖。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,稳定剂包括:蛋白类稳定剂,多糖类稳定剂,聚乙二醇稳定剂,氨基酸稳定剂。
前述一种凝血酶原时间的检测试条,载体膜包括:玻纤膜,滤纸,硝酸纤维素膜,聚砜膜。
一种凝血酶原时间的检测试条的制备方法,包括如下步骤:
步骤一,反应试剂的配制;
按照如下配方准备材料:配方按照份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂;
将组织因子和磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入成膜剂、稳定剂、防腐剂、表面活性剂、促凝剂,用100ml浓度为0.1-1M,pH值为6-8的缓冲液搅拌后,冰箱保存待用;
步骤二,将载体膜浸泡在反应试剂中,干燥后得到试剂层;
步骤三,将准备好的基板、电极、双面胶、试剂层、红细胞分离层、扩散层、亲水层组成成品。
本发明的有益之处在于:
本发明采用单孔单试剂法测试凝血酶原时间;
本试条配合干式多功能化分析仪配套使用检测快速,得到的检测结果具有高准确性;
试条加入了血液分离膜,能够适用于不同红细胞压积的样本测试;
亲水层和双面胶构建了一个虹吸通道,样本通过虹吸通道,经过红细胞分离层,将红细胞与血浆分离,血浆自动吸入到试剂层进行反应,便于凝血酶原时间检测。
附图说明
图1是本发明的一种实施例的结构爆炸图;
图2是本发明的一种实施例的截面图;
图3是本发明的成品1与医院测试值的线性关系图;
图4是本发明的成品2与医院测试值的线性关系图;
图5是本发明的成品3与医院测试值的线性关系图;
图6是本发明的成品4与医院测试值的线性关系图;
图中附图标记的含义:
100基板,200电极,201工作电极,202对电极,300第二粘接层,400试剂层,500红细胞分离层,600扩散层,700第一粘接层,800亲水层。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种凝血酶原时间的检测试条,包括:亲水层800,设置于亲水层800下的扩散层600,设置于亲水层800与扩散层600之间的第一粘接层700,设置于扩散层600下的红细胞分离层500,设置于红细胞分离层500下的试剂层400,设置于试剂层400下的电极层,设置于电极层下的基板100,固定试剂层400并位于第一粘接层700与基板100之间的第二粘接层300;第一粘接层700组成有:第一粘接层700本体,设置于第一粘接层700本体上的第一通孔,设置于第一粘接层700本体上的并联通第一通孔和外界的第一通道;第二粘接层300组成有:第二粘接层300本体,设置于第二粘接层300本体上的第二通孔,设置于第二粘接层300本体上的并联通第二通孔和外界的第二通道;作为一种优选,第一粘接层700、第二粘接层300为U型双面胶。电极层组成有:工作电极201,对电极202。
作为一种实施例,基板为PET板。载体膜包括:玻纤膜,滤纸,硝酸纤维素膜,聚砜膜。电极材料为金膜或碳膜,通过印刷或粘贴或是溅镀在基板100上;红细胞分离层500在试剂层400上面,过滤样本中的红细胞;红细胞分离层500上方有扩散层600或亲水层800,购成一个凝血酶原时间检测体系。亲水层800和双面胶构建为一个虹吸通道,样本可以通过虹吸通道,经过红细胞分离层500,将红细胞与血浆分离,血浆自动吸入到试剂层400,并进行反应,便于凝血酶原时间检测。
试剂层400由载体膜和吸附在载体膜上的反应试剂组成;反应试剂的配方按照质量份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份
防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂。
作为一种实施例,组织因子包括:人,兔,猪;成膜剂包括:羟乙基纤维素,羟甲基纤维素,羟丙基纤维素,聚乙烯吡咯烷酮,聚乙烯醇,壳聚糖,环糊精,硫酸葡萄糖。稳定剂包括:牛血清白蛋白,酪蛋白等蛋白类,蔗糖,海藻糖,甘露醇等多糖类物质和聚乙二醇10000、聚乙二醇6000、聚乙二醇1000等聚乙二醇稳定剂,甘氨酸等氨基酸稳定剂。防腐剂包括:叠氮化钠,硫柳汞,苯甲酸纳,Proclin300。表面活性剂包括:tween-20,tween-80,tritonX-100,triton X-405,Emul份en B66,OP-10等。促凝剂包括:氯化钙,硝酸钙,滑石份,硅藻土。
一种凝血酶原时间的检测试条的制备方法,包括如下步骤:
步骤一,反应试剂的配制;
按照如下配方准备材料:配方按照质量份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂;
将组织因子和磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入成膜剂、稳定剂、防腐剂、表面活性剂、促凝剂,用100ml浓度为0.1-1M,pH值为6-8的缓冲液搅拌后,搅拌时间2小时,冰箱保存待用;作为一种实施例,缓冲液包括:磷酸缓冲液,TRIS缓冲液,柠檬酸缓冲液,MES缓冲液。
步骤二,将载体膜浸泡在反应试剂中,浸泡时间为5分钟;干燥后得到试剂层400,干燥条件选择45度烘箱,干燥30分钟;
步骤三,将准备好的基板100、电极、双面胶、试剂层400、红细胞分离层500、扩散层600、亲水层800组成成品。
以下通过实验验证本发明的准确性;
实施例1
去掉红细胞分离层500
1,试剂层400溶液的配制:将5g的兔脑粉和0.5g的磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入2g羟乙基纤维素、2g的牛血清白蛋白,1g的海藻糖,1g的聚乙二醇6000,以及0.1g的Proclin300,0.5g的triton X-405,2g的氯化钙,100ml浓度为0.5M,pH值为7.2的磷酸缓冲液搅拌2小时后,冰箱保存待用。
2,将玻纤膜浸泡以上的溶液中5分钟,45度烘箱干燥30分钟后为试剂层400。
3,将准备好的电极200和双面胶300、试剂层400、扩散膜600、亲水膜700组成成品1。
实施例2
相比实施例1增加红细胞分离层500
1,试剂层400溶液的配制:将5g的兔脑粉和0.5g的磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入2g羟乙基纤维素、2g的牛血清白蛋白,1g的海藻糖,1g的聚乙二醇6000,以及0.1g的Proclin300,0.5g的triton X-405,2g的氯化钙,100ml浓度为0.5M,pH值为7.2的磷酸缓冲液搅拌2小时后,冰箱保存待用。
2,将玻纤膜浸泡以上的溶液中5分钟,45度烘箱干燥30分钟后为试剂层400。
3,再按1的方式将准备好的电极200和双面胶300、试剂层400、红细胞分离层500、扩散膜600、亲水膜700组成图成品2。
实施例3
极限低浓度
1.试剂层400的配制:将4g的兔脑粉和0.5g的磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入0.1g羟乙基纤维素、1g的牛血清白蛋白,0.5g的海藻糖,0.5g的聚乙二醇6000,以及0.1g的Proclin300,0.1g的triton X-405,1g的氯化钙,100ml浓度为0.1M,pH值为8的磷酸缓冲液搅拌2小时后,冰箱保存待用。
2.将玻纤膜浸泡以上以上的溶液中5分钟,45度烘箱干燥30分钟后为试剂层400
3.将准备好的电极200和双面胶300、试剂层400、红细胞分离层500、扩散膜600、亲水膜700组成成品3。
实施例4
极限高浓度
1.试剂层400的配制:将6g的兔脑粉和0.5g的磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入5g羟乙基纤维素、5g的牛血清白蛋白,5g的海藻糖,2g的聚乙二醇6000,以及1g的Proclin300,1g的triton X-405,5g的氯化钙,100ml浓度为1M,pH值为6的磷酸缓冲液搅拌2小时后,冰箱保存待用。
2.将玻纤膜浸泡以上以上的溶液中5分钟,45度烘箱干燥30分钟后为试剂层400
3.将准备好的电极200和双面胶300、试剂层400、红细胞分离层500、扩散膜600、亲水膜700组成成品4。
将以上的成品,分别用多个手指血样品进行测试,由于本发明可以测试不同压积样本,并得出准确的结果,以下为数据为通过从多个样本中挑选出不同压积的15个典型样本进行测试,用本公司的多功能分析仪进行测试,测试不同样本的电导率,通过一定的换算成凝血酶原时间。
以下不同的实施案例测试的凝血酶原时间以及血凝仪测试的对比表
以下所有结果为两次测试结果的均值
成品1-4与医院测试值的线性关系图见图3-图6。
结果分析:用成品1与本公司的多功能分析仪测试的结果与凝血仪的结果R平方值为0.868,说明检测结果与参考分析仪的结果有一定的相关性。
用成品2与本公司的多功能分析仪测试的结果与凝血仪的结果R平方值为0.985,说明检测结果与参考分析仪的结果有很好的相关性,由于成品2在成品1的结构里增加了一层红细胞分离层500,将所有红细胞分离于试剂层400外,测试不同的压积的样本结果与参考分析仪结果相关性很好。
用成品3与本公司的多功能分析仪测试的结果与凝血仪的结果R平方值为0.931,说明检测结果与参考分析仪的结果有相关性,由于成品3在成品2的的试剂层400在各试剂成分浓度进行调节,测试不同的压积的样本结果与参考分析仪结果有相关性,但比成品2差些。
用成品4与本公司的多功能分析仪测试的结果与凝血仪的结果R平方值为0.972,说明检测结果与参考分析仪的结果有相关性,由于成品4在成品2的的试剂层400在各试剂成分浓度进行调整,测试不同的压积的样本结果与参考分析仪结果有较好的相关性,但比成品2也要差些。
通过以上不同成品测试不同压积比的样本与对比凝血仪的相关性中,成品2最好,主要是因为其增加了一层血液分离膜,同时将配方调整到最优,所以测试相关性最好,符合度也最高;最优配方按照份数包括:5份组织因子,0.5份磷脂酰胆碱,2份羟乙基纤维素,2份牛血清白蛋白,1份海藻糖,1份聚乙二醇6000,0.1份Proclin300,0.5份triton X-405,2份氯化钙。
本发明采用单孔单试剂法测试凝血酶原时间;本试条配合干式多功能化分析仪配套使用检测快速,得到的检测结果具有高准确性;试条加入了血液分离膜,能够适用于不同红细胞压积的样本测试;亲水层800和双面胶构建了一个虹吸通道,样本通过虹吸通道,经过红细胞分离层500,将红细胞与血浆分离,血浆自动吸入到试剂层400进行反应,便于凝血酶原时间检测。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解,上述实施例不以任何形式限制本发明,凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案,均落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,包括:亲水层,设置于所述亲水层下的扩散层,设置于所述亲水层与扩散层之间的第一粘接层,设置于所述扩散层下的红细胞分离层,设置于所述红细胞分离层下的试剂层,设置于所述试剂层下的电极层,设置于所述电极层下的基板,固定试剂层并位于第一粘接层与基板之间的第二粘接层。
2.根据权利要求1所述的一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述第一粘接层组成有:第一粘接层本体,设置于第一粘接层本体上的第一通孔,设置于第一粘接层本体上的并联通第一通孔和外界的第一通道。
3.根据权利要求1所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述第二粘接层组成有:第二粘接层本体,设置于第二粘接层本体上的第二通孔,设置于第二粘接层本体上的并联通第二通孔和外界的第二通道。
4.根据权利要求1所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述电极层组成有:工作电极,对电极。
5.根据权利要求1所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述试剂层由载体膜和吸附在载体膜上的反应试剂组成;所述反应试剂的配方按照质量份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂。
6.根据权利要求5所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述反应试剂的配方按照质量份数包括:5份组织因子,0.5份磷脂酰胆碱,2份羟乙基纤维素,2份牛血清白蛋白,1份海藻糖,1份聚乙二醇6000,0.1份Proclin300,0.5份triton X-405,2份氯化钙。
7.根据权利要求5所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述成膜剂包括:羟乙基纤维素,羟甲基纤维素,羟丙基纤维素,聚乙烯吡咯烷酮,聚乙烯醇,壳聚糖,环糊精,硫酸葡萄糖。
8.根据权利要求5所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述稳定剂包括:蛋白类稳定剂,多糖类稳定剂,聚乙二醇稳定剂,氨基酸稳定剂。
9.根据权利要求5所述一种凝血酶原时间的检测试条,其特征在于,所述载体膜包括:玻纤膜,滤纸,硝酸纤维素膜,聚砜膜。
10.一种凝血酶原时间的检测试条的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,反应试剂的配制;
按照如下配方准备材料:配方按照份数包括:4-6份组织因子,0.4-0.5份磷脂酰胆碱,0.1-5份成膜剂,2-12份稳定剂,0.1-1份防腐剂,0.5-1份表面活性剂,2-5份促凝剂;
将组织因子和磷脂酰胆碱加入缓冲中混合后磁力搅拌分散,然再加入成膜剂、稳定剂、防腐剂、表面活性剂、促凝剂,用100ml浓度为0.1-1M,pH值为6-8的缓冲液搅拌后,冰箱保存待用;
步骤二,将载体膜浸泡在反应试剂中,干燥后得到试剂层;
步骤三,将准备好的基板、电极、双面胶、试剂层、红细胞分离层、扩散层、亲水层组成成品。
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