CN101526538A - 液体白陶土aptt试剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种液体白陶土活化部分凝血活酶(APTT)试剂的制备方法。该试剂主要用于监测内源凝血系统诸凝血因子缺陷和相关抑制物的筛选试验，也是当前用于凝血因子、肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝物质检测的主要手段。该方法以白陶土为激活剂，提高了对凝血因子的敏感性，新颖的稳定系统解决了液体状态保持试剂稳定性的难题，具有敏感性高、使用方便、实验误差小、稳定性强、兼容性好、成本低等优点。

Description

液体白陶土APTT试剂的制备方法

技术领域

本发明涉及临床诊断试剂，具体涉及一种液体白陶土活化部分凝血活酶(APTT)试剂的制备方法，该方法还包括APTT试剂的主要组成部分。

背景技术

开展凝血实验对临床各科的疾病诊断具有重要意义，在血栓与止血检测指标中，活化部分凝血活酶时间(APTT)是检测内源性凝血途径凝血因子异常的一项很有价值的筛选试验，广泛用于出血疾病的初筛诊断，肝素抗凝治疗的监测，狼疮抗凝因子的检测，过筛测定内源途径凝血因子的缺陷，如因子VII、VIII、IX、XI、激肽释放酶原(PK)、高分子量激肽原(HMWK)以及纤维蛋白原等。

活化部分凝血活酶时间(APTT)原理是将待测血浆加入APTT试剂，37℃混匀预温一定时间，在钙离子参与下，激活内源性凝血系统，使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆的活化部分凝血活酶时间。常用的激活剂有硅藻土(商品名Celite)、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸(Ellagic acid)等。不同的部分凝血活酶、不同的激活剂和不同的激活时间对各种凝血因子缺陷、对肝素和对狼疮抗凝物质的敏感性相差很大，如白陶土对凝血因子最敏感、鞣花酸对狼疮抗凝物质敏感性最高。

APTT测定过程受多种因素的影响，其中试剂的质量是最关键因素。由于目前国内APTT试剂大多为冻干粉制剂，普遍存在产品质量不稳定、敏感性差的问题，致使检测结果不稳定，不同的临床检验实验室之间测得的结果难以比较，因此目前临床实验室所使用的试剂绝大部分为进口产品，价格昂贵。另一方面，由于液体制剂在使用的过程中不需复溶，不存在因所用水的质量或体积差异给测定结果造成的误差，有利于测定标准化的实现，因此成为APTT试剂的发展方向。

发明内容

(一)发明目的

本发明的目的是提供一种具有敏感性高、使用方便、实验误差小、稳定性强、兼容性好的APTT试剂的制备方法，最终目的是将应用该方法制成的检测试剂在临床检验上广泛应用，使APTT检验实现标准化。

(二)发明的优势

本发明采用白陶土为激活剂，制备新型液体白陶土APTT检测试剂，扩大了对凝血因子缺乏和抗凝物质筛选的范围。液体试剂具有使用方便的优点，不需复溶，避免各实验室使用蒸馏水不同、复溶体积不准确而造成的测定偏差；试剂稳定性强，开瓶后37℃能稳定30天以上；同时，该试剂兼容性强，可满足使用不同型号血凝仪的检测需要。

(三)发明内容详述

本发明的特征在于由液体白陶土、磷脂、缓冲液和稳定剂制备而成。液体APTT试剂中各试剂的终浓度依次为：0.1％白陶土， 0.2％磷脂，20mM pH7.5 Tris-HCI，0.5％聚乙二醇，1％明胶，0.1％叠氮钠。

具体实施方式

实施例一：液体白陶土APTT试剂的制备

称取1.0g白陶土溶于1000mL 20mM pH7.5 Tris-HCI缓冲液中，搅拌30min，直到整个液体呈现均一白色悬浊液，然后加入2.0g磷脂，混合均匀，37℃保温1h，最后按比例加入稳定剂(由0.5％聚乙二醇，1％明胶，0.1％叠氮钠配制而成)，混匀，即为液体白陶土APTT试剂。该试剂配制过程中，37℃保温时间以及稳定剂的组成对该试剂的稳定性影响较大，白陶土的添加量则影响该试剂的敏感性。

制备液体白陶土APTT试剂主要技术指标如下：

1.外观：液体白陶土APTT试剂为白色悬浊液，检测正常血浆活化部分凝血活酶时间值为24.6～36.8s。

2.试剂重复性：同一瓶试剂重复测定同一血浆样品，所测结果变异系数小于5％。

3.试剂批间差：不同瓶试剂测定同一血浆样品，所测结果变异系数小于8％。

4.试剂稳定性：在2℃～8℃存放不少于18个月。

实施例二：液体白陶土APTT试剂的稳定性检测

本发明的稳定性检测包括开封后稳定性、模拟运输条件稳定性、未开封加速破坏试验、长时稳定性试验。

开封后稳定性实验结果显示，60天之内正常质控血浆测值在正常值范围内，且变化不大，异常质控血浆偏差在5％以内，开封后置于25℃，37℃条件下稳定30天以上。

高温运输条件下，10天之内正常质控血浆测值在正常值范围内；异常质控血浆偏差在5％以内，与进口试剂相当。

37℃加速破坏条件下，正常质控血浆测值在1个月保持基本稳定，处于正常值范围；异常质控血浆测值变化趋势与正常质控血浆基本相同，因此在37℃加速破坏条件下，本试剂可以稳定1个月，与进口试剂稳定性具有可比性。

表1 37℃加速破坏实验长岛-APTT稳定性检测

在2-8℃条件下将该试剂贮存18个月，每隔一个月对该试剂做稳定性检测，检测仪器为ACL200血凝仪，用与仪器配套的市售的APTT试剂做对照，所用血浆为太平洋公司的正常质控血浆L-1，检测结果如表2所示。

表2本发明液体APTT与市售APTT试剂在2-8℃稳定性比较

表2表明，本发明所制备的液体白陶土APTT试剂在2-8℃条件下将该试剂贮存18个月，APTT所检测的质控血浆值均处于正常范围内，试剂稳定性强，与市售APTT试剂的相关性良好。

综上对以上各技术指标的考察结果证明，本发明方法生产的试剂操作简单、使用方便、敏感性好，稳定性强，与国外APTT试剂具有可比性，适合临床应用，可作为新一代标准化PT试剂替代进口试剂。

Claims (9)

1.一种液体白陶土活化部分凝血活酶(APTT)试剂的制备方法，其特征在于它是由激活剂、磷脂、缓冲体系和稳定剂组成。

2.按权利要求1所述方法，其特征在于以白陶土为激活剂，最适浓度为0.1％。

3.按权利要求1所述方法，其特征在于磷脂最适浓度是0.2％。

4.按权利要求1所述方法，其特征在于缓冲液系由Tris-HCI组成，浓度为20～40mM，pH7.4～pH8.0。

5.按权利要求4所述方法，其特征在于Tris-HCI缓冲液的最适浓度为20mM，最适pH为7.5。

6.按权利要求1所述方法，其特征在于稳定剂由下述原料制成：聚乙二醇0.4～1.0％，明胶0.8～1.5％，叠氮钠0.1～0.5％。

7.按权利要求6所述方法，其特征在于稳定剂中聚乙二醇的最适添加量是0.5％。

8.按权利要求6所述方法，其特征在于稳定剂中明胶最适添加量为1％。

9.按权利要求6所述方法，其特征在于稳定剂中叠氮钠最适添加量0.1％。