CN107674901B - 从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法，该提取方法通过对大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；最后，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽；这样，该方法直接对磁化后的大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，磁化过程能够使牢固的肽链出现了裂痕及部分脱落，并且与第一酶制剂、第二酶制剂、第三酶制剂配合，操作性强，其对小分子多肽的提取率高达2.77％，有助于加速肽链的酶剪切，同时减少了酶制剂的用量，从而减少了酶解带来的污染，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于生物肽分离技术领域，具体涉及一种从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法。
背景技术
肽键是由一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基缩合形成的，形成的酰胺基在蛋白质化学中称为肽键；氨基酸的分子最小，蛋白质最大，两个或以上的氨基酸脱水缩合形成若干个肽键从而组成一个肽，多个肽进行多级折叠就组成一个蛋白质分子，蛋白质有时也被称为“多肽”；生物体内已发现几百种肽，是机体完成各种复杂的生理活动必不可少的参与者；在诸多的多肽中，由于小分子活性肽具有易吸收，不增加人体消化负担，营养价值极其高而广泛被当代人们所意识和接受，逐渐成为当下人们养生品而受热捧。
现有的小分子肽提取技术中，提取方法单一，提取效率不高，并且酶制剂用量较高，适用场合受限制，所制备的小分子肽活性难以用于肽类药物和肽类保健品。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的旨在提供从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法。
本发明提供的一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽。
上述方案中，所述步骤1具体为：采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出残渣，获得大鲵骨汤。
上述方案中，所述步骤2具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，将磁化后的所述大鲵骨汤冷却至45-50℃，再采用盐酸溶液调节所述大鲵骨汤的pH值至5.0-6.0，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，搅拌加入三种所述酶制剂后的大鲵骨汤6-8h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，然后加热灭酶去腥，最后冷却至室温，过滤后获得的滤液为酶剪切液。
优选地，所述步骤2中将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述大鲵骨汤，搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第二酶制剂，再搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第三酶制剂。
上述方案中，所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶。
上述方案中，所述步骤3具体为：向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在18-21℃下激活24h，直至所述上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽。
上述方案中，所述蛋白分离液为99％酒精。
上述方案中，所述步骤3之后还包括：步骤4，将所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽。
上述方案中，所述步骤3之后还包括：步骤5，将所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
本发明还提供了一种大鲵小分子肽，所述大鲵小分子肽由如上述方案所述的大鲵肉骨小分子肽的提取方法制备，所述大鲵小分子肽的分子量为80-1000道尔顿。
与现有技术相比，本发明提出了从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法，该提取方法通过对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；然后，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；最后，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽；这样，该方法直接对磁化后的大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，磁化过程能够使牢固的肽链出现了裂痕及部分脱落，并且，第一酶制剂、第二酶制剂、第三酶制剂分阶段进行肽链的酶剪切，操作性强，其对小分子多肽的提取率高达2.77％，磁化过程有助于加速肽链的酶剪切，同时减少了酶制剂的用量，从而减少了酶解带来的污染，降低了生产成本。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法的流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，如图1所示，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
具体为：采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出残渣，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，将磁化后的所述大鲵骨汤冷却至45-50℃，再采用盐酸溶液调节所述大鲵骨汤的pH值至5.0-6.0，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，搅拌加入三种所述酶制剂后的大鲵骨汤6-8h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，然后加热灭酶去腥，最后冷却至室温，过滤后获得的滤液为酶剪切液。
其中，所述步骤2中将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述大鲵骨汤，搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第二酶制剂，再搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第三酶制剂。
其中，所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶；
在采用酶制剂进行肽链剪切之前增加磁化处理，磁化过程能够使牢固的肽链出现了裂痕及部分脱落，磁化处理给酶剪切肽链打开进入房间的门，磁化处理与第一酶制剂、第二酶制剂、第三酶制剂配合进行肽链的酶剪切，操作性强，其对小分子多肽的提取率高达2.77％，磁化过程有助于加速肽链的酶剪切，同时减少了酶制剂的用量，从而减少了酶解带来的污染，降低了生产成本。
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽。
具体为，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在18-21℃下激活24h，直至所述上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽。
其中，所述蛋白分离液为99％酒精。
所述步骤3之后还包括：步骤4，将所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥90％，含量≥20mg/kg体重。
所述步骤3之后还包括：步骤5，将所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥98％。
本发明实施例提供一种大鲵小分子肽，该大鲵小分子肽由上述实施例所述的大鲵肉骨小分子肽的提取方法制备，所述大鲵小分子肽的分子量为80-1000道尔顿。
本发明提出了从大鲵肉骨提取的小分子肽及其提取方法，该提取方法通过对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；然后，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；最后，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽；这样，该方法直接对磁化后的大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，磁化过程能够使牢固的肽链出现了裂痕及部分脱落，并且，第一酶制剂、第二酶制剂、第三酶制剂分阶段进行肽链的酶剪切，操作性强，其对小分子多肽的提取率高达2.77％，磁化过程有助于加速肽链的酶剪切，同时减少了酶制剂的用量，从而减少了酶解带来的污染，降低了生产成本。
实施例1
本发明实施例1提供一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
具体为：去除大鲵的内脏，然后采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，纯净水为大鲵肉骨重量的2倍，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出残渣，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，再将所述大鲵骨汤冷却至48℃，采用盐酸溶液调节所述大鲵骨汤的pH值，待所述大鲵骨汤的pH值为5.5，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，酶制剂在48℃对大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，在酶剪切过程中不断搅拌，搅拌加入所述酶制剂后的大鲵骨汤7h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，对酶剪切完毕的大鲵骨汤加热至灭酶，再加入肉桂以去除腥味，最后冷却至室温，分离过滤，过滤后获得的滤液为酶剪切液。
其中，所述步骤2中将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述大鲵骨汤，搅拌15min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第二酶制剂，再搅拌15min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第三酶制剂；所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶；
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽。
具体为，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在20℃下激活24h，直至上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽。
所述步骤3之后还包括：步骤4，将所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥90％，含量≥20mg/kg体重。
所述步骤3之后还包括：步骤5，将所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥98％。
实施例2
本发明实施例2提供一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
具体为：去除大鲵的内脏，然后采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，纯净水为大鲵肉骨重量的2倍，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出残渣，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，再将所述大鲵骨汤冷却至45℃，采用pH调节剂调节所述大鲵骨汤的pH值，待所述大鲵骨汤的pH值为5.0，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，酶制剂在45℃对大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，在酶剪切过程中不断搅拌，搅拌加入所述酶制剂后的大鲵骨汤6h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，对酶剪切完毕的大鲵骨汤加热至灭酶，再加入肉桂以去除腥味，最后冷却至室温，分离过滤，过滤后获得的滤液为酶剪切液。
其中，所述步骤2中将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述大鲵骨汤，搅拌12min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第二酶制剂，再搅拌12min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第三酶制剂；所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶；
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽。
具体为，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在18℃下激活24h，直至上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽。
所述步骤3之后还包括：步骤4，将所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥90％，含量≥20mg/kg体重。
所述步骤3之后还包括：步骤5，将所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥98％。
实施例3
本发明实施例3提供一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
具体为：去除大鲵的内脏，然后采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，纯净水为大鲵肉骨重量的2倍，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出骨渣，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，再将所述大鲵骨汤冷却至50℃，采用pH调节剂调节所述大鲵骨汤的pH值，待所述大鲵骨汤的pH值为6.0，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，酶制剂在50℃对大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，在酶剪切过程中不断搅拌，搅拌加入所述酶制剂后的大鲵骨汤8h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，对酶剪切完毕的大鲵骨汤加热至灭酶，再加入肉桂以去除腥味，最后冷却至室温，分离过滤，过滤后获得的滤液为酶剪切液。
其中，所述步骤2中将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述大鲵骨汤，搅拌15min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第二酶制剂，再搅拌15min后按所述大鲵肉骨重量0.01％加入所述第三酶制剂；所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶；
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽。
具体为，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在21℃下激活24h，直至上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽。
所述步骤3之后还包括：步骤4，将所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥90％，含量≥20mg/kg体重。
所述步骤3之后还包括：步骤5，将所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
该提纯方法获得的含盐大鲵小分子肽的纯度≥98％。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种大鲵肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，对大鲵进行清洗粉碎，获得大鲵肉骨，蒸煮所述大鲵肉骨，获得大鲵骨汤；
步骤2，对所述大鲵骨汤进行磁化，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入磁化后的所述大鲵骨汤进行肽链的酶剪切，获得酶剪切液；
所述步骤2具体为：将所述大鲵骨汤置于强力磁化机，在4700高斯磁场下磁化5s，将磁化后的所述大鲵骨汤冷却至45-50℃，再采用盐酸溶液调节所述大鲵骨汤的pH值至5.0-6.0，然后将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，搅拌加入三种所述酶制剂后的大鲵骨汤6-8h，直至所述大鲵骨汤的肽链的酶剪切完毕，然后加热灭酶去腥，最后冷却至室温，过滤后获得的滤液为酶剪切液；
所述将第一酶制剂、第二酶制剂和第三酶制剂依次分阶段加入调节后的所述大鲵骨汤，具体为：将所述第一酶制剂按所述大鲵肉骨重量0.01%加入所述大鲵骨汤，搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01%加入所述第二酶制剂，再搅拌12-18min后按所述大鲵肉骨重量0.01%加入所述第三酶制剂；
所述第一酶制剂为胰蛋白酶，所述第二酶制剂为胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制剂为弹性蛋白酶；
步骤3，向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，离心分离后过滤获得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷却离心分离获得大鲵小分子肽；
所述步骤3具体为：向所述酶剪切液中加入蛋白分离液，加热反应，待分离后的所述酶剪切液冷却后，离心分离10min，除去滤渣获得上清液，向所述上清液中加入酒精在18-21℃下激活24h，直至所述上清液为浆状，离心分离去除上层清液获得大鲵小分子肽；
步骤4，将所述步骤3获得的所述大鲵小分子肽提纯为含盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至100ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-75层析柱过柱层析并采用Tris-Hcl缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-280nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得含盐大鲵小分子肽；
步骤5，将所述步骤3获得的所述大鲵小分子肽提纯为脱盐大鲵小分子肽，具体为：采用Tris-Hcl缓冲液将所述大鲵小分子肽溶鲜并定容至10ml，获得溶液；将所述溶液在2000r/min转速下离心分离10min，收集上层清液；将所述上层清夜转入G-25层析柱过柱层析并采用三蒸水缓冲液洗脱，获得层析液，收集峰值段为200-250nm的所述层析液并进行冷冻干燥，获得脱盐大鲵小分子肽。
2.根据权利要求1所述的大鲵肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，所述步骤1具体为：采用粉碎机对大鲵进行粉碎，清洗后获得大鲵肉骨，将所述大鲵肉骨和纯净水加入蒸煮罐内，在0.2MPa压力下以132℃高压蒸煮60min，排出残渣，获得大鲵骨汤。
3.根据权利要求1或2所述的大鲵肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，所述蛋白分离液为99%酒精。
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