CN107561187A

CN107561187A - 一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法

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Publication number: CN107561187A
Application number: CN201710804284.3A
Authority: CN
Inventors: 陈梅雪; 柴玉峰; 王瑞; 柳蒙蒙; 魏源送
Original assignee: Research Center for Eco Environmental Sciences of CAS
Current assignee: Research Center for Eco Environmental Sciences of CAS
Priority date: 2017-09-08
Filing date: 2017-09-08
Publication date: 2018-01-09

Abstract

本发明公开了一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法。该方法包括步骤：(1)将待测污染水体固液分离后取上清液进行膜过滤，之后调节滤液的pH值至X，X为3.5～4间的任意值；(2)将调节pH值后的滤液过HLB柱进行富集，过柱完成后萃取得到抗生素的洗脱液；(3)采用高效液相色谱串联质谱法对抗生素的含量进行检测。本发明的方法检测限低、检测精度高，能够同步检测多达20几种抗生素，具有很好的实际应用前景。

Description

一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法

技术领域

本发明属于分析化学检测技术领域，具体地涉及一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法，可应用于水质检测和生物医学等领域。

背景技术

自20世纪40年代初，抗生素开始陆续在全世界使用。抗生素在环境中的水、土壤等中迁移转化对环境造成了巨大压力，其导致的细菌耐药性已成为威胁人类健康的重要问题。近年来，学术领域内对于环境中抗生素污染的研究已逐渐成为热点。抗生素主要污染来源研究对象由排放量较大的制药废水和医院发展到了城市污水处理厂及畜禽养殖业(Heberer and Stan,1997)。国际上对于污(废)水中抗生素的残留问题也予以了越来越多的关注，而国内尚缺少相关的系统性数据。因此，在我国开展畜禽养殖业粪污中抗生素残留污染的系统调查，获得区域性数据，对于揭示我国畜禽养殖业中抗生素的污染情况、评价其生态风险具有重要意义。

抗生素已广泛应用于医疗医用、畜禽养殖、疾病预防、治疗以及促生长(Zhang andLi,2011)，在我国兽用抗生素的平均使用量每年达到约6000吨(Zhao and Dong et al.,2010)。据估计，大约75％的抗生素是不被动物所利用，通过尿液或粪便以原药或代谢产物的形式从动物排泄到环境中，导致环境中耐药水平的提高，成为重要的新型环境污染物，严重危害生态环境安全和人类健康(Manzetti and Ghisi,2014)。污(废)水中成分复杂，抗生素多以痕量(ng·L^-1)存在(Chee-Sanford and Mackie et al.,2009)，闾幸等人检测出养猪废水中四环素类浓度为0.4～164.26μg·L^-1，磺胺和喹诺酮类分别浓度为0.003～3.470μg·L^-1和0.08～5.920μg·L^-1(闾幸与余卫娟等,2014)；Luo等(Hou and Wan et al.,2015)研究发现8种兽用抗生素在养猪场和鱼塘的检出浓度在0.12～47μg·L^-1之间，比当地污水处理厂的检出浓度高1～2个数量级，集约化养猪业给农村水体带来了严重的抗生素污染。美国在2008年的一项研究表明，24个大城市的饮用水含有抗生素等多种药物成分，至少4100万人在日常生活中饮用这种存在安全隐患的水(洪蕾洁与石璐等,2012)。中国作为抗生素生产和使用大国，抗生素在水环境中的污染比其他国家严重的多，特别是在人口密度最高、发展最快的地区之一的珠江三角洲。已有研究显示，深圳河的抗生素污染非常严重，共检测出7种抗生素，其中红霉素(脱水)最高含量达到1340ng/L，明显高于其他地区河流中药物含量(洪蕾洁与石璐等,2012)。Kim等人(Kim and Hong et al.,2013)在畜禽污水处理厂中检测到磺胺类和四环素类抗生素浓度范围在0.2-41.8μg·L^-1和0.8-4.0μg·L^-1。根据饲养动物的类型和育龄，兽用抗生素种类多，有大环内酯类、林可胺类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类等(秦燕与张美金等,2005；严丽娟与张峰等,2010)，建立快速高效的污(废)水中多种抗生素的同步检测方法对于研究抗生素在处理过程中的迁移转化规律尤为重要。医院病人集中，抗生素使用较为频繁，各种污水和排泄物中均含有抗生素，是抗生素的主要排放单位。家庭使用的抗生素则通过人体排泄进入生活污水。多方面的资料表明，污水处理厂的常规生物处理技术对污水中相当一部分抗生素没有明显的去除效果，部分将随污水处理厂出水进入受纳水体(Drewes and Heberer et al.,2002)。因此，对于含有抗生素的医院污水或城市生活污水，无论是否经过处理，只要实施排放，均可能导致对地表水、地下水以及农田土壤环境的污染。另外，每年都有相当数量的抗生素由于过期丢弃而造成污染。

目前的分析方法中，废水中抗生素的预处理主要采用固相萃取(Jùrgensen andHalling-Sùrensen,2000；Chen and Liu et al.,2015)，检测方法主要使用液相色谱-质谱联用法(Díaz-Cruz and López De Alda et al.,2003；Zhang and Tang et al.,2013)。尤其养殖废水基质复杂，所含抗生素种类较多，建立多种抗生素快速准确的分析方法成为研究者的努力的目标。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法，以期解决上述现有技术中存在的至少部分技术问题。

为实现上述目的，本发明提供一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法，包括步骤：

(1)将待测污染水体固液分离后取上清液进行膜过滤，之后调节滤液的pH值至X，X为3.5～4间的任意值；

(2)将调节pH值后的滤液过HLB柱进行富集，过柱完成后萃取得到抗生素的洗脱液；

(3)采用高效液相色谱串联质谱法对抗生素的含量进行检测；

其中，所述抗生素包括盐酸四环素、4-差向四环素盐酸盐、金霉素、盐酸差向金霉素、土霉素、4-差向土霉素、青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、螺旋霉素、新螺旋霉素、克拉霉素、罗红霉素、诺氟沙星、环丙沙星、替米考星、恩诺沙星、氧氟沙星、磺胺甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶-d4、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺嘧啶和磺胺甲嘧啶中的任意两种或两种以上。

步骤(1)中，所述固液分离的方法可为本领域常规所述，优选离心，更优选以5000r/min离心10min后取上清液。

步骤(1)中，所述膜过滤优选采用0.45μm的滤膜进行过滤。

步骤(1)中，所述调节滤液的pH值优选使用1mol·L^-1的盐酸调节滤液的pH为3.85，更优选向调节pH值后的滤液中加入适量的饱和Na₂EDTA溶液，以防止抗生素中四环素类抗生素与金属离子螯合，影响检测值。

步骤(2)中，所述HLB柱是本领域常规所指，即指Waters Oasis HLB固相萃取小柱，可购自百灵威科技有限公司。

步骤(2)中，优选地，在所述富集之前，所述HLB柱先依次采用乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水淋洗活化，更优选所述乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水的使用体积为1:1:1。

步骤(2)中，所述过HLB柱优选控制流速3～5mL/min。

步骤(2)中，在所述过柱完成后，优选先依次采用5％的甲醇、超纯水冲洗柱子，之后对柱子进行抽真空干燥，然后再依次采用甲醇、由甲醇与乙酸乙酯按体积比1:1组成的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液，最后将洗脱液用惰性气体吹扫至近干后用10％甲醇定容。更优选地，所述抽真空干燥的时间为30min，所述惰性气体优选氮气。

步骤(3)的操作优选如下：配制各浓度梯度的包括所述多种抗生素的混合标准品溶液，利用高效液相色谱串联质谱法同时测定混合标准品溶液中各抗生素的含量，得出各抗生素的标准曲线和线性回归方程；再在同样的条件下利用高效液相色谱串联质谱法测定步骤(2)所得洗脱液并对照所述标准曲线和线性回归方程，得到待测污染水体中各抗生素的含量。

步骤(3)中，所述高效液相色谱的条件优选如下：色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈和0.1％甲酸溶液，柱温35℃，流速0.3mL/min；梯度洗脱程序:0～1min，90％乙腈；1～10min，90％～80％乙腈；10～20min，80％～50％乙腈；20～25min，50％～50％乙腈；25～26min，50％～90％乙腈；26～35min，90％～90％乙腈，进样量10uL。

步骤(3)中，所述质谱条件优选如下：电喷雾离子源；正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90℃和350℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70L/h；毛细管电压为4kV；检测方式为MRM模式，采用ESI-MS/MS正离子检测，用注射泵直接进入的方式，测定每个化合物的母离子、子离子，并优化锥孔电压和碰撞能。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

与现有技术相比，本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种用于各类污染水体中抗生素的同步快速检测方法，即通过有效提取污染水体中的抗生素，在优化的液相色谱和质谱条件下利用高效液相色谱串联质谱法对污染水体中多种抗生素进行同步检测，以克服现有抗生素检测方法成本高、检测抗生素种类少和检测限高的缺点与不足，对进一步开展污(废)水中多种抗生素残留相关研究奠定了基础。本发明的方法检测限低、检测精度高，能够同步检测多达20几种抗生素，具有很好的实际应用前景。

附图说明

图1显示实施例1中待测的24种抗生素的总离子流图，各编号为表1中各抗生素编号。

图2显示实施例1中各抗生素的固相萃取回收率。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。

固相萃取的条件是影响多种抗生素同步检测的重要影响因素，本发明优化了前处理固相萃取方法，建立了20多种抗生素同步分析的方法，对进一步开展污染水体中多种抗生素残留相关研究奠定了基础。

具体地，本发明提供一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法，包括步骤：

(3)采用高效液相色谱串联质谱法对抗生素的含量进行检测。

步骤(1)中，所述固液分离的方法可为本领域常规所述，优选离心，更优选以5000r/min离心10min后取上清液；所述膜过滤采用0.45μm的滤膜进行过滤；所述调节滤液的pH值使用1mol·L^-1的盐酸调节滤液的pH为3.85。

步骤(2)中，在所述富集之前，所述HLB柱先依次采用乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水淋洗活化，更优选所述乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水的使用体积为1:1:1；所述过HLB柱控制流速3～5mL/min；在所述过柱完成后，先依次采用5％的甲醇、超纯水冲洗柱子，之后对柱子进行抽真空干燥，然后再依次采用甲醇、由甲醇与乙酸乙酯按体积比1:1组成的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液，最后将洗脱液用惰性气体吹扫至近干后用10％甲醇定容。其中，优选所述抽真空干燥的时间为30min，所述惰性气体为氮气。

在本发明一较佳实施方式中，步骤(3)的操作如下：配制各浓度梯度的包括所述多种抗生素的混合标准品溶液，利用高效液相色谱串联质谱法同时测定混合标准品溶液中各抗生素的含量，得出各抗生素的标准曲线和线性回归方程；再在同样的条件下利用高效液相色谱串联质谱法测定步骤(2)所得洗脱液并对照所述标准曲线和线性回归方程，得到待测污染水体中各抗生素的含量。

其中，所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈和0.1％甲酸溶液，柱温35℃，流速0.3mL/min；梯度洗脱程序:0～1min，90％乙腈；1～10min，90％～80％乙腈；10～20min，80％～50％乙腈；20～25min，50％～50％乙腈；25～26min，50％～90％乙腈；26～35min，90％～90％乙腈，进样量10uL。

其中，所述质谱条件如下：电喷雾离子源；^[1][1]正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90℃和350℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70L/h；毛细管电压为4kV；检测方式为MRM模式，采用ESI-MS/MS正离子检测，用注射泵直接进入的方式，测定每个化合物的母离子、子离子，并优化锥孔电压和碰撞能。

下面列举若干具体的实施例，以对本发明的实施和技术效果做更进一步的说明。

实施例1标准曲线、检出限、定量限和回收率的测定

(1)抗生素标准储备液的配制

待测抗生素种类包括四环素(TC)、4-差向四环素盐酸盐(E-TC)、金霉素(CTC)、盐酸差向金霉素(E-CTC)、土霉素(OTC)、4-差向土霉素(E-OTC)、青霉素(PCN)、氨苄西林(AMP)、头孢噻肟(CTX)、新螺旋霉素(NSPM)、螺旋霉素(SPM)、克拉霉素(CLR)、泰乐菌素(TLY)、罗红霉素(NERY)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、替米考星(TIL)、恩诺沙星(ENR)、氧氟沙星(OFX)、磺胺甲基嘧啶(SMZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMX)、磺胺甲二唑(SML)、磺胺嘧啶(SD)和磺胺甲嘧啶(SMN)，共24种。精确称取药品各0.010g，用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，混匀，得到质量浓度1000mg·L-1的储备液，置于-20℃冰箱内避光保存，精密量取各标准储备溶液10μL至10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成1.0mg·L^-1的混合标准中间溶液。

准确移取24种单标储备液10μL至同一个10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为100μg/L的混合标准液①。

准确移取混合标准液①5mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为50μg/L的混合标准液②。

准确移取混合标准液②2mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为10μg/L的混合标准液③。

准确移取混合标准液③5mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为5μg/L的混合标准液④。

准确移取混合标准液④5mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为1μg/L的混合标准液⑤。

准确移取混合标准液⑤5mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为0.5μg/L的混合标准液⑥。

准确移取混合标准液⑥5mL至10mL棕色容量瓶中用初始流动相定容，经过超声后混合均匀，配制成各个抗生素都为0.1μg/L的混合标准液⑦。

(2)缓冲液的配制

Na₂EDTA-McIlvaine缓冲溶液的配制：将1L 0.1mol·L-1柠檬酸溶液和625mL0.2mol·L-1磷酸氢二钠混匀，并加入60.5g Na₂EDTA溶解后混合均匀，用1mol·L-1盐酸调节pH＝3.85±0.1。

(3)实验步骤

将各个浓度的标准液过0.22μm的针头滤器到棕色进样瓶，再利用高效液相色谱串联质谱法同时测定混合标准液中24种抗生素的含量，具体条件如下：

(I)色谱条件：色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈(A)和0.1％甲酸溶液(B)，柱温35℃，流速0.3mL/min；梯度洗脱程序:0～1min，90％A，1～10min，90％～80％A；10～20min，80％～50％A；20～25min，50％～50％A；25～26min，50％～90％A；26～35min，90％～90％A，进样量10μL，24种总离子流图(TIC)如图1所示。

(II)质谱条件：电喷雾离子源；^[1][1]正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90℃和350℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70L/h；毛细管电压为4kV。检测方式为MRM模式，采用ESI-MS/MS正离子检测，用注射泵直接进入的方式，测定每个化合物的母离子、子离子，并优化锥孔电压、碰撞能，24种抗生素质谱条件见表1。

具体的仪器操作参照安捷伦1200液相色谱仪和6410质谱仪的仪器操作手册。

表1 24种抗生素的质谱分析参数

(4)实验结果

按步骤(3)所述方法对混合标准液进行测定(每个浓度重复3次)，并采用外标法(抗生素标准品)对样品中浓度进行定量分析，线性方程浓度范围由2.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0、500.0和1000μg·L^-1等8个浓度组成。由于现实中很难找到不受抗生素污染的养猪场废水，因此，采用超纯水作为添加基质来研究方法的可靠性和重现性，而基质的背景污染对方法回收率和检出限计算影响甚大，以标准偏差比上标准曲线的斜率乘以信噪比3计算仪器检出限(instrument detection limit，IDL)。整个流程重复3次，计算不同水样的方法精密度，结果如表2所示。24种抗生素的标准曲线的线性方程、相关系数、检测限及定量限请一并参见表2。

表2 24种抗生素的线性范围、线性回归方程、相关系数和检出限

仪器的检出限为3倍信噪比时的浓度，仪器定量限为10倍信噪比时的浓度，其中氨苄西林响应值最大，检出限在0.03～3.0μg·L^-1，相关性系数为R²为0.990～0.999，满足分析要求。由表2可以看出，利用本发明的方法可以同步检测24种抗生素，检测限低，线性关系好(相关系数>99％)。本实施例中，利用本发明所述方法的回收率请参见图2。

本实施例中，确定了萃取体系的最佳pH值为3.85，用乙酸乙酯和甲醇(v:v，2:7)进行洗脱，其中5大类抗生素的回收率均大于50％，分析时间较短并且加标回收率好，检出限较低，证明本发明的方法适合养猪场废水中多种抗生素的同步分析。

实施例2畜禽养殖废水中24种抗生素的检测

用与实施例1相同的方法和条件检测某废水水体样本，实验步骤如下：

(1)将所测猪场废水100mL样品于5000r·min^-1离心10min，取上清液过0.45μm滤膜，用1mol·L^-1的盐酸调节滤液pH值为3.85，加入100μL饱和Na₂EDTA溶液。

(2)SPE固相萃取柱(Oasis HLB柱，6mL/500mg)，预先采用5mL乙酸乙酯，5mL甲醇，5ml pH＝3.85纯水依次淋洗活化。开启真空泵，控制流速约为3-5mL·min^-1将过膜上清液上柱，上样量为5mL。过柱完成后，分别用5mL 5％甲醇水、5mL超纯水冲洗小柱，对HLB柱抽真空干燥30min，最后，用2mL甲醇和7mL50％甲醇+50％乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液并在室温下用N₂吹扫至近干，用10％甲醇定容至1mL，待测。

(3)在LC-MS/MS仪器上检测。

(II)质谱条件：电喷雾离子源；正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90℃和350℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70L/h；毛细管电压为4kV。检测方式为MRM模式，采用ESI-MS/MS正离子检测，用注射泵直接进入的方式，测定每个化合物的母离子、子离子，并优化锥孔电压、碰撞能，24种抗生素质谱条件见表1。

按上述实验步骤所述方法对混合标准液进行测定(每个浓度重复3次)，并采用外标法(抗生素标准品)对样品中浓度进行定量分析，线性方程浓度范围由2.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0、500.0和1000μg·L^-1等8个浓度组成。结果显示调查的3个猪场的抗生素含量，发现5大类抗生素均有被检出，四环素类药物在所有猪场中均含有，并且与Ben(Ben,Qiang et al.2008)的检测结果相当，说明此同步检测方法适用于猪场废水的多种抗生素同步检测。

在畜禽养殖废水中，6种四环素类、3种β-内酰胺类、6种大环内酯类、4种喹诺酮类和5种磺胺类抗生素分别在0.005^-1μg·mL^-1和0.005-0.5μg·mL^-1、0.005-1.0μg·mL^-1、0.01-1.0μg·mL^-1、0.05-1.0μg·mL^-1范围内线性良好，相关系数R²＞0.99，5大类抗生素的检测限分别为0.03-3.0μg·L^-1、0.5-1.0μg·L^-1、0.5-1.5μg·L^-1、0.5-0.8μg·L^-1和0.5-1.0μg·L^-1，确定了萃取体系的pH值为3.85，用甲醇和乙酸乙酯(v:v＝11:7)进行洗脱，5大类抗生素的回收率均大于50％，分析时间较短并且加标回收率好，检出限较低。证明此方法适合养猪废水中多种抗生素的同步分析。

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种同步检测污染水体中多种抗生素的方法，包括步骤：

(3)采用高效液相色谱串联质谱法对抗生素的含量进行检测；

2.根据权利要求1所述的方法，步骤(1)中，所述固液分离的方法为离心，更优选以5000r/min离心10min后取上清液；

所述膜过滤采用0.45μm的滤膜进行过滤。

3.根据权利要求1所述的方法，步骤(1)中，所述调节滤液的pH值使用1mol·L^-1的盐酸调节滤液的pH为3.85。

4.根据权利要求1所述的方法，步骤(2)中，在所述富集之前，所述HLB柱先依次采用乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水淋洗活化，更优选所述乙酸乙酯、甲醇和pH为X的纯水的使用体积比为1:1:1。

5.根据权利要求1所述的方法，步骤(2)中，所述过HLB柱控制流速3～5mL/min。

6.根据权利要求1所述的方法，步骤(2)中，在所述过柱完成后，先依次采用5％的甲醇、超纯水冲洗柱子，之后对柱子进行抽真空干燥，然后再依次采用甲醇、由甲醇与乙酸乙酯按体积比1:1组成的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液，最后将洗脱液用惰性气体吹扫至近干后用10％甲醇定容。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述抽真空干燥的时间为30min，所述惰性气体为氮气。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)的操作如下：配制各浓度梯度的包括所述多种抗生素的混合标准品溶液，利用高效液相色谱串联质谱法同时测定混合标准品溶液中各抗生素的含量，得出各抗生素的标准曲线和线性回归方程；再在同样的条件下利用高效液相色谱串联质谱法测定步骤(2)所得洗脱液并对照所述标准曲线和线性回归方程，得到待测污染水体中各抗生素的含量。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈和0.1％甲酸溶液，柱温35℃，流速0.3mL/min；梯度洗脱程序:0～1min，90％乙腈；1～10min，90％～80％乙腈；10～20min，80％～50％乙腈；20～25min，50％～50％乙腈；25～26min，50％～90％乙腈；26～35min，90％～90％乙腈，进样量10uL。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述质谱条件如下：电喷雾离子源；正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90℃和350℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70L/h；毛细管电压为4kV；检测方式为MRM模式，采用ESI-MS/MS正离子检测，用注射泵直接进入的方式，测定每个化合物的母离子、子离子，并优化锥孔电压和碰撞能。