CN105929047A - 一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法 - Google Patents

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朱英
邵艳秋
田超
杨凯
唐厚全
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Abstract

本发明提供了一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，属于分析化学领域；其所述的测试方法包括前处理、离心、富集、洗脱、HPLC检测五个步骤，可检测磺胺类、四环素类、大环内酯类三大类抗生素。本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰项；本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。

Description

一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法。
背景技术
在国内外的规模化畜禽养殖场中，抗生素被广泛地添加到动物饲料和饮用水中，用以预防和治疗动物传染病及促进动物生长。抗生素可能在动物体内选择性地培育出耐药菌株，通过食物链间接传染到人类，而进入环境中的耐药菌株通过直接接触感染人类。此外，长期饮用含低浓度抗生素的自来水，也可能在人体内选择性地培育出耐药菌株。由于很多兽用和人用抗生素的化学结构相同或相似(从而其作用机理也相同或相似)，在动物和人体内的细菌中已经发现同样的耐药基因。畜禽养殖业是环境水体中抗生素的主要来源之一。
抗生素的检测对于抗生素的有效去除、在环境中的迁移转化、生物有效性、生态毒理性等方面具有重大的现实意义。目前，抗生素的检测方法的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、HPLC、毛细管电泳法、薄层色谱法、pH计法等，不同的检测方法适用于不用的领域。
畜禽养殖废水中普遍存在磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，对于这三类抗生素的检测已有相关的文献和专利，其中CN201110267859公开了一种测定土壤、污泥及动物废水中磺胺类及四环素类抗生素的方法，CN201310247043公开了一种同时检测水中四环素类抗生素的方法。但对于同时检测三大类的抗生素的方法没有相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，本检测方法可以同时检测磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，操作简便，节约时间。
本发明中所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)前处理：取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至3.5-4.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸＝99-99.9:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液；
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈＝55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃＝90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
进一步地，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
进一步地，所述的步骤(1)中柠檬酸的添加量为0.1～1％(w/w)，乙二胺四乙酸二钠的添加量为0.2-1.5％(w/w)。
进一步地，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，流动相：乙腈：四氢呋喃：0.5％的乙酸溶液(72：18：10)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：
畜禽养殖废水中的抗生素主要包括磺胺类、四环素类、大环内酯类，其中磺胺类的抗生素包括磺胺噻唑(STZ)、磺胺甲恶唑(SMX)、磺胺地索辛(SDM)、磺胺二甲嘧啶(SMN)、磺胺甲二唑(SML)，四环素类的抗生素包括四环霉素(TCN)、土霉素(OTC)、金霉素(CTC)，大环内酯类的抗生素包括泰妙菌素(TIA)。
本发明的有益效果如下：
本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰项；本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。
具体实施方式
下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，以下实施只是用于本发明的进一步说明，不能理解为对发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上述本发明内容对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。
实施例1
一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，测试步骤：
(1)前处理：取200g的畜禽养殖废水，加入0.3％(w/w)柠檬酸和0.5％(w/w)乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至4.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸＝99:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液；
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈＝55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃＝90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
实施例2
一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，测试步骤：
(1)前处理：取200g的畜禽养殖废水，加入1％(w/w)柠檬酸和1.5％(w/w)乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至3.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸＝99.9:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液；
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈＝55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃＝90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
其中，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
其中，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，流动相：乙腈：四氢呋喃：0.5％的乙酸溶液(72：18：10)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：
对本发明中所公开的实施方式的描述并非为了限制本发明的范围，而是用于描述本发明。相应地，本发明的范围不受以上实施方式的限制，而是由权利要求或其等同物进行限定。

Claims (4)

1.一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)前处理：取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至3.5-4.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸＝99-99.9:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液；
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈＝55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃＝90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
2.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
3.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中柠檬酸的添加量为0.1～1％(w/w)，乙二胺四乙酸二钠的添加量为0.2-1.5％(w/w)。
4.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，流动相：乙腈：四氢呋喃：0.5％的乙酸溶液(72：18：10)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：
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