CN107541500A - 一种a型口蹄疫病毒单克隆抗体及应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于动物病毒学与动物传染病学检测技术领域，具体提供了一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体及应用。所述的单克隆抗体由杂交瘤细胞株2A2分泌得到，保藏编号为：CCTCC NO：C201787。利用该抗体制备的A型口蹄疫病毒ELISA试剂盒适用于对A型口蹄疫病毒进行检测，而对其他亚型的口蹄疫病毒，如O型、Asial型病毒，则不反应，具有很好的特异性。利用该抗体制备的A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒适用于对A型口蹄疫抗体的检测，与现有技术中的口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率高，检测时间更短。

Description

一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体及应用

技术领域

本发明属于动物病毒学与动物传染病学检测技术领域。具体涉及一种A型口蹄疫病毒双抗体夹心ELISA检测试剂盒和一种A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV)属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，FMDV基因组RNA全长约8.5kb。口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是由FMDV引起的，主要侵害牛、猪、羊等家畜及多种野生偶蹄动物的高度接触传染病。该病的爆发和流行常常给畜牧业生产和经济发展带来巨大的损失，严重影响了经济贸易和畜牧业的发展，备受世界各国的关注。世界卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其列为A类动物传染病。

FMDV有7个血清型，分为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、Asial，各血清型之间无交叉免疫保护。同一血清型内的不同压型的抗原性均有不同程度的差别，血清学交叉反应的程度也有不同，是的口蹄疫的诊断和控制存在很大难度。单克隆抗体具有识别单一抗原位点的能力，与抗原结合特异性强，均质性高，生物活性单一，易于标准化，可批量生产的特点，广泛应用于生物医学领域中。近年来，中国的部分地区相继发生了A型FMD，因此A型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备对于该病的诊断和预防具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种具有特异性强且生物学活性高的抗A型口蹄疫病毒的单克隆抗体，所述的抗体由杂交瘤细胞株2A2分泌得到，该杂交瘤细胞株已于2017年7月18日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO:C201787，分类命名：杂交瘤细胞株2A2，地址：中国武汉武汉大学。

本发明的另一个目的在于提供了一株分泌A型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，利用该细胞株制备的单抗活性高，产量大，适用于大型生产。

本发明的另一个目的在于提供了一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体在制备A型口蹄疫病毒检测试剂盒或A型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用。

本发明的最后一个目的在于提供了一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体在A型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现的；

本发明利用BL21表达并纯化的A型VP1蛋白免疫BALB/c，制备抗A型口蹄疫病毒单克隆抗体，抗体阳性杂交瘤细胞经3次有限稀释法亚克隆，获得一株能稳定分泌的杂交瘤细胞，命名为2A2，经鉴定抗体亚型为IgG1型。

进一步对单抗验证，2A2只与A型病毒和表达的A型病毒的VP1反应，与其他O型毒或者表达的VP1均不反应，可认定2A2为A型FMDV血清型特异性单抗。

鉴于杂交瘤细胞细胞系2A2所分泌的抗A型口蹄疫病毒单抗为A型FMDV特异性单抗，且有较高的效价，本发明将该杂交瘤细胞系于2017年7月18日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO:C201787，分类命名：杂交瘤细胞株2A2，地址：中国武汉武汉大学。

一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体的应用，包括利用该单抗制备成A型口蹄疫病毒检测试剂盒或A型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。

与现有技术相比本发明具有如下显著优点：

1本发明的A型口蹄疫病毒ELISA试剂盒适用于对A型口蹄疫病毒进行检测，而对其他亚型的口蹄疫病毒，如O型、Asial型病毒，则不反应，具有很好的特异性。

2本发明的A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒适用于对A型口蹄疫抗体的检测，与兰州兽医研究所生产的口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率高。

3本发明将所需的各种试剂组装成试剂盒，操作简单，用时短，不需要由专业人员操作，操作场地要求不高，且试剂盒稳定性好、保存期长。

4本发明同时处理样本量大，适用于临床大规模适用，并且可以用于科研。

附图说明

图1为A型口蹄疫病毒VP1蛋白的SDS-PAGE电泳图。

图2为腹水单抗特异性结果图。

具体实施方式

本发明用试剂及其组分如下：

包被缓冲液：Na₂CO₃ 1.59g，NaHCO₃ 2.93g，用去离子水定容至1000ml；

封闭液：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，KH2PO4 0.2g，BSA 5g,用去离子水定容至1000ml(pH＝7.4)；

样品稀释液：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，KH2PO4 0.2g，Tween-200.5ml,用去离子水定容至1000ml(pH＝7.4)；

显色液A：Na₂HPO₄·12H₂O 14.60g，柠檬酸9.33g，30％的双氧水2ml，加去离子水溶解并定容至1000ml，调pH至5.0～5.4，分装，10ml/瓶。

显色液B：四甲基联苯胺(TMB)20.00mg、无水乙醇10.00ml，加去离子水溶解定容至1000ml，分装成10ml/瓶。

终止液1：2.5ml氢氟酸(HF)加到900ml去离子水中，定容至1000ml，分装，10ml/瓶。

终止液2：27.2ml浓硫酸(H₂SO₄)加到900ml去离子水中，定容至1000ml，分装，10ml/瓶。

20倍浓缩洗涤液：NaCl 160g，KCl 4g，Na₂HPO4·12H₂O 58g，KH₂PO₄ 4g，Tween-2010ml,用去离子水定容至1000ml(pH＝7.4)。

A型口蹄疫病毒检测试剂盒阴、阳性对照：将购自中国农业科学院兰州兽医研究所的A型灭活病毒作为阳性对照；将反复冻融的BHK细胞悬液作为阴性对照。

A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒阴、阳性对照：阳性对照为疫苗免疫猪制备的阳性血清；阴性对照为采集筛选结果为A型口蹄疫病毒抗原和抗体阴性动物的猪血清。

下面结合具体实施例来进一步描述本发明。本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。

实施例1：

杂交瘤细胞株2A2的获得：

VP1合成碱基序列的确定

参考Genebank上公布的A型口蹄疫病毒的VP1序列，确定了要表达的氨基酸序列：SKYSAPATRRGDLGSLAARLAAQLPASFNYGAIRATEIQELLVRMKRAELYCPRPLLAVEVTSQDRHKQKIIAPAKQLL，送武汉擎科创新生物技术有限公司合成并连接到PET-32a，构建重组质粒。

诱导表达将重组质粒转化到BL21中。取50μl BL2与2μl质粒混合，冰浴30min，42℃热击30S，冰浴2min，再加400μlLB，37℃180r/min 45min，取100μl凃平皿。挑转化的单菌落，转入细菌瓶，8ml/瓶，37℃180r/min 12～14h，按1:100的比例接种于新鲜含100μg/ml的氨苄青霉素的200ml LB培养基中，37℃180r/min，培养至菌液OD₆₀₀nm达到0.5～0.6时，加入IPTG至终浓度为0.8mmol/L进行诱导表达，每隔一小时进行取样。将诱导好的菌液以8000r/min离心10min，收集菌体，用20ml缓冲液A(50mmol/L Tris-HCl pH＝8.0,0.5mmol/L EDTApH＝8.0,50mmol/L NaCl,0.5mmol/L二硫代苏糖醇(DTT)，5％甘油)悬浮后将菌体置于冰上，用超声波破碎，直到溶液清亮，不再粘稠。破碎的的溶液以10000r/min离心15min，分别收集上清和沉淀，进行SDS-PAGE电泳，条带在25KD附近，符合预期，见图1。

蛋白复性用8M脲溶沉淀，吹打后仍仍有不溶，放于37℃，不超半小时。然后10000r/min 6min，取上清，转入透析袋中，放于6M脲中4℃透析过夜，接着换4M脲中4℃透析过夜，再换2M脲中4℃透析过夜，最后换PBS(pH＝8.0)透析过夜，分装、冻存。经蛋白核酸测定仪测定蛋白浓度为1.447g/ml，即为纯化后的FMD-A VP1抗原。

鼠免疫

用纯化的FMD-A VP1抗原200μg/200μl加等体积的弗氏完全佐剂，充分乳化后经背部皮下注射6周龄雌性BALB/c；两周后进行第2次免疫，佐剂为弗氏不完全佐剂；再隔2周进行3免，佐剂为弗氏不完全佐剂；融合前3天以不加佐剂的等量抗原进行加强免疫。

筛选方法的确定(间接ELISA检测法)

筛选方法的建立用方阵滴定试验选择最佳抗原包被浓度。辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG作为二抗，小鼠血清采用常用的稀释倍数500倍。

具体步骤如下：

(1)将抗原作1:70，1:140，1:280，1:560，1:1120，1:2240，1:4480，1:8960稀释，100μl/孔包被，4℃过夜，。

(2)次日将酶标板中包被液拍干，用封闭液按120μl/孔封闭，4℃过夜，拍干备用。用前用洗涤液洗3次。

(3)将阳性血清和空白鼠血清分别500倍稀释，加入到相应的抗原包被板中，37℃30min，洗涤5次。

(4)羊抗鼠IgG按照1:200，1:400，1:800，1:1600，1:3200，1:6400，1:12800，1:25600，1:51200，1:102400，1:204800，1:409600作稀释，100μl/孔，37℃30min，洗涤5次。

(5)加入显色液A、B各50μl/孔，室温显色10min，用终止液终止反应，50μl/孔。用酶标仪测定OD630。

(6)用间接ELISA检测方法筛选时。选择阳性血清和阴性血清的比值较大，且OD630值接近1的抗原稀释度作为间接ELISA反应体系的最佳工作浓度。结果选择的蛋白的稀释倍数为1000倍，鼠二抗稀释倍数25000倍。筛选杂交瘤细胞时对于细胞上清液进行检测，OD630读值大于1.0时，判为阳性。

小鼠效价测定

间接ELISA方法建立后，选用最佳包被浓度检测免疫小鼠的抗体效价。选取免疫效价检测值最高的小鼠腹腔追加免疫一次，三天后取该鼠的脾脏进行融合。小鼠的免疫效价见表1，2号效价最高，所以选取2号小鼠的脾脏进行融合。

表1全部免疫小鼠抗体效价检测结果

细胞融合

(1)饲养细胞的制备：取1只BALB/c小鼠摘除眼球放血，按常规方法分离阴性血清。处死的小鼠浸泡于75％酒精中，10min后移入超净工作台。将小鼠腹部向上固定，用眼科镊提起腹部正中的皮肤，眼科剪横向剪一小口，切勿剪破腹膜，用眼科剪和眼科镊向上撕开皮肤，腹膜下可见脾脏。再用眼科镊提起腹膜，横向剪开，向上撕开，彻底暴露脾脏，无菌取脾脏放入灭菌匀浆器中。加入4ml不完全培养基研磨，接着再加入8ml，静置2min后，吸取8ml上层悬液置50ml离心管中，再加8ml不完全培养基，静置2min后，尽可能多的吸取上层悬液置50ml离心管中，注意不要吸到组织块，补加不完全培养基至40ml。1000r/min10min，弃上清，再补加40ml重悬，1000r/min 10min，10min重悬，37℃备用。

(2)骨髓瘤细胞的制备：融合前36～48h，将骨髓瘤细胞扩大培养，使细胞处于对数生长期。融合当天，用15ml不完全培养基将细胞从瓶壁上吹下，收集与50ml离心管中。1000r/min10min。将细胞沉淀重悬置10ml不完全培养基中，计数。

(3)免疫脾细胞的制备：同饲养细胞制备。重悬后，计数，置于37℃备用。

(4)融合：取100mlHAT完全培养基、40ml不完全培养基、1ml50％PEG于37℃预热，另备有37℃水的500ml烧杯。按5份脾细胞数加1份骨髓细胞数取相应细胞悬液量，加入50ml离心管中补加不完全培养基至30ml，混匀。1000r/min 10min，弃上清，尽可能倒干。用手掌轻击离心管底，使沉淀松散。将离心管放入盛有37℃水的500ml烧杯中，一手固定离心管，另一手用1ml巴氏吸管吸取50％PEG溶液1ml，边加边搅拌沉淀细胞，1min内加完，静置2min。随后先慢后快加入不完全培养基至40ml终止反应，37℃水浴静置10min，1000r/min 10min，弃上清，加入10mlHAT完全培养基，轻轻的吹散细胞，然后转出，补加HAT完全培养基至100ml。每孔0.1ml接种于已培养有饲养细胞的96孔培养板，置37℃、5％的CO2培养箱中培养。5d后半量换液，8d后全换液，待克隆孔长至孔底面积1/4～1/3时取上清进行检测。

杂交瘤细胞的克隆化培养

对ELISA检测阳性的杂交瘤细胞及时进行克隆化培养，采用有限稀释法。步骤如下：

①制备饲养细胞：方法如前所述。96孔板中每孔0.1ml。

②用移液器将ELISA检测阳性孔中杂交瘤细胞轻轻吹打混匀，在96孔板中倍比稀释，在显微镜下计数，将细胞总数在100～200左右的孔的细胞全部吸出到10ml完全培养基中。混匀后，每孔0.1ml加入已铺有饲养细胞的96孔板中。在37℃5％CO₂及饱和湿度条件下培养。

③每天观察并记录每孔细胞克隆数，待细胞长到孔底的1/4～1/3时半换液，并对细胞上清进行间接ELISA检测。

④选择克隆数少、OD₆₃₀值高的阳性孔，将其再次克隆。经3～4次克隆化操作，直至所有克隆化细胞孔检测阳性率达100％时，即可确定获得分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，即抗A型FMDV单克隆抗体的杂交瘤细胞(2A2)，应及时扩大并冻存。

该杂交瘤细胞株已于2017年7月18日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO:C201787，分类命名：杂交瘤细胞株2A2，地址：中国武汉武汉大学。

实施例2：

A型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备：

选取8周龄的BALB/c雌鼠，在无菌条件下，每只腹腔注射0.5ml灭菌的液体石蜡。两周后，将准备好的不完全培养基重悬的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内。

细胞的准备：挑选生长状况良好的杂交瘤细胞2A2采用细胞瓶传代培养，无菌条件下，用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落下来，转入15ml离心管中，1000r/min 10min,加入适量不完全培养基重悬，台盼蓝计数调整细胞数量至1×10⁶～6×10⁶个/ml，每只小鼠腹腔注射0.5ml所得细胞，每天观察小鼠，小鼠腹部慢慢隆起，约7～10d小鼠精神沉郁、不走动时，收集腹水，室温1000r/min离心10min，收集上清，即为含有2A2单克隆抗体的腹水。

腹水效价检测

将腹水进行系列稀释，用间接ELISA法测定抗体效价，P/N值大于2.1的最大稀释度为其ELISA效价，测得其效价为10⁶。

腹水特异性的检测

将口蹄疫A型灭活抗原、O型灭活抗原、Asial灭活抗原(购自中国农业科学院兰州兽医研究所)、BHK-21细胞悬液包被于酶标板，100μ/孔，4℃过夜。采用间接ELISA方法对腹水的特异性进行测定，每孔加100μl PBS稀释过的2A2腹水(1:1000),37℃孵育30min。洗板，每孔加入100μPBS稀释好的山羊抗小鼠IgG-HRP(1:5000),37℃30min。洗板，每孔加入50μl显色液A和50μl显色液B，室温反应10min，加入终止液终止，用酶标仪读取OD630值。结果见图2，证明2A2腹水具有良好的特异性。

腹水抗体的纯化：辛酸-硫酸铵法

具体步骤如下：

(1)将腹水2ml 1000r/min离心10min，取上清，边搅拌边加入4倍体积0.06mol/L的醋酸钠缓冲液(pH＝4.5)；

(2)边搅拌边逐滴加入正辛酸至终浓度25μl/ml，室温搅拌30min，4℃10000r/min离心30min，弃沉淀收集上清；

(3)将步骤(2)中的上清用滤纸过滤，调pH至7.4；

(4)向步骤(3)中所得的滤液边加边搅拌加入饱和硫酸铵溶液(硫酸铵体积/总体积≤45％)，待滤液呈白色浑浊液时，继续搅拌30min，4℃10000r/min离心30min；

(5)弃上清，沉淀用2ml 10mM/L pH＝9.0Tris-HCl重悬；在100倍体积的10mM/LpH＝9.0Tris-HCl中，4℃透析过夜。透析结束后体积变为3.2ml，用蛋白核酸浓度测定仪测抗体浓度，分装、冻存。透析后单抗浓度为4.6mg/ml，计算出原始腹水中单抗浓度在7.36mg/ml。

HRP标记纯化的单克隆抗体

将10mgHRP溶于2ml注射水中，呈棕红色，加入1ml浓度0.06M/L NaIO₄，呈草绿色，4℃30min，加入0.16M/L乙二醇1ml终止反应，室温避光30min，溶液变成棕黄色，加入浓度为4.6mg/ml的2A2抗体2ml，0.05M/L PH＝9.5CB中4℃透析过夜。吸出加5mg/mlNaBH4 0.4ml,4℃2h,加入等体积饱和硫酸铵，4℃30min，10000r/min 5min,然后用2ml20mM/L PH＝7.4PB重悬透析，收获酶标单抗HRP-2A2 4.5ml，用于以下实施例。

实施例3：

一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体在制备A型口蹄疫病毒检测试剂盒的应用：

本发明利用A型口蹄疫单克隆抗体2A2和HRP标记的A型口蹄疫单克隆抗体2A2建立的夹心ELISA方法。采用方阵滴定法确定包被的单抗及酶标。包被单抗最佳稀释浓度为2μg/ml，酶标单抗的最佳稀释浓度为1：2500。

具体使用步骤：

(1)包被：以纯化单抗的最佳包被浓度包被酶标板，为100μl/孔，4℃过夜。

(2)封闭：弃孔中液体，拍干，加入封闭液，120μl/孔，4℃过夜。

(3)加样：抗原包被板用洗涤液洗3遍，在纱布上拍干。将稀释好的样品按照相同的布局转移100μl到抗原包被板上，37℃30min。

(4)洗涤：取出酶标板，将其甩干，用洗涤液洗5次，在吸水纸上拍干。加HRP-2A2：每孔加入HRP-2A2 100μl/孔，37℃30min。

(5)洗涤：取出酶标板，将其甩干，用洗涤液洗5次，在吸水纸上拍干。

(6)显色：加入显色液A、B各50μl/孔，室温显色10min，用终止液1终止反应，50μl/孔。用酶标仪测定OD₆₃₀。

(7)结果判定：通过对78份已知背景的A型口蹄疫病毒阴性样品进行检测，得到结果，求其平均值0.228；标准偏差SD＝0.049；根据公式阴阳性临界值＝阴性样本OD_630nm平均值+3SD(标准偏差)，得到阴阳性临界值0.38。即样品的OD_630nm≤0.38则判为阴性，OD_630nm＞0.38则判为阳性。ELISA试验成立的条件是阳性对照值大于1.0，阴性对照值小于0.35。夹心ELISA方法的特异性试验和敏感性试验

(1)特异性试验

利用所建立的ELISA方法检测口蹄疫A型灭活抗原、O型灭活抗原、Asial灭活抗原、猪瘟等样品，检测OD₆₃₀读值均≤0.38，判为阴性，说明本发明对以上各种病毒具有很好的特异性，其结果见表2。

表2本发明对口蹄疫病毒不同亚型及其他主要畜禽病毒的检测结果

(2)敏感性试验

用自制的试剂盒检测购自中国农业科学院兰州兽医研究所的A型口蹄疫灭活病毒，灭活前病毒含量为10^7.0TCID₅₀/ml。当病毒稀释到256倍即病毒含量为10^4.6TCID₅₀/ml时，仍能检出病毒，其结果见表3。

表3本发明敏感性试验

实施例4：

一种A型口蹄疫病毒单克隆抗体在制备A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒的应用：

本发明利用A型口蹄疫单克隆抗体2A2、灭活的A型口蹄疫病毒和HRP标记的A型口蹄疫单克隆抗体2A2建立的竞争ELISA方法。采用方阵滴定法确定包被的单抗、捕获的A型口蹄疫病毒及酶标。包被单抗最佳稀释浓度为2μg/ml，病毒稀释倍数为40倍，酶标单抗的最佳稀释浓度为1：2500。

具体使用步骤：

(1)包被：以纯化单抗的最佳包被浓度包被酶标板，为100μl/孔，4℃过夜。

(2)捕获：弃孔中液体，加入最佳反应浓度的A型口蹄疫病毒，为50μl/孔，4℃过夜。

(3)封闭：弃孔中液体，拍干，加入封闭液，120μl/孔，4℃过夜。

(4)加样：抗原包被板用洗涤液洗3遍，在纱布上拍干。将稀释好的样品按照相同的布局转移50μl到抗原包被板上，接着加入HRP-2A2 50μl，37℃30min。

(5)洗涤：取出酶标板，将其甩干，用洗涤液洗5次，在吸水纸上拍干。

(6)显色：加入显色液A、B各50μl/孔，室温显色10min，用终止液2终止反应，50μl/孔。用酶标仪测定OD₄₅₀。

(7)结果判定：通过对80份已知兰州兽医研究所检测背景的血清进行检测，根据ROC曲线，确定抑制率(PI)的临界值为30％。

抑制率公式PI＝(空白对照OD_450nm―检测样品OD_450nm)/空白对照OD_450nm×100％。

判断标准PI＜30％即为A型口蹄疫抗体阴性，PI≥30％，即为A型口蹄疫抗体阳性。

无血清空白对照OD_450nm 0.75～2.0

阳性对照血清抑制率(PI) 80％～100％

阴性对照血清抑制率(PI) (-15)％～15％

(1)特异性检测

用A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒检测已知背景的10份血清。其中有A型口蹄疫病毒抗原抗体均为阴性的牛、羊、猪血清各一份，编号为牛1、羊1、猪1；O型口蹄疫抗体阳性的牛、羊、猪各一份，编号为牛2、羊2、猪2；猪细小阳性血清、猪瘟阳性血清、猪伪狂犬阳性血清编号为猪3、猪4、猪5；A型口蹄疫阳性猪血清，编号为猪6。除了A型口蹄疫阳性猪血清检测结果为抗体阳性外，其余检测结果均为阴性，该试剂盒特异性良好，详见表4。

表4对特异性血清的检验

(2)敏感性检验

用本发明的A性口蹄疫抗体检测试剂盒和兰州兽医研究所的口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒检测3份不同稀释倍数A型口蹄疫抗体阳性血清。二者敏感性相当，效价基本一致，而本试剂盒反应时间一共为40min，兰州兽医研究所的口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒的反应时间最短为4个小时，所以本发明所用检测时间更短，更适用于工业化检测，具体结果见表5。

表5敏感性检验

注：“+”代表阳性；“—”代表阴性。

(3)符合率试验

用本发明的A型口蹄疫竞争ELISA抗体检测试剂盒和兰兽研的口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒共同检测临床样本300份，结果见表6。共阳性209份，共阴性71份，二者符合率为93.3。

表6符合率试验

Claims (4)

1.一株分泌抗A型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的细胞株为杂交瘤细胞株2A2，保藏编号为： CCTCC NO：C201787。

2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述单克隆抗体在制备A型口蹄疫病毒检测试剂盒中的应用。

4.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述单克隆抗体在制备A型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用。