CN107271598A - 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 - Google Patents
中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107271598A CN107271598A CN201710596340.9A CN201710596340A CN107271598A CN 107271598 A CN107271598 A CN 107271598A CN 201710596340 A CN201710596340 A CN 201710596340A CN 107271598 A CN107271598 A CN 107271598A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peak
- solution
- reference substance
- illustrative plates
- peaks
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 35
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 57
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 40
- YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N Paeoniflorin Chemical compound C([C@]12[C@H]3O[C@]4(O)C[C@](O3)([C@]1(C[C@@H]42)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)OC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N 0.000 claims abstract description 27
- YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N paeoniflorin Natural products O1C(C)(C2(CC34)OC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)CC3(O)OC1C24COC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- KVRQGMOSZKPBNS-FMHLWDFHSA-N Harpagoside Chemical compound O([C@@H]1OC=C[C@@]2(O)[C@H](O)C[C@]([C@@H]12)(C)OC(=O)\C=C\C=1C=CC=CC=1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KVRQGMOSZKPBNS-FMHLWDFHSA-N 0.000 claims abstract description 24
- KVRQGMOSZKPBNS-BYYMOQGZSA-N Harpagoside Natural products C[C@@]1(C[C@@H](O)[C@@]2(O)C=CO[C@@H](O[C@@H]3O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)[C@H]12)OC(=O)C=Cc4ccccc4 KVRQGMOSZKPBNS-BYYMOQGZSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 241001671204 Stemona Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000010231 banlangen Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 241000249864 Tussilago Species 0.000 claims abstract description 15
- 240000005790 Oroxylum indicum Species 0.000 claims abstract description 14
- 235000012920 Oroxylum indicum Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 241000432824 Asparagus densiflorus Species 0.000 claims abstract description 12
- 240000002948 Ophiopogon intermedius Species 0.000 claims abstract description 12
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 244000012254 Canarium album Species 0.000 claims abstract description 11
- 235000009103 Canarium album Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 241000405414 Rehmannia Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000001525 mentha piperita l. herb oil Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000019477 peppermint oil Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 241000931705 Cicada Species 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 28
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 23
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 230000005180 public health Effects 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 claims description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 6
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 6
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 241000334160 Isatis Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 3
- 206010013789 Dry throat Diseases 0.000 description 2
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 2
- 244000170916 Paeonia officinalis Species 0.000 description 2
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 description 2
- -1 Phenylpropanoid Glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001139 anti-pruritic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003908 antipruritic agent Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 206010002953 Aphonia Diseases 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005220 pharmaceutical analysis Methods 0.000 description 1
- 229930015704 phenylpropanoid Natural products 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
- G01N30/8631—Peaks
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用。取R,S‑告依春、芍药苷、哈巴俄苷对照品，咽炎片样品和按咽炎片处方比例及工艺制备的分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的12种阴性样品，分别制备对照品、供试品和阴性样品溶液，精密吸取上述溶液各1μL注入液相色谱仪中，按设定的色谱条件进行测定得到相应的色谱图，并以中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行计算后即生成咽炎片的标准特征图谱。本发明首次构建的咽炎片的标准特征图谱，其所包含的特征峰全面，定位准确，方法快速，可有效鉴别该中成药的真伪并评价其质量的优劣，有望成为咽炎片中成药质量控制的标准方法。
Description
技术领域
本发明涉及中药质量检测领域，具体涉及一种中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用。
背景技术
咽炎片是由玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油等十二味中药饮片组成的中药制剂，所含化学成分十分复杂。该制剂具有养阴润肺，清热解毒，清利咽喉，镇咳止痒之功效。用于慢性咽炎引起的咽干，咽痒，刺激性咳嗽等症。其制备方法是除薄荷油外，款冬花粉碎成细粉，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，静置24小时，取上清液，浓缩成稠膏，与款冬花粉末混合，干燥，制成颗粒，喷加薄荷油，混匀，压制成1000片，包衣，即得。
已有特征图谱技术是一种可以应用于中药成分的综合的检测手段，是通过对共有特征峰的检测以达到对待检测样品的多种成分进行检测的目的，但是目前咽炎片中成药尚无整体性有效控制其质量的检测方法，如仅仅依靠薄层色谱法对咽炎片中成药的部分药味进行薄层色谱检测，或对咽炎片中成药中的某一种或多种成分采用高效液相色谱-紫外检测器法进行含量测定，片面的反映咽炎片中成药的质量有严重的缺陷，如秦香芹等(黑龙江医药.25(4)：529-530)采用高效液相色谱-紫外检测器法测定咽炎片中芍药苷的含量，仅测定咽炎片中牡丹皮所含的1种成分的含量。付永慧等(药物分析杂志.29(12)：2032-2035)测定咽炎片中5种指标成分的含量，仅能测定哈巴俄苷等可定性的5种成分的含量，而不能对咽炎片中至少6种无法定性的成分进行检测，因此只能片面的反映咽炎片的质量，不但不能全面有效地衡量咽炎片质量的优劣，而且不能准确快速的判断咽炎片的真伪。显然，检验效率高同时定性准确的检测方法，以满足中成药复杂的化学成分的质量可控的检测是非常必要的。因此只有构建咽炎片的标准特征图谱才能较为全面的、准确快速的反映咽炎片中复杂的化学成分及其质量的优劣，是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用，以全面、快速地检测出中成药咽炎片中组方的10种药材的特征成分，达到鉴别该中成药的真伪，并评价其质量的优劣，弥补现有技术的不足。
本发明运用中医药理论，首先为建立咽炎片的标准特征图谱对其组方成分进行了研究分析：
首先，咽炎片组方中的君药是玄参，性甘、苦、咸、寒，具有清热养阴，解毒散结的功能；生地、麦冬、天冬、青果、板兰根、牡丹皮六味为臣药，君臣合伍有养阴调肺、清热解毒、清利咽喉之功；制百部、制款冬花、木蝴蝶、为佐药，有润肺止咳、化痰之功效。组成之成药全方以养阴，润肺着力，而取清热解毒、清利咽喉、疏风散热、镇咳化痰，利咽止痒之功，对素体阴虚，感受风热之邪，易从燥化之症甚宜，宜治急、慢性咽炎所致咽喉红肿、咽干、咽痒、口干、口渴、咳嗽、发热、恶风、汗出及刺激性咳嗽、音哑，失音等症。
玄参主要含有环烯醚萜类、苯丙素苷类成分，其中的哈巴俄苷为一种主要环烯醚萜苷成分，有较强的抗炎、神经保护、增强免疫等作用，为玄参的特征性有效成分。因此，本发明选择的玄参的特征成分为哈巴俄苷。
其次，板兰根、牡丹皮均为组方中的臣药。板兰根具有清热解毒、凉血利咽的功能。而衡量板蓝根药材质量优劣的指标性成分为板蓝根中的R,S-告依春，如《中国药典》2015年版一部板蓝根项下采用了高效液相色谱-紫外检测器法测定R,S-告依春的含量，因此以R,S-告依春的含量作为判定板蓝根药材质量优劣的指标；牡丹皮具有清热凉血，活血化瘀的功能。其中牡丹皮中的芍药苷具有保护脑神经细胞和心肌、抗局灶性脑缺血、提高造血机能、肿瘤抑制、免疫调节等生物活性，是牡丹皮的活性成分。因此，本发明选择的板蓝根的特征成分为R,S-告依春。选择的牡丹皮的特征成分为芍药苷；生地、麦冬、天冬、青果亦为方中之臣药，与板兰根、牡丹皮合用可增强君药作用。
再次，制百部、制款冬花、木蝴蝶为组方中的佐药，具有润肺止咳、化痰的功效。既可以加强君、臣药的治疗作用，亦可解除次要的兼证，制百部、制款冬花、木蝴蝶中的特征成分的检测也是不可缺少的。
因此，按照中药君、臣、佐、使组方原则，并依照药味作用主次而选择了R,S-告依春、芍药苷、哈巴俄苷共3种已定性的成分和6种不能定性的成分，实现这6种成分分别归属于1.地黄和百部；2.天冬、麦冬和青果；3.板蓝根和百部；4.木蝴蝶和牡丹皮；5.百部、木蝴蝶和玄参；6.百部和款冬花，共9种特征成分为指标构建了咽炎片的标准特征图谱，从而实现并达到了可以判断咽炎片的真伪并较全面的反映咽炎片成药的质量的优劣。
本发明的标准特征图谱的构建步骤如下：
(1)首先取①R,S-告依春、芍药苷、哈巴俄苷对照品，②12批咽炎片样品，③按《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的咽炎片处方比例及工艺制备的分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的12种阴性样品，即先后制备对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液各1μL，注入液相色谱仪中，按照设定的色谱条件进行测定，检测并记录20分钟的色谱图，并以国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统进行计算后即生成咽炎片的标准特征图谱；
(2)对照品溶液的制备：精密称取R,S-告依春对照品10.35mg、芍药苷对照品12.24mg、哈巴俄苷对照品10.08mg(精密至0.1mg)，分别置于50mL量瓶中，加甲醇定容至50ml，制成对照品浓溶液。分别精密量取对照品浓溶液各5mL，置于25mL量瓶中，加甲醇定容至25mL，制成每1mL含R,S-告依春41.40μg、芍药苷47.20μg、哈巴俄苷38.71μg的混合溶液作为对照品溶液。
(3)供试品溶液的制备：取咽炎片样品10片，除去包衣，精密称定(精密至1mg)，研细，精密称定粉末1g(精密至1mg)，加入20％甲醇20mL，超声处理(功率300W，频率40KHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液。
(4)阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的咽炎片处方比例及工艺制备的分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备12种阴性样品溶液。
其中的共有特征峰的标定是通过对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液的色谱图中的色谱峰出峰时间和色谱峰是否存在进行比较，得出供试品溶液图谱中9个共有特征峰的归属：1号峰为未知成分峰，属于地黄；2号峰为未知成分峰，属于百部、天冬、麦冬、青果；3号峰为R,S-告依春峰，属于板蓝根；4号峰为未知成分峰，属于板蓝根、百部；5号峰为芍药苷峰，属于牡丹皮；6号峰为未知成分峰，属于木蝴蝶、牡丹皮；7号峰为未知成分峰，属于百部、木蝴蝶、玄参；8号峰为未知成分峰，属于百部、款冬花；9号峰为哈巴俄苷峰，属于玄参。
上述构建的咽炎片标准特征图谱应用于咽炎片的真伪鉴别和质量优劣的判定。
应用方法：只要分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪中，按照上述设定的色谱条件进行测定，检测并记录20分钟的色谱图即可进行判定；
结果判定如下：首先待检测样品的供试品溶液图谱中应有9个特征峰，其中包括的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个峰应分别与相应的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个对照品峰的保留时间相同，即设定与R,S-告依春对照品保留时间相同的峰为S1峰，并分别计算检测样品的特征峰1～4号与S1峰的相对保留时间，规定值为：0.73、0.82、1.00、1.22，且检测样品的特征峰1～4号相对保留时间应在规定值的±5％之内；同样设定与芍药苷对照品保留时间相同的峰为S2峰，计算检测样品的特征峰5～9号与S2峰的相对保留时间，规定值为：1.00、1.04、1.14、1.23、1.39，检测样品的相对保留时间应在规定值的±5％之内，如待检测样品的供试品溶液图谱完全满足上述判定条件，则可判定检测样品为合格样品；否则可判定检测样品为不合格样品。
显然，本发明首次构建的咽炎片的标准特征图谱所包含的特征峰全面，定位准确，实现了有效鉴别该中成药的真伪，为评价其质量的优劣提供了快速标准检测方法，有望成为咽炎片中成药质量控制的标准方法。
附图说明
图1：本发明的咽炎片已定性3种成分的对照品溶液的UHPLC-UV色谱图。
图2：本发明的咽炎片供试品溶液的UHPLC-UV色谱图。
图3：本发明构建的咽炎片标准特征图谱。
具体实施方式
下面给出本发明的详细的实施例。
本发明采用：仪器与试药：Agilent 1290超高效液相色谱仪(美国，安捷伦)；Sartoris BP211D电子天平；AUTO SCIENCE AS10200BT型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。甲醇为色谱用试剂，其它试剂均为分析纯。R,S-告依春对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111753-201505，含量为100％)、芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110736-201539，含量为96.4％)、哈巴俄苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111730-201508，含量为96.0％)。
色谱条件：色谱柱：Dikma Endevaorsil C18 2.1×100mm，1.8μm；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱0～4min，90％B→80％B，4～10min，80％B→40％B，10～14min，40％B，14～15min，40％B→80％B，15～18min，80％B→90％B，18～20min，90％B，流速为每分钟0.2ml；检测波长为278nm；柱温为30℃；理论板数按哈巴俄苷峰计算应不低于10000。
对照品溶液的制备：精密称取R,S-告依春对照品10.35mg、芍药苷对照品12.24mg、哈巴俄苷对照品10.08mg(精密至0.1mg)，分别置于50mL量瓶中，加甲醇定容至50ml，制成对照品浓溶液。分别精密量取对照品浓溶液各5mL，置于25mL量瓶中，加甲醇定容至25mL，制成每1mL含R,S-告依春41.40μg、芍药苷47.20μg、哈巴俄苷38.71μg的混合溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取咽炎片样品10片，除去包衣，精密称定(精密至1mg)，研细，精密称定粉末1g(精密至1mg)，加入20％甲醇20mL，超声处理(功率300W，频率40KHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液。
阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的咽炎片处方比例及工艺制备的分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备12种阴性样品溶液。
标准特征图谱的构建：首先取①R,S-告依春、芍药苷、哈巴俄苷对照品；②12批咽炎片样品；③按《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的咽炎片处方比例及工艺制备的分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的阴性样品，先后制备对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按照设定的色谱条件进行测定，并以国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行计算，生成咽炎片的标准特征图谱，其中选定共有特征峰为9个。
共有特征峰的标定：通过对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液的色谱图中色谱峰出峰时间和色谱峰是否存在进行比较，得出供试品溶液图谱中9个共有特征峰的归属。见表1。
表1共有特征峰的归属
具体应用方法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪中，按照设定的色谱条件进行测定，检测并记录20分钟的色谱图进行结果判定。
结果判定：待检测样品的供试品溶液图谱中应有9个特征峰，其中包括的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个峰应分别与相应的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个对照品峰的保留时间相同，即设定与R,S-告依春对照品保留时间相同的峰为S1峰，并分别计算检测样品的特征峰1～4号与S1峰的相对保留时间，规定值为：0.73(1号峰)、0.82(2号峰)、1.00(3号峰)、1.22(4号峰)，且检测样品的特征峰1～4号相对保留时间应在规定值的±5％之内；同样设定与芍药苷对照品保留时间相同的峰为S2峰，计算检测样品的特征峰5～9号与S2峰的相对保留时间，规定值为：1.00(5号峰)、1.04(6号峰)、1.14(7号峰)、1.23(8号峰)、1.39(9号峰)，检测样品的相对保留时间应在规定值的±5％之内，如待检测样品的供试品溶液图谱完全满足上述判定条件，则可判定检测样品为合格样品；否则可判定检测样品为不合格样品。
精密度试验精密吸取同一供试品溶液1μl，连续进样6次，测定共有特征峰9个，峰1～4号以R,S-告依春峰为参照峰，峰5～9号以芍药苷峰为参照峰，各特征峰相对保留时间的相对标准偏差RSD(n＝6)均小于1.5％，表明仪器精密度良好。
重复性试验取同一批咽炎片样品，按供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，分别在上述色谱条件下进行测定，峰1～4号以R,S-告依春峰为参照峰，峰5～9号以芍药苷峰为参照峰，各特征峰相对保留时间的相对标准偏差RSD(n＝6)均小于1.5％，表明该方法重复性良好。
稳定性试验精密吸取同一供试品溶液1μl，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24小时进样1次，测定特征峰9个，峰1～4号以R,S-告依春峰为参照峰，峰5～9号以芍药苷峰为参照峰，各特征峰相对保留时间的相对标准偏差RSD(n＝6)均小于1.5％，表明供试品溶液在24小时内稳定性良好。
相对保留时间的确定采用上述色谱条件分析6批次咽炎片样品，峰1～4号以R,S-告依春峰为参照峰，各共有特征峰相对保留时间平均值(n＝6)分别为：0.73、0.82、1.00、1.22，RSD均为0％；峰5～9号以芍药苷峰为参照峰，各共有特征峰相对保留时间平均值(n＝6)分别为：1.00、1.04、1.14、1.23、1.39，RSD均为0％；允许范围按±5％计算，各色谱峰相对保留时间均在规定范围内。
综上，本发明所建立的咽炎片的标准特征图谱可以较为全面的反映复方制剂中复杂的化学成分，具有操作简便，精密度好，重复性高的特点，有望成为咽炎片中成药质量控制的标准方法，以达到全面、有效地控制和监查中成药咽炎片的质量。
Claims (5)
1.一种中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法，其特征在于包括对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液的制备，并分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液注入液相色谱仪中进行测定以生成咽炎片的标准特征图谱，具体步骤如下：
(1)上述对照品溶液的制备：精密称取R,S-告依春对照品10.35mg、芍药苷对照品12.24mg、哈巴俄苷对照品10.08mg，分别置于50mL量瓶中，加甲醇定容至50ml，制成对照品浓溶液；分别精密量取对照品浓溶液各5mL，置于25mL量瓶中，加甲醇定容至25mL，制成每1mL含R,S-告依春41.40μg、芍药苷47.20μg、哈巴俄苷38.71μg的混合溶液作为对照品溶液；
(2)上述供试品溶液的制备：咽炎片样品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称定粉末1g，加入20％甲醇20mL，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液；
(3)上述阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的咽炎片处方比例及工艺制备的且分别缺少玄参、板蓝根、天冬、麦冬、牡丹皮、制百部、青果、制款冬花、木蝴蝶、地黄、蝉蜕、薄荷油的阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备12种阴性样品溶液；
之后分别精密吸取上述对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液各1μL，分别注入液相色谱仪中，按照设定的色谱条件进行测定，检测并记录20分钟的色谱图，并以国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统进行计算后即生成咽炎片的标准特征图谱，其中的9个共有特征峰的标定是通过对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液的色谱图中的色谱峰出峰时间和色谱峰是否存在进行比较，即以此可得出供试品溶液图谱中9个共有特征峰的归属，并按照出峰时间选定并命名1～9号特征峰：其中1号峰为未知成分峰，属于地黄；2号峰为未知成分峰，属于百部、天冬、麦冬、青果；3号峰为R,S-告依春峰，属于板蓝根；4号峰为未知成分峰，属于板蓝根、百部；5号峰为芍药苷峰，属于牡丹皮；6号峰为未知成分峰，属于木蝴蝶、牡丹皮；7号峰为未知成分峰，属于百部、木蝴蝶、玄参；8号峰为未知成分峰，属于百部、款冬花；9号峰为哈巴俄苷峰，属于玄参。
2.如权利要求1所述的咽炎片标准特征图谱的构建方法，其特征是上述高效液相色谱仪的设定条件：色谱柱：Dikma Endevaorsil C18 2.1×100mm，1.8μm；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱0～4min，90％B→80％B，4～10min，80％B→40％B，10～14min，40％B，14～15min，40％B→80％B，15～18min，80％B→90％B，18～20min，90％B，流速为每分钟0.2ml；检测波长为278nm；柱温为30℃；理论板数按哈巴俄苷峰计算应不低于10000。
3.如权利要求1所述的咽炎片标准特征图谱的构建方法，其特征是上述的超声处理条件为功率300W，频率40KHz。
4.权利要求1构建的咽炎片标准特征图谱应用于咽炎片的真伪鉴别和质量优劣的判定。
5.如权利要求4所述的应用于咽炎片的真伪鉴别和质量优劣的判定方法：
首先待检测样品的供试品溶液图谱中应有9个特征峰，其中包括的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个峰应分别与相应的R,S-告依春、芍药苷和哈巴俄苷3个对照品峰的保留时间相同，即设定与R,S-告依春对照品保留时间相同的峰为S1峰，并分别计算检测样品的特征峰1～4号与S1峰的相对保留时间，规定值为：0.73、0.82、1.00、1.22，且检测样品的特征峰1～4号相对保留时间应在规定值的±5％之内；同样设定与芍药苷对照品保留时间相同的峰为S2峰，计算检测样品的特征峰5～9号与S2峰的相对保留时间，规定值为：1.00、1.04、1.14、1.23、1.39，同样检测样品的相对保留时间应在规定值的±5％之内，如待检测样品的供试品溶液图谱完全满足上述判定条件，则可判定检测样品为合格样品；否则可判定检测样品为不合格样品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710596340.9A CN107271598B (zh) | 2017-07-20 | 2017-07-20 | 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710596340.9A CN107271598B (zh) | 2017-07-20 | 2017-07-20 | 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107271598A true CN107271598A (zh) | 2017-10-20 |
| CN107271598B CN107271598B (zh) | 2018-12-04 |
Family
ID=60078296
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710596340.9A Expired - Fee Related CN107271598B (zh) | 2017-07-20 | 2017-07-20 | 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107271598B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109655543A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 广东方制药有限公司 | 一种利用uplc特征图谱鉴别百部药材基源的方法 |
| CN109655542A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 广东方制药有限公司 | 一种木蝴蝶配方颗粒uplc特征图谱的构建方法及其应用 |
| CN110412155A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-05 | 东阿阿胶股份有限公司 | 一种两地汤的hplc特征图谱的检测方法 |
| CN114689711A (zh) * | 2020-12-29 | 2022-07-01 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种保阴煎特征图谱的构建及检测方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020160059A1 (en) * | 2000-09-13 | 2002-10-31 | Wei Xiao | Cinnamomi and poria composition, method to prepare same and uses thereof |
| WO2002085395A1 (en) * | 2001-04-18 | 2002-10-31 | Sanjiu Medical & Pharmaceutical Co., Ltd. | Total glycosides of paeony, method to prepare the same and uses thereof |
| JP2007238561A (ja) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Taiho Yakuhin Kogyo Kk | ペオニフロリン含有ゼリー製剤 |
| CN101461904A (zh) * | 2007-12-21 | 2009-06-24 | 天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂 | 一种治疗咽喉肿痛大便秘结的中药组合物的检验方法 |
| CN101491634A (zh) * | 2008-01-23 | 2009-07-29 | 北京亚东生物制药有限公司 | 治疗慢性咽炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
| CN103175915A (zh) * | 2013-02-08 | 2013-06-26 | 正大青春宝药业有限公司 | 一种测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法 |
| CN103234935A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-08-07 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种检测牡丹皮的方法 |
| CN103926351A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-07-16 | 湖南康寿制药有限公司 | 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法 |
| CN105477006A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-04-13 | 广州白云山和记黄埔中药有限公司 | 口炎清活性成分群及其指纹特征图谱的构建和质量检测方法 |
| CN106093262A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-09 | 华润三九医药股份有限公司 | 一种建立玄参的药物制剂的指纹图谱的方法 |
-
2017
- 2017-07-20 CN CN201710596340.9A patent/CN107271598B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020160059A1 (en) * | 2000-09-13 | 2002-10-31 | Wei Xiao | Cinnamomi and poria composition, method to prepare same and uses thereof |
| WO2002085395A1 (en) * | 2001-04-18 | 2002-10-31 | Sanjiu Medical & Pharmaceutical Co., Ltd. | Total glycosides of paeony, method to prepare the same and uses thereof |
| JP2007238561A (ja) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Taiho Yakuhin Kogyo Kk | ペオニフロリン含有ゼリー製剤 |
| CN101461904A (zh) * | 2007-12-21 | 2009-06-24 | 天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂 | 一种治疗咽喉肿痛大便秘结的中药组合物的检验方法 |
| CN101491634A (zh) * | 2008-01-23 | 2009-07-29 | 北京亚东生物制药有限公司 | 治疗慢性咽炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
| CN103175915A (zh) * | 2013-02-08 | 2013-06-26 | 正大青春宝药业有限公司 | 一种测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法 |
| CN103234935A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-08-07 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种检测牡丹皮的方法 |
| CN103926351A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-07-16 | 湖南康寿制药有限公司 | 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法 |
| CN105477006A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-04-13 | 广州白云山和记黄埔中药有限公司 | 口炎清活性成分群及其指纹特征图谱的构建和质量检测方法 |
| CN106093262A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-09 | 华润三九医药股份有限公司 | 一种建立玄参的药物制剂的指纹图谱的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 付永慧 等: "RP-HPLC法测定咽炎片中哈巴俄苷、肉桂酸、丹皮酚、芸香苷、黄芩苷的含量", 《药物分析杂志》 * |
| 韦炳华 等: "咽炎方含片高效液相色谱指纹图谱研究", 《中国中医药信息杂志》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109655543A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 广东方制药有限公司 | 一种利用uplc特征图谱鉴别百部药材基源的方法 |
| CN109655542A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 广东方制药有限公司 | 一种木蝴蝶配方颗粒uplc特征图谱的构建方法及其应用 |
| CN109655542B (zh) * | 2018-12-21 | 2021-11-30 | 广东一方制药有限公司 | 一种木蝴蝶配方颗粒uplc特征图谱的构建方法及其应用 |
| CN109655543B (zh) * | 2018-12-21 | 2022-05-17 | 广东一方制药有限公司 | 一种利用uplc特征图谱鉴别百部药材基源的方法 |
| CN110412155A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-05 | 东阿阿胶股份有限公司 | 一种两地汤的hplc特征图谱的检测方法 |
| CN110412155B (zh) * | 2019-07-03 | 2022-02-25 | 东阿阿胶股份有限公司 | 一种两地汤的hplc特征图谱的检测方法 |
| CN114689711A (zh) * | 2020-12-29 | 2022-07-01 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种保阴煎特征图谱的构建及检测方法 |
| CN114689711B (zh) * | 2020-12-29 | 2023-09-08 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种保阴煎特征图谱的构建及检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107271598B (zh) | 2018-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107271598B (zh) | 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 | |
| CN110031570B (zh) | 抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法 | |
| CN108982720A (zh) | 复方感冒灵颗粒hplc标准指纹图谱的构建方法及应用 | |
| CN109633001B (zh) | 酒女贞子的指纹图谱检测方法 | |
| CN105675739B (zh) | 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN105842353A (zh) | 银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN106645508A (zh) | 风热感冒颗粒hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN106706786A (zh) | 一种人参叶中六种人参皂苷类成分的含量测定方法 | |
| CN109406682A (zh) | 生姜药材的uplc特征图谱构建方法和检测方法 | |
| CN107643343B (zh) | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 | |
| CN109668970A (zh) | 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法 | |
| CN110297060A (zh) | 一种山苦荬药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱 | |
| CN110274970A (zh) | 融差指纹图谱的建立方法及其在益血生胶囊质控中的应用 | |
| CN110007031B (zh) | 甘草汁炙女贞子的指纹图谱检测方法 | |
| CN111007190B (zh) | 一种土贝母药材uplc特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法 | |
| CN113341007A (zh) | 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法 | |
| CN110568108B (zh) | 一种肝复乐制剂的多成分含量测定方法 | |
| CN110514761A (zh) | 一种润肺止嗽中药制剂hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN107576739A (zh) | 一种龙牡壮骨颗粒的hplc指纹图谱检测方法 | |
| CN104614475A (zh) | 一种消渴清颗粒的含量检测方法 | |
| CN105929096B (zh) | 一种治疗感冒药物的hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN115508491A (zh) | 一种厚朴温中汤汤剂及基准样品特征图谱的建立及含量测定方法 | |
| CN114813987A (zh) | 一种含川芎、冰片、人工麝香的复方组合物及药物制剂的特征图谱构建方法 | |
| CN106645459A (zh) | 一种风寒感冒颗粒hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN114689710A (zh) | 一种枇杷清肺饮提取物多成分质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20181204 Termination date: 20190720 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |