CN107164495A - 用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 - Google Patents
用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107164495A CN107164495A CN201710437605.0A CN201710437605A CN107164495A CN 107164495 A CN107164495 A CN 107164495A CN 201710437605 A CN201710437605 A CN 201710437605A CN 107164495 A CN107164495 A CN 107164495A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- control
- probe
- quality control
- mankind
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,包括7种基因的特异性引物对和7条与特异性引物配合使用的探针引物,引物探针混合液包含突变位点基因和内控引物探针,质控基因和内控检测引物探针,突变和质控探针标记FAM荧光素,内控标记HEX荧光素,质控及内控均作为结果判读的一部分,质控基因选择是人类KRAS基因相对保守的区段,内控选择是人β‑aCtin保守基因,双控体系共同监控血浆样本DNA质量和PCR反应过程,与现有技术相比,本发明的有益效果是:1)高灵敏度:可在100ng野生型人类基因组背景下检测出1%微量突变模板,减少了假阴性结果的出现;2)全封闭反应,避免假阳性结果的发生;3)双控反应体系,质控及内源对照,有效检测PCR扩增及核酸提取。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术和医学领域,尤其涉及的是一种用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒及其检测方法。
背景技术
目前,肺癌己成为全球癌症死亡的首要原因,全球每年新发病例150万,严重威胁人类健康。在肺癌患者中,非小细胞肺癌约(NSCLC)占80%,且就诊时80%己失去手术或放射治疗最佳机会,致使其长期生存率低,疗效令人堪忧。IIIB/IV期非小细胞肺癌2年生存率仅10%-20%,中位生存时间仅10-12月。因此,人们需要不断研究新的治疗方法以提高肺癌治疗的有效率,其中以分子靶向治疗为代表的新治疗方法,为晚期NSCLC的治疗带来了新的希望。
ras基因家族与人类肿瘤相关的基因有三种——H-ras、K-ras和N-ras,分别定位在11、12和1号染色体上。K-ras因编码21kD的ras蛋白又名p21基因。在ras基因中,K-Ras对人类癌症影响最大,它好像分子开关:当正常时能控制调控细胞生长的路径;发生异常时,则导致细胞持续生长,并阻止细胞自我毁灭。她参与细胞内的信号传递,当K-ras基因突变时,该基因永久活化,不能产生正常的ras蛋白,使细胞内信号传导紊乱,细胞增殖失控而癌变。
K-ras基因就像体内一个“开关”,它在肿瘤细胞生长以及血管生成等过程的信号传导通路中起着重要调控作用,正常的K-ras基因可抑制肿瘤细胞生长,而一旦发生突变,它就会持续刺激细胞生长,打乱生长规律,从而导致肿瘤的发生。
K-ras基因检测是目前医生了解大肠癌患者癌基因状况最直接、最有效的方法。看K-ras基因有没有突变,可以筛选出抗EGFR(表皮生长因子受体)靶向药物治疗有效的大肠癌患者,实现肿瘤病人的个体化治疗,从而延长患者生存期。对于没有突变的患者,则能减少不必要的治疗费用和毒副作用。目前在欧美,K-ras检测已成为大肠癌患者内科治疗前必做的常规检查。
突变扩增阻滞系统(amplification refraCtory mutation system,ARMS)也叫等位基因特异性PCR,该法是在PCR基础上发展而成的,是一种直接用于点突变分析的PCR技术。其依据的基本原理是Taq DNA聚合酶缺少3′到5′外切酶活性,因此对于3′末端错配的引物以低于正常末端配对引物的速度延伸,当错配碱基的数目达到一定程度或者条件达到一定的严谨程度时,扩增反应终止。
大部分肿瘤的突变都是体细胞突变,突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起。因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA,所以对体细胞突变检测需要较高的特异性,而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限,不能完全满足临床需要。特异性探针法如以Scorpions ARMS为代表的英国DxS和中国厦门Adx的KRAS检测试剂盒虽然检测灵敏度高,但其检测费用较高,不适合国内NSCLC患者的常规检测和筛查,因此,临床迫切需要开发一种快速准确、操作简便、灵敏度高的检测KRAS基因突变的试剂盒,满足临床用药和检测诊断的时效性要求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种高灵敏度的用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒和反应体系,本发明的另一目的是提供一种用于检测KRAS基因突变的检测方法。
本发明是通过以下技术方案实现的:用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:包括7种基因的特异性引物对和7条与特异性引物配合使用的探针引物,所述的特异性引物对和探针引物为:
优选的,还包括质控系统或/和内控系统,所述的质控系统为一对质控引物和相应的质控探针,所述的内控系统为一对内控引物和相应的内控探针,具体如下:质控引物:
上游引物:5’AATATAAACTTGTGGTAGTTGGA3’
下游引物:5’TTCGTCCACAAAATGATTCTGA3’
质控探针:5’CTGTATCGTCAAGGCACTCTT3’;
内控引物:
上游引物:5’CCCAGCAGTTTGGCCC3’
下游引物:5’TCCTTAATGTCACGCACGAT3’
内控探针:5’ACCACCACGGCCGAGCGG3’。
优选的,所述的试剂盒还包括KRAS PCR反应液、酶系1、阳性对照、阴性对照和DEPC水。
优选的,所述的试剂盒可用于血清游离DNA样本、组织样本或穿刺样本的KRAS基因突变的检测。
作为优选,包括PCR扩增试剂和对照试剂,所述的扩增试剂、对照试剂的组成成分和终浓度如下:
用于人类KRAS基因突变的检测方法,所述的方法包含以下步骤:
(1)样本DNA的提取
血清游离DNA提取和组织样本DNA提取;
(2)PCR反应体系的配制
分别配制PCR反应液16ul,酶系1、2ul、引物探针混合液2ul,模板DNA5ul,阴性对照和质控视为样本,作相同处理;
(3)结果判读:
根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果:利用特异性引物和荧光探针进行PCR检测,突变和质控由FAM指示,内控由HEX信号指示,通过计算ΔCt的大小进行判断,反应管的ΔCt值<ΔCt Cut-off值时,则样品为该反应管对应信号突变阳性,反之则为阴性或低于试剂盒的检测下限。
ΔCt值=突变样本Ct值-质控Ct值
表 CutoffΔCt值
检测靶点 | CutoffΔCt值 |
12CYS | 10 |
12SER | 10 |
12ARG | 8 |
12VAL | 12 |
12ASP | 8 |
12ALA | 12 |
13ASP | 10 |
本发明提供了用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,所述试剂盒包括PCR反应缓冲液、引物探针混合液、酶系1、阳性对照、阴性对照。引物探针混合液包含突变位点基因和内控引物探针,质控基因和内控检测引物探针,突变和质控探针标记FAM荧光素,内控标记HEX荧光素,质控及内控均作为结果判读的一部分,质控基因选择是人类KRAS基因相对保守的区段,内控选择的是人β-aCtin保守基因,双控体系共同用于监控血浆样本DNA质量和PCR反应过程,与现有技术相比,本发明的有益效果是:1)高灵敏度:可在100ng野生型人类基因组背景下检测出1%微量突变模板,减少了假阴性结果的出现;
2)全封闭反应,避免假阳性结果的发生;3)双控反应体系,质控及内源对照,有效检测PCR扩增及核酸提取。
附图说明
图1为12CYS灵敏度结果
图2为12SER灵敏度结果
图3为12ARG灵敏度结果
图4为12VAL灵敏度结果
图5为12ASP灵敏度结果
图6为12ALA灵敏度结果
图7为13ASP灵敏度结果
图8为临床阳性样本用12CYS检测结果
图9为临床阳性样本用12SER检测结果
图10为临床阳性样本用12ARG检测结果
图11为临床阳性样本用12VAL检测结果
图12为临床阳性样本用12ASP检测结果
图13为临床阳性样本用12ALA检测结果
图14为临床阳性样本用13ASP检测结果
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
利用本发明实时荧光PCR检测KRAS 7种基因突变的方法包括如下步骤:
1、核酸提取
以石蜡包埋组织为例,按照推荐的QIAamp DNA FFPE Tissue Kit说明书进行石蜡包埋组织基因组DNA的提取。
2、PCR反应体系的配制(25ul)
试剂名称 | 加入量 |
PCR反应液 | 16ul |
酶系1 | 2ul |
引物探针混合液 | 2ul |
模板DNA | 5ul |
所述的模板DNA包含样本DNA和阴性、阳性对照DNA。
3、PCR扩增
实时PCR扩增条件为:50℃2min,1个循环;95℃5min;95℃10s,55℃15s,72℃30s,5个循环;95℃10s,60℃45s(收集FAM和HEX荧光信号),40个循环。
4、结果判定
1)检测结果除阴性对照外,突变反应管的内控信号HEX应有扩增曲线,且Ct≤33;若Ct>33,则提示样本DNA模板量偏低或存在PCR抑制剂,需重新提取或者增加PCR模板量再做,但是如果管内FAM有信号,可能是由于突变的扩增抑制了内控序列的扩增,结果仍然可信。
2)质控管FAM信号Ct<21,提示样品加入量过高,需减少样本加入量再实验;质控管FAM信号Ct>26或阴性,提示该样本加入量过低或提取失败,需要增加样本量再实验或重新提取。
3)质控管FAM信号21≤Ct≤26
A:ARMS引物管Ct<30,样本结果判读为阳性。
B:ARMS引物管>阴性临界值或无扩增曲线,样本结果判读为阴性。
C:相应ARMS引物管30≤Ct值<阴性临界值(如下表),且其与质控管FAM信号的ΔCt≤△Ct Cut-off值,该样本结果判读为阳性;反之则判读为阴性。
实施例2
利用本发明检测KRAS基因突变阳性患者石蜡包埋组织样本10例,并与测序结果进行对照,结果:检测出12VAL阳性4例,12ASP阳性5例,13ASP阳性1例,与测序法符合率100%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:包括7种基因的特异性引物对和7条与特异性引物配合使用的探针引物,所述的特异性引物对和探针引物为:
2.根据权利要求1所述的用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:还包括质控系统或/和内控系统,所述的质控系统为一对质控引物和相应的质控探针,所述的内控系统为一对内控引物和相应的内控探针,具体如下:质控引物:
上游引物:5’AATATAAACTTGTGGTAGTTGGA3’
下游引物:5’TTCGTCCACAAAATGATTCTGA3’
质控探针:5’CTGTATCGTCAAGGCACTCTT3’;
内控引物:
上游引物:5’CCCAGCAGTTTGGCCC3’
下游引物:5’TCCTTAATGTCACGCACGAT3’
内控探针:5’ACCACCACGGCCGAGCGG3’。
3.根据权利要求1或2任意所述的用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还包括KRAS PCR反应液、酶系1、阳性对照、阴性对照和DEPC水。
4.根据权利要求1所述的用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒可用于血清游离DNA样本、组织样本或穿刺样本的KRAS基因突变的检测。
5.根据权利要求1-4所述的用于人类KRAS基因突变检测的试剂盒,其特征在于:包括PCR扩增试剂和对照试剂,所述的扩增试剂、对照试剂的组成成分和终浓度如下:
6.用于人类KRAS基因突变的检测方法,所述的方法包含以下步骤:
(1)样本DNA的提取
血清游离DNA提取和组织样本DNA提取;
(2)PCR反应体系的配制
分别配制PCR反应液16ul,酶系1、2ul、引物探针混合液2ul,模板DNA5ul,阴性对照和质控视为样本,作相同处理;
(3)结果判读:
根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果:利用特异性引物和荧光探针进行PCR检测,突变和质控由FAM指示,内控由HEX信号指示,通过计算ΔCt的大小进行判断,反应管的ΔCt值<ΔCt Cut-off值时,则样品为该反应管对应信号突变阳性,反之则为阴性或低于试剂盒的检测下限。
ΔCt值=突变样本Ct值-质控Ct值
表 CutoffΔCt值
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710437605.0A CN107164495A (zh) | 2017-06-12 | 2017-06-12 | 用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710437605.0A CN107164495A (zh) | 2017-06-12 | 2017-06-12 | 用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107164495A true CN107164495A (zh) | 2017-09-15 |
Family
ID=59825683
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710437605.0A Pending CN107164495A (zh) | 2017-06-12 | 2017-06-12 | 用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107164495A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107488727A (zh) * | 2017-09-26 | 2017-12-19 | 臻和(北京)科技有限公司 | 3d数字pcr检测kras和braf基因突变的引物探针组合物、试剂盒及方法 |
CN107904292A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-13 | 上海派森诺医学检验所有限公司 | 一种用于检测人kras基因突变的试剂盒及其检测方法 |
CN110982886A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-10 | 武汉光谷联合医学检验所股份有限公司 | 一种人类K-ras基因突变检测试剂盒及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104805208A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-29 | 山东维真生物科技有限公司 | 用于检测人类kras基因7种热点突变的引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |
-
2017
- 2017-06-12 CN CN201710437605.0A patent/CN107164495A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104805208A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-29 | 山东维真生物科技有限公司 | 用于检测人类kras基因7种热点突变的引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107488727A (zh) * | 2017-09-26 | 2017-12-19 | 臻和(北京)科技有限公司 | 3d数字pcr检测kras和braf基因突变的引物探针组合物、试剂盒及方法 |
CN107488727B (zh) * | 2017-09-26 | 2020-06-02 | 无锡臻和生物科技有限公司 | 3d数字pcr检测kras和braf基因突变的引物探针组合物、试剂盒及方法 |
CN107904292A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-13 | 上海派森诺医学检验所有限公司 | 一种用于检测人kras基因突变的试剂盒及其检测方法 |
CN110982886A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-10 | 武汉光谷联合医学检验所股份有限公司 | 一种人类K-ras基因突变检测试剂盒及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104818320B (zh) | 一次性检测肺癌多重基因的引物、探针、检测体系和试剂盒 | |
CN102719525B (zh) | 用于检测eml4-alk融合基因突变的引物、探针及检测试剂盒 | |
CN106978497A (zh) | Eml4‑alk融合基因突变的检测引物、探针及检测试剂盒 | |
CN107488722B (zh) | LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途 | |
CN105886648A (zh) | 用于检测egfr基因t790m突变的试剂盒 | |
CN105112522A (zh) | Her2基因扩增的检测引物组及试剂盒 | |
CN103451282B (zh) | 用于检测BRCA1mRNA的核酸检测试剂盒 | |
CN107164495A (zh) | 用于人类kras基因突变检测的试剂盒及其检测方法 | |
CN106434982B (zh) | 缺血性脑卒中相关的分子标记物及其应用 | |
CN104830989A (zh) | 一种用于ros1与多种基因发生融合突变的检测试剂盒 | |
CN110055312A (zh) | 用于检测egfr基因c797s和t790m顺反式突变的引物、探针及试剂盒 | |
CN110229910A (zh) | Myd88基因l265p突变检测试剂盒及检测方法 | |
CN108130362A (zh) | 用于egfr基因突变检测的试剂盒及应用 | |
CN106636376A (zh) | 用于检测人类ros1融合基因的核酸、试剂盒及方法 | |
CN106520994B (zh) | 一种用于检测egfr基因突变的多重荧光pcr检测试剂盒 | |
CN107177682A (zh) | 用于brafv600e基因突变的试剂盒及检测方法 | |
CN106755551A (zh) | 一种egfr/l858r突变液体活检试剂盒及其应用 | |
CN103290120A (zh) | 一种用于检测alk基因表达的探针、引物及试剂盒 | |
CN107586851A (zh) | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 | |
CN103911436A (zh) | 一种非贲门胃癌早期诊断的血清/血浆miRNA标志物及其应用 | |
CN106755400A (zh) | 一种血液egfr基因t790m突变的检测方法 | |
CN103589786B (zh) | 检测RRM1 mRNA相对表达量的方法、试剂盒及引物和探针 | |
CN110964829A (zh) | 人类rcn3-ssu72基因融合突变检测引物组合、探针及检测试剂盒的使用方法 | |
CN107029238B (zh) | Linc01094在诊治缺血性脑卒中的应用 | |
CN109055489A (zh) | 一种基于细胞外囊泡dna检测egfr-tki敏感突变的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: 230000 Room 901, 9th Floor, Building 2, Tuxing Luxing Science and Technology Industrial Park, Yaoyuan Road, Luyang District, Hefei City, Anhui Province Applicant after: Anhui Anlong Gene Technology Co Ltd Address before: 230000 Floor 1-2 of A6 at the junction of Fuyang Road and Beicheng Avenue, Luyang Industrial Zone, Hefei City, Anhui Province Applicant before: Anhui Anlong gene limited medical examination |
|
CB02 | Change of applicant information | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170915 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |