CN107488722B - LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了任意一种或两种以上的长链非编码RNA在制备用于诊断肺腺癌的试剂中的用途，所述LncRNA为LINC00942、LINC00973、AFAP1‑AS1或者CLDN10‑AS1。所述的LINC00942长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.15所示。所述的LINC00973长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.16所示。所述的AFAP1‑AS1长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.17所示。所述的CLDN10‑AS1长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.18所示。本发明可应用于肺腺癌的诊断。

Description

LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途

技术领域

本发明属于生物基因领域，涉及一种检测试剂，具体来说是一种LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途。

背景技术

肺癌已经成为发病率排名第一的恶性肿瘤，2015年新发病例73.33万，其中男性位于第一位，女性仅次于乳腺癌，2015年因肺癌死亡61.02万，癌症致死率在男性和女性中均排在第一位，肺癌年龄标化发病率和年龄标化死亡率在男性中保持稳定，在女性均持续升高，与肺癌相关的诊疗的费用也在逐年大幅上升。因此，肺癌的防治已成为我国乃至全球的重大医疗保健问题之一。肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，非小细胞肺癌大概占到80％，肺腺癌和肺鳞癌是非小细胞肺癌的主要类型，近年来，肺腺癌发病率已超过肺鳞癌成为主要的肺癌病例类型，在非小细胞肺癌中占到超过一半，并且恶性程度较高。

目前主要采用组织化学染色光镜下观察肿瘤组织切片进行肺腺癌的诊断。但在肿瘤低分化、坏死、挤压导致结构不清，或者穿刺取样导致样本量稀少等情况下时，仅根据HE染色切片难以做出准确的病理诊断，免疫组化染色过程繁琐，所需时间较长。此时，采用基因检测等方法检测肺腺癌和癌旁正常组织差异表达的LncRNA对明确诊断肿瘤病理类型就非常重要。

目前临床上针对肺腺癌的基因检测大多数以肺腺癌的驱动基因为主，如EGFR突变、ALK融合突变等，此类诊断主要应用于肺癌的分子分型诊断指导后续治疗。然而现在临床上还没有专门针对肺腺癌诊断的基因检测，特别是LncRNA，中国专利文献CN201610896402.3公开了长链非编码RNA XLOC_000090在肺癌中的鉴定和用途，通过基因芯片技术筛选出10对肺癌组织及其对应的正常肺组织中差异表达的lncRNA，其中发现XLOC_000090在肺癌中的表达明显高于正常肺组织中的表达。所述的试剂盒用于辅助检测肺癌细胞是否转移方面。LncRNA在肺癌诊断方面有少许报道，但是仅限于单个LncRNA，无法满足高敏感性和高特异性的要求。目前，关于LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1这四个LncRNA在肺腺癌病理组合型诊断中还未见报道。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途，所述的这种LncRNA(长链非编码RNA)在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途要解决现有技术中针对肺腺癌的基因检测过程复杂，时间长的技术问题。

本发明提供了任意一种或两种以上的长链非编码RNA在制备用于诊断肺癌的试剂中的用途，所述LncRNA为LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1或者CLDN10-AS1。

进一步的，所述的LINC00942长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.15所示。

进一步的，所述的LINC00973长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.16所示。

进一步的，所述的AFAP1-AS1长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.17所示。

进一步的，所述的CLDN10-AS1长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.18所示。

本发明还提供了一种用于诊断肺腺癌的试剂盒，含有任意一种或两种以上的长链非编码RNA，所述的长链非编码RNA为LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1或者CLDN10-AS1。

进一步的，所述的用于诊断肺腺癌的试剂盒，还包括有标准样品，所述的标准样品为肺癌组织、肺癌患者血液、肺癌患者血浆、肺癌患者血清、肺癌患者体液或者肺癌患者细胞中的任意一种或者两种以上的组合。

肺腺癌的诊断金标准为石蜡染色，但是过程繁琐、耗时较长，冰冻染色虽然速度很快，但是结果不可靠，容易受标本大小制约。实时荧光定量PCR所需检测的RNA量只需要很少量的组织即可满足检测要求，不受组织大小制约，同时一次可检测多种指标，综合判断，成本较低，耗时较短。如果使用荧光原位杂交将大大缩短检测步骤和时间。

本发明从癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas，TCGA)下载获取肺腺癌患者癌组织标本和非肺癌患者正常肺组织标本LncRNA高通量测序数据，筛选肺腺癌组织高表达的LncRNA。

本发明通过对肺腺癌和正常肺组织转录组LncRNA全面系统的分析和验证，发现了四种LncRNA：LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1可以在肺腺癌组织病理诊断中用于鉴别诊断肺腺癌，这四种LncRNA较部分目前常用肺腺癌诊断基因在敏感性和特异性上具有一定优势，差异显著，如果制备为诊断试剂盒，步骤和时间效率将会较高。

本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明采用实时荧光定量PCR的方法在肺腺癌和癌旁正常组织中检测LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1表达水平，发现LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1在肺腺癌组织中显著高于癌旁正常组织，确定了LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1在肺腺癌和癌旁正常组织中的表达差异以及在诊断中的应用价值。

附图说明

图1显示了LIN00942在肺腺癌和癌旁正常组织的表达水平差异。

图2显示了LIN00973在肺腺癌和癌旁正常组织的表达水平差异。

图3显示了AFAP1-AS1在肺腺癌和癌旁正常组织的表达水平差异。

图4显示了CLDN10-AS1在肺腺癌和癌旁正常组织的表达水平差异。

具体实施方式

实施例1

一、肺腺癌和肺正常组织LncRNA表达数据分析

首先从TCGA数据库中下载获取肺腺癌和肺正常组织的LncRNA测序数据，共纳入488例肺腺癌组织和58例肺正常组织。LncRNA的表达量，以FPKM值表示。

基于以下标准初步筛选出可应用于肺腺癌肺正常组织诊断的LncRNA。

(1)肺腺癌与正常组织差异倍数大于10。

(2)P<0.01。

(3)LncRNA在肺腺癌中有表达者占比>80％。

我们最终挑选了6个LncRNA，通过Ensembl数据库查找LncRNA不同的转录本，它们均有不止一个转录本，为了提高结果可靠性，使用DNAstar软件分析其共有碱基序列(SEQID NO.13～18)。根据共有碱基序列使用Primer 6设计引物，交由上海华津生物公司合成。

二、抽提癌组织和癌旁正常组织标本总RNA，使用特异性引物实时荧光定量PCR检测目的非编码RNA表达量。在肺腺癌和肺正常组织新鲜标本检测DSCAM-AS1、RP11-51M18.1、LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1的表达水平差异。

我们在46例肺腺癌和对应癌旁正常组织新鲜标本检测DSCAM-AS1、RP11-51M18.1、LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1的表达。具体步骤如下：

(1)采用Takara公司RNAiso Plus抽提组织总RNA，具体步骤如下：

②使用无酶枪头和EP管，剪刀、镊子、纱布、瓷珠高温高压消毒。

②EP管中加入1ml Trizol，放入3个小瓷珠。

③剪取绿豆粒大小组织放入EP管，使用全自动样品快速研磨仪4min 70Hz。

③取出EP管，4度静置5min。

④按照每毫升Trizol加入200μl氯仿比例加入氯仿，剧烈颠倒混匀15秒成乳浊液，4℃静置5min。

⑥12000G 4℃离心15分钟。

⑦移液器小心得吸取上层无色液体至另一EP管中，注意不要吸到中间层或者下层，每1ml Trizol约可吸400-500μl。

⑧加入和吸取的上层清液等体积的异丙醇，颠倒上下混匀，然后15-25℃静置10min。

⑨一万两千G 4度离心10min，可以看到管底有少许白色沉淀，弃上清，加入900μlDEPC水配制的75％的乙醇，轻轻弹动管底使沉淀漂浮起来，上下颠倒充分洗涤，室温静置5min。

⑩一万G 4度离心5min。弃上清，使用黄枪头吸走管底液体，勿吸走沉淀。

在洁净的区域敞开EP管管口3-5min，勿过分干燥。

加入适量的DEPC水溶解RNA沉淀，一边用枪吹打加速溶解，放置于室温30min测量浓度和纯度。总RNA制备完成。

(2)使用TaKaRa RR047A逆转录试剂盒、ProFlexTMPCR System梯度PCR仪进行逆转录制备cDNA。

(3)引物序列由Primer6设计，上海华津生物公司合成，Primer引物设计参数为：

Tm：60.0+/-5.0℃

Length：18To 22bp

Amplicon Length：100To 300bp

引物序列如下：

DSCAM-AS1

RP11-51M18.1

LINC00942

LINC00973

AFAP1-AS1

CLDN10-AS1

(4)RT-PCR采用TaKaRa

Premix Ex TaqTMII RR 820A试剂盒，反应体系如下表：

使用罗氏96系统，扩增程序采用两步法，反应条件如下：

相对表达量计算采用ΔΔCt方法，每个样本做三个复孔，Tm值计算采用三个复孔的平均值，ΔCt＝目的基因的Ct值-内参基因的Ct值，对参照组ΔCt取平均值(ΔCt)-，ΔΔCt＝ΔCt-(ΔCt)-，2^-ΔΔCt即对照组和参照相对表达量比较数值。采用GraphPad 6.0统计与作图。

DSCAM-AS1和RP11-51M18.1在肺腺癌和癌旁正常组织中表达均很低，差异无统计学意义(P>0.05)，结果未附。LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1四种LncRNA在肺腺癌和癌旁正常组织的表达水平差异均具有统计学意义(P<0.01)，如图1-4，它们在肺腺癌组织中表达均显著高于癌旁正常组织。

实施例2试剂盒的使用

参考实施例1的方法，抽提肺腺癌患者癌组织标本和癌旁正常组织总RNA，逆转录为cDNA后，使用本发明的诊断试剂盒，通过RT-PCR检测LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1在肺腺癌和癌旁正常组织的表达量差异。

本发明收集2016年2月至2016年12月中山医院胸外科原发性肺腺癌患者手术切除标本。采用本发明的试剂盒，将筛选出的LncRNA使用QRT-PCR在手术切除的病理标本中进行验证，发现LINC00942、LINC00973、AFAP1-AS1、CLDN10-AS1在癌组织表达均显著高于癌旁组织。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 复旦大学附属中山医院

<120> LncRNA在制备诊断肺腺癌的试剂中的用途

<141> 2017-09-18

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gatccttgtt tggtctcact cc 22

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgcctatgt gggtgattgg 20

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agactccaga cacgccacct ta 22

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggaagccact gagagccaag aa 22

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tcctgcttct gctctcctca ca 22

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

actgggactt cgctctcttg ct 22

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

catttgtccg aggtcacaga 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

agtcactgct ggggaagaga 20

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cgttgaggac tcggaccagg aa 22

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

tgaaggatcg gcggagcgtt a 21

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

cctgtggtgg gagaaagaga ga 22

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ggcagccatg aagaatgaag ca 22

<210> 13

<211> 1640

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 13

ctttgggagg ctgaggcagg cagatcacct aaggccagga attcgacacc agcctggcca 60

acgtggcaaa acccgtctct actaaaaata caaaaattag ccgggcgtgg tggtgtgcgc 120

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tccctctaaa aaaagaaaaa aagaaaagaa aagaaaagaa aatgatatat ccatgatgaa 300

ttaaaatgga gtggaaccca ctgatggtat gcagctgata agacgctata gagaaatgat 360

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aggagggaaa gatgaagcta cttaggggga ctaggaaaca cgcagttggc ctgccctctg 780

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ccatcaagca tgcatttagt 1640

<210> 14

<211> 1521

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 14

cttccacatc gtggaagctt tgttctttcg ctctttgcaa taaatcttgc tactgctcac 60

tctttgggtc cacgctgctt ttatgagctg taacactcac cgcgaagatc tgcagcttca 120

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cacggcttca ttcttgaagt cagtgagacc aagaacccac caattccgga cacaatttct 300

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agtgagaccc tgtctcaaca aaataaatta aaataaaaaa taatatattt ttctaactat 480

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ttaggcaaca aatgccttgt ctgaaatatc acatttgaga atgctgctca tttaatcaga 660

aaggtacgct actttaaaga actgaggtcc actttctgga gccaaaaact cataaatccc 720

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ttaaatcagg atagcaaata ataggggctt ttacaaattc aatctgtttc cttacaaaaa 960

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tgaaaataag ttatttgtta tttctggtaa aggttcaatt gacctcccct tccaggatga 1380

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ttgttaactt ctattttgaa ttgattgtgg catctgcctg cttccccatt aaaactgaat 1500

aaaatcttta acacataaaa a 1521

<210> 15

<211> 1280

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 15

aggctgcctc cggcttcacc gctcctcccc gagcacagcc tttgtggggc ctacggggca 60

gtaggagaca ggacgcttgt cctgcggaat ggcaaggaat cagctctcca tttcagggca 120

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gtctggtgag gaggcaaacg ctcagaatct actgcaggtg ttagttctgc agaggagtct 360

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aggcagaggg aggcacagcc ccgacacagc cacccacccc gtggccagag cagggtggcg 840

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cccctgcaag actgagaact ggccagaatt gcccacttgc tagactagca agagagcgaa 1020

gtcccagtgg gtacccccga cgaaggacac ccgttcctta ccccccaccc agaggcaccc 1080

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gaagacacga ctccacagtg agcacggggc tcaggacagg acccagcgtg gcagaccagc 1260

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<210> 16

<211> 962

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 16

agaagctctt gggagcatgt ggacagttgt ggctgctcct gagctgacac taactgctca 60

tgactcctct gtgggagaag taggtggttt cctagaggaa gaagtttggg taatgaagcc 120

acagagattt gctgatacat ttgctaggca cgacttctgg tcatttagaa agctattttg 180

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atctctggct gcagtaatga gtagaggaaa tgaagaaata agaatggaag cataatcatt 360

tgtccgaggt cacagaggga gatgattaca cagctggaat gtaagcctca gtactttact 420

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atgtagaagg agaagaaggg gaggaattac ttatcctttg gcatacatta gcatgcaaat 600

aaatcctttc tctgcattgt ggaagggtct gaaattatca catatacaat gtatctttta 660

tcaatggcct tgcatacaaa ttttactttg aagaatccag atttagaggt cttctccaaa 720

catttgcatt gtttcttttt cttaggatca gaacttctac ctattgtcat tttaagaaaa 780

aagatcatga attaattaat ttattcatta tttacaccct tatattcttt cccaaatgtt 840

ttaatgtggc ttacattgta tacatgtaca caataaatat ttatatttaa ataagttata 900

atcacagaat gagaatatta ttacaaccac tcatactcat tcaaatagct tgattatatc 960

at 962

<210> 17

<211> 6810

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 17

gctgctgcca cgtaagaagt gtctttcgcc tcccgccatg attctgaggc ctccccagcc 60

atgtgcaact gcgtgtttac tgctctgggc ccagtgcctc cctcgctcaa tggagtgacg 120

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tctcagcggt ctcagccgaa tgactgaaga ggaaccaggg acagggatga ctcacatggg 240

aagaggaccc cactttgttc tgtttgattc taagaggaca cagactgctt cattcatttc 300

agtttcccca gcacctggct taactctcag acatgttaga cggtttgtaa gcaccggctc 360

tactgaactg gcatcaaatc atgacctggt tcagaagaga cacgaggact ggatctgttc 420

taaacagatt gtgcaaaggg gaaagacaca gactcagcat ttccacagct tttaacattt 480

cagcgagagg tgagaaagca tgtcaggaac acaggcccgg ccgatgaaag tgtctgatgc 540

taacacatga actgtcttct gctgggcaca ctaaggggcc acaagcaagc tacgccccag 600

agccactcca cattctctct gggtgcactg gccctcggcc acgcaaggcc gcgccagcct 660

ccgaggtgag ccagaaggac acacacctgt ggactcgatg tccctgactt gggctcgatg 720

gccagcccca gggtgactcc gcccgccagc gctttcttca ggctctcctt gacctccgtc 780

agctccagct ccaggctgac acgctccgcc tccttctgcc ggcactcctc ctccagctgc 840

ttcagcttct cctccaggat cgcctgcggc ttcctgcctg gaattcccag aaacgccgtt 900

actcccgcgg caggcacagg ttctccaaac aacagagaag gcacctggtc cccaagaaga 960

acttccacaa aacgtctgag gtcgagctcc cctgacttag gtcctcgttg tgaaacttaa 1020

attcagcagt tctctaaggg atcagagtcc ttctcctacc atttcccttt gctgcagccg 1080

ttgaggactc ggaccaggaa agaggagatg ctgattctga cgaaggccag gagctcctgg 1140

ctctgggcct caatgttctc attttaaaac gtggacccta aactccacag ttcccaaagc 1200

tgccaccttc ttggagtgtg aaccctgtcc tcccctaacg ctccgccgat ccttcagtca 1260

tcttatttgc gcccgaggca atgaacagta gctcagcttg catctctact ggacatggca 1320

cacatttctt taaggcacat tcacttattt tatttgaggt ttgctgcagt gacctaagat 1380

gcacccactg ggcagatgag aacaccaatc ccaagaggtg aacggacttg tgcccagggc 1440

ctgggccggt ggtggccggc aggcgaggtt ctctttttca aagccaaaag cactcctggc 1500

cctcctgcat cttcactatc ctgcaagctg ggaacacggg agaaatgcta cttctgtctc 1560

attaaactcc atgccccgtc ccattctctg gcacagcctc ctcccgtagg gtcagcctca 1620

gactgcaggc cacatcctgg gcctcctata gggtcagccc gacctgccct gccaacacct 1680

gccttccctc ctctaaactc caaaagcatt tcccttcatc agatcattga ggcacaaagt 1740

ccagcaaggc tggagctgct aaccacctgc tgggtgtgcg tcagctcctc cccgcgcggc 1800

gagccatggg aaggccacag cctcttctct ggaccaccca gggctctgag gcatctgaag 1860

cccccgtccc agcccaggcc agtacaatct caatctaagg agccagtctt ccgtagtcta 1920

agcaccgggc tggaagggag gccatgcgta ggtaagcggt gccaccccag gctcaggagc 1980

tgagcgccag ctcccgccag caggaattgc acgcgcctgg cccagggctg ccactctggc 2040

tgcaaactca gtttctgtga cttcagtccc tctctggtgt ctgtattcca ttagcctggc 2100

ctcttccctg atgcatccca agacagatgc tgccttgctc tcgcctgtcc cttctcaaca 2160

aacgaggggc tgcttctacc cttgtctgga cttctgaata ttactgaccc ctgtgggcta 2220

ccctctgtag agaaatccag ctgatccctc ctacccggtg accagaatct actgcgtcct 2280

gcggatacag gggccatcct ccagacaatc tctgttgtca gcgccagaag ccggaacagg 2340

tcccccagca cctcccctgc ctcggtgagc agcgtgtggg tctggccctg gcctctgcct 2400

gcacgccgca tgtttgacca cacaggcacc tgcctcgggg ttaccagcaa tgtttccaag 2460

ccccaagaaa cactgtgaga taacccactc ttactaaata aaatgacagc cttggtgagc 2520

aataggtcct ttgggcaaag cagaatgaaa tctccagtct ctaatacaaa catgcaccct 2580

gggcagtcac ccacaccctt cataccggcg ttcacttcaa tagccgctcg aaggtctttt 2640

ctttccttgc ggagctgggc cagcctattc cgcagggcct ctttcctctt cagcagctcc 2700

tcctctttgg tctgtagccg cttggcatct gcttctaccc ggttcttgcc atacttgtac 2760

tgggcagcat cttgagaaga aaaaaaagca gcaattaaaa attaggttta ctagcctggg 2820

aaatatggga cgatcccttc tccacaaaaa atacaaaatt agccaggcat ggcggcacat 2880

gcctatagtc ccagctactc aggaagctga ggtgggagaa tcgcttgagc ttgggagctt 2940

gaggctgcag tgagctgtga tcctgccact gtgctccagc ctggatgaca gtgagacccc 3000

gtgtcaaaaa aaaattaggt ttattcaagc agataatggg gtaactcaaa aagcctgttg 3060

aatcagccaa ctcagtaaac aaacacaaag cattattttg ctaattcaac aagaaaagga 3120

cagggctggt atgaaccaag cagaaaagtg actagttcaa attctccaat attctttgaa 3180

tcaaattctt aaaaacgaaa acagaatatt aggaaattcc tttaattcac ttccctttga 3240

ggcacacggc ttataattaa tctgcaacaa ggtggagaat gaacattcta taatcggaaa 3300

agacaggagt aatatcaaaa ataatgtctg aaatttgctt ccttctctac gtcttcaaat 3360

ccttccctaa caccgcagta tctgttcctt atggccatgt catctgactg gctctgaatt 3420

gctgctacac ccccagcact gagattagca cccggcacgg agtgtggcac aataaatgct 3480

tgtttagtga ataaatgaac aacggataca tgaagaggca accaggagcg gtatctggag 3540

cctgactgtc taggaaggag tcccagctta cacttgtagc tgcatgacct ggaacagggc 3600

acgaatccct ctgtgcctca gtttccctca tccgtgaaat ggggatagta agagcaggca 3660

attcactgag tggttacgag gattaaatat ttataaagca cttagaacaa acacaaatgg 3720

gcaacacata aatgcttatt tcataaaatg aataaatgaa gaggaaacta gctgtaggga 3780

aaatttacag acttggcaac ttcacatcac cagtgaaaac agctttcaaa acctgacccc 3840

atgctctctc ctattatgtt ggcttttcaa taacagtaat ttaggacaac acctctttgt 3900

taagacacat ggaagagatg aaggttctaa caaaactcgg atggaggatc accgatttca 3960

aagcttccgt ggtctcccag tcgcttctaa caatcactca cgcctgaagg caactcccag 4020

gccttcctga ctgcacaccc caagtgtctg actccctcac aaggctagaa actacttcag 4080

gtagaagcca caggggtggc ataatgatta agaataaaaa cactggactc agagaggtgg 4140

ctagaaaccc acactccacc ctcccttgct ccatgactct gcaagcaacc tccggagaag 4200

ctcagcttca ccctctctaa agcagaaacg agaaggaatc ctgtgtgtgt gtatgtgtgt 4260

gtgcgtgcgt gtgcatgcgt gttttaaatt agaacgttat atctgaaaaa aatctaacaa 4320

aatgatacga cgcctgatgt agtggacatt cactgacaat tcttaccata tcagcgataa 4380

gtgattccca gagccttgtc cactcaggga cagcagggag ccatttctag cacctgtcct 4440

aaatgctgga tttgccaatt cttgcaacgt aagttatcat gatttcaatg aaatactgca 4500

tttatgaagg cataaaaagt gatcactccc cagtcaattt tcccctaatc aaaagaacca 4560

catagaatga cagcaaaagc gtcggcagcc tgaggagagg cgaagcattc gacaatctga 4620

aacaaaagga tcgctgtttg cagctaaggt taacaacata tttggcaaac agggccaagt 4680

ccaaactcta ctcgcttatt tctaaactaa gctgtttccc caatgaactc aatgcaatca 4740

cctataaatt tccacatctt ttggtcccca tgtaataaat cccatctaat ctataatgca 4800

accggctgga ttcaagcaaa aacacggaat gccattattt ttctcttttg tcaccattag 4860

acgtcaccac agttaataaa aactccctac agaacatccc ataaaataaa ggaataaatc 4920

atctaggaaa taaagtcagc acaggtactg acagagaaac accatggcga ttgagactcc 4980

gtgggactcc gattttgctt gtaacaaagc tttccaggtg tgagctgctc ctctccccca 5040

tctgcccctc ctcaaagaaa caacactaaa agaggtgaaa gtaaatacac ctgatacatt 5100

caggaaataa gatttgccag ataaggtcaa aggaagttag tacattaaac aaatggtggt 5160

aggagggagg atttggccca actggctcca acctatctgg tcaacacgta tgttgggtag 5220

aacagaggtg gagaaaagcc tagatcaggg atgtatacgc ttccttgggg cagacgcagc 5280

ctggccctgc ggagcgattt caagcctcgt tcacgaacat ggccaaggac actgccagcc 5340

tcttcattcc cctgtgtgga tgctccaact ccaaaagtgg aaccacaggg caaatgaatg 5400

tcggcacgtg tcggtatggc agcctcgctc ttcgacagct ggtgtggggg ttaccacctg 5460

gggctagctg gcctcatctt cgttagcact gagactggtc taccagttgc acagattcag 5520

atttgaaaat ctcaggtgca aatcccaagt ggcgatggca tgtaaccaca tcaaactcaa 5580

catctgcacc taactcccac cttctttctc tgggaaatct tcctggacat gcccagatgg 5640

actcaggagc ccatcacctg taaatcccca cactgcagcc ctgccacttg cttgtctgca 5700

tgtgtgggtc cgctggacca ctttggtgta tctttgagcc ccttgagtga aaaaatgctg 5760

cctggctggc tccctgatta gacatccaac ataatgagga ctaacaccaa tacaaacact 5820

taagagatga catatcgccc tagctggatc tactacaggg aagggaagag ggtgctgggt 5880

ccaggcaggc tgagtgtctc atgtcttaat gcttctctgc ccaatctatt tccggctgga 5940

tgtggagtct gaaggcctgg cacccactct ggctctgtga tttaccagct gtgagccttg 6000

ggggagctgc ttactctctt ggtgattctt ttctcatttc tatgatgggg tagaggataa 6060

tgcctatgct tacaaagtgg ctgtgggaag taaaccggat gggataagaa tggcttgctg 6120

tggaccacag gcaccgcagg ataaccattc ctcagaactc ctcatactgc tctagtgctt 6180

ggaggtccgt gtattacctc agctattcca accgcaccaa ccacgggagc cacgtgtcta 6240

cgtctgacag ataaagatgc tgagtttaga gtctgcaagg cttgacaacc acagatcagg 6300

gacaggagct gaggtctcct gacctggagc ccagggccac ccggagctgc aagaaacctg 6360

cactcacaac tgcctcctat tttaaaatgc tgagtcgatc ccacaggtgg caaaccagtt 6420

ctgggcttca atttacaagc agtcagaaaa gctgggttga aatcgccact gtccttctat 6480

gtggctgatg aggaaggatg acggtgccca ccgctccatc tctccagctg accccaagct 6540

ggcactcacg ggtgggcagg ctcagacagg cccagctcca ccaagtgcac ttgaagccgg 6600

aatgcaagac atccgatggt atacttactc gaacccgtcc ttttcacaac agccgcggga 6660

tccgctttct ttggctgact gctcagagtc ttcccttttc ctgtgacccc attagacgcc 6720

acggggggct ttttaccctt gagctgttga aataaacata taagaacatt aaaaataaac 6780

acaaagtcaa acaaaaaaaa aaaaaaaaaa 6810

<210> 18

<211> 895

<212> DNA

<213> 人肺腺(human lung adenocarcinoma)

<400> 18

aggagagcct ggcagacaga gctctgggta gagtctgggt agagggacct gtggtgggag 60

aaagagagaa gatcagagtg gaggggagaa gcagggttgg ggccttgaag gtactgctga 120

gcatgtgggt ccttatcctt accctgcatt gcccgcaggc ctgacctttg cttcattctt 180

catggctgcc aagtgagagt gtggcccctg cagatggttg gatcatccat ccagttcttt 240

gcttcctcta gctgatatcc ttctttgctg tactatatgg gaaaagcaag aaatatttga 300

caccaaaatt gcttcctttg tgtggccccg tattgccctg tatagaagca tttcgtcttc 360

acaacaactc tatgagcagt gtgaagatgg actaatacaa agaggaacta ggggagcttg 420

gaggaaccag agactcaatc agggattcaa gtgaagtctc tgttgcaaac ccttgagcag 480

gtgagaaccc ctggactctt gcaggggatg tgggaggagc tgtacataca gacagtgctg 540

tccagccaat gtgggttcaa accctgcatc tgtcactggc tatgtgacct tgatcaagtt 600

ccttaaggtc tccaggtttg ttttcttatc tgtaagatga gaatcctctt ctgcaaacca 660

tgtctgttta aaatatgtgc ttattttgaa agtgatgtag caacattttc tctagttaat 720

gttctttctc cctcataatt ttaaaacatt tattcatgac tataatgtta agtctgtgac 780

tttatttttg ctaaatgtcc atctcagaga agaatatgac tttatatagc gaagtatttt 840

ttaaaaaata gccttagtaa tgcatatttg caataaaaat atttgacaat cctaa 895

Claims (4)

1.任意一种或两种的长链非编码RNA在制备用于诊断肺腺癌的试剂中的用途，所述长链非编码RNA为LINC00973或者CLDN10-AS1。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的LINC00973长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.16所示。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的CLDN10-AS1长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.18所示。

4.一种用于诊断肺腺癌的试剂盒，其特征在于：含有检测任意一种或两种长链非编码RNA的引物，所述的长链非编码RNA为LINC00973或者CLDN10-AS1，检测所述的长链非编码RNA LINC00973的上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ ID NO.8所示；检测所述的长链非编码RNA CLDN10-AS1的上游引物序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物序列如SEQ ID NO.12所示；还包括有标准样品，所述的标准样品为肺癌组织、肺癌患者血液、肺癌患者血浆、肺癌患者血清、肺癌患者体液或者肺癌患者细胞中的任意一种或者两种以上的组合。

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