CN104789689A - 作为肺腺癌诊治靶标的clec9a基因 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了CLEC9A基因及其编码蛋白产物的应用。CLEC9A基因可作为诊断肺腺癌转移的特异性标志基因。CLEC9A基因的编码蛋白可以施用于肺腺癌转移的患者或者施用于肺腺癌转移风险高的患者，以抑制肺腺癌转移或预防肺腺癌转移。本发明为临床上诊断肺腺癌转移提供了新的诊断方法并且为治疗肺腺癌转移提供了新的候选药物。

Description

作为肺腺癌诊治靶标的CLEC9A基因
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地涉及人CLEC9A基因在肺腺癌诊断、治疗中的用途。
背景技术
恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的疾病。我国每年癌症发病人数约160万。恶性肿瘤正超过心血管病成为致死原因的第一位。癌症的防治和研究正成为全世界科学家日益关注的课题。肺腺癌(lung adenocarcinoma)是肺癌的一种，属于非小细胞癌，腺癌大约占肺原发肿瘤的40％。不同于鳞状细胞肺癌，肺腺癌较容易发生于女性及不抽烟者。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部X线检查时被发现。
对于肺癌的诊断检查，临床上常用的方法有以下几种：(1)X线检查；(2)支气管镜检查；(3)放射性核素检查；(4)细胞学检查；(5)剖胸探查术；(6)ECT检查；(7)纵隔镜检查。但是上述诊断方法均不能满足对肺癌早期诊断的这种要求。因此目前非常有必要寻找适合肺癌早期诊断的方法。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的基因标志物。相比传统的肺癌诊断方法，使用基因标志物来诊断肺腺癌的转移具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在癌症早期就能预判肺腺癌转移风险，针对风险高低，采取相应的预防措施。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种人CLEC9A基因及其表达产物在制备预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品中的应用。
进一步，上面所提到的诊断产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品。
进一步，所述用RT-PCR预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CLEC9A基因的引物；所述用实时定量PCR预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CLEC9A基因的引物；所述用免疫检测预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：与CLEC9A蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：与CLEC9A基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CLEC9A蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CLEC9A基因的核酸序列杂交的探针。
优选地，所述产品包括芯片、试剂盒。
本发明还提供了人CLEC9A基因在高通量测序平台中的应用。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知人CLEC9A基因的异常与肺腺癌相关也属于人CLEC9A基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
本发明还提供了人CLEC9A基因及其表达产物在制备预防肺腺癌转移、治疗肺腺癌转移的药物中的应用。
进一步，所述药物包括：含有人CLEC9A基因的药物、携带人CLEC9A基因的载体或宿主细胞所形成的药物、人CLEC9A蛋白质药物、或其他能够促进CLEC9A基因表达的药物。本发明的药物可以用于补充内源性的人CLEC9A蛋白的缺失或不足，通过提高人CLEC9A蛋白的表达，从而治疗因人CLEC9A蛋白缺乏导致的肺腺癌的转移。
本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。
在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。
进一步，本发明的药物还包括药学上可接受的载体，载体，这类载体包括(但并不限于)：稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇等。
本发明的药物导入组织或者细胞的方式可以分为体外或者体内的方式。体外方式包括将含有人CLEC9A基因的药物或者含有人CLEC9A蛋白质的药物导入细胞中，再将细胞移植或回输到体内。体内方式包括直接将含有人CLEC9A基因的药物或者含有人CLEC9A蛋白质的药物注入体内组织中。
本发明的药物还可与其他治疗肺腺癌转移的药物联用，多种药物联合使用可以大大提到治疗的成功率。
本发明还提供了一种预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的芯片，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CLEC9A基因转录水平的针对CLEC9A基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的CLEC9A蛋白的特异性抗体。
进一步，所述基因芯片可用于检测包括人CLEC9A基因在内的多个基因(例如，与肺腺癌转移相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括人CLEC9A蛋白在内的多个蛋白质(例如与肺腺癌转移相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与肺腺癌转移的标志物同时检测，可大大提高肺腺癌诊断的准确率。
本发明提供了一种预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的试剂盒，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测CLEC9A基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括CLEC9A蛋白的特异性抗体。
进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测CLEC9A基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对CLEC9A基因的引物和/或探针。根据SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测CLEC9A基因表达水平的引物和探针。
与CLEC9A基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
进一步，所述CLEC9A蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述CLEC9A蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与CLEC9A蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗体。
在本发明的上下文中，“CLEC9A基因”包括人CLEC9A基因以及人CLEC9A基因的任何功能等同物的多核苷酸。CLEC9A基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中CLEC9A基因(NC_000012.12)DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
优选地，CLEC9A基因的编码序列包括以下任一一种DNA分子：
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA序列；
(2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有70％、优选地，90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。
在本发明的具体实施方案中，所述CLEC9A基因的编码序列是SEQ ID NO.1所示的DNA序列。
在本发明的上下文中，CLEC9A基因表达产物包括人CLEC9A蛋白以及人CLEC9A蛋白的部分肽。所述CLEC9A蛋白的部分肽含有与肺腺癌转移相关的功能域。
“CLEC9A蛋白”包括人CLEC9A蛋白以及人CLEC9A蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括人CLEC9A蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与人CLEC9A的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。
优选地，CLEC9A蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：
(1)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个。
(3)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有至少80％同源性(又称为序列同一性)，更优选地，与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列至少约90％至95％的同源性，常为96％、97％、98％、99％同源性的氨基酸序列构成的多肽。
在本发明的具体实施方案中，所述CLEC9A蛋白是具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白质。
通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是CLEC9A蛋白的融合蛋白。对于与CLEC9A蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留CLEC9A蛋白的生物学活性即可。
本发明的CLEC9A蛋白也包括对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只要经过修饰的蛋白质仍然能够保留CLEC9A蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。
附图说明
图1显示利用RT-PCR检测CLEC9A基因在肺腺癌组织中的表达情况；
图2显示利用RT-PCR检测CLEC9A基因在肺腺癌细胞中的过表达情况。
具体的实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:ColdSpring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1筛选与肺腺癌转移相关的基因标志物
1、样本获取：30例肺腺癌组织(包括15例有转移样本和15例无转移样本)上述样本为肺腺癌患者的手术切除标本，这些标本来自于河北医科大学第四医院和北京友谊医院。上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。组织样本的临床资料包括：性别、年龄、肿瘤大小、病理分级(Edmonson)、转移与否、复发与否等。
2、RNA样品的制备(利用TAKARA的RNA提取试剂盒进行操作)
1)在较少RNase干扰的清洁区，使用含适量液氮的研钵称取离体肺腺癌组织样本约20mg，用杵棒研磨至粉末状；
2)将样本转移到一个不含RNA酶的2mL的离心管中；
3)加入300uL Lysis solution，置于匀浆器内，充分研磨1-5min；
4)12000g，4℃，离心10min，转移上清至新的1.5mL的离心管中；
5)加入600ul RNase-Free Water，用漩涡器混匀；
6)加入20ul蛋白酶K，在55℃温浴15min，不断涡旋混匀；
7)14000g，室温，离心1min，使细胞碎片沉淀于离心管底部，取上清转移到另外一个不含RNA酶1.5mL的离心管中；
8)加入450ul的95％乙醇，涡旋混匀；
RNA吸附：
9)取650ul含乙醇的裂解液加到离心柱中，14000g离心1min；
10)弃下层，重置收集管于柱上；
11)依照裂解液的容量，重复9)～10)步；
12)加入400ulWash solution，14000g离心2min；
13)弃下层，将柱置于一新的收集管上；
DNase处理：
14)加入100ulEnzyme Incubation Buffer和15ulDNase I，14000g离心1min；
15)将收集管中的溶液重新移入柱中；
16)室温放置15min；
RNA洗涤：
17)加入400ulWash solution，14000g离心1min，弃下层，重置收集管于柱上；
18)加入400ulWash solution，14000g离心2min，弃收集管；
RNA洗脱：
19)把柱子放入1.7mL Elution管中；
20)加入30ul Elution Buffer；
21)200g离心2min，使溶液充分与柱结合，然后14000g离心1min；
3、高通量转录组测序
3.1RNA-seq读段定位
首先将低质量的读段去除得到清洁读段，然后利用TopHat v1.3.1将清洁片段与UCSC H.sapiens参考基因组(hg19)进行匹配，H.sapiens UCSC hg19版的预先构建的索引从TopHat主页下载，并作为参考基因组，利用TopHat与基因组匹配时，允许每个读段(默认到20)有多个匹配位点，最多2次错配。TopHat根据外显子区域和GT-AG剪切信号建立可能的剪切位点库，根据这些剪切位点库将没有定位到基因组的读段定位到基因组上。我们使用TopHat方法的系统默认参数。
3.2转录丰度评估
匹配上的读段文件通过Cufflinks v1.0.3处理，Cufflinks v1.0.3将RNA-seq片段数目进行标准化计算转录本的相对丰度。FPKM值指的是每一百万测序片段中匹配到特定基因1kb长的外显子区域的片段数目。通过贝叶斯推理方法计算FPKM估计值的置信区间。Cufflinks使用的参考的GTF注释文件从Ensembl数据库下载(Homo_sapiens.GRCh37.63.gtf)。
3.3差异表达基因的检测
将下载的Ensembl GTF文件和通过TopHat匹配的原始文件传输到Cuffdiff，Cuffdiff使用原始的匹配文件重新估算GTF文件中列出的转录本的表达丰度，检测差异表达。在Cuffidff输出中只有q值＜0.01，测试显示成功的比较才被认为是差异表达。
4、结果
RNA-seq结果显示，CLEC9A基因在已转移的肺腺癌组织中的表达量显著低于未转移的肺腺癌组织中的表达量。
实施例2RT-PCR测序验证CLEC9A基因的差异表达
1、根据高通量测序的检测结果选择CLEC9A基因进行大样本RT-PCR验证。按照实施例1中的样本收集方式选择转移肺腺癌组织和未转移肺腺癌组织各80例。
2、RNA提取过程同实施例1。
3、逆转录：采用TAKARA的逆转录试剂盒进行RNA的逆转录，具体操作步骤见说明书。
4、PCR扩增
CLEC9A基因RT-PCR引物序列如下：
CLEC9A：正向引物为5’-TGTGGCAATCTGTGGTGA-3’(SEQ ID NO.3)
CLEC9A：反向引物为5’-GAGTTTTAAAGGCCAAATTT-3’(SEQ ID NO.4)
β-actin基因的RT-PCR引物序列如下：
β-actin：正向引物为5’-CATCCTGCGTCTGGACCT-3’(SEQ ID NO.5)；
β-actin：反向引物为5’-GTACTTGCGCTCAGGAGGAG-3’(SEQ ID NO.6)。
按照表1配制PCR反应体系：
表1PCR反应体系
试剂 体积
正向引物 0.2μl
反向引物 0.2μl
10×PCR缓冲液 0.4μl
dNTP混合物 1μl
Taq DNA聚合酶 1μl
模板 2μl
去离子水 补足10μl
反应条件：94℃，5min预变性；94℃，30s变性；55℃，30s退火；72℃，30s延伸；共35个循环。
以DNA条带的亮度来衡量DNA量，条带越亮，代表DNA量越多。以β-actin作内参对照，将CLEC9A基因扩增产物的条带的亮度进行均一化处理，比较已转移的肺腺癌组织和未转移的肺腺癌组织中CLEC9A基因扩增产物的亮度的比值。结果如图1所示，与未发生转移的组织相比，CLEC9A基因在已转移的肺腺癌组织中的表达下调，同RNA-sep结果一致。
实施例3CLEC9A基因过表达
1、细胞培养：将肺腺癌细胞株A549于RPMI1640培养基和10％胎牛血清中培养，置于37℃、5％CO2培养箱中。
2、CLEC9A基因的过表达
2.1CLEC9A基因表达载体的构建
根据CLEC9A基因的编码序列(如SEQ ID NO.1所示)设计扩增引物，引物序列如下：正向引物为5’-ATGCACGAGGAAGAAATATAC-3’(SEQ IDNO.7)，反向引物为5’-TCTCAACGCATACTTCTCACA-3’(SEQ ID NO.8)。从成人胎脑的cDNA文库(clontech公司，货号：638831)中扩增全长的CLEC9A基因的编码序列，上述cDNA序列经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后插入到经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切的真核细胞表达载体pcDNA3.1中，连接获得的重组载体pcDNA3.1-CLEC9A用于后续实验。
2.2转染
将肺腺癌细胞株A549分为两组，分别为对照组(转染pcDNA3.1空载体)、和CLEC9A过表达组(转染pcDNA3.1-CLEC9A)。使用脂质体2000进行载体的转染，具体转染方法按照说明书的指示进行。pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1-CLEC9A的工作浓度均为0.5μg/ml。
2.3RT-PCR检测
具体步骤同实施例2。
2.4结果
如图2所示，与转染pcDNA3.1空载体的细胞相比，转染pcDNA3.1-CLEC9A的细胞中CLEC9A的含量显著上调。
实施例4CLEC9A基因对肺腺癌细胞迁移能力的影响
采用划痕愈合实验检测CLEC9A基因对肺腺癌细胞迁移能力的影响。
1、具体步骤
(1)选用含有15μg/ml纤维蛋白原的PBS涂盖5cm大小的培养皿过夜。
(2)第二天加入含有10％FBS的RPMI1640培养基，在紫外线下灭菌数小时后使用。
(3)将A549细胞按照前面描述的方法进行细胞转染，转染72h后，按照1×106个细胞的标准对细胞进行接种培养，24h后，观察细胞是否生长均匀。
(4)用细胞刮在培养皿的细胞中间划开一条痕迹，将其放置在培养箱中培养24h后观察细胞在划痕中的迁移能力，每次观察的时候选择3个样本，观察3次。
2、统计学方法
实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用的t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
3、结果
迁移实验开始24h后，CLEC9A基因过表达组和对照组的划痕愈合率的平均值分别为31％、72％，上述差异具有统计学意义(P<0.05)，表明CLEC9A基因表达抑制了肺腺癌细胞的迁移能力。
实施例5CLEC9A基因对肺腺癌细胞侵袭能力的影响
使用Transwell侵袭小室测定法检测CLEC9A基因对肺腺癌细胞侵袭能力的影响。
具体操作步骤为：
转染48h的A549细胞使用胰酶消化并计数，取105个细胞置于1.5mL EP管中，加入200μL无血清培养基重悬细胞，加入经过铺基质胶的transwell小室中，下层小室加入10％FBS的DMEM培养基，放人37℃，5％CO2孵箱培养24h。取transwell小室，用棉签擦除里面的细胞，并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。固定染色后显微镜下取8个随机视野进行计数。
结果：
24h后，CLEC9A基因过表达组，通过Transwell膜的细胞数在显微镜下每个视野细胞数的平均值为65个，而对照组通过Transwell膜的细胞数在显微镜下每个视野细胞数的平均值为312个，上述差异具有统计学意义(P<0.05)，表明CLEC9A基因表达抑制了肺腺癌细胞的侵袭能力。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.人CLEC9A基因及其表达产物在制备预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CLEC9A基因的引物；所述用实时定量PCR预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增CLEC9A基因的引物；所述用免疫检测预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：与CLEC9A蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：与CLEC9A基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CLEC9A蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CLEC9A基因的核酸序列杂交的探针。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片、试剂盒。
5.人CLEC9A基因在高通量测序平台中的应用，其特征在于，通过高通量测序能够获知CLEC9A基因的表达异常与肺腺癌转移相关。
6.人CLEC9A基因及其表达产物在制备预防肺腺癌转移、治疗肺腺癌转移的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物包括：含有人CLEC9A基因的药物、携带人CLEC9A基因的载体或宿主细胞所形成的药物、人CLEC9A蛋白质药物、或其他能够促进CLEC9A基因表达的药物。
8.一种预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的芯片，其特征在于，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CLEC9A基因转录水平的针对CLEC9A基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的CLEC9A蛋白的特异性抗体。
9.一种预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否转移、判断肺腺癌转移是否复发的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测CLEC9A基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括CLEC9A蛋白的特异性抗体。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括针对CLEC9A基因的引物和/或探针。
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