CN109234391A - 作为肺腺癌生物标志物的anxa3基因或anxa3蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及肺癌基因检测技术领域，具体涉及作为肺腺癌生物标志物的ANXA3基因或ANXA3蛋白。研究发现，无论在宣威地区还是非宣威地区的肺腺癌中，ANXA3基因都异常表达，表达量低于或高于正常水平，ANXA3基因或蛋白可以作为肺腺癌生物标志物在肺腺癌的诊断、淋巴结转移判断、辅助TNM分期和预后等阶段发挥作用。本发明提供一种ANXA3基因及其表达产物在制备预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助TNM分期的产品中的应用、一对ANXA3基因的引物、一种预诊断肺腺癌的检测试剂盒和一种用于治疗肺腺癌的药物组合物，本发明为临床上诊断肺腺癌转移提供了新的诊断方法并且为治疗肺腺癌转移提供了新的候选药物。

Description

作为肺腺癌生物标志物的ANXA3基因或ANXA3蛋白
技术领域
本发明涉及肺癌诊断技术领域，具体涉及作为肺腺癌生物标志物的ANXA3基因或ANXA3蛋白。
背景技术
Annexin A3，是annexin膜蛋白家族的12个成员之一，是一个钙依赖性磷脂结合蛋白。ANXA3蛋白的表达具有特异性，而且ANXA3蛋白具备多种功能，参与抗炎、抗纤溶、囊泡转运、细胞增殖、分化、凋亡、细胞生长和血管生成。最近的研究结果表明，ANXA3在大鼠肝再生和血管生成中起着重要的作用，ANXA3在肺癌和前列腺癌中的表达异常，ANXA3的表达水平与肿瘤预后密切相关。
肺癌发病率在全球各种实体瘤中排名第一，居癌症相关死亡首位，特别是原发性肺腺癌，近年来患病数和比例均呈上升趋势，其侵袭性强、预后差，成为人们关注的焦点。肺腺癌(lung adenocarcinoma)是肺癌的一种，属于非小细胞癌(NSCLC)。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。研究表明，染色体失衡导致基因改变，在NSCLC的分子发病机制中起主要作用，但靶基因仍有待鉴定。识别早期非小细胞肺癌的发生，为肺癌的早期诊治与完善预后有积极意义。众所周知，转移是肺癌的常见现象和主要致死原因，直接影响肺癌的转归。大多数癌症的特征是差异表达的基因(DEGs)，这些基因在癌细胞中的表达与其附近的正常细胞有显著差异。这些基因被认为在癌症的发生和发展中起着重要的作用。通过微阵列分析的基因表达谱已经被证明是用于鉴定与癌症相关的基因的有力工具。
已有文献表明[1]，ANXA3基因在肺腺癌组织中是高表达的，ANXA3基因表达产物可能具有促进癌细胞迁移、侵袭的作用，将ANXA3基因敲除后，肺腺癌发病进程明显减缓。ANXA3可以作为肺腺癌预后的生物标志物。但是，针对发病原因特殊的宣威地区肺腺癌可否也可以用ANXA3作为生物标志物进行预后判断，判断标准是否一样呢？
对宣威地区肺癌高发的病因学研究，尚无统一的结论，除环境因素外，近年来疾病的内在因素作用开始受到更多关注。因此，进一步探索宣威肺腺癌的组织生物学行为和临床特征，判断预后成为人们关注的焦点。由于宣威地区肺腺癌发病早期并无明显特征，且目前尚无明确诊断标志物。虽然近年来，分子靶向药物的治疗获得了可喜的效果，但是仍有70％的宣威肺腺癌患者，在确诊肺癌的时候就已经处于癌症晚期，并远处转移，这部分病人的五年生存率不到15％，给社会和家庭带来巨大经济负担。所以积极地探究其发病机制、寻找标志基因，对协助预防、辅助早期诊断、判断预后、肿瘤早期筛查以及个体化治疗肺腺癌乃至宣威肺腺癌具有重要意义。
[1]Liu Y F,Liu Q Q,Zhang Y H,et al.Annexin A3Knockdown SuppressesLung Adenocarcinoma[J].Anal Cell Pathol(Amst),2016,2016:4131403.
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明通过基因芯片技术、qRT-PCR筛选出在宣威肺腺癌组织中差异表达的ANXA3基因，通过western-bolt和免疫组化实验验证ANXA3蛋白在宣威肺腺癌组织中差异表达，使用ANXA3基因或蛋白作为宣威肺癌的生物标志物能够快速对患者病情进行判断；ANXA3蛋白的表达与肺腺癌淋巴结的转移具有相关性，ANXA3也可以辅助肺腺癌TNM分期，在疾病发生时监测ANXA3的表达量可以预判肺腺癌的严重程度。
本发明提供一种ANXA3基因及其表达产物在制备预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中的应用。
进一步，上述的预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品包括：用RT-PCR、RT-qPCR、免疫组化、原位杂交、生物芯片预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品；
所述RT-PCR预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中至少包括一对特异性扩增ANXA3基因的引物；
所述RT-qPCR预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中至少包括一对特异性扩增ANXA3基因的引物；
所述免疫组化预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括与ANXA3蛋白特异性结合的抗体；
所述原位杂交预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括与ANXA3基因的核酸序列杂交的探针；
所述生物芯片预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括：含有与ANXA3蛋白特异性结合的抗体的蛋白芯片或含有与ANXA3基因的核酸序列杂交的探针的基因芯片。
进一步，所述的ANXA3基因及其表达产物在制备预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品是试剂盒或试剂。
本发明还提供一对ANXA3基因的引物，引物序列如下：
ANXA3F：5’-GCGGCAGCTGATTGTTAAGGA-3’；
ANXA3R：5’-GAGTCACTAGGGCCACCATGAGA-3’。
进一步，上述的ANXA3基因的引物应用于检测ANXA3基因的产品中，
进一步，上述的检测ANXA3基因的产品包括用RT-PCR、RT-qPCR检测ANXA3基因的产品。
本发明再提供一种预诊断肺腺癌的检测试剂盒，所述试剂盒是基因检测试剂盒、蛋白免疫检测试剂盒中的一种；
所述基因检测试剂盒包括用RT-PCR、RT-qPCR、原位杂交、基因芯片中的任意一种方法检测ANXA3基因转录水平的试剂和ANXA3引物；
所述蛋白免疫检测试剂盒中包括ANXA3蛋白的特异性抗体。
本发明还提供一种用于治疗肺腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括ANXA3基因表达调控剂；
上述ANXA3基因表达调控剂使表达量异常的ANXA3基因恢复正常表达水平。
本发明还提供一种ANXA3基因及其表达产物在诊断宣威肺癌中的应用。
有益效果：
ANXA3表达量异常变化通常伴随着肺组织的癌变，现有研究表明，肺腺癌组织的ANXA3基因是高表达的，但宣威地区肺癌有其独特的发病原因，病人的肺腺癌组织中的ANXA3基因相对于癌旁组织表达量是显著性下调的，这为ANXA3这一基因在肺腺癌中的作用蒙上更神秘的色彩。综上所述，ANXA3在肺组织中的差异表达可能预示着肺组织的癌变发生，但具体表达量是上调还是下调可能跟发病诱因相关。
实验可知，ANXA3蛋白都与淋巴结转移相关，ANXA3蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率为86.8％，无淋巴结转移组的阳性表达率42.5％，二者的具有统计性差异，宣威组与非宣威组相比，差异不具有统计学意义；ANXA3蛋白在癌组织中的阳性表达率随TNM分期增加呈上升趋势，在分期晚的病人中阳性率较高，T1+T2期与T3+T4期患者相比，后者阳性率明显高于前者，差异具有统计学意义。实验结果可知，检测ANXA3基因的表达量可以判断肺腺癌中淋巴结是否转移并且可以辅助肺腺癌TNM分期。
附图说明
图1是表达谱芯片检测ANXA3基因在肺癌组织的表达情况(纵轴表示肺腺癌组织与癌旁组织中的ANXA3表达量的比值，正值表示肺腺癌组织中的ANXA3表达上调，负值表示ANXA3在肺腺癌组织中的表达下调；横轴表示样本编号)；
图2是ANXA3mRNA在癌及癌旁组织中表达分析图；
图3是western blot检测ANXA3蛋白在癌及癌旁组织的表达量(纵坐标表示所检测出的ANXA3与β-Actin的western blot条带的灰度比值)。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下结合附图和实施例对本发明作进一步详细描述：
实施例一：
ANXA3基因在肺腺癌组织中的表达情况
1基因芯片检测基因表达
1.1取材
29例原发肺腺癌患者的手术切除癌组织和癌旁组织作为实验样本。所有肺腺癌患者在宣威地区生活大于十年，所有癌组织均术后病理证实为肺腺癌。全部原发肺腺癌患者术前均未行放、化疗，全部病例临床资料完整。
1.2组织RNA的提取
用TRIZOL法提取各组织中的RNA，Nanodrop2000对所提RNA进行浓度和纯度测定，要求OD260/280在1.8～2.2之间。-80℃保存备用。
1.3样品进行荧光标记
a.反转录合成First strand cDNA：以Total RNA起始，含有T7启动子序列的T7Oligo(dT)Primer为引物，使用First strand Enzyme Mix合成First strand cDNA；
b.合成Second strand DNA：用Second Strand Enzyme Mix将DNA-RNA杂合体中的RNA链转化为Second Strand cDNA，即双链DNA；
c.体外转录合成cRNA：以双链cDNA为模板，利用T7Enzyme Mix合成cRNA，掺入生物素biotin；
d.cRNA纯化：使用磁珠纯化cRNA，除去其中的盐、蛋白质等杂质，利用紫外分光光度计对cRNA进行定量；
e.cRNA片段化：将cRNA片段化成适宜测量杂交的大小。
1.4芯片杂交、清洗、染色、扫描。
1.5数据提取及分析使用AGCC软件(Affymetrix@GeneChip@Command Console@Software)将芯片的荧光扫描图像进一步保存成.CELL文件以待进一步分析。
2实时荧光定量PCR
TRIZOL法获得RNA后，检测其浓度和纯度，进行cDNA模板合成，按照TaKaRa公司的RR036A荧光定量预混试剂说明书混匀各反应试剂并进行反应。ANXA3和内参GADPH基因的qPCR所需要的引物均采用Primer在线引物设计软件设计(见表1)，经blast比对，所有引物序列均特异，并且跨内含子。引物由上海生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
表1RT-PCR引物
PCR反应结束后，读取Ct值并根据每组所得ANXA3及GAPDH基因的Ct值，用2－△△Ct的方法进行相对定量。
3结果分析
3.1芯片分析基因表达情况
29例宣威肺腺癌的患者年龄为49.2±7.8岁，其中男性16例，女性13例。根据TNM分期，T1期11例，T2期11例，T3期7例。经过归一化和数据过滤，发现了2424个显著差异表达的基因，其中1636个基因表达上调和788个基因表达下调。经过路径分析这些参与肺腺癌患者多种生物学功能的差异表达基因，并进行聚类分析，筛选出与肺腺癌关系密切的下调表达的ANXA3基因。在检测的29对宣威地区原发肺癌组织中，有18例癌组织中ANXA3表达低于癌旁组织，占62％，并且下调表达差异倍数大于2倍，如图1所示。Gene Ontology分析表明，ANXA3基因参与调节各种生物反应，并且为细胞外分泌蛋白，可能是影响宣威肺腺癌的发生发展的因素之一。
3.2RT-PCR分析ANXA3mRNA表达情况
为研究地区原发性肺腺癌中ANXA3基因的表达，实验利用qRT-PCR检测宣威地区原发性肺腺癌癌组织及相应癌旁组织中ANXA3的mRNA表达水平。按上述步骤1提取RNA并检测合格后，检测肺癌组织及癌旁组织mRNA表达水平，样本共24对。
ANXA3基因在肺腺癌组织和癌旁组织mRNA表达水平的差异检测实验数据使用2－△△Ct相对定量分析方法，通常认为2－△△Ct>2或者2－△△Ct<0.5表示腺癌组织相对于癌旁组织来说，基因表达上调或者下调。检测的24对宣威肺腺癌和癌旁组织计算结果显示，16对腺癌组织相对癌旁组织，基因表达下调，下调发生率为66％，结果具有统计学意义。24对癌组织和癌旁组织中的mRNA表达水平为非正态分布，故用两配对样本的非参数检验，应用SPSSStatistic 17.0进行统计分析。结果表明宣威地区原发性肺腺癌中ANXA3基因的mRNA表达低于癌旁组织，表达水平与芯片的结果相一致，结果具有统计学意义(P<0.05)，结果如图2所示。上述结果提示ANXA3基因可能与原发性肺腺癌的发生发展有密切联系。
本实施例应用实时荧光定量PCR对筛选出的ANXA3基因进行相应表达水平的验证，结果提示ANXA3基因表达是下调的，与芯片结果一致。分析实时荧光定量PCR结果中mRNA表达水平，推测ANXA3基因的低表达可能发生拷贝数的改变，从而对肺癌的发生发展产生影响。有研究通过联合应用表达谱芯片，miRNA芯片以及外显子测序对218例前列腺标本进行分析，发现NCOA2作为一个新的癌基因，遵循这一思路，将ANXA3基因列为作为与宣威地区肺腺癌发病机制相似的肺癌的分子标志物而进行下一步研究。
实施例二
ANXA3蛋白在肺腺癌组织中的表达
1临床标本收集及肺腺癌组织信息
标本的收集与病例资料的准备同第一部分，此部分共检测原发性肺腺癌组织及癌旁标本共21对。
2组织蛋白提取及浓度测量
RIPA裂解法提取组织中的总蛋白，BCA蛋白浓度测定试剂盒用来测定蛋白的浓度，使用碧云天试剂盒，目录号：P0012S。
3蛋白变性
根据所测得的样品浓度对各蛋白样品进行调整，每管中加入适量5×loadingbuffer，金属浴煮5min，储存于-20℃各用。
4Western Blot实验步骤
根据蛋白分子量配制SDS-PAGE凝胶，恒压进行电泳，浓缩胶电压为80V，分离胶电泳为110V；对蛋白胶进行“湿转”，恒流280mA；转膜完成后封闭并孵育抗体，所用一抗是兔抗人ANXA3抗体，所用二抗是山羊抗兔，β-Actin作为对照。
5结果分析
用BIO-RAD Quantity one凝胶成像系统分析软件，以β-Actin为内参计算出ANXA3蛋白的相对表达量，原发性肺腺癌组织及相应癌旁组织中ANXA3的蛋白表达水平分布情况如图3，ANXA3蛋白在原发性肺腺癌组织中表达低于癌旁组织。(P<0.05)
本实施例应用Western blot技术检测ANXA3蛋白在肺癌组织和癌旁组织的表达情况，进一步了解ANXA3蛋白与肿瘤的关系。结果显示癌组织中蛋白表达水平低，对比相应的癌旁组织，差异具有统计学意义，结合ANXA3基因在肺癌中mRNA、蛋白表达水平，初步认为ANXA3可能是宣威地区肺腺癌的分子候选标志物。
实施例三
ANXA3蛋白在肺腺癌中的免疫组化表达
1.研究材料
收集昆明医科大学第一附属医院2016年-2017年宣威地区原发性肺腺癌标本共计69例，另收集昆明医科大学第一附属医院2016年-2017年非宣威地区原发性肺腺癌标本共计72例。总共141例肺腺癌病例，患者接受手术之前，没有放化疗病史，所有病例的采集均包括肿瘤部分及癌旁区域，且获得较为完整的临床资料。另选取人类脾脏组织为ANXA3抗体的阳性对照片。
69例宣威地区原发性肺腺癌中，包括男性43例，女性26例，其中吸烟者39例，不吸烟者30例。年龄为32-77岁，平均年龄及中位年龄分别为60岁及52岁。有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者46例。按肿瘤直径分类：≤3cm者27例，＞3cm者35例，未知7例；按组织分化程度对肿瘤进行分级：Ⅰ级(也称G1)26例，分化程度良好，肿瘤细胞接近相应的正常发源组织，恶性程度低；Ⅱ级(也称G2)22例，组织异型性在Ⅰ级和Ⅲ级之间，恶性程度居中；Ⅲ级(也称G3)16例，分化程度较低，肿瘤细胞与相应的正常发源组织区别大、分化差，为高度恶性；Ⅳ级(也称G4)5例，未分化肿瘤，高度恶性。采用2010年国际抗癌联盟的第七版TNM staging(AJCC-7)，肺癌的TNM分期法进行肿瘤分期：T1为27例；T2为22例；T3为10例；T4为3例；由于肿瘤大小不详未能具体分期7例。所有病例术前均未接受放疗和化疗，且获得较为完整的临床资料。
72例非宣威地区原发性肺腺癌中，包括男性42例，女性30例，其中吸烟者38例，不吸烟者34例。年龄为30-93岁，平均年龄及中位年龄分别为61岁及64岁。有淋巴结转移者38例，无淋巴结转移者34例。按肿瘤直径分类：≤3cm者25例，＞3cm者41例，未知6例；按组织分化程度对肿瘤进行分级：Ⅰ级(也称G1)23例，分化程度良好，肿瘤细胞接近相应的正常发源组织，恶性程度低；Ⅱ级(也称G2)26例，组织异型性在Ⅰ级和Ⅲ级之间，恶性程度居中；Ⅲ级(也称G3)15例，分化程度较低，肿瘤细胞与相应的正常发源组织区别大、分化差，为高度恶性；Ⅳ级(也称G4)8例，未分化肿瘤，高度恶性。采用2010年国际抗癌联盟的第七版TNMstaging(AJCC-7)，肺癌的TNM分期法进行肿瘤分期：T1为25例；T2为25例；T3为11例；T4为5例；由于肿瘤大小不详未能具体分期6例。所有病例术前均未接受放疗和化疗，且获得较为完整的临床资料。2研究方法
所有手术切除标本均经4％中性缓冲甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋。肿瘤常规切片均经过重新染色并复核HE结果。应用免疫组化EnVision法检测ANXA3在肺腺癌肿瘤及癌旁组织中的表达情况，采用SPSS17.0分析软件分析系统，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
3免疫组化DAB染色评分
显微镜在低倍镜(100X)下选定肿瘤区域，再用高倍镜(400X)观察肿瘤细胞阳性表达情况。对肿瘤细胞免疫组化后蛋白表达情况，采用半定量积分法对阳性表达细胞(DAB染色显棕褐色)的比例及染色强度进行评分。每张玻片在肿瘤区域随即选取10个高倍镜(400X)视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的阳性细胞数以及染色表达强度。阳性细胞数所占百分比评分标准：0分(0％)，1分(1％—25％)，2分(26％—50％)，3分(51％—75％)，4分(76％—100％)。染色表达强度评分标准：无棕褐色显色为0分，淡黄褐色为1分、黄褐色为2分，棕褐色为3分。按阳性细胞数所占百分比及染色表达强度的乘积将免疫组化反应结果分为四个等级：0—2分为阴性(—)，3—4分为弱阳性(+)，5—8分为阳性(++)。由三位病理医师独立评判，若两位专家评分相差3分则重新评判。
4免疫组化结果
4.1研究共收集69例宣威地区原发性肺腺癌及其相应的癌旁组织标本，免疫组化结果显示ANXA3在宣威地区肺腺癌组织中呈中-低程度表达，其表达位置主要位于细胞浆，胞核中偶然可见少量表达。ANXA3的阳性表达率在宣威地区原发肺腺癌肿瘤组、癌旁组表达依次为52.2％和10.1％。
4.2研究共收集72例非宣威地区原发性肺腺癌及其相应的癌旁组织标本，免疫组化结果显示中ANXA3在宣威地区肺腺癌癌组织中呈高-中程度表达，其表达位置主要位于细胞膜和细胞浆，胞核中偶然可见少量表达，可见阴性表达，而在相应的癌旁组织中ANXA3几乎不表达。ANXA3的阳性表达率在宣威地区原发肺腺癌肿瘤组、癌旁组表达依次为72.2％和15.2％，癌组织表达P＜0.05，表达程度高，癌旁表达P>0.05，表达程度较低(见表2)。
4.3无论在宣威地区肺腺癌还是非宣威地区中，ANXA3的表达均与淋巴结转移、TNM分期有关，(均P＜0.05)。而与浸润深度及肿瘤分化情况年龄、性别、吸烟与否无关(P＞0.05)(见表2和3)。
表2非宣威地区ANXA3蛋白表达与临床参数关系
表3宣威地区ANXA3蛋白表达与临床参数关系
4.4ANXA3蛋白表达与淋巴结转移的关系：ANXA3蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率为86.8％高于无淋巴结转移组阳性表达率42.5％(P<0.05)差异具有统计学意义，ANXA3蛋白在淋巴结转移组阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异不具有统计学意义(P＝0.05)；在无淋巴结转移组阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
4.5ANXA3蛋白表达与临床肿瘤分期的关系：ANXA3蛋白在癌组织中的阳性表达率随TNM分期增加呈上升趋势，在分期晚的病人中阳性表达率较高。T1+T2期与T3+T4期患者相比较，后者阳性率明显高于前者，差异具有统计学意义(P<0.05)。
本实施例应用病理组织免疫组化技术，结果显示ANXA3蛋白在非宣威地区原发性肺腺癌中高表达，在宣威地区原发性肺腺癌中表达水平低于非宣威地区，差异具有统计学意义。对于ANXA3在宣威地区肺腺癌中的表达情况，以及ANXA3对宣威肺腺癌发生发展的影响机制，原因可能是人体长期暴露于烟煤排放中会产生很强的遗传毒性效应，从而在分子水平上表现出明显的特征。一系列的现有研究表明宣威肺腺癌的发病机制可能与发生在其他地理区域的肺癌的发病机制不同。因此，我们认为在宣威肺腺癌中ANXA3差异表达模式，可能是独特的环境和某些易感群体带来的结果。ANXA3蛋白作为一种影响肿瘤发生的因素之一，也是肿瘤发生侵袭和转移的指标。ANXA3基因或ANXA3蛋白作为生物标志物在宣威肺腺癌的肿瘤检测、淋巴结转移预判参考和TNM分期参考中的应用也可同样应用于与宣威地区肺腺癌发病原因相似的肺癌中，对于这一特殊的肺癌的早期诊断、治疗等都由临床应用价值。
应理解，在阅读了本发明的上述内容后，本领域技术人员可以对本发明进行各种修改和润色，然而均是以检测本发明所述的ANXA3基因或ANXA3蛋白相关，这些修改或润色均属于本发明的范围。

Claims (10)

1.一种ANXA3基因及其表达产物在制备预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品，其特征为：包括用RT-PCR、RT-qPCR、免疫组化、原位杂交、生物芯片预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品；
所述RT-PCR预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中至少包括一对特异性扩增ANXA3基因的引物；
所述RT-qPCR预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中至少包括一对特异性扩增ANXA3基因的引物；
所述免疫组化预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括与ANXA3蛋白特异性结合的抗体；
所述原位杂交预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括与ANXA3基因的核酸序列杂交的探针；
所述生物芯片预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括含有与ANXA3蛋白特异性结合的抗体的蛋白芯片；
所述生物芯片预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中包括含有与ANXA3基因的核酸序列杂交的探针的基因芯片。
3.根据权利要求1或2任意一项所述的ANXA3基因及其表达产物在制备预判肺腺癌淋巴结是否转移、辅助肺腺癌TNM分期的产品中的应用，其特征是：所述产品是试剂盒或试剂。
4.一对ANXA3基因的引物，其特征为：所述ANXA3基因的引物序列如下：
Anxa3F：5’-GCGGCAGCTGATTGTTAAGGA-3’；
Anxa3R：5’-GAGTCACTAGGGCCACCATGAGA-3’。
5.根据权利要求4所述的ANXA3基因的引物，其特征为：所述ANXA3基因的引物应用于检测ANXA3基因的产品中。
6.根据权利要求5所述的ANXA3基因的引物，其特征为：所述的检测ANXA3基因的产品包括用RT-PCR、RT-qPCR检测ANXA3基因的产品。
7.一种预诊断肺腺癌的检测试剂盒，其特征为：所述试剂盒是基因检测试剂盒或蛋白免疫检测试剂盒；
所述基因检测试剂盒包括用RT-PCR、RT-qPCR、原位杂交、基因芯片中的任意一种方法检测ANXA3基因转录水平的所需试剂和ANXA3基因的引物；
所述蛋白免疫检测试剂盒包括ANXA3蛋白的特异性抗体。
8.一种用于治疗肺腺癌的药物组合物，其特征为：所述药物组合物包括ANXA3基因表达调控剂。
9.根据权利要求8所述的用于治疗肺腺癌的药物组合物，其特征为：所述ANXA3基因表达调控剂使表达量异常的ANXA3基因恢复正常表达水平。
10.一种ANXA3基因及其表达产物在制备诊断宣威肺癌产品中的应用。
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