CN107125028A - 一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，属于真菌人工培育领域，包括四个步骤如下：步骤一、野生黄环鳞伞菌母种培养、步骤二、野生黄环鳞液体菌种培养、步骤三、野生黄环鳞菌种培养及步骤四、野生黄环鳞伞子实体培养。本发明公开的人工培育方法，成功培育出黄环鳞伞，具有产量高、生长快、生物转化率稳定的特点，驯化的黄环鳞伞菌株转代3次不出现退化现象。驯化出的黄环鳞伞菌株生长发育速度快、生产成本较低、产品质量好，生物学形状稳定，有效药用成分含量高，可以进行示范推广。
Description
技术领域
本发明属于真菌人工培育领域，特别涉及到一种关于黄环鳞伞菌株的人工培育方法。
背景技术
黄环鳞伞Descolea flavoannulata(L.Vassilieva)Horak，属担子菌亚门、层菌纲、球盖菇科、磷伞属。生于阔叶林地，外生菌根菌。菌盖直径5～12cm，初期半球形，后期逐渐平展，中部圆形突出。表面土黄色至黄褐色，具有纵向排列的细毛状鳞片，菌肉污黄色。菌褶直生至稍弯生，灰褐色至黄褐色，菌缘呈黄色粉状。菌柄长4～12cm，粗0.8～1.2cm，向下渐粗呈棒状，孢子印褐黄色。
黄环鳞伞氨基酸含量丰富，是食、药兼用珍稀菇类，其有效药用成分对艾氏癌抑制率为90％，对小白鼠肉瘤180抑制率为80％，经常食用可增强人体免疫力和抗病能力。
因此现有技术当中迫切需要一种解决上述问题的技术方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：根据选种目标，在不同区域、不同海拔高度采集质优形美、无病虫害发生的黄环鳞伞子实体，进行筛选、提纯、品比试验筛选优良菌株，提供黄环鳞伞人工驯化培育方法。
建立黄环鳞伞种质资源库，驯化出能够进行人工栽培的稳产、高抗优良菌株，对其生物学特性、栽培环境条件、栽培技术、病虫害防治进行全面系统研究。
一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，
步骤一、野生黄环鳞伞菌母种培养
选取形状完整、无病虫害的野生黄环鳞伞子实体，采用组织分离法，在无菌条件下，将黄环鳞伞用浓度为75％的酒精溶液进行消毒，将消毒后的黄环鳞伞切两半，采用接种钩取出菌盖与菌柄交接处内部断面为5mm的组织块，放到PH值为6～6.5的斜面培养基中进行斜面培养，在23℃～27℃生化培养箱内培养；待菌丝萌发后，挑取前端菌丝转管提纯培养，经过5次提纯，每次培养时间为5天～7天；继续进行筛选驯化试验，选取无空泡、无杂菌的菌种作为黄环鳞伞一级母种；
步骤二、野生黄环鳞液体菌种培养
将所述步骤一中获得的黄环鳞伞一级母种，在装有200ml的培养液的摇瓶进行接菌，接种量为1cm见方的培养基，在23℃～27℃的温度下，旋转式摇床170转/分钟，进行液体深层发酵培养5～7天，获得菌种；
步骤三、野生黄环鳞菌种培养
取出菇袋备用，向出菇袋内装入20㎝高的培养料，培养料含水量为60％～65％，按照1.2kg/㎝2的高压灭菌1.5小时，或按照一个大气压，在100℃的条件下，灭菌11小时～12小时，冷却至22℃～25℃后，无菌操作接入所述步骤二中培养后的菌种，避光，在温度22℃～26℃、空气相对湿度50％～60％的条件下培养30天～45天，至菌丝长满全袋；
步骤四、野生黄环鳞伞子实体培养
将步骤三中培养的菌丝继续培养45天～55天，将出菇袋口打开出菇，保持温度在13℃～18℃，增加空气相对湿度至85％～90％，每天通风5小时～6小时，每天散射光照射5小时～6小时，7天～10天可形成菇蕾。
所述步骤二中摇瓶内的培养液的组分为每1000ml水加入20g蛋白胨、1g酵母膏、5g麦芽糖、5g葡萄糖、50g麦麸、1.5g硫酸镁、3g磷酸二氢钾、维生素B1、B2各20mg，PH值为6.5。
所述步骤三中出菇袋内培养料的组分为重量百分比为硬杂木屑50％、农作物秸秆粉20％、玉米面20％、麦麸7％、白糖1％、石膏1％、白灰1％，所述培养料的含水量为65％，PH值为6～6.5。
所述步骤三中出菇袋为15㎝×38㎝的聚丙烯袋。
通过上述设计方案，本发明公开的人工培育方法，成功培育出黄环鳞伞，具有产量高、生长快、生物转化率稳定的特点。
具体实施方式
一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，
步骤一、野生黄环鳞伞菌母种培养：选取形状完整、无病虫害的野生黄环鳞伞子实体，采用组织分离法，在无菌条件下，将黄环鳞伞用浓度为75％的酒精溶液进行消毒，将消毒后的黄环鳞伞切两半，采用接种钩取出菌盖与菌柄交接处内部断面为5mm的组织块，放到PH值为6～6.5的斜面培养基中进行斜面培养，在23℃～27℃生化培养箱内培养，待菌丝萌发后，挑取前端菌丝转管提纯培养，经过5次提纯，每次培养时间为5天～7天；
菌丝呈现白色绒毛状，初期较蓬松，后期气生菌丝紧贴培养基，分枝多。通过镜检可看到,菌丝分枝多，锁状联合发达，可见少量生长点，无空泡，无杂菌污染；继续进行筛选驯化试验，选取无空泡、无杂菌的菌种作为黄环鳞伞一级母种；
步骤二、野生黄环鳞液体菌种培养：所用的培养液成分包括：1000ml水、20g蛋白胨、5g麦芽糖、1g酵母膏、5g葡萄糖、50g麦麸、1.5g硫酸镁、3g磷酸二氢钾、20mg维生素B1、20mg维生素B2，PH值为6.5，培养液调制完毕后通过1.2千克/平方厘米的压强进行灭菌25分钟。
待冷却后接种，接种量为一个试管菌种接6个500ml的摇瓶，每个摇瓶装200ml培养液，培养温度23℃～27℃，旋转式摇床170转/分钟，培养5～7天。
菌球湿重占培养基重量达25％以上，培养液气味为水果香味，镜检观察到菌丝分枝多，锁状联合发达，可见少量生长点，无空泡，无杂菌污染，即可作为种子备用。
使用种子罐为容器培养时，培养基与摇瓶种子培养基相同，PH值6.5，温度23℃～27℃，空气流量0.5V/V，罐压0.5kg/㎝2，接种量为种子罐容积的15％，培养5～7天。
当通过观察判断菌球湿重占培养基重量达25％以上，味感呈水果味，镜检检查到菌球湿重达25％以上，镜检观察到菌丝分枝多，锁状联合发达，可见少量生长点，无空泡，无杂菌污染时即可进行菌丝体培养。
步骤三、野生黄环鳞菌种培养：黄环鳞伞培养料配方为：硬杂木屑50％，农作物秸杆粉20％，玉米面20％，麦麸7％，白糖1％，石膏1％，白灰1％，含水量65％，选用15×38㎝聚丙烯袋，装料高20㎝，套棉花，上包牛皮纸，高压灭菌1.2kg/㎝21.5小时。冷却后无菌操作接入菌种，温度22℃～26℃，保持黑环境，空气相对湿度50％～60％，培养30～45天，至菌丝长满全袋。
外观检查，菌丝洁白、生长均匀、边缘整齐、菌丝初期白色、绒毛状、不易产生菌被，培养袋内无黄色积水，没有干枯收缩现象，无杂菌感染，生长后期有部分菇蕾出现，镜检菌丝着色深，粗壮，分枝多，有锁状联合，生长点明显可见。
步骤四、野生黄环鳞伞子实体培养：菌袋培养40天，菌丝会长满全袋，后熟继续培养8天，共继续培养45天～55天，打开袋口或袋划口出菇，拉大温差刺激，温度保持在13℃～18℃，同时增加空气相对湿度至85％～90％，每天通风5小时～6小时，每天散射光照射5小时～6小时，7天～10天可形成菇蕾。
在人工培养过程中为扩大产量，增加菌种数量，还可在液体菌培养之后增加种子罐培养，培养基与摇瓶种子培养所用的培养料相同。PH值为6.5，接种量为15％，温度23～27℃，培养时间为5～7天。
子实体一般菌盖直径5～12cm，初期半球形，后期逐渐平展，中部圆形突出。表面土黄色至黄褐色，具有纵向排列的细毛状鳞片，菌肉污黄色。菌褶直生至稍弯生，灰褐色至黄褐色，菌缘呈黄色粉状。菌柄长4～12cm，粗0.8～1.2cm，向下渐粗呈棒状，孢子印褐黄色。
上述形态与野生黄环鳞伞菌完全相同。
根据实验结果表明，本发明驯化的黄环鳞伞菌株转代3次不出现退化现象。
利用驯化的菌株进行人工栽培黄环鳞伞，采用固态-液态-固态的工艺路线。
驯化出的黄环鳞伞菌株生长发育速度快、生产成本较低、产品质量好，生物学形状稳定，有效药用成分含量高，可以进行示范推广。
Claims (4)
1.一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，
步骤一、野生黄环鳞伞菌母种培养
选取形状完整、无病虫害的野生黄环鳞伞子实体，采用组织分离法，在无菌条件下，将黄环鳞伞用浓度为75％的酒精溶液进行消毒，将消毒后的黄环鳞伞切两半，采用接种钩取出菌盖与菌柄交接处内部断面为5mm的组织块，放到PH值为6～6.5的斜面培养基中进行斜面培养，在23℃～27℃生化培养箱内培养；待菌丝萌发后，挑取前端菌丝转管提纯培养，经过5次提纯，每次培养时间为5天～7天；继续进行筛选驯化试验，选取无空泡、无杂菌的菌种作为黄环鳞伞一级母种；
步骤二、野生黄环鳞液体菌种培养
将所述步骤一中获得的黄环鳞伞一级母种，在装有200ml的培养液的摇瓶进行接菌，接种量为1cm见方的培养基，在23℃～27℃的温度下，旋转式摇床170转/分钟，进行液体深层发酵培养5～7天，获得菌种；
步骤三、野生黄环鳞菌种培养
取出菇袋备用，向出菇袋内装入20㎝高的培养料，培养料含水量为60％～65％，按照1.2kg/㎝2的高压灭菌1.5小时，或按照一个大气压，在100℃的条件下，灭菌11小时～12小时，冷却至22℃～25℃后，无菌操作接入所述步骤二中培养后的菌种，避光，在温度22℃～26℃、空气相对湿度50％～60％的条件下培养30天～45天，至菌丝长满全袋；
步骤四、野生黄环鳞伞子实体培养
将步骤三中培养的菌丝继续培养45天～55天，将出菇袋口打开出菇，保持温度在13℃～18℃，增加空气相对湿度至85％～90％，每天通风5小时～6小时，每天散射光照射5小时～6小时，7天～10天可形成菇蕾。
2.根据权利要求1所述的一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：所述步骤二中摇瓶内的培养液的组分为每1000ml水加入20g蛋白胨、1g酵母膏、5g麦芽糖、5g葡萄糖、50g麦麸、1.5g硫酸镁、3g磷酸二氢钾、20mg维生素B1、20mg维生素B2，PH值为6.5。
3.根据权利要求1所述的一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：所述步骤三中出菇袋内培养料的组分为重量百分比为硬杂木屑50％、农作物秸秆粉20％、玉米面20％、麦麸7％、白糖1％、石膏1％、白灰1％，所述培养料的含水量为65％，PH值为6～6.5。
4.根据权利要求1所述的一种野生黄环鳞伞菌驯化及人工培育方法，其特征是：所述步骤三中出菇袋为15㎝×38㎝的聚丙烯袋。
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