CN107048411A - 一种林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
本发明公开了一种林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法，属于保健食品技术领域。其是利用我国东北地区丰富的林蛙资源，通过酶解法提取出其中的胶原蛋白多肽，并将其与氯化亚铁进行螯合，反应物用无水乙醇溶液处理得到沉淀，反复处理直至无游离Fe2+/Fe3+，通过真空冷冻干燥成粉，最终得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物。最后，选取最优的工艺条件通过锐孔凝固浴法制成一种新型的功能性补铁剂—林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊，这款微胶囊相比于市面上的普通铁片能有效改善人体贫血，稳定性较高，且易于被机体吸收，不对人体胃肠道产生刺激。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的配方及其制备方法。
背景技术
林蛙，又称雪蛤、哈什蚂，是一种分布在我国东北地区，尤其是长白山一带的珍稀两栖类野生动物。由于其有着丰富的营养价值和经济价值，近些年来，日渐成为广大学者研究的对象。林蛙皮为制备林蛙油的副产品，其中含有丰富的多肽类物质，胶原蛋白及透明质酸等，且具有抗炎、抑菌、保湿等功效。研究表明，林蛙皮酶解得到的林蛙胶原蛋白肽具有良好的吸湿保湿性，具有明显的还原能力和清除超氧阴离子自由基能力，以及抗氧化作用。
当今社会，缺铁现象在人群中越来越普遍。特别存在于老年人、小孩和女性人群中。据报道，缺铁性贫血的发病率在不同人群中有着不同的体现。其中男性同胞的发病率约为10％,女性同胞的发病率约为20％,但孕妇的发病率达40％,小孩的发病率更是高达52％。近些年来，随着人们生活水平的不断提高,人们对于各类健康问题也越来越重视。因此缺铁造成的各类疾病和发育缺陷也受到越来越多人的关注。与此同时，补铁剂对于治疗缺铁性贫血等疾病具有一定的功效，所以补铁剂的研发也越来越受到社会各界的广泛关注。
林蛙胶原蛋白多肽铁复合物是一种以多肽为配体,与二价铁结合形成的多肽铁复合物，属于第四代功能性补铁剂。相比于前几代补铁剂，这种多肽铁复合物不产生刺激性气味，而且在动物体内不产生沉淀，易于被机体吸收，无毒副作用产生，因此，可将其直接对机体进行补铁。以此同时，它还不易受到温度、pH值等的影响，是一款比较理想的补铁剂。
本文通过林蛙胶原蛋白多肽与氯化亚铁反应，从而螯合生成一种新型的功能性补铁剂—林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，这种复合物能有效改善贫血，且易于被机体吸收，稳定性高，对胃肠道刺激甚小。
发明内容
本发明的目的在于利用我们东北地区丰富的林蛙资源，研发出一款易于被机体吸收，且稳定性高，不对人体胃肠道产生刺激的新型功能性补铁剂—林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊及其制备方法。
一种林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法，其特征在于，采用锐孔凝固浴法，以林蛙胶原蛋白多肽铁复合物为芯材、海藻酸钠为壁材；以吐温80为乳化剂、氯化钙溶液为凝固浴制备林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊；
至少包括以下步骤：
(1)林蛙胶原蛋白多肽的制备方法
取筛选得到的林蛙皮，以料液比为1:8-1:12的比例浸泡于蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为林蛙皮重量的1.5-3.0％，在40-60℃的恒温条件下酶解反应5-6小时，调节酶解液pH值为7.5-10.0；对酶解液在100℃条件下灭酶10-15min；冷却至室温，6000-8000r/min离心15-25min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法
将干燥的林蛙胶原蛋白多肽与蒸馏水按质量比1:10-1:20加入到锥形瓶中，同时充分搅拌使其溶化；添加抗坏血酸到锥形瓶中，防止Fe2+氧化，抗坏血酸质量占林蛙胶原蛋白多肽溶液的1％-2％，搅拌使其溶解；再加入质量占林蛙胶原蛋白多肽溶液1％-2％的FeCl2，用浓度为10％-15％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为5.0-8.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应10-30min，使用离心机，在5000-8000r/min的条件下离心10-20分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物；
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法
称取海藻酸钠，溶解于蒸馏水中，使得海藻酸钠的浓度为1％-3％，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为50-70℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1％-2％的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入壁材溶液1％-3％的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；称取无水氯化钙，溶解于蒸馏水中，使其浓度为2％-5％，搅拌均匀后制成凝固浴；最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤3-5次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
有益效果：
相比于第一代无机铁补铁剂、第二代有机铁补铁剂和第三代氨基酸螯合物补铁剂，本发明所述的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物补铁剂属于第四代以血红素铁、多糖铁、多肽铁为代表的新型功能性补铁剂。
研究结果表明，该款林蛙胶原蛋白铁复合物具有抑菌性和抗氧化、抗贫血作用，且易于被机体吸收，在体内不产生沉淀，无毒副作用，稳定性高，对胃肠道刺激甚小。因此，是一款比较理想的补铁剂。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的描述，但这些实施例仅用于解释本发明，对本发明的范围并不构成任何限制。
实施例1：
(1)取筛选得到的林蛙皮10g，浸泡于100mL蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶2g，在50℃的恒温条件下酶解反应5小时，调节酶解液pH值为8.0；对酶解液在100℃条件下灭酶10min；冷却至室温，6000r/min离心15min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法：首先，称取干燥的林蛙胶原蛋白多肽样品0.5g，溶解于10mL蒸馏水中，同时充分搅拌使其溶化；添加0.1g抗坏血酸，防止Fe2+氧化。再加入0.1gFeCl2，用浓度为10％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为6.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应20min，使用离心机，在5000r/min的条件下离心15分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物。
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法：称取海藻酸钠2g，溶解于100mL蒸馏水中，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为70℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1g的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入2g的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；准确称取3g的无水氯化钙，溶解于100mL蒸馏水中，使其浓度为3％，搅拌均匀后制成凝固浴。最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤3次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
实施例2：
(1)取筛选得到的林蛙皮12g，浸泡于100mL蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶3g，在50℃的恒温条件下酶解反应5小时，调节酶解液pH值为8.0；对酶解液在100℃条件下灭酶10min；冷却至室温，6000r/min离心20min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法：首先，称取干燥的林蛙胶原蛋白多肽样品1.0g，溶解于10mL蒸馏水中，同时充分搅拌使其溶化；添加0.1g抗坏血酸，防止Fe2+氧化。再加入0.1gFeCl2，用浓度为10％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为7.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应20min，使用离心机，在6000r/min的条件下离心20分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物。
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法：称取海藻酸钠1g，溶解于100mL蒸馏水中，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为70℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1g的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入2g的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；准确称取4g的无水氯化钙，溶解于100mL蒸馏水中，使其浓度为4％，搅拌均匀后制成凝固浴。最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤3次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
实施例3：
(1)取筛选得到的林蛙皮9g，浸泡于100mL蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶2.5g，在55℃的恒温条件下酶解反应5.5小时，调节酶解液pH值为8.5；对酶解液在100℃条件下灭酶10min；冷却至室温，6000r/min离心15min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法：首先，称取干燥的林蛙胶原蛋白多肽样品0.7g，溶解于10mL蒸馏水中，同时充分搅拌使其溶化；添加0.2g抗坏血酸，防止Fe2+氧化。再加入0.1gFeCl2，用浓度为10％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为6.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应20min，使用离心机，在6000r/min的条件下离心15分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物。
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法：称取海藻酸钠2g，溶解于100mL蒸馏水中，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为70℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1g的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入2g的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；准确称取3g的无水氯化钙，溶解于100mL蒸馏水中，使其浓度为3％，搅拌均匀后制成凝固浴。最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤3次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
实施例4：
(1)取筛选得到的林蛙皮10g，浸泡于100mL蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶2.5g，在60℃的恒温条件下酶解反应5小时，调节酶解液pH值为8.0；对酶解液在100℃条件下灭酶10min；冷却至室温，6000r/min离心15min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法：首先，称取干燥的林蛙胶原蛋白多肽样品0.8g，溶解于10mL蒸馏水中，同时充分搅拌使其溶化；添加0.1g抗坏血酸，防止Fe2+氧化。再加入0.1gFeCl2，用浓度为10％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为7.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应20min，使用离心机，在5500r/min的条件下离心15分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物。
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法：称取海藻酸钠3g，溶解于100mL蒸馏水中，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为60℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1.5g的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入3g的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；准确称取5g的无水氯化钙，溶解于100mL蒸馏水中，使其浓度为5％，搅拌均匀后制成凝固浴。最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤4次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
Claims (1)
1.一种林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法，其特征在于，采用锐孔凝固浴法，以林蛙胶原蛋白多肽铁复合物为芯材、海藻酸钠为壁材；以吐温80为乳化剂、氯化钙溶液为凝固浴制备林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊；
该方法至少包括以下步骤：
(1)林蛙胶原蛋白多肽的制备方法
取筛选得到的林蛙皮，以料液比为1:8-1:12的比例浸泡于蒸馏水中，室温浸泡24h；加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为林蛙皮重量的1.5-3.0％，在40-60℃的恒温条件下酶解反应5-6小时，调节酶解液pH值为7.5-10.0；对酶解液在100℃条件下灭酶10-15min；冷却至室温，6000-8000r/min离心15-25min，取上清液即得林蛙胶原蛋白多肽粗提液；通过凝胶层析法分离纯化，再经真空冷冻干燥即得林蛙胶原蛋白多肽；
(2)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物的制备方法
将干燥的林蛙胶原蛋白多肽与蒸馏水按质量比1:10-1:20加入到锥形瓶中，同时充分搅拌使其溶化；添加抗坏血酸到锥形瓶中，防止Fe2+氧化，抗坏血酸质量占林蛙胶原蛋白多肽溶液的1％-2％，搅拌使其溶解；再加入质量占林蛙胶原蛋白多肽溶液1％-2％的FeCl2，用浓度为10％-15％的NaOH或HCl溶液调节其pH值为5.0-8.0；滴加结束后通过磁力搅拌在室温下反应10-30min，使用离心机，在5000-8000r/min的条件下离心10-20分钟；离心结束后，取上层清液用无水乙醇处理，反应液中迅速出现沉淀；静置，过夜，使其完全沉淀；取沉淀物反复多次用无水乙醇处理，直至上层清液中无Fe3+/Fe2+检出后，取沉淀物通过真空冷冻干燥，得无定型粉末，该物质即为林蛙胶原蛋白多肽铁复合物；
(3)林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊的制备方法：
称取海藻酸钠，溶解于蒸馏水中，使得海藻酸钠的浓度为1％-3％，在磁力搅拌器上进行加热磁力搅拌，搅拌温度为50-70℃，直至完全溶解；缓缓地向壁材溶液中加入1％-2％的吐温80作为乳化剂，混合均匀后加入壁材溶液1％-3％的林蛙胶原蛋白多肽铁复合物，继续搅拌直至混合均匀；称取无水氯化钙，溶解于蒸馏水中，使其浓度为2％-5％，搅拌均匀后制成凝固浴；最后，采用微胶囊造粒机，通过注射器将上述配置好的乳化液以液滴状缓慢滴入凝固浴中，固化，清水洗涤3-5次，真空冷冻干燥24h后得到林蛙胶原蛋白多肽铁复合物微胶囊。
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