CN106232820A - 杀昆虫蛋白及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于防治害虫的组合物和方法。所述方法涉及用编码杀昆虫蛋白的核酸序列转化生物体。具体地讲，所述核酸序列可用于制备具有杀昆虫活性的植物和微生物。因此，本发明提供了经转化的细菌、植物、植物细胞、植物组织和种子。所述组合物是细菌物种的杀昆虫核酸和蛋白质。所述序列可用于构建表达载体以用于后续转化到包括植物在内的所关注的生物体中，用作分离其他同源(或部分同源)基因的探针。所述杀虫蛋白可用于防治、抑制生长或杀灭鳞翅目、鞘翅目、双翅目、真菌、半翅目和线虫害虫种群，以及用于生产具有杀昆虫活性的组合物。

Description

杀昆虫蛋白及其使用方法
对以电子方式提交的序列表的引用
将创建于2014年8月1日，文件名为“5273PCT_sequence_listing.txt”，大小为1,663千字节的序列表以ASCI格式作为“文本”文件与本说明书同时提交。该序列表是本说明书的一部分，并且全文以引用方式并入本文。
技术领域
本发明涉及分子生物学领域。提供了编码杀虫蛋白的新型基因。这些杀虫蛋白以及编码它们的核酸序列可用于制备杀虫制剂并且可用于产生转基因抗虫害植物。
背景技术
使用微生物剂如真菌、细菌或者另一昆虫物种对具有农业意义的昆虫害虫进行生物防治，可提供具有环境友好性和商业吸引力的合成化学杀虫剂替代方案。一般而言，生物杀虫剂的使用造成的污染和环境危害的风险更低，并且生物杀虫剂能提供比传统广谱化学杀昆虫剂的特征性靶标特异性更高的靶标特异性。另外，生物杀虫剂的生产成本往往更低，因此能提高众多作物的经济产量。
已知芽孢杆菌属(Bacillus)微生物的某些种对于一系列昆虫害虫具有杀虫活性，这些昆虫包括鳞翅目(Lepidoptera)、双翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、半翅目(Hemiptera)害虫以及其他害虫。苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)(Bt)和日本金龟子芽孢杆菌(Bacillus popilliae)是至今为止发现的最成功的生物防治剂的代表。昆虫致病性也被归咎于幼虫芽孢杆菌(B.larvae)、缓病芽孢杆菌(B.lentimorbus)、球形芽孢杆菌(B.sphaericus)和蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的菌株。微生物杀昆虫剂特别是那些从芽孢杆菌菌株获得的微生物杀昆虫剂，在农业上作为害虫化学防治的替代方案已起到重要的作用。
最近，已通过对作物进行遗传工程改造以产生来自芽孢杆菌的杀虫蛋白，开发出了昆虫抗性增强的作物。例如，已对玉米和棉花植物进行遗传工程改造以产生从Bt的菌株分离的杀虫蛋白。这些经遗传工程改造的作物目前在农业中广泛应用，给农场主提供了替代传统昆虫防治方法的环境友好的方案。虽然这些经遗传工程改造的抗昆虫作物已证明在商业上十分成功，但它们仅对较窄范围的经济上重要的昆虫害虫具有抗性。在一些情况中，昆虫可产生对不同杀昆虫化合物的抗性，使得有必要寻找替代的生物防治剂来进行害虫防治。
因此，仍然需要针对昆虫害虫具有不同范围杀昆虫活性的新杀虫蛋白，例如对于鳞翅目和鞘翅目的多种昆虫具有活性的杀昆虫蛋白，所述多种昆虫包括但不限于已对现有杀昆虫剂产生抗性的昆虫害虫。
发明内容
提供了将杀虫活性赋予细菌、植物、植物细胞、组织和种子的组合物和方法。组合物包含编码杀虫和杀昆虫多肽序列的核酸分子、含有那些核酸分子的载体以及含有所述载体的宿主细胞。组合物还包含杀虫多肽序列以及那些多肽的抗体。核酸序列可用于DNA构建体或表达盒中，该DNA构建体或表达盒用于在生物体(包括微生物和植物)中转化和表达。核苷酸或氨基酸序列可以为设计用于在生物体(包括但不限于微生物或植物)中表达的合成序列。组合物还包含经转化的细菌、植物、植物细胞、组织和种子。
具体地讲，提供了分离的或重组的核酸分子，所述核酸分子编码假单胞菌(Pseudomonas)杀昆虫蛋白-47(PIP-47)多肽，所述多肽包含其氨基酸的置换、缺失、插入片段以及它们的组合。此外，涵盖了与PIP-47多肽对应的氨基酸序列。提供了分离的或重组的核酸分子，所述核酸分子能够编码SEQ ID NO：2的PIP-47多肽及其氨基酸的置换、缺失、插入、片段以及它们的组合。还涵盖了与所述实施例的核酸序列互补或杂交至所述实施例的序列的核酸序列。还提供了分离的或重组的SEQ ID NO：2的PIP-47多肽及其氨基酸的置换、缺失、插入、片段以及它们的组合。
提供了用于产生多肽以及使用那些多肽防治或杀灭鳞翅目、鞘翅目、线虫、真菌和/或双翅目害虫的方法。所述实施例的转基因植物表达本文所公开的杀虫序列中的一者或多者。在各种实施例中，转基因植物还包含用于昆虫抗性的一个或多个另外的基因，例如，用于防治鞘翅目、鳞翅目、半翅目或线虫害虫的一个或多个另外的基因。本领域技术人员应当理解，转基因植物可包含赋予所关注的农艺性状的任何基因。
还包括了用于检测样品中的所述实施例的核酸和多肽的方法。提供了用于检测样品中是否存在PIP-47多肽或编码PIP-47多肽的核苷酸序列的试剂盒。所述试剂盒可连同执行检测预期因子的方法所需的所有试剂和对照样品以及使用说明一起提供。
所述实施例的组合物和方法可用于产生具有增强的害虫抗性或耐受性的生物体。这些生物体和包含所述生物体的组合物是农业用途所需的。所述实施例的组合物也可用于产生具有杀虫活性的改变或改善的蛋白质，或可用于检测产物或生物体中是否存在PIP-47多肽或核酸。
附图说明
图1A-1B示出了PIP-47Aa(SEQ ID NO：1)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQID NO：6)、PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)与下列远缘同源物的氨基酸序列比对：Plu2048(SEQ IDNO：10)、Plu2046(SEQ ID NO：12)、YP003041397(SEQ ID NO：14)、YP003041380(SEQ ID NO：16)、ZP17107944(SEQ ID NO：18)以及ZP05881874(SEQ ID NO：20)。经受饱和诱变的相对于PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)的氨基酸位置由该位置上方的箭头(↓)指示。在PIP-47Aa序列(SEQID NO：2)上识别出三个基序：基序1-相对于SEQ ID NO：2的第77-87位、基序2-相对于SEQID NO：2的第107-120位以及基序3-相对于SEQ ID NO：2的第233-247位，并且这些位置在PIP-47Aa序列(SEQ ID NO：2)中以下划线标明。
图2示出了PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)和PIP-47Bb(SEQ IDNO：6)的氨基酸序列的比对。PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)和PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)以及PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)之间的氨基酸多样性用阴影指示。
图3示出了PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ IDNO：6)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列的比对。氨基酸多样性用阴影指示。
图4示出了由PHP61246和PHP61185构建体产生的事件在T0时的GH功效结果。相对阴性对照事件观察了源自这两种构建体的事件的功效，这种功效由保护根免受西方玉米根虫侵害的效果衡量。使用Oleson，et al.(2005)[J.Econ Entomol.98(1)：1-8](Oleson等人，2005年，《经济昆虫学杂志》，第98卷，第1期，第1-8页)开发的方法，根据受损根结节数(CRWNIS＝玉米根虫结节损伤评分)衡量根受保护的程度。根损伤评分由“0”至“3”量度，其中“0”指示无可见根损伤；“1”指示有1个根结节损坏；“2”指示有2个根结节损坏；“3”是最大评分，指示有3个根结节损坏。
具体实施方式
应当理解，本发明不限于所述的特定方法、方案、细胞系、属和试剂，因为这些可能变化。还应当理解，本文所用的术语只是出于描述特定实施例的目的，并非旨在限制本发明的范围。
除非上下文另外明确规定，否则本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个指代物。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个此类细胞，并且提及“该蛋白”包括提及一种或多种蛋白以及本领域技术人员已知的其等同物，等等。除非另外明确指明，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
本发明涉及用于防治害虫的组合物和方法。这些方法涉及用编码PIP-47多肽的核酸序列转化生物体。具体地讲，所述实施例的核酸序列可用于制备具有杀虫活性的植物和微生物。因此，本发明提供了经转化的细菌、植物、植物细胞、植物组织和种子。所述组合物是细菌物种的杀虫核酸和蛋白质。所述核酸序列可用于构建表达载体，以便后续转化到所关注的生物体中、用作分离其他同源(或部分同源)基因的探针以及用于通过本领域已知的方法(例如定点诱变、结构域交换或DNA改组)产生改变的PIP-47多肽。PIP-47多肽可用于防治或杀灭鳞翅目、鞘翅目、双翅目、真菌、半翅目和线虫害虫种群，并用于产生具有杀虫活性的组合物。所关注的昆虫害虫包括但不限于鳞翅目物种和鞘翅目物种，其中鳞翅目物种包括但不限于：小菜蛾，例如谷实夜蛾(Helicoverpa zea)(Boddie)；大豆夜蛾，例如大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens)(Walker)；以及黎豆毛虫，例如黎豆夜蛾(Anticarsiagemmatalis)(Hübner)；鞘翅目物种包括但不限于西方玉米根虫(Diabrotica virgifera)-WCRW、南方玉米根虫(Diabrotica undecimpunctata howardi)-SCRW以及北方玉米根虫(Diabrotica barberi)-NCRW。
本文中所用的所谓“杀虫毒素”或“杀虫蛋白”指对于一种或多种害虫(包括但不限于鳞翅目、双翅目、半翅目和鞘翅目或线虫门的成员)具有毒杀活性的毒素，或与此类蛋白同源的蛋白质。已从生物体中分离出了杀虫蛋白，所述生物体包括(例如)芽孢杆菌属物种、假单胞菌属物种、发光杆菌属(Photorhabdus)物种、致病杆菌属(Xenorhabdus)物种、双酶梭菌(Clostridium bifermentans)和日本甲虫类芽孢杆菌(Paenibacillus popilliae)。杀虫蛋白包括但不限于：来自假单胞菌属物种的杀昆虫蛋白，例如PSEEN3174(Monalysin；(2011)PLoS Pathogens 7：1-13(Monalysin，2011年，《公共科学图书馆病原学》，第7卷，第1-13页))；来自生防假单胞菌(Pseudomonas protegens)菌株CHA0和Pf-5(之前称荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens))的杀昆虫蛋白(Pechy-Tarr，(2008)EnvironmentalMicrobiology 10：2368-2386(Pechy-Tarr，2008年，《环境微生物学》，第10卷，第2368-2386页)；GenBank登录号EU400157)；来自台湾假单胞菌(Pseudomonas Taiwanensis)的杀昆虫蛋白(Liu，et al.，(2010)J.Agric.Food Chem.，58：12343-12349(Liu等人，2010年，《农业与食品化学杂志》，第58卷，第12343-12349页))以及来自类产碱假单胞菌(Pseudomonaspseudoalcligenes)的杀昆虫蛋白(Zhang，et al.，(2009)Annals of Microbiology 59：45-50(Zhang等人，2009年，《微生物学年报》，第59卷，第45-50页)；Li，et al.，(2007)PlantCell Tiss.Organ Cult.89：159-168(Li等人，2007年，《植物细胞、组织与器官培养》，第89卷，第159-168页))；来自发光杆菌属物种和致病杆菌属物种的杀昆虫蛋白(Hinchliffe，etal.，(2010)The Open Toxicology Journal，3：101-118(Hinchliffe等人，2010年，《开放毒素学杂志》，第3卷，第101-118页)；Morgan，et al.，(2001)Applied and Envir.Micro.67：2062-2069(Morgan等人，2001年，《应用与环境微生物学》，第67卷，第2062-2069页))；美国专利No.6,048,838和美国专利No.6,379,946；美国序列号13792861的PIP-1多肽；美国序列号13/800233的AfIP-1A和/或AfIP-1B多肽；美国序列号13/839702的PHI-4多肽；以及δ-内毒素，包括但不限于Cry1、Cry2、Cry3、Cry4、Cry5、Cry6、Cry7、Cry8、Cry9、Cry10、Cry11、Cry12、Cry13、Cry14、Cry15、Cry16、Cry17、Cry18、Cry19、Cry20、Cry21、Cry22、Cry23、Cry24、Cry25、Cry26、Cry27、Cry28、Cry29、Cry30、Cry31、Cry32、Cry33、Cry34、Cry35，Cry36、Cry37、Cry38、Cry39、Cry40、Cry41、Cry42、Cry43、Cry44、Cry45、Cry46、Cry47、Cry49、Cry51、Cry55类δ-内毒素基因和苏云金芽孢杆菌溶细胞cyt1和cyt2基因。这些类别的苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白的成员包括但不限于Cry1Aa1(登录号AAA22353)、Cry1Aa2(登录号AAA22552)、Cry1Aa3(登录号BAA00257)、Cry1Aa4(登录号CAA31886)、Cry1Aa5(登录号BAA04468)、Cry1Aa6(登录号AAA86265)、Cry1Aa7(登录号AAD46139)、Cry1Aa8(登录号I26149)、Cry1Aa9(登录号BAA77213)、Cry1Aa10(登录号AAD55382)、Cry1Aa11(登录号CAA70856)、Cry1Aa12(登录号AAP80146)、Cry1Aa13(登录号AAM44305)、Cry1Aa14(登录号AAP40639)、Cry1Aa15(登录号AAY66993)、Cry1Aa16(登录号HQ439776)、Cry1Aa17(登录号HQ439788)、Cry1Aa18(登录号HQ439790)、Cry1Aa19(登录号HQ685121)、Cry1Aa20(登录号JF340156)、Cry1Aa21(登录号JN651496)、Cry1Aa22(登录号KC158223)、Cry1Ab1(登录号AAA22330)、Cry1Ab2(登录号AAA22613)、Cry1Ab3(登录号AAA22561)、Cry1Ab4(登录号BAA00071)、Cry1Ab5(登录号CAA28405)、Cry1Ab6(登录号AAA22420)、Cry1Ab7(登录号CAA31620)、Cry1Ab8(登录号AAA22551)、Cry1Ab9(登录号CAA38701)、Cry1Ab10(登录号A29125)、Cry1Ab11(登录号I12419)、Cry1Ab12(登录号AAC64003)、Cry1Ab13(登录号AAN76494)、Cry1Ab14(登录号AAG16877)、Cry1Ab15(登录号AAO13302)、Cry1Ab16(登录号AAK55546)、Cry1Ab17(登录号AAT46415)、Cry1Ab18(登录号AAQ88259)、Cry1Ab19(登录号AAW31761)、Cry1Ab20(登录号ABB72460)、Cry1Ab21(登录号ABS18384)、Cry1Ab22(登录号ABW87320)、Cry1Ab23(登录号HQ439777)、Cry1Ab24(登录号HQ439778)、Cry1Ab25(登录号HQ685122)、Cry1Ab26(登录号HQ847729)、Cry1Ab27(登录号JN135249)、Cry1Ab28(登录号JN135250)、Cry1Ab29(登录号JN135251)、Cry1Ab30(登录号JN135252)、Cry1Ab31(登录号JN135253)、Cry1Ab32(登录号JN135254)、Cry1Ab33(登录号AAS93798)、Cry1Ab34(登录号KC156668)、Cry1Ab样(登录号AAK14336)、Cry1Ab样(登录号AAK14337)、Cry1Ab样(登录号AAK14338)、Cry1Ab样(登录号ABG88858)、Cry1Ac1(登录号AAA22331)、Cry1Ac2(登录号AAA22338)、Cry1Ac3(登录号CAA38098)、Cry1Ac4(登录号AAA73077)、Cry1Ac5(登录号AAA22339)、Cry1Ac6(登录号AAA86266)、Cry1Ac7(登录号AAB46989)、Cry1Ac8(登录号AAC44841)、Cry1Ac9(登录号AAB49768)、Cry1Ac10(登录号CAA05505)、Cry1Ac11(登录号CAA10270)、Cry1Ac12(登录号I12418)、Cry1Ac13(登录号AAD38701)、Cry1Ac14(登录号AAQ06607)、Cry1Ac15(登录号AAN07788)、Cry1Ac16(登录号AAU87037)、Cry1Ac17(登录号AAX18704)、Cry1Ac18(登录号AAY88347)、Cry1Ac19(登录号ABD37053)、Cry1Ac20(登录号ABB89046)、Cry1Ac21(登录号AAY66992)、Cry1Ac22(登录号ABZ01836)、Cry1Ac23(登录号CAQ30431)、Cry1Ac24(登录号ABL01535)、Cry1Ac25(登录号FJ513324)、Cry1Ac26(登录号FJ617446)、Cry1Ac27(登录号FJ617447)、Cry1Ac28(登录号ACM90319)、Cry1Ac29(登录号DQ438941)、Cry1Ac30(登录号GQ227507)、Cry1Ac31(登录号GU446674)、Cry1Ac32(登录号HM061081)、Cry1Ac33(登录号GQ866913)、Cry1Ac34(登录号HQ230364)、Cry1Ac35(登录号JF340157)、Cry1Ac36(登录号JN387137)、Cry1Ac37(登录号JQ317685)、Cry1Ad1(登录号AAA22340)、Cry1Ad2(登录号CAA01880)、Cry1Ae1(登录号AAA22410)、Cry1Af1(登录号AAB82749)、Cry1Ag1(登录号AAD46137)、Cry1Ah1(登录号AAQ14326)、Cry1Ah2(登录号ABB76664)、Cry1Ah3(登录号HQ439779)、Cry1Ai1(登录号AAO39719)、Cry1Ai2(登录号HQ439780)、Cry1A样(登录号AAK14339)、Cry1Ba1(登录号CAA29898)、Cry1Ba2(登录号CAA65003)、Cry1Ba3(登录号AAK63251)、Cry1Ba4(登录号AAK51084)、Cry1Ba5(登录号ABO20894)、Cry1Ba6(登录号ABL60921)、Cry1Ba7(登录号HQ439781)、Cry1Bb1(登录号AAA22344)、Cry1Bb2(登录号HQ439782)、Cry1Bc1(登录号CAA86568)、Cry1Bd1(登录号AAD10292)、Cry1Bd2(登录号AAM93496)、Cry1Be1(登录号AAC32850)、Cry1Be2(登录号AAQ52387)、Cry1Be3(登录号ACV96720)、Cry1Be4(登录号HM070026)、Cry1Bf1(登录号CAC50778)、Cry1Bf2(登录号AAQ52380)、Cry1Bg1(登录号AAO39720)、Cry1Bh1(登录号HQ589331)、Cry1Bi1(登录号KC156700)、Cry1Ca1(登录号CAA30396)、Cry1Ca2(登录号CAA31951)、Cry1Ca3(登录号AAA22343)、Cry1Ca4(登录号CAA01886)、Cry1Ca5(登录号CAA65457)、Cry1Ca6[1](登录号AAF37224)、Cry1Ca7(登录号AAG50438)、Cry1Ca8(登录号AAM00264)、Cry1Ca9(登录号AAL79362)、Cry1Ca10(登录号AAN16462)、Cry1Ca11(登录号AAX53094)、Cry1Ca12(登录号HM070027)、Cry1Ca13(登录号HQ412621)、Cry1Ca14(登录号JN651493)、Cry1Cb1(登录号M97880)、Cry1Cb2(登录号AAG35409)、Cry1Cb3(登录号ACD50894)、Cry1Cb样(登录号AAX63901)、Cry1Da1(登录号CAA38099)、Cry1Da2(登录号I76415)、Cry1Da3(登录号HQ439784)、Cry1Db1(登录号CAA80234)、Cry1Db2(登录号AAK48937)、Cry1Dc1(登录号ABK35074)、Cry1Ea1(登录号CAA37933)、Cry1Ea2(登录号CAA39609)、Cry1Ea3(登录号AAA22345)、Cry1Ea4(登录号AAD04732)、Cry1Ea5(登录号A15535)、Cry1Ea6(登录号AAL50330)、Cry1Ea7(登录号AAW72936)、Cry1Ea8(登录号ABX11258)、Cry1Ea9(登录号HQ439785)、Cry1Ea10(登录号ADR00398)、Cry1Ea11(登录号JQ652456)、Cry1Eb1(登录号AAA22346)、Cry1Fa1(登录号AAA22348)、Cry1Fa2(登录号AAA22347)、Cry1Fa3(登录号HM070028)、Cry1Fa4(登录号HM439638)、Cry1Fb1(登录号CAA80235)、Cry1Fb2(登录号BAA25298)、Cry1Fb3(登录号AAF21767)、Cry1Fb4(登录号AAC10641)、Cry1Fb5(登录号AA013295)、Cry1Fb6(登录号ACD50892)、Cry1Fb7(登录号ACD50893)、Cry1Ga1(登录号CAA80233)、Cry1Ga2(登录号CAA70506)、Cry1Gb1(登录号AAD10291)、Cry1Gb2(登录号AAO13756)、Cry1Gc1(登录号AAQ52381)、Cry1Ha1(登录号CAA80236)、Cry1Hb1(登录号AAA79694)、Cry1Hb2(登录号HQ439786)、Cry1H样(登录号AAF01213)、Cry1Ia1(登录号CAA44633)、Cry1Ia2(登录号AAA22354)、Cry1Ia3(登录号AAC36999)、Cry1Ia4(登录号AAB00958)、Cry1Ia5(登录号CAA70124)、Cry1Ia6(登录号AAC26910)、Cry1Ia7(登录号AAM73516)、Cry1Ia8(登录号AAK66742)、Cry1Ia9(登录号AAQ08616)、Cry1Ia10(登录号AAP86782)、Cry1Ia11(登录号CAC85964)、Cry1Ia12(登录号AAV53390)、Cry1Ia13(登录号ABF83202)、Cry1Ia14(登录号ACG63871)、Cry1Ia15(登录号FJ617445)、Cry1Ia16(登录号FJ617448)、Cry1Ia17(登录号GU989199)、Cry1Ia18(登录号ADK23801)、Cry1Ia19(登录号HQ439787)、Cry1Ia20(登录号JQ228426)、Cry1Ia21(登录号JQ228424)、Cry1Ia22(登录号JQ228427)、Cry1Ia23(登录号JQ228428)、Cry1Ia24(登录号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δ-内毒素的例子还包括但不限于：美国专利No.5,880,275和No.7,858,849提出的Cry1A蛋白；美国专利No.8,304,604、No.8.304,605和No.8,476,226提出的DIG-3或DIG-11毒素(N端缺失的cry蛋白(例如Cry1A、Cry3A)的α-螺旋1和/或α-螺旋2变体)；美国专利申请序列号10/525,318提出的Cry1B；美国专利No.6,033,874提出的Cry1C；美国专利No.5,188,960和No.6,218,188提出的Cry1F；美国专利No.7,070,982、No.6,962,705和No.6,713,063提出的Cry1A/F嵌合体；美国专利No.7,064,249提出的Cry2蛋白，例如Cry2Ab蛋白；Cry3A蛋白，包括但不限于经工程改造的杂合杀昆虫蛋白(eHIP)，其通过融合至少两个不同Cry蛋白的可变区和保守区的独特组合而形成(美国专利申请公布No.2010/0017914)；美国专利No.7,329,736、No.7,449,552、No.7,803,943、No.7,476,781、No.7,105,332、No.7,378,499和No.7,462,760提出的Cry4蛋白、Cry5蛋白、Cry6蛋白、Cry8蛋白；Cry9蛋白，例如Cry9A、Cry9B、Cry9C、Cry9D、Cry9E和Cry9F家族的成员；Naimov，et al.，(2008)Applied andEnvironmental Microbiology，74：7145-7151(Naimov等人，2008年，《应用与环境微生物学》，第74卷，第7145-7151页)提出的Cry15蛋白；美国专利No.6,127,180、No.6,624,145和No.6,340,593提出的Cry22、Cry34Ab1蛋白；美国专利No.6,248,535、No.6,326,351、No.6,399,330、No.6,949,626、No.7,385,107和No.7,504,229提出的CryET33和cryET34蛋白；美国专利公布No.2006/0191034、2012/0278954和PCT公布No.WO 2012/139004提出的CryET33和CryET34同源物；美国专利No.6,083,499、No.6,548,291和No.6,340,593提出的Cry35Ab1蛋白；Cry46蛋白；Cry51蛋白；Cry二元毒素；TIC901或相关毒素；美国专利申请公布No.2008/0295207提出的TIC807；PCT US 2006/033867提出的ET29、ET37、TIC809、TIC810、TIC812、TIC127、TIC128；美国专利No.8,236,757提出的AXMI-027、AXMI-036和AXMI-038；美国专利No.7,923,602提出的AXMI-031、AXMI-039、AXMI-040、AXMI-049；WO 2006/083891提出的AXMI-018、AXMI-020和AXMI-021；WO 2005/038032提出的AXMI-010；WO 2005/021585提出的AXMI-003；美国专利申请公布No.2004/0250311提出的AXMI-008；美国专利申请公布No.2004/0216186提出的AXMI-006；美国专利申请公布No.2004/0210965提出的AXMI-007；美国专利申请No.2004/0210964提出的AXMI-009；美国专利申请公布No.2004/0197917提出的AXMI-014；美国专利申请公布No.2004/0197916提出的AXMI-004；WO 2006/119457提出的AXMI-028和AXMI-029；WO 2004/074462提出的AXMI-007、AXMI-008、AXMI-0080rf2、AXMI-009、AXMI-014和AXMI-004；美国专利No.8,084,416提出的AXMI-150；美国专利申请公布No.2011/0023184提出的AXMI-205；美国专利申请公布No.2011/0263488提出的AXMI-011、AXMI-012、AXMI-013、AXMI-015、AXMI-019、AXMI-044、AXMI-037、AXMI-043、AXMI-033、AXMI-034、AXMI-022、AXMI-023、AXMI-041、AXMI-063和AXMI-064；美国专利申请公布No.2010/0197592提出的AXMI-R1和相关蛋白；WO 2011/103248提出的AXMI221Z、AXMI222z、AXMI223z、AXMI224z和AXMI225z；WO 2011/103247提出的AXMI218、AXMI219、AXMI220、AXMI226、AXMI227、AXMI228、AXMI229、AXMI230和AXMI231；美国专利No.8,334,431提出的AXMI-115、AXMI-113、AXMI-005、AXMI-163和AXMI-184；美国专利申请公布No.2010/0298211提出的AXMI-001、AXMI-002、AXMI-030、AXMI-035和AXMI-045；美国专利申请公布No.2009/0144852提出的AXMI-066和AXMI-076；美国专利No.8,318,900提出的AXMI128、AXMI130、AXMI131、AXMI133、AXMI140、AXMI141、AXMI142、AXMI143、AXMI144、AXMI146、AXMI148、AXMI149、AXMI152、AXMI153、AXMI154、AXMI155、AXMI156、AXMI157、AXMI158、AXMI162、AXMI165、AXMI166、AXMI167、AXMI168、AXMI169、AXMI170、AXMI171、AXMI172、AXMI173、AXMI174、AXMI175、AXMI176、AXMI177、AXMI178、AXMI179、AXMI180、AXMI181、AXMI182、AXMI185、AXMI186、AXMI187、AXMI188、AXMI189；美国专利申请公布No.2010/0005543提出的AXMI079、AXMI080、AXMI081、AXMI082、AXMI091、AXMI092、AXMI096、AXMI097、AXMI098、AXMI099、AXMI100、AXMI101、AXMI102、AXMI103、AXMI104、AXMI107、AXMI108、AXMI109、AXMI110、AXMI111、AXMI112、AXMI114、AXMI116、AXMI117、AXMI118、AXMI119、AXMI120、AXMI121、AXMI122、AXMI123、AXMI124、AXMI1257、AXMI1268、AXMI127、AXMI129、AXMI164、AXMI151、AXMI161、AXMI183、AXMI132、AXMI138、AXMI137；美国专利No.8,319,019提出的cry蛋白,例如具有经修饰的蛋白水解位点的Cry1A和Cry3A；美国专利申请公布No.2011/0064710提出的来自苏云金芽孢杆菌菌株VBTS 2528的Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca毒素蛋白。其他Cry蛋白是本领域技术人员熟知的(参见链接lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/(添加“www”前缀后，可在万维网上访问)，即Crickmore，et al.，“Bacillusthuringiensis toxin nomenclature”(2011)(Crickmore等人，“苏云金芽孢杆菌毒素命名法”，2011年))。本领域技术人员非常熟悉Cry蛋白的杀昆虫活性(相关综述，参见vanFrannkenhuyzen，(2009)J.Invert.Path.101：1-16(van Frannkenhuyzen，2009年，《无脊椎动物病理学杂志》，第101卷，第1-16页)。将Cry蛋白用作转基因植物性状的用途是本领域技术人员所熟知的；而且Cry转基因植物，包括但不限于表达Cry1Ac、Cry1Ac+Cry2Ab、Cry1Ab、Cry1A.105、Cry1F、Cry1Fa2、Cry1F+Cry1Ac、Cry2Ab、Cry3A、mCry3A、Cry3Bb1、Cry34Ab1、Cry35Ab1、Vip3A、mCry3A、Cry9c和CBI-Bt的植物，已获得监管机构批准(参见Sanahuja，(2011)Plant Biotech Journal 9：283-300(Sanahuja，2011年，《植物生物技术杂志》，第9卷，第283-300页)；和链接cera-gmc.org/index.php？action＝gm_crop_database(添加“www”前缀后，可在万维网上访问)，即美国华盛顿特区国际生命科学研究所(ILSI)环境风险评估中心(CERA)2010发布的转基因作物数据库。也可在植物中表达本领域技术人员熟知的不止一种杀虫蛋白，例如Vip3Ab和Cry1Fa(US2012/0317682)；Cry1BE和Cry1F(US2012/0311746)；Cry1CA和Cry1AB(US2012/0311745)；Cry1F和CryCa(US2012/0317681)；Cry1DA和Cry1BE(US2012/0331590)；Cry1DA和Cry1Fa(US2012/0331589)；Cry1AB和Cry1BE(US2012/0324606)；Cry1Fa和Cry2Aa，Cry1I和Cry1E(US2012/0324605)；Cry34Ab/35Ab和Cry6Aa(US20130167269)；Cry34Ab/VCry35Ab和Cry3Aa(US20130167268)；Cry3A和Cry1Ab或Vip3Aa(US20130116170)。杀虫蛋白还包括杀昆虫脂肪酶，所述杀昆虫脂肪酶包括美国专利No.7,491,869提出的脂酰基水解酶和(例如)来自链霉菌属(Streptomyces)的胆固醇氧化酶(Purcell et al.(1993)Biochem Biophys Res Commun 15：1406-1413(Purcell等人，1993年，《生物化学与生物物理研究通讯》，第15卷，第1406-1413页))。杀虫蛋白还包括美国专利No 5,877,012、No 6,107,279、No 6,137,033、No 7,244,820、No 7,615,686和No 8,237,020等提出的VIP(植物性杀昆虫蛋白)毒素。其他VIP蛋白是本领域技术人员所熟知的(参见链接lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html(添加“www”前缀后，可在万维网上访问))。杀虫蛋白还包括毒素复合物(TC)蛋白，这种蛋白可得自(例如)致病杆菌属、发光杆菌属和类芽孢杆菌属(Paenibacillus)之类生物体(参见美国专利No.7,491,698和No.8,084,418)。一些TC蛋白具有“独立”杀昆虫活性，而其他TC蛋白增强由相同给定生物体产生的独立毒素的活性。“独立”TC蛋白(例如来自发光杆菌属、致病杆菌属或类芽孢杆菌属)的毒性可通过源自不同属的来源生物体的一种或多种TC蛋白“增效剂”来增强。TC蛋白有三种主要的类型。如本文所提及的，A类蛋白(“蛋白A”)是独立毒素。B类蛋白(“蛋白B”)和C类蛋白(“蛋白C”)增强A类蛋白的毒性。A类蛋白的例子是TcbA、TcdA、XptA1和XptA2。B类蛋白的例子是TcaC、TcdB、XptB1Xb和XptC1Wi。C类蛋白的例子是TccC、XptC1Xb和XptB1Wi。杀虫蛋白还包括蜘蛛毒蛋白、蛇毒蛋白和蝎毒蛋白。蜘蛛毒肽的例子包括但不限于lycotoxin-1肽及其突变体(美国专利No.8,334,366)。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含从本文公开的全长核酸序列推导出的氨基酸序列，以及由于使用替代性下游起始位点、或由于加工产生具有杀虫活性的较短蛋白而比全长序列短的氨基酸序列。加工可在蛋白表达的生物体中进行或在蛋白摄食后在害虫体内进行。
因此，本文提供了赋予杀虫活性的新型的分离或重组核酸序列。还提供了PIP-47多肽的氨基酸序列。这些PIP-47多肽基因翻译所得到的蛋白质使得细胞能够防治或杀灭摄食这种蛋白质的害虫。
细菌菌株
本发明一方面涉及表达PIP-47多肽的细菌菌株。在一些实施例中，这种细菌菌株是恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)菌株。在一些实施例中，这种细菌菌株是恶臭假单胞菌菌株SS62E1的生物纯培养物，其在2013年8月13日以登录号NRRL B-50845保藏于美国伊利诺伊州皮奥里亚北方大学街道1815号农业研究菌种保藏中心(NRRL)(1815NorthUniversity Street，Peoria，Illinois 61604)(链接nrrl.ncaur.usda.gov(添加“www”前缀后，可在万维网上访问))。按照国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约的条款保存该保藏物。这些保藏物仅为便利于本领域技术人员而保存，并非承认保藏物是在35U.S.C.§112下所要求的。在本申请待决期间，专利商标局专员及其应要求获得授权的人员可取得该保藏物。在本申请的任何权利要求被授权后，依照37C.F.R.§1.808，申请人将确保公众可获得保藏在美国伊利诺伊州皮奥里亚北方大学街道1815号农业研究菌种保藏中心(NRRL)(1815North University Street，Peoria，Illinois 61604)的该保藏物的样品。该保藏物将在作为一家公共保藏单位的NRRL保藏单位维持30年时间，或在最近请求后5年，或持续至本专利的有效期限，选其长者，并且如果其在此期间失活将予以更换。一旦专利授权，该保藏物将不可撤回且无限制或无条件地向公众提供。另外，申请人已经满足37C.F.R.§§1,801-1,809的全部要求，包括提供该样品在保藏时有活力的指征。申请人无权豁免法律对生物材料转移或其商业运输所规定的任何限制。申请人不豁免对他们在本专利下被授予的权利的任何侵犯。但是，应当理解，保藏物的可获取性不构成许可在损害政府法令所授予的专利权的情况下实施本发明。
核酸分子及其变体和片段
本发明一方面涉及包含编码PIP-47多肽或其生物活性部分的核酸序列的分离的或重组的核酸分子；以及足以用作杂交探针，来识别编码具有序列同源性区域的蛋白的核酸分子的多种核酸分子。如本文所用，术语“核酸分子”是指DNA分子(例如，重组DNA、cDNA、基因组DNA、质体DNA、线粒体DNA)和RNA分子(例如，mRNA)以及使用核苷酸类似物产生的DNA或RNA的类似物。核酸分子可以是单链的或双链的，但优选的是双链DNA。
“分离的”核酸分子(或DNA)在本文用来指不再处于其天然环境中，例如处于体外的核酸序列(或DNA)。“重组的”核酸分子(或DNA)在本文用来指处于重组细菌或植物宿主细胞中的核酸序列(或DNA)。在一些实施例中，“分离的”或“重组的”核酸不含在该核酸的来源生物体的基因组DNA中天然处于该核酸旁侧的序列(即位于该核酸的5′和3′端的序列)(优选蛋白质编码序列)。出于本公开的目的，“分离的”或“重组的”在用来指核酸分子时不包括分离的染色体。例如，在各种实施例中，编码PIP-47多肽的重组核酸分子可以包含小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核酸序列，所述核酸序列在该核酸的来源细胞的基因组DNA中天然处于该核酸分子的旁侧。
在一些实施例中，与天然或基因组核酸序列相比，编码PIP-47多肽的分离的核酸分子在核酸序列中具有一个或多个改变。在一些实施例中，天然或基因组核酸序列的改变包括但不限于：遗传密码简并性引起的核酸序列改变；与天然或基因组序列相比，存在氨基酸置换、插入、缺失和/或添加，而导致的核酸序列改变；一个或多个内含子被去除；一个或多个上游或下游调节区缺失；与基因组核酸序列相关的5’和/或3’非翻译区缺失。在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是非基因组序列。
设想了编码PIP-47多肽或相关蛋白质的多种多核苷酸。当此类多核苷酸被有效连接至合适的启动子、转录终止序列和/或聚腺苷酸化序列时，可用于在宿主细胞中产生PIP-47多肽。此类多核苷酸也可用作探针，来分离编码PIP-47多肽或相关蛋白质的同源或基本上同源的多核苷酸。
编码PIP-47多肽或相关蛋白质的多核苷酸的一种来源如下：一种恶臭假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：2的PIP-47Aa多肽的SEQ ID NO：1的PIP-47Aa多核苷酸；一种恶臭假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：4的PIP-47Bb多肽的SEQ ID NO：3的PIP-47Ba多核苷酸；黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)菌株，其包含编码SEQ ID NO：6的PIP-47Bb多肽的SEQ ID NO：5的PIP-47Bb多核苷酸；或绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)菌株，其包含编码SEQ ID NO：8的PIP-47Fa多肽的SEQ ID NO：7的PIP-47Fa多核苷酸。这些多核苷酸序列分离自假单胞菌宿主，因而适用于在其他细菌宿主中表达所编码的PIP-47多肽。例如，SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7可用于在包括但不限于下列的细菌宿主中表达PIP-47多肽：农杆菌属(Agrobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、埃希氏菌属(Escherichia)、沙门氏菌属(Salmonella)、假单胞菌属(Pseudomonas)和根瘤菌属(Rhizobium)细菌宿主细胞。此类多核苷酸也可用作探针，来分离编码PIP-47多肽或相关蛋白质的同源或基本上同源的多核苷酸。此类探针可用于鉴定源自假单胞菌属或其他相关细菌的同源或基本上同源的多核苷酸。
也可依据PIP-47多肽序列从头合成编码PIP-47多肽的多核苷酸。可使用遗传密码，由PIP-47多肽序列推导出多核苷酸基因的序列。可使用计算机程序，例如“BackTranslate”(GCGTM软件包，美国加利福尼亚州圣地亚哥阿赛乐德公司(Acclerys，Inc.San Diego，Calif.))，将肽序列转换为编码这种肽的相应核苷酸序列。可用来获得相应编码核苷酸的序列的PIP-47多肽序列的例子包括但不限于序列SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8的PIP-47多肽。此外，本公开的合成PIP-47多核苷酸序列可被设计成将能在植物中表达。美国专利No.5,500,365描述了用于合成植物基因以改善由该合成基因编码的蛋白质的表达水平的方法。该方法涉及对外源转基因的结构基因序列进行修饰，使其被植物更有效地转录、加工、翻译和表达。在植物中充分表达的基因的特征包括消除可引起基因转录物的编码区中非期望的内含子剪接或多聚腺苷酸化的序列，同时基本上保留杀昆虫蛋白的毒性部分的氨基酸序列。美国专利No.5,689,052公开了类似方法，用于提升转基因在单子叶植物中的表达水平。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有以SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7示出的序列以及这些序列的变体、片段和互补序列的多核苷酸。“互补序列”在本文中用来指与给定的核酸序列充分地互补使得其可杂交至该给定的核酸序列从而形成稳定双链体的核酸序列。“多核苷酸序列变体”在本文中用来指除了遗传密码简并之外编码相同多肽的核酸序列。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。如本文所用，“非基因组核酸序列”或“非基因组核酸分子”是指与天然或基因组核酸序列相比在核酸序列中具有一个或多个改变的核酸分子。在一些实施例中，对天然或基因组核酸分子的改变包括但不限于：由于遗传密码简并性引起的核酸序列改变；用于在植物中表达的核酸序列的密码子优化；与天然或基因组序列相比，引入至少一种氨基酸置换、插入、缺失和/或添加引起的核酸序列改变；与基因组核酸序列相关的一个或多个内含子的去除；一个或多个异源内含子的插入；与基因组核酸序列相关的一个或多个上游或下游调节区的缺失；一个或多个异源上游或下游调节区的插入；与基因组核酸序列相关的5’和/或3’非翻译区的缺失；异源5’和/或3’非翻译区的插入；以及聚腺苷酸化位点的修饰。在一些实施例中，前述非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，前述非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子不是具有以SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7示出的序列的多核苷酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子不编码SEQ ID NO：2、SEQID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的多肽。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子是具有编码下述多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ IDNO：8的氨基酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子是具有编码下述多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子是具有编码下述多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子是具有编码下述多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的非基因组核酸分子是具有编码下述多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含这样的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8相比，具有至少一个氨基酸改变，并且所述PIP-47多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含这样的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％的同一性，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：2相比，具有至少一个氨基酸改变，并且所述PIP-47多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含这样的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少80％的同一性，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：4相比，具有至少一个氨基酸改变，并且所述PIP-47多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含这样的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少80％的同一性，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：6相比，具有至少一个氨基酸改变，并且所述PIP-47多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含这样的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：8相比，具有至少一个氨基酸改变，并且所述PIP-47多肽具有杀虫活性。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列的PIP-47多肽，且所述多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8中相应位置的天然氨基酸相比，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的PIP-47多肽，且所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的PIP-47多肽，且所述多肽与SEQ ID NO：4中相应位置的天然氨基酸相比，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的PIP-47多肽，且所述多肽与SEQ ID NO：6中相应位置的天然氨基酸相比，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的PIP-47多肽，且所述多肽与SEQ ID NO：8中相应位置的天然氨基酸相比，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：481的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：482的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：483的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：484的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：485的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：486的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，非基因组核酸分子编码包含SEQ ID NO：487的氨基酸序列的PIP-47多肽，所述多肽与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由Xaa表示的位置具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61个氨基酸置换。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：481的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：482的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His或Asn；第4位处的Xaa是Pro或缺失；第5位处的Xaa是Gly或缺失；第6位处的Xaa是Ala或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu或Val；第13位处的Xaa是Ser或Val；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Gly或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Gly或缺失；第22位处的Xaa是Lys或Thr；第24位处的Xaa是Asn、Lys或Arg；第25位处的Xaa是Ala或Val；第26位处的Xaa是Lys或Asn；第29位处的Xaa是Ala、Thr或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Ala或Val；第31位处的Xaa是Arg或His；第37位处的Xaa是Gln或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第41位处的Xaa是Arg或His；第42位处的Xaa是Gln或His；第43位处的Xaa是Leu或Gln；第46位处的Xaa是Ala、Ser或Pro；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第49位处的Xaa是Gln、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser或Ala；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第66位处的Xaa是Lys、Ala或Ser；第68位处的Xaa是Thr或Ala；第71位处的Xaa是Gly或Asp；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第75位处的Xaa是Lys或Asn；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Lys、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第97位处的Xaa是Ala或Ser；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、yal或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第121位处的Xaa是Ala或Lys；第136位处的Xaa是Glu或Asn；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第161位处的Xaa是Val或Ile；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第172位处的Xaa是Lys或Ala；第173位处的Xaa是Asn或Ala；第174位处的Xaa是Gln或Lys；第181位处的Xaa是Gln或Lys；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第212位处的Xaa是Asp、Ile或Asn；第213位处的Xaa是Ser、Ala或Gly；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第230位处的Xaa是Ser或Thr；第232位处的Xaa是His或Lys；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile或Val；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys或Arg；第262位处的Xaa是Val或Thr；第264位处的Xaa是Ser或Ala；第272位处的Xaa是Gln或Glu；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第283位处的Xaa是Arg或Lys；第284位处的Xaa是Glu或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：483的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His、Asn、Arg、Lys或Gln；第4位处的Xaa是Pro或缺失；第5位处的Xaa是Gly或缺失；第6位处的Xaa是Ala或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Leu、Val或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Asp、Ala、Ile或Leu；第13位处的Xaa是Ser、Val、Thr、Ile、Leu或Ala；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Gly、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Gly、Ser或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Thr、Arg或Ser；第24位处的Xaa是Asn、Lys、Arg或Gln；第25位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第26位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Ile、Ser、Leu、Val或Met；第30位处的Xaa是Leu、Ala、Val、Ile；第31位处的Xaa是Arg、His或Lys；第37位处的Xaa是Gln、His、Asn、Arg或Lys；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第41位处的Xaa是Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、His、Asn；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ile、Val或Asn；第46位处的Xaa是Ala、Ser、Pro或Thr；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第49位处的Xaa是Gln、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Ala、Thr；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第66位处的Xaa是Lys、Ala、Ser、Arg或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Ala、Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第75位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Lys、Asn、Arg或Gln；第85位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第117位处的Xaa是Lys或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；第121位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第136位处的Xaa是Glu、Asn、Gln或Asp；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第161位处的Xaa是Val、Ile或Met；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第172位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第173位处的Xaa是Asn、Ala或Gln；第174位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第181位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第212位处的Xaa是Asp、Ile、Asn、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Ala、Gly或Thr；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第230位处的Xaa是Ser或Thr；第232位处的Xaa是His、Lys或Arg；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Gln或Asp；第260位处的Xaa是Lys或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；第272位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第283位处的Xaa是Arg或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQ ID NO：483的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：484的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His或Ser；第3位处的Xaa是Ala或Thr；第4位处的Xaa是Pro或Gln；第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；第11位处的Xaa是Lys或Glu；第12位处的Xaa是Glu或Lys；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；第14位处的Xaa是Ala或Lys；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala或Trp；第17位处的Xaa是Trp或Leu；第18位处的Xaa是Leu或Asn；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；第27位处的Xaa是Ser或Phe；第28位处的Xaa是Thr或Ala；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile或Phe；第35位处的Xaa是Phe或Tyr；第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；第47位处的Xaa是Thr或Ser；第48位处的Xaa是Gly或Leu；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala或Ile；第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第65位处的Xaa是Ala或Thr；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；第67位处的Xaa是Gly或Ser；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；第76位处的Xaa是Asp或Ala；第78位处的Xaa是Asp或Asn；第79位处的Xaa是Ala、Asn或Lys；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val或Ala；第84位处的Xaa是Gly或Ser；第85位处的Xaa是Ser、Thr或Lys；第86位处的Xaa是Ala或Val；第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；第98位处的Xaa是Ile或Val；第99位处的Xaa是Asp或Asn；第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；第103位处的Xaa是Arg或Thr；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr或Trp；第110位处的Xaa是Leu或Asn；第112位处的Xaa是Gln或Pro；第115位处的Xaa是Asp、Gly或Ala；第116位处的Xaa是Gln、Ala或Arg；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg或Asn；第119位处的Xaa是Lys或His；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；第124位处的Xaa是Arg或Tyr；第130位处的Xaa是Phe或Leu；第132位处的Xaa是Gln或Lys；第133位处的Xaa是Gln或Glu；第135位处的Xaa是Ala或Ser；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；第137位处的Xaa是Ile或Asn；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu或Pro；第143位处的Xaa是Leu或Glu；第144位处的Xaa是Ala或Ser；第146位处的Xaa是Gln或Ser；第147位处的Xaa是Val或Ser；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln或Leu；第150位处的Xaa是Ile或Val；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；第153位处的Xaa是Lys或Gln；第156位处的Xaa是Asp或Gly；第158位处的Xaa是Asn或Asp；第161位处的Xaa是Val或Ile；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val或Ala；第168位处的Xaa是Phe或Ser；第169位处的Xaa是Ile或His；第170位处的Xaa是Gly或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；第176位处的Xaa是Val或Ile；第178位处的Xaa是Gln或Glu；第179位处的Xaa是Ile或Thr；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser或Lys；第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；第189位处的Xaa是Ala或Val；第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；第196位处的Xaa是Gln或Lys；第198位处的Xaa是Glu或Asn；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn或Phe；第203位处的Xaa是Phe或Leu；第206位处的Xaa是Asn或His；第207位处的Xaa是Ile或Thr；第208位处的Xaa是Leu或Met；第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；第213位处的Xaa是Ser、Gly或A1a；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys或Val；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；第235位处的Xaa是Thr或Ala；第236位处的Xaa是Ile或Leu；第237位处的Xaa是Thr或Asn；第243位处的Xaa是Thr、Ser或Leu；第245位处的Xaa是Ser或Thr；第246位处的Xaa是Gln或Pro；第247位处的Xaa是Ala或Ser；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；第250位处的Xaa是Gln或Thr；第253位处的Xaa是Val或Gly；第254位处的Xaa是Glu或Gly；第255位处的Xaa是Ser或Gly；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；第267位处的Xaa是Gln或Leu；第270位处的Xaa是Asp或Lys；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；第274位处的Xaa是Trp或Thr；第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；第279位处的Xaa是Thr或Ile；第280位处的Xaa是Thr或Pro；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQ ID NO：484的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：485的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His或Ser；第3位处的Xaa是Ala或Thr；第4位处的Xaa是Pro或Gln；第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；第11位处的Xaa是Lys或Glu；第12位处的Xaa是Glu或Lys；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；第14位处的Xaa是Ala或Lys；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala或Trp；第17位处的Xaa是Trp或Leu；第18位处的Xaa是Leu或Asn；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；第27位处的Xaa是Ser或Phe；第28位处的Xaa是Thr或Ala；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile或Phe；第35位处的Xaa是Phe或Tyr；第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第48位处的Xaa是Gly或Leu；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala或Ile；第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第65位处的Xaa是Ala或Thr；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；第67位处的Xaa是Gly或Ser；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；第76位处的Xaa是Asp或Ala；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；第98位处的Xaa是Ile或Val；第99位处的Xaa是Asp或Asn；第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；第103位处的Xaa是Arg或Thr；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；第124位处的Xaa是Arg或Tyr；第130位处的Xaa是Phe或Leu；第132位处的Xaa是Gln或Lys；第133位处的Xaa是Gln或Glu；第135位处的Xaa是Ala或Ser；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；第137位处的Xaa是Ile或Asn；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；第143位处的Xaa是Leu或Glu；第144位处的Xaa是Ala或Ser；第146位处的Xaa是Gln或Ser；第147位处的Xaa是Val或Ser；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln或Leu；第150位处的Xaa是Ile或Val；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；第153位处的Xaa是Lys或Gln；第156位处的Xaa是Asp或Gly；第158位处的Xaa是Asn或Asp；第161位处的Xaa是Val或Ile；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val或Ala；第168位处的Xaa是Phe或Ser；第169位处的Xaa是Ile或His；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；第176位处的Xaa是Val或Ile；第178位处的Xaa是Gln或Glu；第179位处的Xaa是Ile或Thr；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser或Lys；第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；第189位处的Xaa是Ala或Val；第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；第196位处的Xaa是Gln或Lys；第198位处的Xaa是Glu或Asn；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn或Phe；第203位处的Xaa是Phe或Leu；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第206位处的Xaa是Asn或His；第207位处的Xaa是Ile或Thr；第208位处的Xaa是Leu或Met；第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys或Val；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；第250位处的Xaa是Gln或Thr；第253位处的Xaa是Val或Gly；第254位处的Xaa是Glu或Gly；第255位处的Xaa是Ser或Gly；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；第267位处的Xaa是Gln或Leu；第270位处的Xaa是Asp或Lys；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；第274位处的Xaa是Trp或Thr；第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；第280位处的Xaa是Thr或Pro；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：485的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：486的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；第47位处的Xaa是Thr或Ser；第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第65位处的Xaa是A1a、Thr或Ser；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Pro、Ile或Val；第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val、A1a、Ile或Leu；第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；第170位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；第235位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第236位处的Xaa是Ile、Leu或Val；第237位处的Xaa是Thr、Asn、Ser或Gln；第243位处的Xaa是Thr、Ser、Leu、Ile或Val；第245位处的Xaa是Ser或Thr；第246位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第247位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；第279位处的Xaa是Thr、Ile、Ser、Leu或Val；第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQ ID NO：486的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸分子是具有编码包含SEQ ID NO：487的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的多核苷酸，其中，第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、yal、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或yal；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：487的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，核酸分子编码具有编码包含下述氨基酸基序的PIP-47多肽的核苷酸序列的PIP-47多肽，所述氨基酸基序由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第234-247位表示。
在一些实施例中，核酸分子编码具有编码包含下述氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的PIP-47多肽：所述氨基酸序列与以SEQ ID NO：2示出的氨基酸序列具有至少80％的同一性。
在一些实施例中，示例性核酸分子编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ IDNO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921的PIP-47多肽及其活性片段，其氨基酸的置换、缺失、插入和片段以及它们的组合。
在一些实施例中，所述核酸分子编码表8、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表16、表17、表18和/或表19的PIP-47多肽及其氨基酸置换、缺失和/或插入的组合。
还提供了编码转录和/或翻译产物的核酸分子，这些转录和/或翻译产物随后被剪接，最终产生功能性PIP-47多肽。剪接可在体外或体内完成，并且可涉及顺式或反式剪接。供剪接的底物可以是多核苷酸(例如，RNA转录物)或多肽。多核苷酸顺式剪接的例子是，将插入编码序列的内含子移除并将两个旁侧外显子区剪接，从而产生PIP-47多肽的编码序列。反式剪接的例子将是通过如下方式加密多核苷酸的情形：将编码序列分成两个或更多个片段，所述两个或更多个片段可单独地转录，然后剪接而形成全长杀虫编码序列。可引入构建体中的剪接增强子序列的使用可有利于多肽顺式或反式剪接方式的剪接(美国专利No.6,365,377和No.6,531,316)。因此，在一些实施例中，所述多核苷酸不直接编码全长PIP-47多肽，而是编码PIP-47多肽的一个或多个片段。这些多核苷酸可用于通过涉及剪接的机制来表达功能性PIP-47多肽，其中剪接可在多核苷酸(例如，内含子/外显子)和/或多肽(例如，内含肽/外显肽)水平发生。这可用于例如控制杀虫活性的表达，因为功能性杀虫多肽将仅在如下情况下表达：所有必需的片段在容许剪接过程的环境中表达从而产生功能性产物。又如，向多核苷酸内引入一个或多个插入序列可能有利于与低同源性多核苷酸的重组；在插入序列中使用内含子或内含肽有利于去除间插序列，从而恢复所编码变体的功能。
所述实施例还涵盖这些编码PIP-47多肽的核酸序列的片段，即核酸分子。本文使用的“片段”是指编码PIP-47多肽的核酸序列的一部分。核酸序列的片段可以编码PIP-47多肽的生物活性部分，或可以是在使用下文公开的方法时可用作杂交探针或PCR引物的片段。取决于预期应用，作为编码PIP-47多肽的核酸序列的片段的核酸分子包含至少约150、180、210、240、270、300、330或360个连续核苷酸，且包含的连续核苷酸的数量最多为编码本文所公开PIP-47多肽的全长核酸序列中存在的核苷酸总数。“连续核苷酸”在本文中用来指彼此紧邻的核苷酸残基。所述实施例的核酸序列的片段将编码这样的蛋白质片段：其将保留PIP-47多肽的生物活性，从而保留杀昆虫活性。本文使用的“保留PIP-47活性”，是指多肽具有SEQ ID NO：2的全长PIP-47Aa多肽至少约10％、至少约30％、至少约50％、至少约70％、80％、90％、95％或以上的杀昆虫活性。在一个实施例中，杀昆虫活性是(杀灭)鳞翅目活性。在一个实施例中，杀昆虫活性针对的是鞘翅目物种。在一个实施例中，杀昆虫活性针对的是玉米根虫复合群中下列一种或多种害虫：西方玉米根虫(Diabrotica virgifera)、北方玉米根虫(D.barberi)、南方玉米根虫或黄瓜十一星叶甲食根亚种(Diabroticaundecimpunctata howardi)、墨西哥玉米根虫(D.virgifera zeae)。在一个实施例中，杀昆虫活性针对的是叶甲属(Diabrotica)物种。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的核酸序列中编码蛋白质生物活性部分的片段将编码至少大约15、20、30、50、75、100、125个连续氨基酸，且编码的连续氨基酸的数量最多为所述实施例的全长PIP-47多肽中存在的氨基酸总数。在一些实施例中，从相对于SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8或这些序列的变体的N端和/或C端，至少截去约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34个或更多个氨基酸，得到所述片段；截去氨基酸的方式例如为：通过蛋白水解；插入起始密码子；缺失编码要缺失的氨基酸的密码子，伴随插入终止密码子；或通过在编码序列中插入终止密码子。在一些实施例中，从相对于SEQ ID NO：2、28、32或36或这些序列的变体的N端，除去1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个氨基酸，得到本文涵盖的片段；除去氨基酸的方式例如为：通过蛋白水解或通过在编码序列中插入起始密码子。在一些实施例中，从相对于SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8或这些序列的变体的N端，除去1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸，得到本文涵盖的片段；除去氨基酸的方式例如为：通过蛋白水解或通过在编码序列中插入起始密码子。
在一些实施例中，PIP-47多肽由与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5或SEQID NO：7的核酸序列充分同源的核酸序列编码。本文使用的“充分同源”，是指使用本文所述的比对程序之一并采用标准参数，将氨基酸或核酸序列与参考序列比较时，两种序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的序列同源性。本领域技术人员将会认识到，可通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、阅读框定位等等而适当调整这些值以确定两条核酸序列所编码的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性是相对编码PIP-47多肽的多核苷酸的全长序列或相对PIP-47多肽的全长序列而言。在一些实施例中，PIP-47多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ IDNO：8相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的序列同一性。在一些实施例中，序列同一性是相对编码PIP-47多肽的多核苷酸的全长序列或相对PIP-47多肽的全长序列而言。在一些实施例中，使用程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen Corporation，Carlsbad，Calif.))中模块内的ClustalW算法，参数全部默认，来计算序列同一性。在一些实施例中，使用Vector NTI程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(InvitrogenCorporation，Carlsbad，Calif.))中ALIGNX模块内的ClustalW算法，参数全部默认，跨多肽全长计算序列同一性。
为了确定两条氨基酸序列或两条核酸序列的同一性百分比，对序列进行了最佳比较目的的比对。这两条序列之间的同一性百分比是序列所共有的相同位置的数量的函数(即，同一性百分比＝相同位置的数量/位置(例如，重叠的位置)的总数×100)。在一个实施例中，这两条序列的长度相同。在另一个实施例中，跨参考序列全长(例如，跨SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQID NO：8之一的全长)进行比较。两条序列之间的同一性百分比可使用类似于下文所述的那些的技术在允许或不允许空位的情况下确定。在计算同一性百分比过程中，通常对准确的匹配进行计数。
可以使用数学算法确定两条序列之间的同一性百分比。用来比较两条序列的数学算法的非限制性例子是Karlin and Altschul，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264(Karlin和Altschul，1990年，《美国国家科学院院刊》，第87卷，第2264页)提出的算法；Karlin and Altschul，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877(Karlin和Altschul，1993年，《美国国家科学院院刊》，第90卷，第5873-5877页)改进了这种算法。该算法并入Altschul，et al.，(1990)J.Mol.Biol.215：403(Altschul等人，1990年，《分子生物学杂志》，第215卷，第403页)提出的BLASTN和BLASTX程序中。BLAST核苷酸搜索可以用BLASTN程序、得分＝100、字长＝12来进行，以获得与所述实施例的杀虫核酸分子同源的核酸序列。BLAST蛋白质搜索可用BLASTX程序、得分＝50、字长＝3来进行，以获得与所述实施例的杀虫蛋白分子同源的氨基酸序列。可采用空位BLAST程序(在BLAST2.0中)，按Altschul，et al.，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389(Altschul等人，1997年，《核酸研究》，第25卷，第3389页)中所述步骤获得空位比对结果，再用该结果进行比较。或者，可使用PSI-Blast执行迭代搜索，检测分子间的远缘关系。参见Altschul等人1997年发表的文献(出处同上)。采用BLAST、Gapped BLAST和PSI-Blast程序时，可使用各程序(例如，BLASTX和BLASTN)的默认参数。还可以采用人工检查的方式执行比对。
用于比较序列的数学算法的另一个非限制性例子是ClustalW算法(Higgins，etal.，(1994)Nucleic Acids Res.22：4673-4680(Higgins等人，1994年，《核酸研究》，第22卷，第4673-4680页))。ClustalW对序列进行比较并对氨基酸或DNA序列整体进行比对，从而可提供有关整条氨基酸序列的序列保守性的数据。ClustalW算法用于若干商品化的DNA/氨基酸分析软件包，比如程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen Corporation，Carlsbad，Calif.))中的模块。在用ClustalW对氨基酸序列进行比对之后，可评估氨基酸同一性百分比。可用于分析ClustalW比对结果的软件程序的非限制性例子是GENEDOCTM。运用GENEDOCTM(Karl Nicholas)可以评估多种蛋白质的氨基酸(或DNA)相似性和同一性。用于比较序列的数学算法的另一个非限制性例子是Myers and Miller，(1988)C4BIOS 4：11-17(Myers和Miller，1988年，《计算机在生物科学中的应用》，第4卷，第11-17页)提出的算法。该算法并入ALIGN程序(2.0版)，ALIGN程序(2.0版)是GCG威斯康辛遗传学10版软件包(得自美国加利福尼亚州圣地亚哥斯克兰顿路9685号的Accelrys公司(Accelrys，Inc.，9685Scranton Rd.，San Diego，Calif.，USA))的组成部分。采用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可使用PAM120加权残基表、空位长度罚分12和空位罚分4。
用于比较序列的数学算法的另一个非限制性例子是Needleman and Wunsch，(1970)J.Mol.Biol.48(3)：443-453(Needleman和Wunsch，1970年，《分子生物学杂志》，第48卷，第3期，第443-453页)提出的算法，该算法使用GAP 10版软件，运用下列默认参数测定序列同一性或相似性：使用GAP权重50、长度权重3及nwsgapdna.cmpii打分矩阵，获得核酸序列的同一性百分比和相似性百分比；使用GAP权重8、长度权重2及BLOSUM62打分程序，获得氨基酸序列的同一性百分比或相似性百分比。也可使用等同程序。“等同程序”在本文中用来指任何这样的序列比较程序，其对于任何两个所考虑的序列，相比于GAP 10版软件所产生的相应比对，能产生出具有相同的核苷酸残基匹配和相同的序列同一性百分比的比对。
所述实施例还涵盖编码PIP-47多肽变体的核酸分子。编码PIP-47多肽“变体”的核酸序列，包括编码本文公开的PIP-47多肽、但由于遗传密码简并性而存在保守差异的那些序列，以及与上文讨论过的序列充分相同的那些序列。天然存在的等位基因变体可用公知的分子生物学技术进行鉴定，例如用下文概述的聚合酶链反应(PCR)和杂交技术来鉴定。变体核酸序列还包括合成得到的核酸序列，这种核酸序列(例如)通过使用定点诱变产生，但仍编码本发明公开的PIP-47多肽，下文将论述这种情况。
本发明提供编码本文公开的任一种PIP-47多肽的分离或重组的多核苷酸。本领域的普通技术人员将易于认识到，由于遗传密码简并性，存在大量编码本发明的PIP-47多肽的核苷酸序列。表1为密码子表，提供了每种氨基酸的同义密码子。例如，密码子AGA、AGG、CGA、CGC、CGG和CGU全都编码精氨酸。因此，在本发明核酸中由某密码子指定为精氨酸的每个位置处，可将该密码子更改为上述任一种对应的密码子，而不会改变所编码的多肽。应当理解，RNA序列中的U对应DNA序列中的T。
表1
丙氨酸 Ala A GCA GCC GCG GCU
半胱氨酸 Cys C UGC UGU
天冬氨酸 Asp D GAC GAU
谷氨酸 Glu E GAA GAG
苯丙氨酸 Phe F UUC UUU
甘氨酸 Gly G GGA GGC GGG GGU
组氨酸 His CAC CAU
异亮氨酸 Ile I AUAAUC AUU
赖氨酸 Lvs K AAA AAG
亮氨酸 Leu L UUA UUG CUA CUC CUG CUU
甲硫氨酸 Met M AUG
天冬酰胺 Asn N AAC AAU
脯氨酸 Pro P CCA CCC CCG CCU
谷氨酰胺 Gln Q CAA CAG
精氨酸 Arg R AGA AGG CGA CGC CGG CGU
丝氨酸 Ser S AGC AGUUCAUCC UCGUCU
苏氨酸 Thr T ACA ACC ACG ACU
缬氨酸 Val V GUA GUC GUG GUU
色氨酸 Trp W UGG
酪氨酸 Tyr Y UAC UAU
技术人员还将理解，可通过核酸序列的突变引入变化，从而引起所编码的PIP-47多肽的氨基酸序列改变，却不改变蛋白质的生物活性。因此，可通过将一个或多个核苷酸置换、添加和/或缺失引入本文所公开的相应核酸序列中来形成变体核酸分子，使得一个或多个氨基酸置换、添加或缺失被引入所编码的蛋白质中。可通过标准技术，比如定点诱变和PCR介导的诱变来引入突变。本发明还涵盖了此类变体核酸序列。
或者，可通过沿着所有或部分的编码序列随机引入突变，例如通过饱和诱变来制得变体核酸序列，并且可筛查所得突变体赋予杀虫活性的能力来鉴定保留活性的突变体。诱变后，可以重组方式表达所编码的蛋白质，并且可使用标准测定法技术确定该蛋白质的活性。
除如Ausubel、Berger和Sambrook所述的标准克隆方法以外，本发明的多核苷酸及其片段任选地用作多种重组和递归重组反应的底物，即，为了产生具有所需特性的额外杀虫多肽同源物及其片段。多种此类反应是已知的，包括发明人及其同事开发的那些。用于产生本文所列任何核酸的变体的方法包括将此类多核苷酸与第二(或更多)多核苷酸递归重组，从而形成变体多核苷酸的文库，所述方法也是本发明的实施例，所产生的文库、包含所述文库的细胞以及由此类方法产生的任何重组多核苷酸也是如此。另外，此类方法任选地包括当此类递归重组在体外或体内完成时，基于杀虫活性从此类文库选择变体多核苷酸。
多种多样性产生方案(包括核酸递归重组方案)可供使用并且已在本领域中充分描述。这些程序可单独和/或组合使用以产生核酸或核酸组的一个或多个变体，以及所编码的蛋白质的变体。这些程序单独地和共同地提供产生多样化的核酸和核酸组(包括例如核酸文库)的稳固、广泛适用的方法，可用于例如核酸、蛋白质、通路、细胞和/或生物体的工程改造或快速进化而具有新的和/或改善的特性。
虽然为清楚起见在后续讨论过程中进行了区分和分类，但应当理解，这些技术通常不是互相排斥的。事实上，所述各种方法可单独或组合使用、并行或连续使用，以获得多样的序列变体。
任何本文所述的多样性产生程序的结果可以是产生一条或多条核酸，可对所述一条或多条核酸进行选择或筛选而得到具有或赋予所需特性的核酸或者编码具有或赋予所需特性的蛋白质的核酸。在通过本文的一种或多种方法或者可供技术人员使用的其他方法进行多样化后，可针对所需活性或特性例如杀虫活性或在所需pH下的此类活性等等，来选择产生的任何核酸。这可包括鉴定任何活性，所述活性可通过本领域的任何测定法以例如自动化或可自动化的格式进行检测，参见例如下文杀昆虫活性的筛查的讨论。操作人员可自行决定，是连续评价、还是并行评价多种相关(甚至不相关的)特性。
可从下列出版物及其中引用的参考文献中找到用于产生经修饰核酸序列(例如，编码具有杀虫活性的多肽或其片段的核酸序列)的多种多样性产生工序：Soong，et al.，(2000)Nat Genet 25(4)：436-439(Soong等人，2000年，《自然-遗传学》，第25卷，第4期，第436-439页)；Stemmer，et al.，(1999)Tumor Targeting 4：1-4(Stemmer等人，1999年，《肿瘤靶向》，第4卷，第1-4页)；Ness，et al.，(1999)Nat Biotechnol 17：893-896(Ness等人，1999年，《自然生物技术》，第17卷，第893-896页)；Chang，et al.，(1999)Nat Biotechnol17：793-797(Chang等人，1999年，《自然生物技术》，第17卷，第793-797页)；Minshull andStemmer，(1999)Curr Opin Chem Biol 3：284-290(Minshull和Stemmer，1999年，《化学生物学新见》，第3卷，第284-290页)；Christians，et al.，(1999)Nat Biotechnol 17：259-264(Christians等人，1999年，《自然生物技术》，第17卷，第259-264页)；Crameri，et al.，(1998)Nature 391：288-291(Crameri等人，1998年，《自然》，第391卷，第288-291页)；Crameri，et al.，(1997)Nat Biotechnol 15：436-438(Crameri等人，1997年，《自然生物技术》，第15卷，第436-438页)；Zhang，et al.，(1997)PNAS USA 94：4504-4509(Zhang等人，1997年，《美国国家科学院院刊》，第94卷，第4504-4509页)；Patten，et al.，(1997)CurrOpin Biotechnol 8：724-733(Patten等人，1997年，《生物技术新见》，第8卷，第724-733页)；Crameri，et al.，(1996)Nat Med 2：100-103(Crameri等人，1996年，《自然医学》，第2卷，第100-103页)；Crameri，et al.，(1996)Nat Biotechnol 14：315-319(Crameri等人，1996年，《自然生物技术》，第14卷，第315-319页)；Gates，et al.，(1996)J Mol Biol 255：373-386(Gates等人，1996年，《分子生物学杂志》，第255卷，第373-386页)；Stemmer，(1996)“Sexual PCR and Assembly PCR”：The Encyclopedia of Molecular Biology.VCHPublishers，New York.pp.447-457(Stemmer，1996年，“有性PCR和装配PCR”，载于：《分子生物学百科全书》，纽约VCH出版社，第447-457页)；Crameri and Stemmer，(1995)BioTechniques 18：194-195(Crameri和Stemmer，1995年，《生物技术》，第18卷，第194-195页)；Stemmer，et al.，(1995)Gene，164：49-53(Stemmer等人，1995年，《基因》，第164卷，第49-53页)；Stemmer，(1995)Science 270：1510(Stemmer，1995年，《科学》，第270卷，第1510页)；Stemmer，(1995)Bio/Technology 13：549-553(Stemmer，1995年，《生物/技术)》，第13卷，第549-553页)；Stemmer，(1994)Nature 370：389-391(Stemmer，1994年，《自然》，第370卷，第389-391页)以及Stemmer，(1994)PNAS USA 91：10747-10751(Stemmer，1994年，《美国国家科学院院刊》，第91卷，第10747-10751页)。
产生多样性的突变方法包括(例如)定点诱变(Ling，et al.，(1997)Anal Biochem254(2)：157-178(Ling等人，1997年，《分析生物化学》，第254卷，第2期，第157-178页)；Dale，et al.，(1996)MethodsMol Biol57：369-374(Dale等人，1996年，《分子生物学方法》，第57卷，第369-374页)；Smith，(1985)Ann Rev Genet 19：423-462(Smith，1985年，《遗传学年评》，第19卷，第423-462页)；Botstein and Shortle，(1985)Science 229：1193-1201(Botstein和Shortle，1985年，《科学》，第229卷，第1193-1201页)；Carter，(1986)BiochemJ 237：1-7(Carter，1986年，《生物化学杂志》，第237卷，第1-7页)以及Kunkel，(1987)“Theefficiency of oligonucleotide directed mutagenesis”Nucleic Acids&MolecularBiology(Eckstein and Lilley，eds.，Springer Verlag，Berlin)(Kunkel，1987年，“寡核苷酸定点诱变的效率”，《核酸与分子生物学》，Eckstein和Lilley编辑，柏林施普林格出版社))；使用含尿嘧啶的模板进行诱变(Kunkel，(1985)PNAS USA 82：488-492(Kunkel，1985年，《美国国家科学院院刊》，第82卷，第488-492页)；Kunkel，et al.，(1987)MethodsEnzymol 154：367-382(Kunkel等人，1987年，《酶学方法》，第154卷，第367-382页)以及Bass，et al.，(1988)Science 242：240-245(Bass等人，1988年，《科学》，第242卷，第240-245页))；寡核苷酸定点诱变(Zoller and Smith，(1983)Methods Enzymol 100：468-500(Zoller和Smith，1983年，《酶学方法》，第100卷，第468-500页)；Zoller and Smith，(1987)Methods Enzymol 154：329-350(1987)(Zoller和Smith，1987年，《酶学方法》，第154卷，第329-350页，1987年)；Zoller and Smith，(1982)Nucleic Acids Res 10：6487-6500(Zoller和Smith，1982年，《核酸研究》，第10卷，第6487-6500页))；硫代磷酸酯修饰的DNA诱变(Taylor，et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：8749-8764(Taylor等人，1985年，《核酸研究》，第13卷，第8749-8764页)；Taylor，et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：8765-8787(1985)(Taylor等人，1985年，《核酸研究》，第13卷，第8765-8787页，1985年)；Nakamaye andEckstein，(1986)Nucl Acids Res 14：9679-9698(Nakamaye和Eckstein，1986年，《核酸研究》，第14卷，第9679-9698页)；Sayers，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：791-802(Sayers等人，1988年，《核酸研究》，第16卷，第791-802页)以及Sayers，et al.，(1988)NuclAcids Res 16：803-814(Sayers等人，1988年，《核酸研究》，第16卷，第803-814页))；使用缺口双链DNA进行诱变(Kramer，et al.，(1984)Nucl Acids Res 12：9441-9456(Kramer等人，1984年，《核酸研究》，第12卷，第9441-9456页)；Kramer and Fritz，(1987)MethodsEnzymel154：350-367(Kramer和Fritz，1987年，《酶学方法》，第154卷，第350-367页)；Kramer，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：7207(Kramer等人，1988年，《核酸研究》，第16卷，第7207页)以及Fritz，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：6987-6999(Fritz等人，1988年，《核酸研究》，第16卷，第6987-6999页))。
另外的合适方法包括点错配修复(Kramer，et al.，(1984)Cell 38：879-887(Kramer等人，1984年，《细胞》，第38卷，第879-887页))、使用修复缺失型宿主菌株进行诱变(Carter，et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：4431-4443(Carter等人，1985年，《核酸研究》，第13卷，第4431-4443页)以及Carter，(1987)Methods in Enzymol 154：382-403(Carter，1987年，《酶学方法》，第154卷，第382-403页))、缺失诱变(Eghtedarzadeh andHenikoff，(1986)Nucl Acids Res 14：5115(Eghtedarzadeh和Henikoff，1986年，《核酸研究》，第14卷，第5115页))、限制-选择和限制-纯化(Wells，et al.，(1986)Phil Trans RSoc Lend A 317：415-423(Wells等人，1986年，《伦敦皇家学会哲学汇刊A辑》，第317卷，第415-423页))、使用全基因合成进行诱变(Nambiar，et al.，(1984)Science 223：1299-1301(Nambiar等人，1984年，《科学》，第223卷，第1299-1301页)；Sakamar and Khorana，(1988)Nucl Acids Res 14：6361-6372(Sakamar和Khorana，1988年，《核酸研究》，第14卷，第6361-6372页)；Wells，et al.，(1985)Gene 34：315-323(Wells等人，1985年，《基因》，第34卷，第315-323页)以及et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：3305-3316(等人，1985年，《核酸研究》，第13卷，第3305-3316页))、双链断裂修复(Mandecki，(1986)PNAS USA，83：7177-7181(Mandecki，1986年，《美国国家科学院院刊》，第83卷，第7177-7181页)以及Arnold，(1993)Curr Opin tiotech 4：450-455(Arnold，1993年，《生物技术新见》，第4卷，第450-455页))。可从Methods Enzymol Volume 154(《酶学方法》，第154卷)中找到与上述多种方法有关的额外细节，该文献还描述了解决各种诱变方法中的难题的多种有用对照。
还可从下列美国专利、PCT公布及申请和EPO公布中找到与各种多样性产生方法有关的额外细节：美国专利No.5,723,323、美国专利No.5,763，192、美国专利No.5,814,476、美国专利No.5,817,483、美国专利No.5,824,514、美国专利No.5,976,862、美国专利No.5,605,793、美国专利No.5,811,238、美国专利No.5,830,721、美国专利No.5,834,252、美国专利No.5,837,458、WO 1995/22625、WO 1996/33207、WO 1997/20078、WO 1997/35966、WO1999/41402、WO 1999/41383、WO 1999/41369、WO 1999/41368、EP 752008、EP 0932670、WO1999/23107、WO 1999/21979、WO 1998/31837、WO 1998/27230、WO 1998/27230、WO 2000/00632、WO 2000/09679、WO 1998/42832、WO 1999/29902、WO 1998/41653、WO 1998/41622、WO 1998/42727、WO 2000/18906、WO 2000/04190、WO 2000/42561、WO 2000/42559、WO2000/42560、WO 2001/23401和PCT/US0I/06775。
还可使用所述实施例的核苷酸序列，从其他生物体，具体地讲其他细菌，具体地讲假单胞菌属物种，更具体地讲恶臭假单胞菌、黄褐假单胞菌或绿针假单胞菌菌株中分离相应的序列。这样，就可使用像PCR、杂交等之类的方法，基于这类序列与本文给出序列的序列同源性来鉴定这类序列。本发明的实施例涵盖了基于序列与本文示出的完整序列或其片段的序列同一性而选择的序列。这类序列包括为本发明所公开的序列的直系同源物的序列。术语“直系同源物”指衍生自共同祖先基因并且由于物种形成而存在于不同物种中的基因。如果存在于不同物种中的基因的核苷酸序列和/或其编码的蛋白质序列如本文别处定义的那样具有实质性的同一性，那么，认为这些基因是直系同源物。直系同源物的功能在各种物种中常常是高度保守的。
在PCR方法中，可设计寡核苷酸引物用于PCR反应，以便由提取自任何所关注生物体的cDNA或基因组DNA扩增相应的DNA序列。设计PCR引物和PCR克隆的方法是本领域公知的，Sambrook，et al.，(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2d ed.，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Plainview，New York)(Sambrook等人，1989年，《分子克隆：实验室手册》，第二版，美国纽约普莱恩维尤冷泉港实验室出版社)(下文称“Sambrook”)公开了这些方法。另参见Innis，et al.，eds.(1990)PCR Protocols：AGuideto Methods and Applicattons(Academic Press，New York)(Innis等人编辑，1990年，《PCR方案：方法和应用指南》，纽约学术出版社)；Innis and Gelfand，eds.(1995)PCRStrategies(Academic Press，New York)(Innis和Gelfand编辑，1995年，《PCR策略》，纽约学术出版社)；以及Innis and Gelfand，eds.(1999)PCR Methods Manual(AcademicPress，New York)(Innis和Gelfand编辑，1999年，《PCR方法手册》，纽约学术出版社)。已知的PCR方法包括但不限于利用成对引物、巢式引物、单一特异性引物、简并引物、基因特异性引物、载体特异性引物、部分错配引物等的方法。
为了从细菌保藏物中鉴定潜在的PIP-47多肽，可使用针对PIP-47多肽所生成的抗体，利用蛋白质印迹和/或ELISA方法筛选细菌细胞裂解物。该类型的测定法可以高通量方式进行。可利用各种技术，例如基于抗体的蛋白质纯化和识别，进一步分析阳性样品。生成抗体的方法是本领域熟知的，下文将论及这些方法。
或者，可使用基于质谱的蛋白质鉴定方法，运用文献(Scott Patterson，(1998)，10.22，1-24，Current Protocol in Molecular Biology，John Wiley&Son Inc.(ScottPatterson，1998年10月22日，第1-24页，《分子生物学实验手册》，约翰π威立父子出版公司出版))中的方案鉴定PIP-47多肽的同源物。具体来说，使用基于LC-MS/MS的蛋白质鉴定方法，将给定细胞裂解物或富含所需分子量的样品(从PIP-47的相关分子量条带的SDS-PAGE凝胶切离)的MS数据与PIP-47(例如，SEQ ID NO：2)及其同源物的序列信息关联起来。肽序列中的任何匹配均指示该样品中可能含有同源蛋白质。可使用另外的技术(蛋白质纯化和分子生物学技术)分离蛋白质并鉴定同源物的序列。
在杂交方法中，可使用部分或整个杀虫核酸序列来筛选cDNA或基因组文库。构建此类cDNA和基因组文库的方法是本领域公知的，Sambrook和Russell 2001年发表的文献(出处同上)公开了这些方法。所谓“杂交探针”，可为基因组DNA片段、cDNA片段、RNA片段或其他寡核苷酸，并可由可检测的基团(比如32P)或任何其他可检测的标记物(比如其他放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子)标记。可通过标记基于本文所公开的编码已知PIP-47多肽的核酸序列的合成寡核苷酸，来制作用于杂交的探针。另外还可使用简并引物，这些简并引物以核酸序列或所编码的氨基酸序列中的保守核苷酸或氨基酸残基为基础设计。此探针通常包含下述核酸序列区域：该区域在严格条件下杂交至编码本发明所述PIP-47多肽或其片段或变体的核酸序列中的至少大约12、至少约25、至少约50、75、100、125、150、175或200个连续核苷酸上。制作用于杂交的探针的方法是本领域公知的，Sambrook和Russell2001年发表的文献(出处同上，以引用方式并入本文)公开了这些方法。
例如，可将编码本文公开的PIP-47多肽的整个核酸序列或该核酸序列的一个或多个部分用作探针，这种探针能够特异性杂交于编码PIP-47多肽样序列的相应核酸序列和信使RNA。这种探针需包含独特的、优选长度为至少约10个或至少约20个核苷酸的序列，方可在多种条件下实现特异性杂交。这种探针可用于通过PCR从选定的生物体扩增相应的杀虫序列。可使用这项技术从所需生物体分离另外的编码序列，或可将这项技术用作诊断测定法，来确定生物体中是否存在编码序列。杂交技术包括杂交筛选平板DNA文库(噬菌斑或菌落；参见例如Sambrook，et al.，(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2ded.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(Sambrook等人，1989年，《分子克隆：实验室手册》(第2版，冷泉港实验室出版社，纽约冷泉港))。
可以在严格条件下杂交这类序列。本文使用的“严格条件”或“严格杂交条件”，是指这样的条件：在这种条件下，可以检测到探针与其靶标序列杂交的程度相比探针与其他序列杂交的程度高(例如，至少为背景信号的两倍)。严格条件是序列依赖性的，在不同的情况中将会不同。通过控制杂交和/或洗涤条件的严格性，就可鉴定与探针100％互补的靶标序列(同源探测)。或者，可以调节严格条件，以允许序列中存在一些错配，从而检测到更低的相似性(异源探测)。一般来讲，探针长度小于约1000个核苷酸，优选长度小于500个核苷酸。
通常，严格条件将为下述条件：盐浓度小于约1.5M钠离子，通常大约为0.01至1.0M钠离子浓度(或其他盐)；pH为7.0至8.3；用于短探针(例如，含10至50个核苷酸)的温度为至少约30℃，用于长探针(例如，含50个以上核苷酸)的温度为至少约60℃。还可添加去稳定剂(如甲酰胺)来实现严格条件。示例性的低严格条件包括用30至35％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲溶液在37℃下杂交，然后在1×至2×SSC(20×SSC＝3.0MNaCl/0.3M柠檬酸三钠)中于50至55℃下洗涤。示例性的中等严格条件包括在40至45％甲酰胺、1.0M NaCl、1％SDS中，于37℃下杂交，然后在0.5×至1×SSC中于55至60℃下洗涤。示例性的高严格条件包括在50％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS中，于37℃下杂交，然后在0.1×SSC中于60至65℃下洗涤。任选地，洗涤缓冲液可包含约0.1％至约1％SDS。杂交的持续时间通常小于约24小时，往往为约4至约12小时。
特异性通常随杂交后的洗涤条件变化而变化，关键因素为最终洗涤溶液的离子强度和温度。就DNA-DNA杂交体来说，可根据Meinkoth and Wahl，(1984)Anal.Biochem.138：267-284(Meinkoth和Wahl，1984年，《分析生物化学》，第138卷，第267-284页)的方程式估算热解链温度(Tm)：Tm＝81.5℃+16.6(log M)+0.41(％GC)-0.61(％form)-500/L；其中M为单价阳离子的摩尔浓度，％GC为DNA中的鸟嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸的百分数，％form为杂交溶液中的甲酰胺的百分数，L为杂交体的长度(单位为碱基对)。Tm为50％的互补靶标序列与完美匹配的探针杂交时的温度(在确定的离子强度和pH下)。每发生1％错配，Tm降低1℃左右；因而，可调节Tm、杂交和/或洗涤条件，来与所需同一性的序列杂交。例如，如果寻求同一性≥90％的序列，则Tm可能降低10℃。通常，选择的严格条件比特定序列及其互补序列在确定的离子强度和pH下的Tm低约5℃。然而，极严格条件可利用比Tm低1、2、3或4℃的杂交和/或洗涤温度；中等严格条件可利用比Tm低6、7、8、9或10℃的杂交和/或洗涤温度；低严格条件可利用比Tm低11、12、13、14、15或20℃的杂交和/或洗涤温度。普通技术人员将会理解，前述公式、对杂交和洗涤条件的综合描述和需要的Tm这些内容，本身就描述了杂交和/或洗涤溶液严格性的多种变化。如果需要的错配程度导致Tm低于45℃(水溶液)或32℃(甲酰胺溶液)，则优选增大SSC浓度，以便能够使用较高的温度。核酸杂交技术的详尽指南可参见Tijssen，(1993)Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes，Part I，Chapter 2(Elsevier，N.Y.)(Tijssen，1993年，《生物化学和分子生物学实验技术-与核酸探针杂交》，第I部分，第2章，纽约爱思唯尔出版社)；Ausubel，et al.，eds.(1995)Current Protocols in MolecularBiology，Chapter 2(Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York)(Ausubel等人编辑，1995年，《现代分子生物学实验手册》，第2章，纽约格林出版社在线期刊中心)。参见Sambrook，et al.，(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2d ed.，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)(Sambrook等人，1989年，《分子克隆：实验室手册》，第2版，冷泉港实验室出版社，纽约冷泉港)。
蛋白质及其变体和片段
本发明还涵盖了PIP-47多肽。“假单胞菌杀昆虫蛋白-47”、“PIP-47多肽”或“PIP-47蛋白”在本文可互换使用，是指下述多肽：这种多肽有杀虫活性，包括但不限于杀真菌活性、杀灭鳞翅目和/或鞘翅目中的一种或多种害虫的活性；且与SEQ ID NO：2的蛋白质充分同源。设想了多种PIP-47多肽。PIP-47多肽或相关蛋白质的一种来源如下：一种恶臭假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：2的PIP-47Aa多肽的SEQ ID NO：1的PIP-47Aa多核苷酸；一种恶臭假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：4的PIP-47Bb多肽的SEQ ID NO：3的PIP-47Ba多核苷酸；黄褐假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：6的PIP-47Bb多肽的SEQ ID NO：5的PIP-47Bb多核苷酸；或绿针假单胞菌菌株，其包含编码SEQ ID NO：8的PIP-47Fa多肽的SEQID NO：7的PIP-47Fa多核苷酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQID NO：8的氨基酸序列充分同源。本文使用的“充分同源”，是指使用本文所述的比对程序之一并采用标准参数，将氨基酸序列与参考序列比较时，两种序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的序列同源性。本领域技术人员将会认识到，可通过考虑氨基酸相似性等而适当调整这些值以确定蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性是相对PIP-47多肽的全长序列而言。在一些实施例中，PIP-47多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的序列同一性。在一些实施例中，序列同一性是相对PIP-47多肽的全长序列而言。在一些实施例中，使用程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(InvitrogenCorporation，Carlsbad，Calif.))中模块内的ClustalW算法，参数全部默认，来计算序列同一性。在一些实施例中，使用程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen Corporation，Carlsbad，Calif.))中模块内的ClustalW算法，参数全部默认，跨多肽全长计算序列同一性。
如本文所用，术语“蛋白质”、“肽分子”或“多肽”包括任何含有五个或更多个氨基酸的分子。可对蛋白质、肽或多肽分子进行修饰，包括翻译后修饰，例如但不限于形成二硫键、糖基化、磷酸化或寡聚化，这是本领域众所周知的。因此，本文使用的术语“蛋白质”、“肽分子”或“多肽”，包括经由任何生物或非生物过程修饰的任一种蛋白质。术语“氨基酸”是指所有天然存在的L-氨基酸。
本文使用的“重组蛋白”，是指不再处于其天然环境中，例如处于体外或者处于重组细菌或植物宿主细胞中的蛋白质。基本上不含细胞物质的PIP-47多肽包括其所含非杀虫蛋白(在本文中也称“污染性蛋白”)小于约30％、20％、10％或5％(以干重计)的蛋白质制备物。
“片段”或“生物活性部分”包括其所含氨基酸序列与PIP-47多肽充分相同并表现出杀昆虫活性的多肽片段。PIP-47多肽的“片段”或“生物活性部分”，包括含有下述氨基酸序列的片段：这些氨基酸序列分别与以SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921示出的氨基酸序列充分相同。PIP-47多肽的生物活性部分可以是长度为(例如)10、25、50、75、100、125、132个或更多个氨基酸的多肽。此类生物活性部分可通过重组技术制备并且可评价其杀昆虫活性。如此处所用，片段包含PIP-47多肽中的至少8个连续氨基酸。在一些实施例中，PIP-47多肽片段包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921中的至少8个连续氨基酸。在一些实施例中，片段包含SEQ ID NO：2中的至少8个连续氨基酸。在一些实施例中，片段包含SEQ ID NO：18中的至少8个连续氨基酸。在一些实施例中，从相对于SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8或这些序列的变体的N端和/或C端，截去至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34个或更多个氨基酸，得到PIP-47多肽片段；其中这些序列的变体包括但不限于：SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：226、SEQ IDNO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ IDNO：238、SEQ ID NO：239、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ IDNO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：259、SEQ IDNO：260、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：262、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：264、SEQ ID NO：265、SEQ ID NO：266、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：268、SEQ ID NO：269、SEQ ID NO：270、SEQ IDNO：271、SEQ ID NO：272、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：274、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：276、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：278、SEQ ID NO：279、SEQ ID NO：280、SEQ ID NO：281、SEQ IDNO：282、SEQ ID NO：283、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：285、SEQ ID NO：286、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：288、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：290、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：292、SEQ IDNO：293、SEQ ID NO：294、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：296、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：298、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：300、SEQ ID NO：301、SEQ ID NO：302、SEQ ID NO：303、SEQ IDNO：304、SEQ ID NO：305、SEQ ID NO：306、SEQ ID NO：307、SEQ ID NO：308、SEQ ID NO：309、SEQ ID NO：310、SEQ ID NO：311、SEQ ID NO：312、SEQ ID NO：313、SEQ ID NO：314、SEQ IDNO：315、SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318、SEQ ID NO：319、SEQ ID NO：320、SEQ ID NO：321、SEQ ID NO：322、SEQ ID NO：323、SEQ ID NO：324、SEQ ID NO：325、SEQ IDNO：326、SEQ ID NO：327、SEQ ID NO：328、SEQ ID NO：329、SEQ ID NO：330、SEQ ID NO：331、SEQ ID NO：332、SEQ ID NO：333、SEQ ID NO：334、SEQ ID NO：335、SEQ ID NO：336、SEQ IDNO：337、SEQ ID NO：338、SEQ ID NO：339、SEQ ID NO：340、SEQ ID NO：341、SEQ ID NO：342、SEQ ID NO：343、SEQ ID NO：344、SEQ ID NO：345、SEQ ID NO：346、SEQ ID NO：347、SEQ IDNO：348、SEQ ID NO：349、SEQ ID NO：350、SEQ ID NO：351、SEQ ID NO：352、SEQ ID NO：353、SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355、SEQ ID NO：356、SEQ ID NO：357、SEQ ID NO：358、SEQ IDNO：359、SEQ ID NO：360、SEQ ID NO：361、SEQ ID NO：362、SEQ ID NO：363、SEQ ID NO：364、SEQ ID NO：365、SEQ ID NO：366、SEQ ID NO：367、SEQ ID NO：368、SEQ ID NO：369、SEQ IDNO：370、SEQ ID NO：371、SEQ ID NO：372、SEQ ID NO：373、SEQ ID NO：374、SEQ ID NO：375、SEQ ID NO：376、SEQ ID NO：377、SEQ ID NO：378、SEQ ID NO：379、SEQ ID NO：380、SEQ IDNO：381、SEQ ID NO：382、SEQ ID NO：383、SEQ ID NO：384、SEQ ID NO：385、SEQ ID NO：386、SEQ ID NO：387、SEQ ID NO：388、SEQ ID NO：389、SEQ ID NO：390、SEQ ID NO：391、SEQ IDNO：392、SEQ ID NO：393、SEQ ID NO：394、SEQ ID NO：395、SEQ ID NO：396、SEQ ID NO：397、SEQ ID NO：398、SEQ ID NO：399、SEQ ID NO：400、SEQ ID NO：401、SEQ ID NO：402、SEQ IDNO：403、SEQ ID NO：404、SEQ ID NO：405、SEQ ID NO：406、SEQ ID NO：407、SEQ ID NO：408、SEQ ID NO：409、SEQ ID NO：410、SEQ ID NO：411、SEQ ID NO：412、SEQ ID NO：413、SEQ IDNO：414、SEQ ID NO：415、SEQ ID NO：416、SEQ ID NO：417、SEQ ID NO：418、SEQ ID NO：419、SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629、SEQ ID NO：630、SEQ ID NO：631、SEQ ID NO：632、SEQ IDNO：633、SEQ ID NO：634、SEQ ID NO：635、SEQ ID NO：636、SEQ ID NO：637、SEQ ID NO：638、SEQ ID NO：639、SEQ ID NO：640、SEQ ID NO：641、SEQ ID NO：642、SEQ ID NO：643、SEQ IDNO：644、SEQ ID NO：645、SEQ ID NO：646、SEQ ID NO：647、SEQ ID NO：648、SEQ ID NO：649、SEQ ID NO：650、SEQ ID NO：651、SEQ ID NO：652、SEQ ID NO：653、SEQ ID NO：654、SEQ IDNO：655、SEQ ID NO：656、SEQ ID NO：657、SEQ ID NO：658、SEQ ID NO：659、SEQ ID NO：660、SEQ ID NO：661、SEQ ID NO：662、SEQ ID NO：663、SEQ ID NO：664、SEQ ID NO：665、SEQ IDNO：666、SEQ ID NO：667、SEQ ID NO：668、SEQ ID NO：669、SEQ ID NO：670、SEQ ID NO：671、SEQ ID NO：672、SEQ ID NO：673、SEQ ID NO：674、SEQ ID NO：675、SEQ ID NO：676、SEQ IDNO：677、SEQ ID NO：678、SEQ ID NO：679、SEQ ID NO：680、SEQ ID NO：681、SEQ ID NO：682、SEQ ID NO：683、SEQ ID NO：684、SEQ ID NO：685、SEQ ID NO：686、SEQ ID NO：687、SEQ IDNO：688、SEQ ID NO：689、SEQ ID NO：690、SEQ ID NO：691、SEQ ID NO：692、SEQ ID NO：693、SEQ ID NO：694、SEQ ID NO：695、SEQ ID NO：696、SEQ ID NO：697、SEQ ID NO：698、SEQ IDNO：699、SEQ ID NO：700、SEQ ID NO：701、SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：703、SEQ ID NO：704、SEQ ID NO：705、SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：707、SEQ ID NO：708、SEQ ID NO：709、SEQ IDNO：710、SEQ ID NO：711、SEQ ID NO：712、SEQ ID NO：713、SEQ ID NO：714、SEQ ID NO：715、SEQ ID NO：716、SEQ ID NO：717、SEQ ID NO：718、SEQ ID NO：719、SEQ ID NO：720、SEQ IDNO：721、SEQ ID NO：722、SEQ ID NO：723、SEQ ID NO：724、SEQ ID NO：725、SEQ ID NO：726、SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797、SEQ ID NO：798、SEQ ID NO：799、SEQ ID NO：800、SEQ IDNO：801、SEQ ID NO：802、SEQ ID NO：803、SEQ ID NO：804、SEQ ID NO：805、SEQ ID NO：806、SEQ ID NO：807、SEQ ID NO：808、SEQ ID NO：809、SEQ ID NO：810、SEQ ID NO：811、SEQ IDNO：812、SEQ ID NO：813、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：815、SEQ ID NO：816、SEQ ID NO：817、SEQ ID NO：818、SEQ ID NO：819、SEQ ID NO：820、SEQ ID NO：821、SEQ IDNO：822、SEQ ID NO：823、SEQ ID NO：824、SEQ ID NO：825、SEQ ID NO：826、SEQ ID NO：827、SEQ ID NO：828、SEQ ID NO：829、SEQ ID NO：830、SEQ ID NO：831、SEQ ID NO：832、SEQ IDNO：833、SEQ ID NO：834、SEQ ID NO：835、SEQ ID NO：836、SEQ ID NO：837、SEQ ID NO：838、SEQ ID NO：839、SEQ ID NO：840、SEQ ID NO：841、SEQ ID NO：842、SEQ ID NO：843、SEQ IDNO：844、SEQ ID NO：845、SEQ ID NO：846、SEQ ID NO：847、SEQ ID NO：848、SEQ ID NO：849、SEQ ID NO：850、SEQ ID NO：851、SEQ ID NO：852、SEQ ID NO：853、SEQ ID NO：854、SEQ IDNO：855、SEQ ID NO：856、SEQ ID NO：857、SEQ ID NO：858、SEQ ID NO：859、SEQ ID NO：860、SEQ ID NO：861、SEQ ID NO：862、SEQ ID NO：863、SEQ ID NO：864、SEQ ID NO：865、SEQ IDNO：888、SEQ ID NO：889、SEQ ID NO：890、SEQ ID NO：891、SEQ ID NO：892、SEQ ID NO：893、SEQ ID NO：894、SEQ ID NO：895、SEQ ID NO：896、SEQ ID NO：897、SEQ ID NO：898、SEQ IDNO：899、SEQ ID NO：900、SEQ ID NO：901、SEQ ID NO：902、SEQ ID NO：903、SEQ ID NO：904、SEQ ID NO：905、SEQ ID NO：906、SEQ ID NO：907、SEQ ID NO：908、SEQ ID NO：909、SEQ IDNO：916、SEQ ID NO：917、SEQ ID NO：918、SEQ ID NO：919、SEQ ID NO：920和SEQ ID NO：921；截去氨基酸的方式例如为：通过蛋白水解；通过插入起始密码子；通过缺失编码要缺失的氨基酸的密码子，伴随插入起始密码子；并且/或者插入终止密码子。
在一些实施例中，从相对于SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8或这些序列的变体的N端，移除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸，得到本文所涵盖的PIP-47多肽片段；其中这些序列的变体包括但不限于：SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921中的任一序列；移除氨基酸的方式例如为：通过蛋白水解；或通过插入起始密码子；通过缺失编码要缺失的氨基酸的密码子，伴随插入起始密码子。
在一些实施例中，从相对于SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8或这些序列的变体的N端，移除1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸，得到本文所涵盖的PIP-47多肽片段；其中这些序列的变体包括但不限于：SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ IDNO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921中的任一序列。在一些实施例中，截去了SEQ ID NO：2、SEQID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8或这些序列的变体中的头4个氨基酸；其中这些序列的变体包括但不限于：SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQ IDNO：921中的任一序列。
本文使用的“变体”，是指其具有的氨基酸序列与亲本氨基酸序列的同一性为至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的蛋白质或多肽。在一些实施例中，PIP-47多肽变体不具有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列。
在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQID NO：8的氨基酸序列的全长上，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列的全长上，具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：2的氨基酸序列的全长上，具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：4的氨基酸序列的全长上，具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：6的氨基酸序列的全长上，具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽在SEQ ID NO：8的氨基酸序列的全长上，具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少50％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。在一些实施例中，PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有杀昆虫活性。
在一些实施例中，使用程序包(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen Corporation，Carlsbad，Calif.))中模块内的ClustalW算法，参数全部默认，跨多肽全长计算序列同一性。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第77-87位表示的氨基酸基序1。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第107-120位表示的氨基酸基序2。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第234-247位表示的氨基酸基序3。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含由下列序列的第77-87位表示的氨基酸基序1、由下列序列的第107-120位表示的氨基酸基序2以及由下列序列的第234-247位表示的氨基酸基序3：SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：481的氨基酸序列，其中，第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、TVr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：481的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：481中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：481的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：481中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：482的氨基酸序列，其中，第2位处的Xaa是His或Asn；第4位处的Xaa是Pro或缺失；第5位处的Xaa是Gly或缺失；第6位处的Xaa是Ala或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu或Val；第13位处的Xaa是Ser或Val；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Gly或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Gly或缺失；第22位处的Xaa是Lys或Thr；第24位处的Xaa是Asn、Lys或Arg；第25位处的Xaa是Ala或Val；第26位处的Xaa是Lys或Asn；第29位处的Xaa是Ala、Thr或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Ala或Val；第31位处的Xaa是Arg或His；第37位处的Xaa是Gln或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第41位处的Xaa是Arg或His；第42位处的Xaa是Gln或His；第43位处的Xaa是Leu或Gln；第46位处的Xaa是Ala、Ser或Pro；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第49位处的Xaa是Gln、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser或Ala；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第66位处的Xaa是Lys、Ala或Ser；第68位处的Xaa是Thr或Ala；第71位处的Xaa是Gly或Asp；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第75位处的Xaa是Lys或Asn；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Lys、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第97位处的Xaa是Ala或Ser；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、yal或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第121位处的Xaa是Ala或Lys；第136位处的Xaa是Glu或Asn；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第161位处的Xaa是Val或Ile；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第172位处的Xaa是Lys或Ala；第173位处的Xaa是Asn或Ala；第174位处的Xaa是Gln或Lys；第181位处的Xaa是Gln或Lys；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第212位处的Xaa是Asp、Ile或Asn；第213位处的Xaa是Ser、Ala或Gly；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第230位处的Xaa是Ser或Thr；第232位处的Xaa是His或Lys；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是GlV、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或TVr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile或Val；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys或Arg；第262位处的Xaa是Val或Thr；第264位处的Xaa是Ser或Ala；第272位处的Xaa是Gln或Glu；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第283位处的Xaa是Arg或Lys；第284位处的Xaa是Glu或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：482的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：482中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：482的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：482中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：483的氨基酸序列，其中，第2位处的Xaa是His、Asn、Arg、Lys或Gln；第4位处的Xaa是Pro或缺失；第5位处的Xaa是Gly或缺失；第6位处的Xaa是Ala或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Leu、Val或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Asp、Ala、Ile或Leu；第13位处的Xaa是Ser、Val、Thr、Ile、Leu或Ala；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Gly、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Gly、Ser或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Thr、Arg或Ser；第24位处的Xaa是Asn、Lys、Arg或Gln；第25位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第26位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Ile、Ser、Leu、Val或Met；第30位处的Xaa是Leu、Ala、Val、Ile；第31位处的Xaa是Arg、His或Lys；第37位处的Xaa是Gln、His、Asn、Arg或Lys；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第41位处的Xaa是Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、His、Asn；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ile、Val或Asn；第46位处的Xaa是Ala、Ser、Pro或Thr；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第49位处的Xaa是Gln、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Ala、Thr；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第66位处的Xaa是Lys、Ala、Ser、Arg或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Ala、Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第75位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Lys、Asn、Arg或Gln；第85位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第117位处的Xaa是Lys或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；第121位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第136位处的Xaa是Glu、Asn、Gln或Asp；第142位处的Xaa是Leu、Gly、yal、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；第161位处的Xaa是Val、Ile或Met；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；第172位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第173位处的Xaa是Asn、Ala或Gln；第174位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第181位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第212位处的Xaa是Asp、Ile、Asn、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Ala、Gly或Thr；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第230位处的Xaa是Ser或Thr；第232位处的Xaa是His、Lys或Arg；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Gln或Asp；第260位处的Xaa是Lys或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；第272位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第283位处的Xaa是Arg或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQ ID NO：483的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：483的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：483中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：483的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：483中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：484的氨基酸序列，其中，第2位处的Xaa是His或Ser；第3位处的Xaa是Ala或Thr；第4位处的Xaa是Pro或Gln；第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；第11位处的Xaa是Lys或Glu；第12位处的Xaa是Glu或Lys；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；第14位处的Xaa是Ala或Lys；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是A1a或Trp；第17位处的Xaa是Trp或Leu；第18位处的Xaa是Leu或Asn；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；第27位处的Xaa是Ser或Phe；第28位处的Xaa是Thr或Ala；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile或Phe；第35位处的Xaa是Phe或Tyr；第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；第47位处的Xaa是Thr或Ser；第48位处的Xaa是Gly或Leu；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala或Ile；第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第65位处的Xaa是Ala或Thr；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；第67位处的Xaa是Gly或Ser；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；第76位处的Xaa是Asp或Ala；第78位处的Xaa是Asp或Asn；第79位处的Xaa是Ala、Asn或Lys；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val或Ala；第84位处的Xaa是Gly或Ser；第85位处的Xaa是Ser、Thr或Lys；第86位处的Xaa是Ala或Val；第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；第98位处的Xaa是Ile或Val；第99位处的Xaa是Asp或Asn；第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；第103位处的Xaa是Arg或Thr；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr或Trp；第110位处的Xaa是Leu或Asn；第112位处的Xaa是Gln或Pro；第115位处的Xaa是Asp、Gly或Ala；第116位处的Xaa是Gln、Ala或Arg；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg或Asn；第119位处的Xaa是Lys或His；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；第124位处的Xaa是Arg或Tyr；第130位处的Xaa是Phe或Leu；第132位处的Xaa是Gln或Lys；第133位处的Xaa是Gln或Glu；第135位处的Xaa是Ala或Ser；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；第137位处的Xaa是Ile或Asn；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu或Pro；第143位处的Xaa是Leu或Glu；第144位处的Xaa是Ala或Ser；第146位处的Xaa是Gln或Ser；第147位处的Xaa是Val或Ser；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln或Leu；第150位处的Xaa是Ile或Val；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；第153位处的Xaa是Lys或Gln；第156位处的Xaa是Asp或Gly；第158位处的Xaa是Asn或Asp；第161位处的Xaa是Val或Ile；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val或Ala；第168位处的Xaa是Phe或Ser；第169位处的Xaa是Ile或His；第170位处的Xaa是Gly或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；第176位处的Xaa是Val或Ile；第178位处的Xaa是Gln或Glu；第179位处的Xaa是Ile或Thr；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser或Lys；第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；第189位处的Xaa是Ala或Val；第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；第196位处的Xaa是Gln或Lys；第198位处的Xaa是Glu或Asn；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn或Phe；第203位处的Xaa是Phe或Leu；第206位处的Xaa是Asn或His；第207位处的Xaa是Ile或Thr；第208位处的Xaa是Leu或Met；第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys或Val；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；第235位处的Xaa是Thr或Ala；第236位处的Xaa是Ile或Leu；第237位处的Xaa是Thr或Asn；第243位处的Xaa是Thr、Ser或Leu；第245位处的Xaa是Ser或Thr；第246位处的Xaa是Gln或Pro；第247位处的Xaa是Ala或Ser；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；第250位处的Xaa是Gln或Thr；第253位处的Xaa是Val或Gly；第254位处的Xaa是Glu或Gly；第255位处的Xaa是Ser或Gly；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；第267位处的Xaa是Gln或Leu；第270位处的Xaa是Asp或Lys；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；第274位处的Xaa是Trp或Thr；第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；第279位处的Xaa是Thr或Ile；第280位处的Xaa是Thr或Pro；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQID NO：484的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：484的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：484中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：484的氨基酸序列，且与SEQ ID NO：2中相应位置的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：484中的Xaa表示的多个残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：485的氨基酸序列，第2位处的Xaa是His或Ser；第3位处的Xaa是Ala或Thr；第4位处的Xaa是Pro或Gln；第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；第11位处的Xaa是Lys或Glu；第12位处的Xaa是Glu或Lys；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；第14位处的Xaa是Ala或Lys；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala或Trp；第17位处的Xaa是Trp或Leu；第18位处的Xaa是Leu或Asn；第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；第27位处的Xaa是Ser或Phe；第28位处的Xaa是Thr或Ala；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile或Phe；第35位处的Xaa是Phe或Tyr；第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第48位处的Xaa是Gly或Leu；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala或Ile；第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；第62位处的Xaa是Phe或Tyr；第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第65位处的Xaa是Ala或Thr；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；第67位处的Xaa是Gly或Ser；第68位处的Xaa是Thr、Gly、A1a或Leu；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；第76位处的Xaa是Asp或Ala；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；第98位处的Xaa是Ile或Val；第99位处的Xaa是Asp或Asn；第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；第103位处的Xaa是Arg或Thr；第106位处的Xaa是Gly或Glu；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pr0、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；第124位处的Xaa是Arg或Tyr；第130位处的Xaa是Phe或Leu；第132位处的Xaa是Gln或Lys；第133位处的Xaa是Gln或Glu；第135位处的Xaa是Ala或Ser；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；第137位处的Xaa是Ile或Asn；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、yal、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；第143位处的Xaa是Leu或Glu；第144位处的Xaa是Ala或Ser；第146位处的Xaa是Gln或Ser；第147位处的Xaa是Val或Ser；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln或Leu；第150位处的Xaa是Ile或Val；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；第153位处的Xaa是Lys或Gln；第156位处的Xaa是Asp或Gly；第158位处的Xaa是Asn或Asp；第161位处的Xaa是Val或Ile；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val或Ala；第168位处的Xaa是Phe或Ser；第169位处的Xaa是Ile或His；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；第176位处的Xaa是Val或Ile；第178位处的Xaa是Gln或Glu；第179位处的Xaa是Ile或Thr；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser或Lys；第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；第189位处的Xaa是Ala或Val；第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；第196位处的Xaa是Gln或Lys；第198位处的Xaa是Glu或Asn；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn或Phe；第203位处的Xaa是Phe或Leu；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第206位处的Xaa是Asn或His；第207位处的Xaa是Ile或Thr；第208位处的Xaa是Leu或Met；第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys或Val；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；第250位处的Xaa是Gln或Thr；第253位处的Xaa是Val或Gly；第254位处的Xaa是Glu或Gly；第255位处的Xaa是Ser或Gly；第257位处的Xaa是Asn或Glu；第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；第267位处的Xaa是Gln或Leu；第270位处的Xaa是Asp或Lys；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；第274位处的Xaa是Trp或Thr；第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；第276位处的Xaa是Gly或Asp；第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；第280位处的Xaa是Thr或Pro；第281位处的Xaa是Gln或Pro；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：485的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中相对于SEQ ID NO：485而言，任选地从PIP-47的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：485的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：485中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：485的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：485中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：486的氨基酸序列，其中第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；第47位处的Xaa是Thr或Ser；第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Pro、Ile或Val；第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；第170位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；第235位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第236位处的Xaa是Ile、Leu或Val；第237位处的Xaa是Thr、Asn、Ser或Gln；第243位处的Xaa是Thr、Ser、Leu、Ile或Val；第245位处的Xaa是Ser或Thr；第246位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第247位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；第279位处的Xaa是Thr、Ile、Ser、Leu或Val；第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸并且/或者在相对于SEQ ID NO：486的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：486的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：486中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：486的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：486中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：487的氨基酸序列，第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；第9位处的Xaa是Ser或Thr；第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；第15位处的Xaa是His或Ala；第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；第32位处的Xaa是Gly或Pro；第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；第38位处的Xaa是Asp或Glu；第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；第45位处的Xaa是Thr或Ser；第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第51位处的Xaa是Met或Pro；第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；第53位处的Xaa是Ser或Thr；第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；第80位处的Xaa是Asn或Asp；第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；第96位处的Xaa是Thr或Ser；第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；第141位处的Xaa是Ser或Thr；第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；第148位处的Xaa是Thr或Ser；第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第164位处的Xaa是Phe或Cys；第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；第200位处的Xaa是Gln或Glu；第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；第222位处的Xaa是Ala或Pro；第226位处的Xaa是Thr或Ser；第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或yal；第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：487的第41位与第42位之间插入一个氨基酸；并且其中相对于SEQID NO：487而言，任选地从PIP-47多肽的N端缺失1至14个氨基酸。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：487的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：487中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：487的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO：2的相应位置处的天然氨基酸相比，在由SEQ ID NO：287中的Xaa表示的残基处具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个任意组合的氨基酸置换。
在一些实施例中，示例性PIP-47多肽由以SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7示出的、以SEQ ID NO：21-SEQ ID NO：220、SEQ ID NO：530-SEQ ID NO：628、SEQ ID NO：866-SEQ ID NO：877或SEQ ID NO：910-SEQ ID NO：915中的任何一者示出的多核苷酸序列编码。在一些实施例中，PIP-47多肽由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7的多核苷酸序列编码。
在一些实施例中，示例性PIP-47多肽以SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：224、SEQ IDNO：225、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：235、SEQ IDNO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：238、SEQ ID NO：239、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ IDNO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ IDNO：258、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：260、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：262、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：264、SEQ ID NO：265、SEQ ID NO：266、SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：268、SEQ IDNO：269、SEQ ID NO：270、SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：272、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：274、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：276、SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：278、SEQ ID NO：279、SEQ IDNO：280、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：282、SEQ ID NO：283、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：285、SEQ ID NO：286、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：288、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：290、SEQ IDNO：291、SEQ ID NO：292、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：294、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：296、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：298、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：300、SEQ ID NO：301、SEQ IDNO：302、SEQ ID NO：303、SEQ ID NO：304、SEQ ID NO：305、SEQ ID NO：306、SEQ ID NO：307、SEQ ID NO：308、SEQ ID NO：309、SEQ ID NO：310、SEQ ID NO：311、SEQ ID NO：312、SEQ IDNO：313、SEQ ID NO：314、SEQ ID NO：315、SEQ ID NO：316、SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318、SEQ ID NO：319、SEQ ID NO：320、SEQ ID NO：321、SEQ ID NO：322、SEQ ID NO：323、SEQ IDNO：324、SEQ ID NO：325、SEQ ID NO：326、SEQ ID NO：327、SEQ ID NO：328、SEQ ID NO：329、SEQ ID NO：330、SEQ ID NO：331、SEQ ID NO：332、SEQ ID NO：333、SEQ ID NO：334、SEQ IDNO：335、SEQ ID NO：336、SEQ ID NO：337、SEQ ID NO：338、SEQ ID NO：339、SEQ ID NO：340、SEQ ID NO：341、SEQ ID NO：342、SEQ ID NO：343、SEQ ID NO：344、SEQ ID NO：345、SEQ IDNO：346、SEQ ID NO：347、SEQ ID NO：348、SEQ ID NO：349、SEQ ID NO：350、SEQ ID NO：351、SEQ ID NO：352、SEQ ID NO：353、SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355、SEQ ID NO：356、SEQ IDNO：357、SEQ ID NO：358、SEQ ID NO：359、SEQ ID NO：360、SEQ ID NO：361、SEQ ID NO：362、SEQ ID NO：363、SEQ ID NO：364、SEQ ID NO：365、SEQ ID NO：366、SEQ ID NO：367、SEQ IDNO：368、SEQ ID NO：369、SEQ ID NO：370、SEQ ID NO：371、SEQ ID NO：372、SEQ ID NO：373、SEQ ID NO：374、SEQ ID NO：375、SEQ ID NO：376、SEQ ID NO：377、SEQ ID NO：378、SEQ IDNO：379、SEQ ID NO：380、SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：382、SEQ ID NO：383、SEQ ID NO：384、SEQ ID NO：385、SEQ ID NO：386、SEQ ID NO：387、SEQ ID NO：388、SEQ ID NO：389、SEQ IDNO：390、SEQ ID NO：391、SEQ ID NO：392、SEQ ID NO：393、SEQ ID NO：394、SEQ ID NO：395、SEQ ID NO：396、SEQ ID NO：397、SEQ ID NO：398、SEQ ID NO：399、SEQ ID NO：400、SEQ IDNO：401、SEQ ID NO：402、SEQ ID NO：403、SEQ ID NO：404、SEQ ID NO：405、SEQ ID NO：406、SEQ ID NO：407、SEQ ID NO：408、SEQ ID NO：409、SEQ ID NO：410、SEQ ID NO：411、SEQ IDNO：412、SEQ ID NO：413、SEQ ID NO：414、SEQ ID NO：415、SEQ ID NO：416、SEQ ID NO：417、SEQ ID NO：418、SEQ ID NO：419、SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629，SEQ ID NO：630、SEQ IDNO：631、SEQ ID NO：632、SEQ ID NO：633、SEQ ID NO：634、SEQ ID NO：635、SEQ ID NO：636、SEQ ID NO：637、SEQ ID NO：638、SEQ ID NO：639、SEQ ID NO：640、SEQ ID NO：641、SEQ IDNO：642、SEQ ID NO：643、SEQ ID NO：644、SEQ ID NO：645、SEQ ID NO：646、SEQ ID NO：647、SEQ ID NO：648、SEQ ID NO：649、SEQ ID NO：650、SEQ ID NO：651、SEQ ID NO：652、SEQ IDNO：653、SEQ ID NO：654、SEQ ID NO：655、SEQ ID NO：656、SEQ ID NO：657、SEQ ID NO：658、SEQ ID NO：659、SEQ ID NO：660、SEQ ID NO：661、SEQ ID NO：662、SEQ ID NO：663、SEQ IDNO：664、SEQ ID NO：665、SEQ ID NO：666、SEQ ID NO：667、SEQ ID NO：668、SEQ ID NO：669、SEQ ID NO：670、SEQ ID NO：671、SEQ ID NO：672、SEQ ID NO：673、SEQ ID NO：674、SEQ IDNO：675、SEQ ID NO：676、SEQ ID NO：677、SEQ ID NO：678、SEQ ID NO：679、SEQ ID NO：680、SEQ ID NO：681、SEQ ID NO：682、SEQ ID NO：683、SEQ ID NO：684、SEQ ID NO：685、SEQ IDNO：686、SEQ ID NO：687、SEQ ID NO：688、SEQ ID NO：689、SEQ ID NO：690、SEQ ID NO：691、SEQ ID NO：692、SEQ ID NO：693、SEQ ID NO：694、SEQ ID NO：695、SEQ ID NO：696、SEQ IDNO：697、SEQ ID NO：698、SEQ ID NO：699、SEQ ID NO：700、SEQ ID NO：701、SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：703、SEQ ID NO：704、SEQ ID NO：705、SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：707、SEQ IDNO：708、SEQ ID NO：709、SEQ ID NO：710、SEQ 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在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或SEQID NO：8的氨基酸序列。
在一些实施例中，示例性PIP-47多肽是表8、表10、表12、表13、表14、表15、表16、表17、表18和/或表19中所示的多肽以及其氨基酸置换及其缺失和/或插入和片段的任何组合。
在一些实施例中，PIP-47多肽的计算分子量在约26kD与约40kD之间、约28kD与约40kD之间、约30kD与约37kD之间、约32kD与约37kD之间、约34kD与约36kD之间以及为约35kD。
在一些实施例中，PIP-47多肽具有经改变的物理性质。如本文所用，术语“物理性质”是指适用于描述蛋白质的物理化学特性的任何参数。如本文所用，“所关注的物理性质”和“所关注的性质”可互换使用，是指正研究和/或经改变的蛋白质的物理性质。物理性质的例子包括但不限于蛋白质表面上的净表面电荷和电荷分布、蛋白质表面上的净疏水性和疏水残基分布、表面电荷密度、表面疏水性密度、表面可电离基团的总数、表面张力、蛋白质大小及其在溶液中的分布、熔融温度、热容和第二维里系数。物理性质的例子还包括但不限于溶解度、折叠性、稳定性和消化性。在一些实施例中，PIP-47多肽增强了蛋白水解片段在昆虫肠道中的消化性。由模拟胃液进行消化的模型是本领域技术人员已知的(Fuchs，R.L.andJ.D.Astwood.Food Technology 50：83-88，1996(Fuchs，R.L.和J.D.Astwood，《食品技术》，第50卷，第83-88页，1996年)；Astwood，J.D.，et al Nature Biotechnology 14：1269-1273，1996(Astwood，J.D.等人，《自然生物技术》，第14卷，第1269-1273页，1996年)；Fu TJet al J.Agric Food Chem.50：7154-7160，2002(Fu TJ等人，《农业与食品化学杂志》，第50卷，第7154-7160页，2002年))。
在一些实施例中，变体包括因诱变而在氨基酸序列上有差异的多肽。本发明所涵盖的变体蛋白质具有生物活性，即它们继续具有天然蛋白质的所需生物活性(即杀虫活性)。在某个实施例中，变体将具有天然蛋白的至少约10％、至少约30％、至少约50％、至少约70％、至少约80％或更多的杀昆虫活性。在一些实施例中，变体可具有相比于天然蛋白质改善的活性。
细菌基因常常在开放阅读框起点附近具有多个甲硫氨酸起始密码子。通常，在一个或多个这些起始密码子处的翻译起始将导致功能性蛋白质的产生。这些起始密码子可包括ATG密码子。然而，细菌比如芽孢杆菌属物种也将密码子GTG识别为起始密码子，并且在GTG密码子处起始翻译的蛋白质在第一位氨基酸处包含甲硫氨酸。在少数情况下，细菌系统中的翻译可在TTG密码子处起始，而在此情形下TTG编码甲硫氨酸。此外，通常不能先验确定这些密码子中的哪些是细菌中天然使用的。因此，应当理解，使用甲硫氨酸密码子的替代物之一也可导致杀虫蛋白的产生。这些杀虫蛋白涵盖于本发明中并且可应用于本发明的方法中。应当理解，当在植物中表达时，为实现正确翻译，有必要将替代起始密码子更改为ATG。
在另一个方面，PIP-47多肽可被表达为具有间插序列的前体蛋白，所述间插序列催化多步的翻译后蛋白剪接。蛋白剪接涉及从多肽切除间插序列，同时伴随旁侧序列的连接，从而产生新的多肽(Chong，et al.，(1996)J.Biol.Chem.，271：22159-22168(Chong等人，1996年，《生物化学杂志》，第271卷，第22159-22168页))。该间插序列或蛋白剪接元件称为内含肽，催化其通过在N端和C端剪接点处的如下三种配位反应而发生的自身切除：N端半胱氨酸或丝氨酸的酰基重排；两个末端之间的酯交换反应以形成支链酯或硫酯中间体；以及肽键断裂同时伴随内含肽C端天冬酰胺的环化，使内含肽得以释放(Evans，et al.，(2000)J.Biol.Chem.，275：9091-9094(Evans等人，2000年，《生物化学杂志》，第275卷，第9091-9094页))。蛋白剪接机制的阐明产生了多种基于内含肽的应用(Comb等人，美国专利No.5,496,714；Comb等人，美国专利No.5,834,247；Camarero and Muir，(1999)J.Amer.Chem.Soc.121：5597-5598(Camarero和Muir，1999年，《美国化学会志》，第121卷，第5597-5598页)；Chong，et al.，(1997)Gene 192：271-281(Chong等人，1997年，《基因》，第192卷，第271-281页)；Chong，et al.，(1998)Nucleic Acids Res.26：5109-5115(Chong等人，1998年，《核酸研究》，第26卷，第5109-5115页)；Chong，et al.，(1998)J.Biol.Chem.273：10567-10577(Chong等人，1998年，《生物化学杂志》，第273卷，第10567-10577页)；Cotton，et al.，(1999)J.Am.Chem.Soc.121：1100-1101(Cotton等人，1999年，《美国化学会志》，第121卷，第1100-1101页)；Evans，et al.，(1999)J.Biol.Chem.274：18359-18363(Evans等人，1999年，《生物化学杂志》，第274卷，第18359-18363页)；Evans，etal.，(1999)J.Biol.Chem.274：3923-3926(Evans等人，1999年，《生物化学杂志》，第274卷，第3923-3926页)；Evans，et al.，(1998)Protein Sci.7：2256-2264(Evans等人，1998年，《蛋白质科学》，第7卷，第2256-2264页)；Evans，et al.，(2000)J.Biol.Chem.275：9091-9094(Evans等人，2000年，《生物化学杂志》，第275卷，第9091-9094页)；Iwai andPluckthun，(1999)FEBS Lett.459：166-172(Iwai和Pluckthun，1999年，《欧洲生化学会联合会快报》，第459卷，第166-172页)；Mathys，et al.，(1999)Gene 231：1-13(Mathys等人，1999年，《基因》，第231卷，第1-13页)；Mills，et al.，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：3543-3548(Mills等人，1998年，《美国国家科学院院刊》，第95卷，第3543-3548页)；Muir，etal.，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：6705-6710(Muir等人，1998年，《美国国家科学院院刊》，第95卷，第6705-6710页)；Otomo，et al.，(1999)Biochemistry 38：16040-16044(Otomo等人，1999年，《生物化学》，第38卷，第16040-16044页)；Otomo，et al.，(1999)J.Biolmol.NMR 14：105-114(Otomo等人，1999年，《生物分子核磁共振杂志》，第14卷，第105-114页)；Scott，et al.，(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：13638-13643(Scott等人，1999年，《美国国家科学院院刊》，第96卷，第13638-13643页)；Severinov and Muir，(1998)J.Biol.Chem.273：16205-16209(Severinov和Muir，1998年，《生物化学杂志》，第273卷，第16205-16209页)；Shingledecker，et al.，(1998)Gene 207：187-195(Shingledecker等人，1998年，《基因》，第207卷，第187-195页)；Southworth，et al.，(1998)EMBO J.17：918-926(Southworth等人，1998年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第17卷，第918-926页)；Southworth，et al.，(1999)Biotechniques 27：110-120(Southworth等人，1999年，《生物技术》，第27卷，第110-120页)；Wood，et al.，(1999)Nat.Biotechnol.17：889-892(Wood等人，1999年，《自然生物技术》，第17卷，第889-892页)；Wu，et al.，(1998a)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：9226-9231(Wu等人，(1998a)，《美国国家科学院院刊》，第95卷，第9226-9231页)；Wu，et al.，(1998b)Biochim Biophys Acta 1387：422-432(Wu等人，(1998b)，《生物化学与生物物理学报》，第1387卷，第422-432页)；Xu，et al.，(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：388-393(Xu等人，1999年，《美国国家科学院院刊》，第96卷，第388-393页)；Yamazaki，et al.，(1998)J.Am.Chem.Soc.，120：5591-5592(Yamazaki等人，1998年，《美国化学会志》，第120卷，第5591-5592页))。有关内含肽在植物转基因中的应用，参见Yang，et al.，(Transgene Res 15：583-593(2006))(Yang等人，《转基因研究》，第15卷，第583-593页，2006年)和Evans，et al.，(Annu.Rev.Plant Biol.56：375-392(2005)(Evans等人，《植物生物学年评》，第56卷，第375-392页，2005年)。
在另一个方面，PIP-47多肽可由两个单独的基因编码，其中前体蛋白的内含肽来自这两个基因，称为断裂型内含肽，并且前体的这两个部分通过形成肽键而连接在一起。该肽键形成通过内含肽介导的反式剪接而实现。为此，包含这两个单独基因的第一和第二表达盒还编码能够介导蛋白质反式剪接的内含肽。通过反式剪接，由第一和第二片段编码的蛋白质和多肽可通过形成肽键而连接在一起。反式剪接内含肽可选自包括真核生物、古细菌和真细菌在内的不同生物体的核仁和细胞器基因组。可使用的内含肽在neb.com/neb/inteins.html(可使用“www”前缀在万维网上访问)上列出。编码内含肽的核苷酸序列可分成分别编码内含肽5′和3′部分的5′和3′部分。内含肽剪接中所不需要的序列部分(例如，归巢核酸内切酶域)可以缺失。内含肽编码序列断裂以使得5′和3′部分能够反式剪接。为了选择内含肽编码序列的合适断裂位点，可遵循Southworth，et al.，(1998)EMBO J.17：918-926(Southworth等人，1998年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第17卷，第918-926页)公布的考虑因素。在构建第一和第二表达盒时，将5′内含肽编码序列连接至编码PIP-47多肽的N端部分的第一片段的3′端，并且将3′内含肽编码序列连接至编码PIP-47多肽的C端部分的第二片段的5′端。
一般来讲，可使用任何断裂型内含肽(包括任何天然存在的或人工断裂的断裂型内含肽)来设计反式剪接伴侣。若干天然存在的断裂型内含肽是已知的，例如：集胞藻属物种(Synechocystis sp.)PCC6803的DnaE基因的断裂型内含肽(参见，Wu，et al.，(1998)Proc Natl Acad Sci USA.95(16)：9226-31(Wu等人，1998年，《美国国家科学院院刊》，第95卷，第16期，第9226-9231页)以及Evans，et al.，(2000)J Biol Chem.275(13)：9091-4(Evans等人，2000年，《生物化学杂志》，第275卷，第13期，第9091-9094页)以及来自点状念珠藻(Nostoc punctiforme)的DnaE基因的断裂型内含肽(参见Iwai，et al.，(2006)FEBSLett.580(7)：1853-8(Iwai等人，2006年，《欧洲生化学会联合会快报》，第580卷，第7期，第1853-1858页))。已在实验室中将非断裂型内含肽人工断裂而形成新的断裂型内含肽，例如：人工断裂的Ssp DnaB内含肽(参见Wu，et al.，(1998)Biochim Biophys Acta.1387：422-32(Wu等人，1998年，《生物化学与生物物理学报》，第1387卷，第422-432页))和断裂型Sce VMA内含肽(参见Brenzel，et al.，(2006)Biochemistry.45(6)：1571-8(Brenzel等人，2006年，《生物化学》，第45卷，第6期，第1571-1578页))以及人工断裂的真菌微型内含肽(参见Elleuche，et al.，(2007)Biochem Biophys Res Commun.355(3)：830-4(Elleuche等人，2007年，《生物化学与生物物理研究通讯》，第355卷，第3期，第830-834页))。还有可供使用的载有已知内含肽的内含肽数据库(参见例如可在如下网址获取的在线数据库：bioinformatics.weizmann.ac.il/～pietro/inteins/Inteinstable.html(添加“www”前缀后，可在万维网上访问))。
天然存在的非断裂型内含肽可具有核酸内切酶或其他酶活性，这些酶活性通常可在设计人工断裂的断裂型内含肽时被移除。此类微型内含肽或最小化的断裂型内含肽是本领域熟知的，并且长度通常少于200个氨基酸残基(参见，Wu，et al.，(1998)BiochimBiophys Acta.1387：422-32(Wu等人，1998年，《生物化学与生物物理学报》，第1387卷，第422-432页))。合适的断裂型内含肽可具有添加至其结构上的其他实现纯化的多肽元件，前提条件是此类元件不会抑制断裂型内含肽的剪接或者以允许其在剪接之前被移除的方式添加。已报道了使用包含如下结构域的蛋白质进行的蛋白剪接：细菌内含肽样(BIL)结构域(参见Amitai，et al.，(2003)Mol Microbiol.47：61-73(Amitai等人，2003年，《分子微生物学》，第47卷，第61-73页))和刺猬蛋白(Hog)自加工结构域(当后者与内含肽组合时，称为Hog/内含肽超家族或HINT家族(参见Dassa，et al.，(2004)J Biol Chem.279：32001-7(Dassa等人，2004年，《生物化学杂志》，第279卷，第32001-32007页))，并且诸如这些的结构域也可用来制备人工断裂的内含肽。具体地讲，可通过分子生物学方法修饰此类家族的非剪接成员以在此类相关物质中引入或恢复剪接活性。最近的研究证实，当使N端断裂型内含肽组分与自然界中并非作为其“伴侣”存在的C端断裂型内含肽组分反应时，可观察到剪接；例如，采用与“天然”剪接伴侣具有低至30％至50％同源性的伴侣时，观察到了剪接(参见Dassa，et al.，(2007)Biochemistry.46(1)：322-30(Dassa等人，2007年，《生物化学》，第46卷，第1期，第322-330页))。已表明，相异的断裂型内含肽伴侣的其他此类混合物彼此无反应(参见，Brenzel，et al.，(2006)Biochemistry.45(6)：1571-8(Brenzel等人，2006年，《生物化学》，第45卷，第6期，第1571-1578页))。然而，在相关领域技术人员能力范围内的是，使用常规方法且不必运用独创性技术就可确定具体的一对多肽是否能够彼此相连而提供功能性内含肽。
在另一个方面，PIP-47多肽是环状排列的变体。在某些实施例中，PIP-47多肽是如下序列的多肽的环状排列的变体：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8，或如下任何一者：SEQ ID NO：629，.SEQ ID NO：630、SEQ ID NO：631、SEQ ID NO：632、SEQID NO：633、SEQ ID NO：634、SEQ ID NO：635、SEQ ID NO：636、SEQ ID NO：637、SEQ ID NO：638、SEQ ID NO：639、SEQ ID NO：640、SEQ ID NO：641、SEQ ID NO：642、SEQ ID NO：643、SEQID NO：644、SEQ ID NO：645、SEQ ID NO：646、SEQ ID NO：647、SEQ ID NO：648、SEQ ID NO：649、SEQ ID NO：650、SEQ ID NO：651、SEQ ID NO：652、SEQ ID NO：653、SEQ ID NO：654、SEQID NO：655、SEQ ID NO：656、SEQ ID NO：657、SEQ ID NO：658、SEQ ID NO：659、SEQ ID NO：660、SEQ ID NO：661、SEQ ID NO：662、SEQ ID NO：663、SEQ ID NO：664、SEQ ID NO：665、SEQID NO：666、SEQ ID NO：667、SEQ ID NO：668、SEQ ID NO：669、SEQ ID NO：670、SEQ ID NO：671、SEQ ID NO：672、SEQ ID NO：673、SEQ ID NO：674、SEQ ID NO：675、SEQ ID NO：676、SEQID NO：677、SEQ ID NO：678、SEQ ID NO：679、SEQ ID NO：680、SEQ ID NO：681、SEQ ID NO：682、SEQ ID NO：683、SEQ ID NO：684、SEQ ID NO：685、SEQ ID NO：686、SEQ ID NO：687、SEQID NO：688、SEQ ID NO：689、SEQ ID NO：690、SEQ ID NO：691、SEQ ID NO：692、SEQ ID NO：693、SEQ ID NO：694、SEQ ID NO：695、SEQ ID NO：696、SEQ ID NO：697、SEQ ID NO：698、SEQID NO：699、SEQ ID NO：700、SEQ ID NO：701、SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：703、SEQ ID NO：704、SEQ ID NO：705、SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：707、SEQ ID NO：708、SEQ ID NO：709、SEQID NO：710、SEQ ID NO：711、SEQ ID NO：712、SEQ ID NO：713、SEQ ID NO：714、SEQ ID NO：715、SEQ ID NO：716、SEQ ID NO：717、SEQ ID NO：718、SEQ ID NO：719、SEQ ID NO：720、SEQID NO：721、SEQ ID NO：722、SEQ ID NO：723、SEQ ID NO：724、SEQ ID NO：725、SEQ ID NO：726、SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797、SEQ ID NO：798、SEQ ID NO：799、SEQ ID NO：800、SEQID NO：801、SEQ ID NO：802、SEQ ID NO：803、SEQ ID NO：804、SEQ ID NO：805、SEQ ID NO：806、SEQ ID NO：807、SEQ ID NO：808、SEQ ID NO：809、SEQ ID NO：810、SEQ ID NO：811、SEQID NO：812、SEQ ID NO：813、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：815、SEQ ID NO：816、SEQ ID NO：817、SEQ ID NO：818、SEQ ID NO：819、SEQ ID NO：820、SEQ ID NO：821、SEQID NO：822、SEQ ID NO：823、SEQ ID NO：824、SEQ ID NO：825、SEQ ID NO：826、SEQ ID NO：827、SEQ ID NO：828、SEQ ID NO：829、SEQ ID NO：830、SEQ ID NO：831、SEQ ID NO：832、SEQID NO：833、SEQ ID NO：834、SEQ ID NO：835、SEQ ID NO：836、SEQ ID NO：837、SEQ ID NO：838、SEQ ID NO：839、SEQ ID NO：840、SEQ ID NO：841、SEQ ID NO：842、SEQ ID NO：843、SEQID NO：844、SEQ ID NO：845、SEQ ID NO：846、SEQ ID NO：847、SEQ ID NO：848、SEQ ID NO：849、SEQ ID NO：850、SEQ ID NO：851、SEQ ID NO：852、SEQ ID NO：853、SEQ ID NO：854、SEQID NO：855、SEQ ID NO：856、SEQ ID NO：857、SEQ ID NO：858、SEQ ID NO：859、SEQ ID NO：860、SEQ ID NO：861、SEQ ID NO：862、SEQ ID NO：863、SEQ ID NO：864、SEQ ID NO：865、SEQID NO：888、SEQ ID NO：889、SEQ ID NO：890、SEQ ID NO：891、SEQ ID NO：892、SEQ ID NO：893、SEQ ID NO：894、SEQ ID NO：895、SEQ ID NO：896、SEQ ID NO：897、SEQ ID NO：898、SEQID NO：899、SEQ ID NO：900、SEQ ID NO：901、SEQ ID NO：902、SEQ ID NO：903、SEQ ID NO：904、SEQ ID NO：905、SEQ ID NO：906、SEQ ID NO：907、SEQ ID NO：908、SEQ ID NO：909、SEQID NO：916、SEQ ID NO：917、SEQ ID NO：918、SEQ ID NO：919、SEQ ID NO：920和SEQ ID NO：921。
重组DNA方法的开发使得可以研究序列转座对蛋白质折叠、结构和功能的影响。用于形成新序列的方法类似于天然存在的蛋白对的、与其氨基酸序列的线性重构相关的方法(Cunningham，et al.，(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.76：3218-3222(Cunningham等人，1979年，《美国国家科学院院刊》，第76卷，第3218-3222页)；Teather and Erfle，(1990)J.Bacteriol.172：3837-3841(Teather和Erfle，1990年，《细菌学杂志》，第172卷，第3837-3841页)；Schimming，et al.，(1992)Eur.J.Biochem.204：13-19(Schimming等人，1992年，《欧洲生物化学杂志》，第204卷，第13-19页)；Yamiuchi and Minamikawa，(1991)FEBSLett.260：127-130(Yamiuchi和Minamikawa，1991年，《欧洲生化学会联合会快报》，第260卷，第127-130页)；MacGregor，et al.，(1996)FEBS Lett.378：263-266(MacGregor等人，1996年，《欧洲生化学会联合会快报》，第378卷，第263-266页))。该类型重排于蛋白质上的首次体外应用如Goldenberg and Creighton(J.Mol.Biol.165：407-413，1983(Goldenberg和Creighton，《分子生物学杂志》，第165卷，第407-413页，1983年))所述。在形成环状排列的变体时，在初始序列的内部位点(断点)处选择新的N端，从该断点开始，该新序列具有与初始序列相同顺序的氨基酸，直到其到达处于或接近初始C端的氨基酸。此时，该新序列直接地或通过序列的另外部分(接头)连接至处于或接近初始N端的氨基酸，并且该新序列继续采用与初始序列相同的序列，直到其到达处于或接近初始序列断点位点N端的氨基酸的点，该残基形成该链的新C端。接头的氨基酸序列长度可根据经验选择或在结构信息指导下选择或通过使用这两种方法的组合选择。当没有可供使用的结构信息时，可使用如下设计来制备小系列的接头以用于测试，该设计的长度是变化的以跨越0至的范围并且该设计的序列被选择为符合表面暴露(亲水性，Hopp and Woods，(1983)Mol.Immunol.20：483-489(Hopp和Woods，1983年，《分子免疫学》，第20卷，第483-489页)；Kyte and Doolittle，(1982)J.Mol.Biol.157：105-132(Kyte和Doolittle，1982年，《分子生物学杂志》，第157卷，第105-132页)；溶剂暴露表面积，Lee and Richards，(1971)J.Mol.Biol.55：379-400(Lee和Richards，1971年，《分子生物学杂志》，第55卷，第379-400页))和采取所需构象而不扰乱杀虫多肽的构型的能力(构象柔性；Karplus and Schulz，(1985)Naturwissenschaften72：212-213(Karplus和Schulz，1985年，《自然科学》，第72卷，第212-213页))。假定每个残基平均平移2.0至这意味着要测试的长度将在0至30个残基之间，其中0至15个残基是优选的范围。此类经验系列的示例将是使用盒序列诸如重复n次(其中n为1、2、3或4)的Gly-Gly-Gly-Ser来构建接头。本领域技术人员将认识到，存在长度或组成有所差别且可用作接头的许多此类序列，首要考虑因素是它们既不能过长也不能太短(参阅Sandhu，(1992)Critical Rev.Biotech.12：437-462(Sandhu，1992年，《生物技术评论》，第12卷，第437-462页))；如果它们太长，熵效应可能会破坏三维折叠的稳定性，并且也可能使折叠在动力学上不切实际，并且如果它们太短，它们可能会因为扭转或空间应变而破坏分子的稳定性。蛋白质结构信息分析方面的技术人员将认识到，使用链末端之间的距离(限定为c-α碳之间的距离)可用来限定要使用的序列的长度，或至少用来限制必须在接头经验选择中测试的可能性数量。他们还将认识到，有时情况是这样的：多肽链的末端的位置在源自X射线衍射或核磁共振波谱数据的结构模型中不明确，并且当事实如此时，该情况将因此需要加以考虑以便正确估计所需接头的长度。从位置明确的那些残基中选择序列中邻近链末端的两个残基，并且使用其c-α碳之间的距离计算它们之间的接头的近似长度。然后使用计算的长度作为指导，选择具有一定范围残基数量(使用每个残基2至来计算)的接头。这些接头可由初始序列构成，可视需要缩短或延长，并且当延长时，可如上所述将附加残基选择为柔性和亲水的；或任选地可使用一系列接头置换初始序列，一个例子是上述的Gly-Gly-Gly-Ser盒方法；或任选地可使用具有适当总长的、初始序列与新序列的组合。能够折叠成生物活性状态的杀虫多肽的序列可在使用如上所述的接头序列的同时，通过从初始多肽链内适当选择开始(氨基端)和结束(羧基端)位置来制备。使用下述指南从序列的共同链段(称为断点区)内选择氨基端和羧基端。因此，通过从相同断点区内选择氨基端和羧基端，产生了新型氨基酸序列。在许多情况下，新末端的选择将使得羧基端的初始位置紧接在氨基端的初始位置之前。然而，本领域技术人员将认识到，在该区域内任何位置处选择末端都可起作用，并且这些将有效地引起新序列的氨基或羧基部分的缺失或添加。分子生物学的核心原则是，蛋白质的一级氨基酸序列决定了折叠成表达其生物功能所需的三维结构。使用单一蛋白质晶体的X射线衍射或蛋白质溶液的核磁共振波谱获得并解读三维结构信息的方法是本领域技术人员已知的。与断点区的鉴定相关的结构信息的例子包括蛋白质二级结构的位置和类型(α螺旋和3-10螺旋、平行和反平行β折叠、链反转和转角以及环；Kabsch andSander，(1983)Biopolymers 22：2577-2637(Kabsch和Sander，1983年，《生物聚合物》，第22卷，第2577-2637页)；氨基酸残基的溶剂暴露的程度、残基彼此相互作用的程度和类型(Chothia，(1984)Ann.Rev.Biochem.53：537-572(Chothia，1984年，《生物化学年评》，第53卷，第537-572页))以及沿着多肽链的构象静态和动态分布(Alber and Mathews，(1987)Methods Enzymol.154：511-533(Alber和Mathews，1987年，《酶学方法》，第154卷，第511-533页))。在一些情况下，已知关于残基溶剂暴露的额外信息；一个例子是在蛋白质表面上有一个必需的翻译后糖类附着位点。当实验结构信息不可用或不可能获得时，也可利用多种方法分析一级氨基酸序列以预测蛋白质三级和二级结构、溶剂可及性以及转角和环的出现。当直接的结构性方法不可行时，有时也可应用生物化学方法来经验性地确定表面暴露；例如，采用限制性蛋白水解后鉴定断链位点，来推断表面暴露(Gentile and Salvatore，(1993)Eur.J.Biochem.218：603-621(Gentile和Salvatore，1993年，《欧洲生物化学杂志》，第218卷，第603-621页))。因此，使用实验得出的结构信息或预测方法(例如，Srinivisanand Rose，(1995)Proteins：Struct.，Funct.Genetics 22：81-99(Srinivisan和Rose，1995年，《蛋白质：结构、功能和遗传学》，第22卷，第81-99页))检查亲本氨基酸序列以根据它们对于二级和三级结构的维持是否不可或缺而将区域分类。在已知涉及周期性二级结构(α螺旋和3-10螺旋、平行和反平行β折叠)的区域内出现的序列是应当避开的区域。类似地，观察或预测到具有低程度溶剂暴露的氨基酸序列的区域更可能是所谓的蛋白质疏水核的部分，在选择氨基端和羧基端时也应当避开。相比之下，已知或经预测处于表面转角或环中的那些区域，特别是已知并非生物活性所需的那些区域，是多肽链末端定位的优选位点。基于上述标准所优选的氨基酸序列的连续链段被称为断点区。可基本上按照如下文献中所述的方法制备编码环状排列的PIP-47多肽的多核苷酸，所述PIP-47多肽具有包含将初始C端和N端分隔开的接头区的新N端/C端：Mullins，et al.，(1994)J.Am.Chem.Soc.116：5529-5533(Mullins等人，1994年，《美国化学会志》，第116卷，第5529-5533页)。使用聚合酶链反应(PCR)扩增的多个步骤来重排编码蛋白质一级氨基酸序列的DNA序列。可基于如下文献中所述的串联重复方法制备编码环状排列的PIP-47多肽的多核苷酸，所述PIP-47多肽具有包含将初始C端和N端分隔开的接头区的新N端/C端：Horlick，et al.，(1992)Protein Eng.5：427-431(Horlick等人，1992年，《蛋白质工程》，第5卷，第427-431页)。使用串联重复的模板DNA进行新N端/C端基因的聚合酶链反应(PCR)扩增。
在另一个方面，提供了融合蛋白，所述融合蛋白在其氨基酸序列内包含构成PIP-47多肽的氨基酸序列，所述PIP-47多肽包括但不限于SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8的多肽，或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909、SEQ ID NO：916-SEQID NO：921的多肽及其活性片段中的任何一者。
用于设计和构建融合蛋白(和对其编码的多核苷酸)的方法是本领域技术人员已知的。可将编码PIP-47多肽的多核苷酸融合到信号序列，所述信号序列将引导PIP-47多肽定位于原核或真核细胞的特定区室和/或引导本发明实施例的PIP-47多肽从原核或真核细胞分泌。例如，在大肠杆菌(E.coli)中，可能希望引导蛋白质表达于细胞周质间隙。PIP-47多肽可融合到其上以引导多肽表达于细菌细胞周质间隙的信号序列或蛋白质(或其片段)的例子包括但不限于pelB信号序列、麦芽糖结合蛋白(MBP)信号序列、MBP、ompA信号序列、周质大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基的信号序列以及碱性磷酸酶的信号序列。用于构建将引导蛋白的定位的融合蛋白的若干载体可商购获得，比如可购自新英格兰生物实验室(NewEngland Biolabs)的pMAL系列载体(特别是pMAL-p系列)。在具体实施例中，可将PIP-47多肽融合到pelB果胶酸裂解酶信号序列以增加此类多肽在革兰氏阴性细菌中表达和纯化的效率(参见，美国专利No.5,576,195和No.5,846,818)。植物质体转运肽/多肽融合体是本领域熟知的(参见，美国专利No.7,193,133)。质外体转运肽比如水稻或大麦α-淀粉酶分泌信号也是本领域熟知的。质体转运肽通常以N端融合到要靶向的多肽(例如，融合伴侣)。在一个实施例中，融合蛋白基本上由质体转运肽和要靶向的PIP-47多肽组成。在另一个实施例中，融合蛋白包含质体转运肽和要靶向的多肽。在此类实施例中，质体转运肽优选地位于融合蛋白的N端。然而，另外的氨基酸残基可为质体转运肽的N端，前提条件是融合蛋白至少部分地靶向质体。在特定实施例中，质体转运肽处于融合蛋白的N端一半处、N端三分之一处或N端四分之一处。大多数或所有质体转运肽通常在插入质体后从融合蛋白裂解。由于特定的细胞间状况或所使用的转运肽/融合伴侣的具体组合，裂解的位置在植物物种之间、在不同植物发育期可略有差别。在一个实施例中，质体转运肽裂解是同源的，使得裂解位点在融合蛋白群中是相同的。在另一个实施例中，质体转运肽是非同源的，使得裂解位点在融合蛋白群中相差1-10个氨基酸。质体转运肽可以若干方法之一重组地融合到第二蛋白质。例如，可将限制性内切核酸酶识别位点引入转运肽的核苷酸序列中对应于其C末端的位置处，并且可将该位点或相容位点设计在要靶向的蛋白质的核苷酸序列中其N末端处。必须小心设计这些位点以确保转运肽和第二蛋白质的编码序列保持处于“框内”，从而允许所需融合蛋白的合成。在一些情况下，当引入新限制位点时，可能优选的是将第二蛋白质的起始子甲硫氨酸密码子移除。两个亲本分子上限制性内切核酸酶识别位点的引入及其后续通过重组DNA技术进行的连接可导致转运肽与第二蛋白质之间添加一个或多个额外的氨基酸。只要转运肽裂解位点保持可触及并且第二蛋白质的功能不会受到在其N端处所添加的这些额外氨基酸的影响，那么这通常不会影响靶向活性。或者，本领域技术人员可使用基因合成(Stemmer，et al.，(1995)Gene 164：49-53(Stemmer等人，1995年，《基因》，第164卷，第49-53页))或类似方法在转运肽与第二蛋白质(具有或不具有其起始子甲硫氨酸)之间形成精确裂解位点。此外，转运肽融合体可有意识地包含裂解位点下游的氨基酸。成熟蛋白质N端的氨基酸可影响转运肽将蛋白质靶向质体的能力和/或蛋白质输入后裂解的效率。这可取决于要靶向的蛋白质。参见例如Comai，et al.，(1988)J.Biol.Chem.263(29)：15104-9(Comai等人，1988年，《生物化学杂志》，第263卷，第29期，第15104-15109页)。
在一些实施例中，提供了融合蛋白，所述融合蛋白包含通过氨基酸接头连接在一起的PIP-47多肽和杀昆虫多肽。
在一些实施例中，提供了由选自如下的式表示的融合蛋白：
R1-L-R2、R2-L-R1、R1-R2或R2-R1
其中R1是PIP-47多肽或如下序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8，或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ ID NO：727、SEQID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909以及SEQ ID NO：916-SEQ IDNO：921中的任何一者，R2是杀昆虫多肽。R1多肽直接地或通过接头(L)区段融合到R2多肽。术语“直接地”限定了多肽在无肽接头的情况下进行连接的融合。因此，“L”表示R1和R2两者均框内融合到其上的化学键或多肽区段，最常见的是，L为R1和R2通过酰胺键结合到其上的线性肽，所述酰胺键将R1的羧基端连接到L的氨基端并将L的羧基端连接到R2的氨基端。所谓“框内融合”意指R1与R2的阅读框之间没有翻译终止或中断。连接基团(L)通常为长度介于1与500个氨基酸之间的多肽。连接两个分子的接头优选地被设计为(1)允许这两个分子独立于彼此折叠和发挥作用，(2)没有倾向形成可干扰这两个蛋白质的功能域的有序二级结构，(3)具有极少可与功能性蛋白域相互作用的疏水或带电特性，以及(4)提供R1与R2的位阻分离，使得R1和R2可同时与其在单个细胞上的相应受体相互作用。通常，柔性蛋白区中的表面氨基酸包括Gly、Asn和Ser。事实上，包含Gly、Asn和Ser的氨基酸序列的任何排列预计都将满足接头序列的以上标准。其他中性氨基酸诸如Thr和Ala也可在接头序列中使用。为了在接头序列中添加独特的限制性位点以有利于构建融合体，另外的氨基酸也可包含在接头中。
在一些实施例中，接头包含选自下式的序列：(Gly3Ser)n、(Gly4Ser)n、(Gly5Ser)n、(GlynSer)n或(AlaGlySer)n，其中n是整数。高度柔性的接头的一个例子是存在于丝状噬菌体例如噬菌体M13或fd的pIII蛋白内的富含(GlySer)的间隔区(Schaller等人，1975年)。该区域提供了pIII表面蛋白两个域之间较长的柔性间隔区。还包括其中包含内切肽酶识别序列的接头。对于分离融合体的各个组分以确定它们在体外是否正确折叠并具有活性而言，此类裂解位点可能是有价值的。各种内切肽酶的例子包括但不限于纤溶酶、肠激酶、激肽释放酶、尿激酶、组织纤溶酶原激活物、梭菌蛋白酶、凝乳酶、胶原酶、圆斑蝰蛇毒蛋白酶、脯氨酸后裂解酶、V8蛋白酶、凝血酶和因子Xa。在一些实施例中，接头包含来自多基因表达载体(MGEV)的氨基酸EEKKN(SEQ ID NO：488)，其由如美国专利申请公布No.US 2007/0277263中所公开的液泡蛋白酶裂解。在其他实施例中，来自重链免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的铰链区的肽接头区段提供所连接的多肽之间的角度关系。尤其有用的是其中半胱氨酸被替换为丝氨酸的那些铰链区。本发明的接头包含源自其中半胱氨酸已被更换为丝氨酸的小鼠IgG γ2b铰链区的序列。融合蛋白不受到所采用的接头序列的形态、大小或数量的限制，并且接头的唯一要求是在功能上其不会不利地干扰融合体的各个分子的折叠和功能。
在另一个方面，提供了嵌合PIP-47多肽，所述嵌合PIP-47多肽通过连接最初编码单独PIP-47蛋白的PIP-47基因的两个或更多个部分形成嵌合基因来产生。嵌合基因的翻译得到了具有源自每个初始多肽的区域、基序或结构域的单个嵌合PIP-47多肽。在某些实施例中，嵌合蛋白包含任何组合的PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)的部分、基序或结构域。
已经认识到，可通过各种方法改变DNA序列，并且这些改变可导致该DNA序列编码的蛋白质具有与野生型(或天然)杀虫蛋白不同的氨基酸序列。在一些实施例中，PIP-47多肽可以各种方式进行改变，所述方式包括一个或多个氨基酸的氨基酸置换、缺失、截短和插入，包括与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：481、SEQ IDNO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487相比最多至2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145或更多个氨基酸置换、缺失和/或插入或它们的组合。在一些实施例中，PIP-47多肽包含相对于SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8的氨基酸位置或SEQ ID NO：221-SEQ ID NO：420、SEQ ID NO：629-SEQ IDNO：727、SEQ ID NO：797-SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：888-SEQ ID NO：909和SEQ ID NO：916-SEQ ID NO：921中任一者的氨基酸位置而言从PIP-47多肽的N端发生的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个氨基酸的缺失。
这类操纵的方法是本领域公知的。例如，PIP-47多肽的氨基酸序列变体可通过在DNA中突变来制备。这也可通过若干形式之一的诱变和/或在定向进化中完成。在一些方面，氨基酸序列中所编码的变化将不会对蛋白质的功能产生实质性影响。这种变体将具有所需的杀虫活性。然而，应当理解，可通过对本发明组合物使用此类技术，使PIP-47多肽赋予杀虫活性的能力提高。
例如，可在一个或多个、预测的、非必需氨基酸残基处进行保守氨基酸置换。“非必需”氨基酸残基是可从PIP-47多肽的野生型序列改变而不改变生物活性的残基。“保守氨基酸置换”是氨基酸残基被替换为具有类似侧链的氨基酸残基的氨基酸置换。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中定义。这些家族包括：具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)；极性、带负电荷的残基及其酰胺(例如天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺)；不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)；较小脂族、非极性或弱极性残基(例如丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、甘氨酸)；非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；较大脂族、非极性残基(例如甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸)；β-支化的侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)；芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)；大型芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)的氨基酸。
氨基酸置换可在保留功能的非保守区中进行。一般来讲，此类置换不会对保守氨基酸残基或对位于保守基序内的氨基酸残基进行，其中此类残基是蛋白质活性所必需的。保守的且可能是蛋白质活性所必需的残基的例子包括例如在相似或相关毒素与所述实施例的序列的比对中所含的所有蛋白质之间相同的残基(例如，在同源蛋白质的比对中相同的残基)。保守的但可允许保守氨基酸置换且仍然保留活性的残基的例子包括例如在相似或相关毒素与所述实施例的序列的比对中所含的所有蛋白质之间仅具有保守置换的残基(例如，在同源蛋白质的比对中所含的所有蛋白质之间仅具有保守置换的残基)。然而，本领域技术人员应当理解，功能性变体在保守残基中可具有少量保守或非保守的改变。有关不会影响所关注蛋白质的生物活性的适当氨基酸置换的指导可在以下文献所述的模型中找到：Dayhoff，et al.，(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.)(Dayhoff等人，1978年，《蛋白质序列和结构图表集》(美国国家生物医学研究基金会，华盛顿特区))，将该文献以引用方式并入本文。
在进行此类改变时，可考虑氨基酸的亲水性指数。亲水性氨基酸指数在为蛋白质赋予相互作用的生物功能方面的重要性是本领域中普遍理解的(Kyte and Doolittle，(1982)J Mol Biol.157(1)：105-32(Kyte和Doolittle，1982年，《分子生物学杂志》，第157卷，第1期，第105-132页))。公认的是，氨基酸的相对亲水性特征促成了所得蛋白质的二级结构，这继而限定了蛋白质与其他分子例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等等的相互作用。
本领域已知的是，某些氨基酸可被具有类似亲水性指数或评分的其他氨基酸置换，并且仍然产生具有类似生物活性的蛋白质，即仍然获得生物功能方面等效的蛋白质。基于其疏水性和带电特性为每个氨基酸指定了亲水性指数(Kyte和Doolittle，同前)。亲水性指数分别为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。在进行此类改变时，亲水性指数在+2内的氨基酸的置换是优选的，亲水性指数在+1内的那些是尤其优选的，并且亲水性指数在+0.5内的那些甚至更是尤其优选的。
本领域中还应当理解，可基于亲水性有效地进行类似氨基酸的置换。美国专利No.4,554,101陈述了蛋白质的最大局部平均亲水性(由其相邻氨基酸的亲水性决定)与蛋白质的生物性质相关联。
如美国专利No.4,554,101中详述，已为氨基酸残基指定下列亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+0.1)；谷氨酸(+3.0.+0.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+0.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。
或者，可对许多蛋白质在氨基端或羧基端的蛋白质序列进行改变，而基本上不影响其活性。这可包括通过现代分子方法引入的插入、缺失或改变，所述现代分子方法诸如PCR，包括通过使PCR扩增中采用的寡核苷酸中包含氨基酸编码序列而改变或延长蛋白质编码序列的PCR扩增。或者，所添加的蛋白质序列可包括全部蛋白质编码序列，诸如本领域通常用于产生蛋白融合体的那些。此类融合蛋白通常用于(1)增加所关注蛋白质的表达，(2)引入结合结构域、酶活性或表位以有利于蛋白质纯化、蛋白质检测或本领域已知的其他实验用途，(3)使蛋白质的分泌或翻译靶向亚细胞细胞器，诸如革兰氏阴性细菌的细胞周质间隙、植物的线粒体或叶绿体或者真核细胞的内质网，后者通常导致蛋白质的糖基化。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO：2的天然氨基酸相比在选自SEQ ID NO：2的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、57、58、62、63、65、66、67、68、71、72、73、74、75、76、78、79、80、81、82、83、84、85、86、88、90、91、92、95、96、97、98、99、100、103、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、124、130、132、133、135、136、137、141、142、143、144、146、147、148、149、150、151、153、156、158、161、164、165、168、169、170、172、173、174、176、178、179、181、182、184、185、188、189、193、194、196、198、200、202、203、205、206、207、208、212、213、221、222、226、228、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、257、260、262、264、265、267、270、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、283、284、287或295的一个或多个残基处具有任何组合的氨基酸置换，并且任选地PIP-47多肽还包含相对于SEQ ID NO：2而言任何组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO：2的天然氨基酸相比在选自SEQ ID NO：2的位置2、4、5、6、7、9、10、13、19、20、21、22、24、25、26、29、30、37、38、41、42、43、46、47、49、50、53、62、66、68、71、73、75、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、95、97、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、136、142、161、170、172、173、174、181、205、212、213、221、230、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、257、260、262、264、272、276、279、281、283、284、287和295的一个或多个残基处具有任何组合的氨基酸置换，并且任选地PIP-47多肽还包含相对于SEQ ID NO：2而言任何组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO：2的天然氨基酸相比在选自SEQ ID NO：2的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、57、58、62、63、65、66、67、68、71、72、73、74、75、76、78、79、80、81、82、83、84、85、86、88、90、91、92、95、96、97、98、99、100、103、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、124、130、132、133、135、136、137、141、142、143、144、146、147、148、149、150、151、153、156、158、161、164、165、168、169、170、172、173、174、176、178、179、181、182、184、185、188、189、193、194、196、198、200、202、203、205、206、207、208、212、213、221、222、226、228、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、257、260、262、264、265、267、270、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、283、284、287或295的1至60个残基处具有任何组合的氨基酸置换，并且任选地PIP-47多肽还包含相对于SEQ ID NO：2而言任何组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
在一些实施例中，PIP-47多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO：2的天然氨基酸相比在选自SEQ ID NO：2的位置2、4、5、6、7、9、10、13、19、20、21、22、24、25、26、29、30、37、38、41、42、43、46、47、49、50、53、62、66、68、71、73、75、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、95、97、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、136、142、161、170、172、173、174、181、205、212、213、221、230、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、257、260、262、264、272、276、279、281、283、284、287和295的1至60个残基处具有任何组合的氨基酸置换，并且任选地PIP-47多肽还包含相对于SEQ ID NO：2而言任何组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
在具体的实施例中，置换为用丙氨酸在所列举的位置处置换天然氨基酸。还涵盖了编码变体蛋白质或多肽的核酸序列。
本发明的变体核苷酸和氨基酸序列还涵盖源自诱变和引起重组的程序(比如DNA改组)的序列。采用此类程序时，一个或多个不同PIP-47多肽编码区可用于形成具有所需性质的新PIP-47多肽。以此方式，从一组相关的多核苷酸序列产生重组多核苷酸的文库，所述相关的多核苷酸序列包含具有实质的序列同一性且可以在体外或体内同源重组的序列区域。例如，使用该方法，可将编码所关注结构域的序列基序在杀虫基因和其他已知的杀虫基因之间进行改组，以获得编码具有改进的所关注性质(诸如提高的杀昆虫活性)的蛋白质的新基因。这种DNA改组的策略是本领域已知的。参见，例如，Stemmer(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：10747-10751(Stemmer，1994年，《美国国家科学院院刊》，第91卷，第10747-10751页)；Stemmer，(1994)Nature 370：389-391(Stemmer，1994年，《自然》，第370卷，第389-391页)；Crameri，et al.，(1997)Nature Biotech.15：436-438(Crameri等人，1997年，《自然生物技术》，第15卷，第436-438页)；Moore，et al.，(1997)J.Mol.Biol.272：336-347(Moore等人，1997年，《分子生物学杂志》，第272卷，第336-347页)；Zhang，et al.，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：4504-4509(Zhang等人，1997年，《美国国家科学院院刊》，第94卷，第4504-4509页)；Crameri，et al.，(1998)Nature 391：288-291(Crameri等人，1998年，《自然》，第391卷，第288-291页)；以及美国专利No.5,605,793和5,837,458。
结构域交换或改组是用于产生改变的PIP-47多肽的另一种机制。结构域可在PIP-47多肽之间进行交换，从而产生具有改善的杀昆虫活性或目标谱的杂合或嵌合毒素。用于产生重组蛋白并测试其杀虫活性的方法是本领域熟知的(参见，例如Naimov，et al.，(2001)Appl.Environ.Microbiol.67：5328-5330(Naimov等人，2001年，《应用与环境微生物学》，第67卷，第5328-5330页)；de Maagd，et al.，(1996)Appl.Environ.Microbiol.62：1537-1543(de Maagd等人，1996年，《应用与环境微生物学》，第62卷，第1537-1543页)；Ge，et al.，(1991)J.Biol.Chem.266：17954-17958(Ge等人，1991年，《生物化学杂志》，第266卷，第17954-17958页)；Schnepf，et al.，(1990)J.Biol.Chem.265：20923-20930(Schnepf等人，1990年，《生物化学杂志》，第265卷，第20923-20930页)；Rang，et al.，91999)Appl.Environ.Microbiol.65：2918-2925(Rang等人，1999年，《应用与环境微生物学》，第65卷，第2918-2925页)。
DNA改组和定点诱变两者均用于限定具有杀虫活性的多肽序列。在实例8中，DNA改组用于通过存在于PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)中的多样性的重组生成活性变体文库。本领域技术人员将能够使用与其他蛋白质或功能测定法的比较来进一步限定基序。可使用高通量筛选来测试这些基序的变异以确定具体残基的作用。若已知若干基序，则可以限定对功能性蛋白质的要求。对基序的了解允许技术人员设计不会影响功能的序列变异。
PIP-47同源物的同源物比对(图1、2和3)允许对该家族的天然同源物间高度保守的残基进行鉴定(图1)。在实例9和10中，使用饱和诱变在保守残基处基序中的所选氨基酸位置处进行置换，并测试这些置换。测试了这些突变体的活性，并且识别出了同源物间不存在的多种活性置换，从而提供了对这些残基处的功能性限制的理解。
组合物
还涵盖了包含PIP-47多肽的组合物。在一些实施例中，所述组合物包含PIP-47多肽。在一些实施例中，所述组合物包含PIP-47融合蛋白。
抗体
还涵盖了针对本发明实施例的PIP-47多肽或对于其变体或片段的抗体。本发明的抗体包括多克隆和单克隆抗体以及它们的片断，所述片断保留了其与存在于昆虫肠道中的PIP-47蛋白结合的能力。抗体、单克隆抗体或其片段如果能够与分子发生特异性反应从而使该分子结合于该抗体、单克隆抗体或其片段，则被认为能够结合该分子。术语“抗体”(Ab)或“单克隆抗体”(Mab)意在包括能够结合半抗原的完整分子以及其片段或结合区或域(比如，Fab和F(ab).sub.2片段)。此类片段通常由蛋白水解裂解(比如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶)产生。或者，半抗原结合片段可通过应用重组DNA技术或通过合成化学产生。用于制备本发明抗体的方法是本领域公知的。例如参见Antibodies，A Laboratory Manual，Ed Harlowand David Lane (eds.)Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y.(1988)(《抗体：实验室手册》，Ed Harlow和David Lane编辑，纽约冷泉港实验室，1988年)以及其中引用的参考文献。阐述免疫学一般原理的标准参考著作包括：Klein，J.Immunology：The Science of Cell-Noncell Discrimination，John Wiley&Sons，N.Y.(1982)(Klein，J.，《免疫学：细胞-非细胞区分的科学》，约翰π威立父子出版公司，纽约，1982年)；Dennett，et al.，MonoclonalAntibodies，Hybridoma：A New Dimension in Biological Analyses，Plenum Press，N.Y.(1980)(Dennett等人，单克隆抗体，杂交瘤：生物学分析的新尺度，Plenum出版社，纽约，1980年)以及Campbell，“Monoclonal Antibody Technology，”In Laboratory Techniquesin Biochemistry and Molecular Biology，Vol.13，Burdon，et al.，(eds.)，Elsevier，Amsterdam(1984)(Campbell，“单克隆抗体技术”，载于《生物化学和分子生物学实验技术》，第13卷，Burdon等人编辑，爱思唯尔，阿姆斯特丹，1984年)。另参见以下各号美国专利：4,196,265、4,609,893、4,713,325、4,714,681、4,716,111、4,716,117和4,720,459。PIP-47多肽或PIP-47多肽抗体或其抗原结合部分可通过多种技术产生，包括常规的单克隆抗体方法，例如Kohler and Milstein，(1975)Nature 256：495(Kohler和Milstein，1975年，《自然》，第256卷，第495页)的标准体细胞杂交技术。也可采用用于产生单克隆抗体的其他技术，比如B淋巴细胞的病毒转化或致癌性转化。用于制备杂交瘤的动物系统是小鼠系统。用于分离供融合用的免疫脾细胞的免疫方案和技术是本领域已知的。融合伴侣(例如，小鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。本发明的抗体和单克隆抗体可通过将PIP-47多肽用作抗原来制备。
提供了用于在样品中检测PIP-47多肽的存在或检测编码PIP-47多肽的核苷酸序列的存在的试剂盒。在一个实施例中，该试剂盒提供了基于抗体的试剂以用于检测组织样品中PIP-47多肽的存在。在另一个实施例中，该试剂盒提供了可用于检测编码PIP-47多肽的一个或多个多核苷酸的存在的标记核酸探针。该试剂盒连同执行检测方法的适当试剂和对照以及试剂盒使用说明一起提供。
受体鉴定和分离
还涵盖了针对本发明实施例的PIP-47多肽或针对其变体或片段的受体。用于鉴定受体的方法是本领域熟知的(参见，Hofmann，et.al.，(1988)Eur.J.Biochem.173：85-91(Hofmann等人，1988年，《欧洲生物化学杂志》，第173卷，第85-91页)；Gill，et al.，(1995)J.Biol.Chem.27277-27282(Gill等人，1995年，《生物化学杂志》，第27277-27282页))，可用于利用来自易感昆虫的刷状缘膜囊鉴定并分离识别PIP-47多肽的受体。除了所引用的文献中列出的放射性标记方法以外，PIP-47多肽还可用荧光染料和其他常见标签诸如链霉抗生物素蛋白进行标记。易感昆虫比如大豆尺蠖和椿象的刷状缘膜囊(BBMV)可根据参考文献中列出的方案制备，并且在SDS-PAGE凝胶上分离，并印迹在合适的膜上。可将标记的PIP-47多肽与BBMV的印迹膜一起温育，并用标记的报告子鉴定标记的PIP-47多肽。可通过N端氨基酸气相测序或基于质谱的蛋白质鉴定方法检测与PIP-47多肽相互作用的蛋白质条带的身份(Patterson，(1998)10.22，1-24，Current Protocol in Molecular Biology publishedby John Wiley&Son Inc(Patterson，1998年10月22日，第1-24页，《分子生物学实验手册》，由约翰π威立父子出版公司出版))。蛋白质一经识别出，就可从易感昆虫的基因组DNA或cDNA文库克隆相应基因，并且可直接用PIP-47多肽测量结合亲和力。与PIP-47多肽作用而表现杀昆虫活性的受体功能可通过RNAi类型的基因敲除方法完成验证(Rajagopal，etal.，(2002)J.Biol.Chem.277：46849-46851(Rajagopal等人，2002年，《生物化学杂志》，第277卷，第46849-46851页))。
核苷酸构建体、表达盒和载体
本文中术语“核苷酸构建体”的使用无意于将本发明实施例局限于包含DNA的核苷酸构建体。本领域普通技术人员将认识到，核苷酸构建体，特别是由核糖核苷酸以及核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的组合构成的多核苷酸和寡核苷酸，也可应用于本文公开的方法中。本发明实施例的核苷酸构建体、核酸和核苷酸序列另外涵盖了这类构建体、分子和序列的所有互补形式。此外，本发明实施例的核苷酸构建体、核苷酸分子和核苷酸序列涵盖了所有可在本发明实施例的方法中应用以转化植物的核苷酸构建体、分子和序列，包括但不限于那些由脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸以及它们的组合所构成的核苷酸构建体、分子和序列。这种脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸既包括天然存在的分子，也包括合成的类似物。所述实施例的核苷酸构建体、核酸和核苷酸序列还涵盖了所有形式的核苷酸构建体，包括但不限于单链形式、双链形式、发夹结构、茎-环结构等。
又一个实施例涉及经转化的生物体，如选自植物和昆虫细胞、细菌、酵母、杆状病毒、原生动物、线虫和藻类的生物体。经转化的生物体包含所述实施例的DNA分子、含所述DNA分子的表达盒或者含所述表达盒的载体，它们可稳定掺入到经转化的生物体的基因组中。
在DNA构建体中提供了本发明实施例的序列以用于在所关注生物体中表达。该构建体将包括有效连接至本发明实施例的序列的5′和3′调节序列。本文所用的术语“有效连接”指启动子与第二序列之间的功能性连接，其中启动子序列起始并介导与第二序列对应的DNA序列的转录。一般来讲，有效连接意指被连接的核酸序列是连续的，并有必要在相同的阅读框内连接两个蛋白质编码区。该构建体可另外含有至少一个待共转化到该生物体中的额外基因。或者，所述额外基因可在多个DNA构建体上提供。
这种DNA构建体提供有多个限制位点，以使PIP-47多肽基因序列的插入处于调控区的转录调控之下。DNA构建体可另外含有选择性标记基因。
该DNA构建体在5′至3′转录方向上通常包含：转录和翻译起始区(即，启动子)、本发明实施例的DNA序列、在充当宿主的生物体中具有功能的转录和翻译终止区(即终止区)。转录起始区(即启动子)相对于宿主生物体和/或相对于本发明实施例的序列可以是天然的、类似的、外来的或者异源的。另外，该启动子可以是天然序列或备选地是合成序列。如本文所用的术语“外来的”表示启动子在引入该启动子的天然生物体中不存在。如果启动子相对于本发明实施例的序列是“外来的”或者“异源的”，则意指该启动子不是所有效连接的本发明实施例的序列的天然或自然存在的启动子。本文所用的嵌合基因包含与转录起始区可操作连接的编码序列，该转录起始区对于该编码序列是异源的。如果启动子是天然或自然的序列，则所有效连接的序列的表达相比野生型表达被变更，这导致表型变更。
在一些实施例中，DNA构建体还可包含转录增强子序列。如本文所用，术语“增强子”是指这样的DNA序列，所述DNA序列可以刺激启动子活性，并且可以是启动子的固有元件或经插入以增强启动子的水平或组织特异性的异源元件。各种增强子是本领域已知的，包括例如，植物中具有基因表达增强性质的内含子(美国专利申请公布No.2009/0144863，泛素内含子(即，玉蜀黍泛素内含子1(参见例如，NCBI序列S94464))、omega增强子或omegaprime增强子(Gallie，et al.，(1989)Molecular Biology of RNA ed.Cech(Liss，NewYork)237-256(Galiie等人，1989年，《RNA的分子生物学》，Cech编辑(纽约Liss))和Gallie，et al.，(1987)Gene 60：217-25(Galiie等人，1987年，《基因》，第60卷，第217-225页))、CaMV 35S增强子(参见例如，Benfey，et al.，(1990)EMBO J.9：1685-96(Benfey等人，1990年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第9卷，第1685-1696页))并且还可使用美国专利No.7,803,992的增强子，所述文献中的每一篇均以引用方式并入。上面关于转录增强子的列表并不意指是限制性的。任何适当的转录增强子都可用于所述实施例。
终止区可以是对于转录起始区而言是天然的，可以对于有效连接的所关注DNA序列而言是天然的，可以对于植物宿主而言是天然的，或者可以衍自另一来源(即对于该启动子、所关注序列、植物宿主或者它们的任何组合而言是外来的或异源的)。
易得的终止区可获自根瘤农杆菌(A.tumefaciens)的Ti质粒，比如章鱼碱合酶和胭脂碱合酶终止区。另参见Guerineau，et al.，(1991)Mol.Gen.Genet.262：141-144(Guerineau等人，1991年，《分子遗传和基因组学》，第262卷，第141-144页)；Proudfoot，(1991)Cell 64：671-674(Proudfoot，1991年，《细胞》，第64卷，第671-674页)；Sanfacon，etal.，(1991)Genes Dev.5：141-149(Sanfacon等人，1991年，《基因与发育》，第5卷，第141-149页)；Mogen，et al.，(1990)Plant Cell 2：1261-1272(Mogen等人，1990年，《植物细胞》，第2卷，第1261-1272页)；Munroe，et al.，(1990)Gene 91：151-158(Munroe等人，1990年，《基因》，第91卷，第151-158页)；Ballas，et al.，(1989)Nucleic Acids Res.17：7891-7903(Ballas等人，1989年，《核酸研究》，第17卷，第7891-7903页)和Joshi，et al.，(1987)Nucleic Acid Res.15：9627-9639(Joshi等人，1987年，《核酸研究》，第15卷，第9627-9639页)。
如适当，可将核酸进行优化以提高其在宿主生物体中的表达。因此，如果该宿主生物体是植物，则可用植物偏好的密码子合成出合成的核酸以改进表达。有关宿主偏好的密码子用法的讨论，参见例如Campbell and Gowri，(1990)Plant Physiol.92：1-11(Campbell和Gowri，1990年，《植物生理学》，第92卷，第1-11页)。例如，尽管本发明实施例的核酸序列在单子叶植物物种和双子叶植物物种中都可表达，但可对序列进行修饰以迎合单子叶植物或双子叶植物的特定密码子偏好性和GC含量偏好性，因为这些偏好性已被证实是不同的(Murray et al.(1989)Nucleic Acids Res.17：477-498(Murray等人，1989年，《核酸研究》，第17卷，第477-498页)。因此，特定氨基酸的玉蜀黍偏好密码子可由来自玉蜀黍的已知基因序列得出。关于来自玉蜀黍植物的28种基因的玉蜀黍密码子的用法在Murray等人(出处同上)的表4中列出。合成植物偏好基因的方法是本领域现成的。参见例如美国专利No.5,380,831和No.5,436,391以及Murray，et al.，(1989)Nucleic Acids Res.17：477-498(Murray等人，1989年，《核酸研究》，第17卷，第477-498页)以及Liu H et al.Mol BioRep 37：677-684，2010(Liu H等人，《分子生物学报道》，第37卷，第677-684页，2010年)，所述文献以引用的方式并入本文。玉蜀黍(Zea maize)密码子用法表也可见于kazusa.or.jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi？species＝4577(可使用www前缀访问)。表2示出了玉蜀黍最佳密码子分析(修改自Liu H et al.Mol Bio Rep 37：677-684，2010(Liu H等人，《分子生物学报道》，第37卷，第677-684页，2010年))。
表2
使用卡方列联检验来比较密码子用法以鉴定最佳密码子。出现明显更频繁(P\0.01)的密码子用星号指示。
大豆(Glycine max)密码子用法表在表3中示出并且也可见于kazusa.or.jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi？species＝3847&aa＝1&style＝N(可使用www前缀访问)。
表3
在一些实施例中，编码PIP-47多肽的重组核酸分子具有玉蜀黍优化密码子。
已知有另外的序列修饰能增强细胞宿主中的基因表达。这些包括消除以下序列：编码假多聚腺苷酸化信号、外显子-内含子剪接位点信号的序列、转座子样重复序列以及其他得到充分表征的可能对基因表达有害的序列。可将序列的GC含量调整至给定细胞宿主的平均水平，这通过参考在宿主细胞中表达的已知基因计算得到。如本文所用的术语“宿主细胞”指含有载体并支持该表达载体的复制和/或表达的细胞。宿主细胞可以是原核细胞如大肠杆菌或者真核细胞如酵母、昆虫、两栖动物或者哺乳动物细胞，或者单子叶或者双子叶植物细胞。单子叶植物宿主细胞的一个例子是玉蜀黍宿主细胞。当可能时，修饰序列以避免可预见的发夹二级mRNA结构。
表达盒可以另外含有5′前导序列。此类前导序列可以起到增强翻译的作用。翻译前导序列是本领域已知的，包括：小核糖核酸病毒前导序列，例如EMCV前导序列(脑心肌炎5′非编码区)(Elroy-Stein，et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：6126-6130(Elroy-Stein等人，1989年，《美国国家科学院院刊》，第86卷，第6126-6130页))；马铃薯Y病毒组前导序列，例如TEV前导序列(烟草蚀纹病毒)(Gallie，et al.，(1995)Gene 165(2)：233-238(Gallie等人，1995年，《基因》，第165卷，第2期，第233-238页))；MDMV前导序列(玉米矮花叶病毒)；人免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)(Macejak，et al.，(1991)Nature 353：90-94(Macejak等人，1991年，《自然》，第353卷，第90-94页))；来自苜蓿花叶病毒的外被蛋白mRNA的非翻译前导序列(AMV RNA 4)(Jobling，et al.，(1987)Nature 325：622-625(Jobling等人，1987年，《自然》，第325卷，第622-625页))；烟草花叶病毒前导序列(TMV)(Gallie，et al.，(1989)in Molecular Biology of RNA，ed.Cech(Liss，New York)，pp.237-256(Gallie等人，1989年，载于《RNA的分子生物学》，Cech编辑，纽约Liss，第237-256页))和玉米枯黄斑点病毒前导序列(MCMV)(Lommel，et al.，(1991)Virology 81：382-385(Lommel等人，1991年，《病毒学》，第81卷，第382-385页))。另参见Della-Cioppa，etal.，(1987)Plant Physiol.84：965-968(Della-Cioppa等人，1987年，《植物生理学》，第84卷，第965-968页)。此类构建体也可包含“信号序列”或“前导序列”以有利于肽的共翻译转运或翻译后转运到特定细胞内结构，比如叶绿体(或其他质体)、内质网或高尔基体。
如本文所用的“信号序列”是指已知或疑似引起跨越细胞膜的共翻译肽转运或翻译后肽转运的序列。在真核生物中，这通常涉及分泌到高尔基体中，伴随着一定程度的糖基化。细菌的杀昆虫毒素通常被合成为原毒素，其在靶标害虫的肠道中被质子传递(protolytically)激活(Chang，(1987)Methods Enzymol.153：507-516(Chang，1987年，《酶学方法》，第153卷，第507-516页))。在一些实施例中，信号序列位于天然序列内，或者可以来源于所述实施例的序列。如本文所用的“前导序列”是指任意序列，当该序列被翻译时，其产生的氨基酸序列足以触发肽链共翻译转运到亚细胞细胞器。因此，这包括通过进入内质网、穿过液泡、质体(包括叶绿体)、线粒体等而靶向转运和/或糖基化的前导序列。靶向叶绿体类囊体内腔区室的细胞核编码蛋白质具有特征性的二连转运肽(bipartite transitpeptide)，其由基质靶向信号肽和内腔靶向信号肽构成。基质靶向信息位于该转运肽的近氨基端部分。内腔靶向信号肽位于该转运肽的近羧基端部分，其含有靶向内腔的所有信息。近年来高等植物叶绿体的蛋白质组学研究成功鉴定了许多细胞核编码的内腔蛋白质(Kieselbach et al.FEBS LETT 480：271-276，2000(Kieselbach等人，《欧洲生化学会联合会快报》，第480卷，第271-276页，2000年)；Peltier et al.Plant Cell 12：319-341，2000(Peltier等人，《植物细胞》，第12卷，第319-341页，2000年)；Bricker etal.Biochim.Biophys Acta 1503：350-356，2001(Bricker等人，《生物化学与生物物理学报》，第1503卷，第350-356页，2001年))，其内腔靶向信号肽存在依本发明使用的可能性。Kieselbach et al.，Photosynthesis Research，78：249-264，2003(Kieselbach等人，《光合作用研究》，第78卷，第249-264页，2003年)报道了来自拟南芥(Arabidopsis)的约80种蛋白质以及菠菜和豌豆的同源蛋白质。具体地讲，在此以引用方式并入本说明书的该出版物的表2公开了以其登录号标识的85种叶绿体内腔蛋白质(还可参见美国专利申请公布2009/09044298)。此外，近来发表的水稻基因组草图(Goff et al，Science 296：92-100，2002(Goff等人，《科学》，第296卷，第92-100页，2002年))是可根据本发明使用的内腔靶向信号肽的合适来源。
合适的叶绿体转运肽(CTP)是本领域技术人员熟知的，也包括嵌合CTP，所述嵌合CTP包含但不限于来自如下酶的CTP的N端结构域、中央结构域或C端结构域：水稻(Oryzasattva)1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶、水稻过氧化物歧化酶、水稻可溶性淀粉合酶、水稻NADP依赖型苹果酸酶、水稻磷酸-2-脱氢-3-脱氧庚糖酸醛缩酶2、水稻L-抗坏血酸过氧化物酶5、水稻磷酸葡聚糖水二激酶、玉米(Zea Mays)ssRUBISCO、玉米β-葡萄糖苷酶、玉米苹果酸脱氢酶、玉米M型硫氧还蛋白(美国专利申请公布2012/0304336)。
可根据植物细胞核与该细胞器之间的密码子用法的差异来优化要靶向叶绿体的PIP-47多肽基因以用于在叶绿体中表达。以此方式，可使用叶绿体偏好的密码子合成所关注的核酸。参见例如，美国专利No.5,380,831，其以引用方式并入本文。
在制备表达盒时，可对多个DNA片段进行操纵，以提供处于正确取向的DNA序列，且适当时提供处于正确的阅读框的DNA序列。为此目的，可应用衔接子或接头将DNA片段连接在一起，或者可涉及其他的操纵以提供便利的限制性位点、去除多余的DNA、去除限制性位点等。出于这个目的，可能涉及体外诱变、引物修复、限制性酶切、退火、再置换(例如转换和颠换)。
有多种启动子可用于本发明实施例的实施。可根据期望的结果来选择启动子。可将核酸与组成型启动子、组织偏好型启动子、诱导型启动子或其他启动子进行组合，以在宿主生物体中表达。适用于植物宿主细胞的组成型启动子包括例如WO 1999/43838和美国专利No.6,072,050中所公开的Rsyn7启动子的核心启动子及其他组成型启动子；核心CaMV35S启动子(Odell，et al.，(1985)Nature 313：810-812(Odell等人，1985年，《自然》，第313卷，第810-812页))；水稻肌动蛋白(McElroy，et al.，(1990)Plant Cell 2：163-171(McElroy等人，1990年，《植物细胞》，第2卷，第163-171页))；泛素(Christensen，et al.，(1989)Plant Mol.Biol.12：619-632(Christensen等人，1989年，《植物分子生物学》，第12卷，第619-632页)和Christensen，et al.，(1992)Plant Mol.Biol.18：675-689(Christensen等人，1992年，《植物分子生物学》，第18卷，第675-689页))；pEMU(Last等人，(1991)Theor.Appl.Genet.81：581-588(Last等人，1991年，《理论与应用遗传学》，第81卷，第581-588页))；MAS(Velten，et al.，(1984)EMBO J.3：2723-2730(Velten等人，1984年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第3卷，第2723-2730页))；ALS启动子(美国专利No.5,659,026)等等。其他组成型启动子包括例如美国专利No.5,608,149；No.5,608,144；No.5,604,121；No.5,569,597；No.5,466,785；No.5,399,680；No.5,268,463；No.5,608,142；和No.6,177,611中所讨论的那些。
取决于所需的结果，从诱导型启动子表达基因可能是有利的。对于调节本发明实施例的核苷酸序列在植物中的表达特别有意义的是损伤诱导型启动子。这种损伤诱导型启动子可响应昆虫取食所引起的损害，包括马铃薯蛋白酶抑制剂(pin II)基因(Ryan(1990)Ann.Rev.Phytopath.28：425-449(Ryan，1990年，《植物病理学年评》，第28卷，第425-449页)；Duan，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：494-498(Duan等人，1996年，《自然生物技术》，第14卷，第494-498页))；wun1和wun2，美国专利No.5,428,148；win1和win2(Stanford，et al.，(1989)Mol.Gen.Genet.215：200-208(Stanford等人，1989年，《分子遗传学与普通遗传学》，第215卷，第200-208页))；系统素(McGurl，et al.，(1992)Science225：1570-1573(McGurl等人，1992年，《科学》，第225卷，第1570-1573页))；WIP1(Rohmeier，et al.，(1993)Plant Mol.Biol.22：783-792(Rohmeier等人，1993年，《植物分子生物学》，第22卷，第783-792页)；Eckelkamp，et al.，(1993)FEBS Letters 323：73-76(Eckelkamp等人，1993年，《欧洲生化学会联合会快报》，第323卷，第73-76页))；MPI基因(Corderok，etal.，(1994)Plant J.6(2)：141-150(Corderok等人，1994年，《植物杂志》，第6卷，第2期，第141-150页))等等，这些文献以引用方式并入本文。
另外，病原体诱导型启动子可用于本发明实施例的方法和核苷酸构建体中。这种病原体诱导型启动子包括那些来自致病相关蛋白(PR蛋白)的在经病原体感染后被诱导的启动子；例如PR蛋白、SAR蛋白、β-1，3-葡聚糖酶、壳多糖酶等等。参见例如，Redolfi，etal.，(1983)Neth.J.Plant Pathol.89：245-254(Redolfi等人，1983年，《荷兰植物病理学杂志》，第89卷，第245-254页)；Uknes，et al.，(1992)Plant Cell 4：645-656(Uknes等人，1992年，《植物细胞》，第4卷，第645-656页)以及Van Loon，(1985)Plant Mol.Virol.4：111-116(Van Loon，1985年，《植物分子病毒学》，第4卷，第111-116页)。还可参见WO 1999/43819，该专利以引用的方式并入本文。
值得关注的是在病原体感染位点处或附近局部表达的启动子。参见例如，Marineau，et al.，(1987)Plant Mol.Biol.9：335-342(Marineau等人，1987年，《植物分子生物学》，第9卷，第335-342页)；Matton，et al.，(1989)Molecular Plant-MicrobeInteractions 2：325-331(Matton等人，1989年，《分子植物与微生物相互作用》，第2卷，第325-331页)；Somsisch，et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：2427-2430(Somsisch等人，1986年，《美国国家科学院院刊》，第83卷，第2427-2430页)；Somsisch，et al.，(1988)Mol.Gen.Genet.2：93-98(Somsisch等人，1988年，《分子遗传学与普通遗传学》，第2卷，第93-98页)；和Yang(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：14972-14977(Yang等人，1996年，《美国国家科学院院刊》，第93卷，第14972-14977页)。还可参见Chen，et al.，(1996)PlantJ.10：955-966(Chen等人，1996年，《植物杂志》，第10卷，第955-966页)；Zhang，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：2507-2511(Zhang等人，1994年，《美国国家科学院院刊》，第91卷，第2507-2511页)；Warner，et al.，(1993)Plant J.3：191-201(Warner等人，1993年，《植物杂志》，第3卷，第191-201页)；Siebertz，et al.，(1989)Plant Cell 1：961-968(Siebertz等人，1989年，《植物细胞》，第1卷，第961-968页)；美国专利No.5,750,386(线虫诱导型)以及其中引用的参考文献。特别值得关注的是玉蜀黍PRms基因的诱导型启动子，其表达由病原体串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)诱导(参见例如，Cordero，et al.，(1992)Physiol.Mol.Plant Path.41：189-200(Cordero等人，1992年，《生理与分子植物病理学》，第41卷，第189-200页)。
可通过施加外源化学调节剂将化学调节型启动子用于调控基因在植物中的表达。取决于目标，启动子可以是化学诱导型启动子，其中施用化学物质可诱导基因表达，或者是化学阻抑型启动子，其中施用化学物质可抑制基因表达。化学诱导型启动子是本领域已知的，包括但不限于玉蜀黍In2-2启动子(其通过苯磺酰胺除草剂安全剂激活)、玉蜀黍GST启动子(其通过用作前突生除草剂的疏水性亲电化合物激活)和烟草PR-1a启动子(其通过水杨酸激活)。其他所关注的化学调控型启动子包括类固醇响应启动子(参见，例如，糖皮质素诱导型启动子，Schena，et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：10421-10425(Schena等人，1991年，《美国国家科学院院刊》，第88卷，第10421-10425页)和McNellis，et al.，(1998)Plant J.14(2)：247-257(McNellis等人，1998年，《植物杂志》，第14卷，第2期，第247-257页))和四环素诱导型和四环素阻抑型启动子(参见，例如，Gatz，et al.，(1991)Mol.Gen.Genet.227：229-237(Gatz等人，1991年，《分子遗传学与普通遗传学》，第227卷，第229-237页)以及美国专利No.5,814,618和5,789,156)，上述文献以引用的方式并入本文。
组织偏好型启动子可用来将增强的PIP-47多肽表达靶向特定的植物组织内。组织偏好型启动子包括以下文献中描述的那些启动子：Yamamoto，et al.，(1997)Plant J.12(2)255-265(Yamamoto等人，1997年，《植物杂志》，第12卷，第2期，第255-265页)；Kawamata，et al.，(1997)Plant Cell Physiol.38(7)：792-803(Kawamata等人，1997年，《植物细胞生理学》，第38卷，第7期，第792-803页)；Hansen，et al.，(1997)Mol.Gen Genet.254(3)：337-343(Hansen等人，1997年，《分子遗传学与普通遗传学》，第254卷，第3期，第337-343页)；Russell，et al.，(1997)Transgenic Res.6(2)：157-168(Russell等人，1997年，《转基因研究》，第6卷，第2期，第157-168页)；Rinehart，et al.，(1996)Plant Physiol.112(3)：1331-1341(Rinehart等人，1996年，《植物生理学》，第112卷，第3期，第1331-1341页)；Van Camp，et al.，(1996)Plant Physiol.112(2)：525-535(Van Camp等人，1996年，《植物生理学》，第112卷，第2期，第525-535页)；Canevascini，et al.，(1996)Plant Physiol.112(2)：513-524(Canevascini等人，1996年，《植物生理学》，第112卷，第2期，第513-524页)；Yamamoto，et al.，(1994)Plant Cell Physiol.35(5)：773-778(Yamamoto等人，1994年，《植物细胞生理学》，第35卷，第5期，第773-778页)；Lam(1994)Results Probl.Cell Differ.20：181-196(Lam，1994年，《细胞分化的结果与问题》，第20卷，第181-196页)；Orozco，et al.，(1993)Plant Mol Biol.23(6)：1129-1138(Orozco等人，1993年，《植物分子生物学》，第23卷，第6期，第1129-1138页)；Matsuoka，et al.，(1993)Proc Natl.Acad.Sci.USA 90(20)：9586-9590(Matsuoka等人，1993年，《美国国家科学院院刊》，第90卷，第20期，第9586-9590页)和Guevara-Garcia，et al.，(1993)Plant J.4(3)：495-505(Guevara-Garcia等人，1993年，《植物杂志》，第4卷，第3期，第495-505页)。如有必要，可对此类启动子进行修饰，用于弱表达。
叶偏好的启动子是本领域已知的。参见例如，Yamamoto，et al.，(1997)PlantJ.12(2)：255-265(Yamamoto等人，1997年，《植物杂志》，第12卷，第2期，第255-265页)；Kwon，et al.，(1994)Plant Physiol.105：357-67(Kwon等人，1994年，《植物生理学》，第105卷，第357-367页)；Yamamoto，et al.，(1994)Plant Cell Physiol.35(5)：773-778(Yamamoto等人，1994年，《植物细胞生理学》，第35卷，第5期，第773-778页)；Gotor，et al.，(1993)Plant J.3：509-18(Gotor等人，1993年，《植物杂志》，第3卷，第509-518页)；Orozco，et al.，(1993)Plant Mol.Biol.23(6)：1129-1138(Orozco等人，1993年，《植物分子生物学》，第23卷，第6期，第1129-1138页)以及Matsuoka，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(20)：9586-9590(Matsuoka等人，1993年，《美国国家科学院院刊》，第90卷，第20期，第9586-9590页)。
根偏好型启动子或者根特异性启动子是已知的，可选自许多可从文献得到的启动子，或者从各种相容的物种从头(de novo)分离。参见例如，Hire，et al.，(1992)PlantMol.Biol.20(2)：207-218(Hire等人，1992年，《植物分子生物学》，第20卷，第2期，第207-218页)(大豆根特异性谷氨酰胺合成酶基因)；Keller and Baumgartner，(1991)PlantCell 3(10)：1051-1061(Keller和Baumgartner，1991年，《植物细胞》，第3卷，第10期，第1051-1061页(法国菜豆的GRP 1.8基因中的根特异性控制元件)；Sanger，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.14(3)：433-443(Sanger等人，1990年，《植物分子生物学》，第14卷，第3期，第433-443页)(根瘤农杆菌的甘露氨酸合酶(MAS)基因的根特异性启动子)；和Miao，etal.，(1991)Plant Cell 3(1)：11-22(Miao等人，1991年，《植物细胞》，第3卷，第1期，第11-22页)(编码胞质谷氨酰胺合成酶(GS)的全长cDNA克隆，该酶在大豆的根和根瘤中表达)。另参见Bogusz et al.(1990)Plant Cell 2(7)：633-641(Bogusz等人，1990年，《植物细胞》，第2卷，第7期，第633-641页)，其中描述了从来自固氮非豆科植物榆科山黄麻(Parasponiaandersonii)和相关的非固氮非豆科植物鸡屎藤山麻黄(Trema tomentosa)的血红蛋白基因分离的两个根特异性启动子。将这些基因的启动子连接至β-葡糖醛酸酶报道基因并引入进非豆科植物烟草(Nicotiana tabacum)和豆科植物百脉根(Lotus corniculatus)二者中，在这两种情况中根特异性启动子活性得以保持。Leach和Aoyagi(1991)描述了他们对毛根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的高度表达的rolC和rolD根诱导基因的启动子的分析(参见Plant Science(Limerick)79(1)：69-76(《植物科学》，Limerick，第79卷，第1期，第69-76页))。他们得出结论认为，增强子和组织偏好的DNA决定子在那些启动子中是分离的。Teeri等人(1989)使用与lacZ的基因融合表明，编码章鱼氨酸合酶的农杆菌T-DNA基因在根尖的表皮中特别活跃，且TR2′基因在完整植物中是根特异性的并且通过叶组织中的创伤刺激，这是与杀昆虫或杀幼虫基因一起使用的特别理想的特性组合(参见EMBO J.8(2)：343-350(《欧洲分子生物学组织杂志》，第8卷，第2期，第343-350页))。与nptII(新霉素磷酸转移酶II)融合的TR1′基因显示了相似的特性。另外的根偏好启型动子包括VfENOD-GRP3基因启动子(Kuster，et al.，(1995)Plant Mol.Biol.29(4)：759-772(Kuster等人，1995年，《植物分子生物学》，第29卷，第4期，第759-772页))和rolB启动子(Capana，et al.，(1994)Plant Mol.Biol.25(4)：681-691(Capana等人，1994年，《植物分子生物学》，第25卷，第4期，第681-691页))。另参见以下各号美国专利：5,837,876、5,750,386、5,633,363、5,459,252、5,401,836、5,110,732和5,023，179。拟南芥根偏好型调控序列公开于US20130117883中。
“种子偏好的”启动子包括“种子特异性”启动子(这种启动子在种子发育期间活跃，例如种子贮藏蛋白的启动子)和“种子萌发”启动子(这种启动子在种子萌发期间活跃)。参见Thompson et al.(1989)BioEssays 10：108(Thompson等人，1989年，《生物学论文集》，第10卷，第108页)，该文献以引用方式并入本文。此类种子偏好的启动子包括但不限于Cim1(细胞分裂素诱导信息)基因启动子；cZ19B1(玉蜀黍19kDa玉米醇溶蛋白)基因启动子；和milps(肌醇-1-磷酸合酶)基因启动子(参见美国专利No.6,225,529，以引用的方式并入本文)。γ-玉米醇溶蛋白基因启动子和Glb-1基因启动子是胚乳特异性启动子。对于双子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于Kunitz胰蛋白酶抑制剂3(KTi3)(Jofuku andGoldberg，(1989)Plant Cell 1：1079-1093(Jofuku和Goldberg，1989年，《植物细胞》，第1卷，第1079-1093页))、菜豆β-菜豆素、油菜籽蛋白(napin)、β-伴大豆球蛋白、大豆球蛋白1、大豆凝集素、十字花科蛋白等等。对于单子叶植物而言，种子特异性启动子包括但不限于玉蜀黍15kDa玉米醇溶蛋白基因启动子、22kDa玉米醇溶蛋白基因启动子、27kDa玉米醇溶蛋白基因启动子、g-玉米醇溶蛋白基因启动子、糯性蛋白基因启动子、超甜蛋白1基因启动子、超甜蛋白2基因启动子、球蛋白1基因启动子等。另参见WO 2000/12733，其中公开了来自end1和end2基因的种子偏好启动子；该专利以引用方式并入本文。在双子叶植物中，种子特异性启动子包括但不限于来自拟南芥的种皮启动子pBAN；以及来自拟南芥的早期种子启动子p26、p63和p63tr(美国专利No.7,294,760和No.7,847,153)。在特定组织中具有“偏好”表达的启动子在该组织中表达的程度高于在至少一种其他植物组织中表达的程度。一些组织偏好型启动子几乎专门在特定组织中表达。
如果需要低水平表达，则要使用弱启动子。一般来讲，如本文所用的术语“弱启动子”指驱动编码序列以低水平表达的启动子。所谓“低水平表达”意指处于约1/1000个转录物至约1/100,000个转录物至约1/500,000个转录物的水平。或者，认识到术语“弱启动子”还涵盖了仅在少数细胞中而不在其他细胞中驱动表达从而造成总表达水平较低的启动子。如启动子驱动不可接受的高水平表达，则可缺失或者修饰启动子序列的一些部分以降低表达水平。
这种弱组成型启动子包括例如Rsyn7启动子的核心启动子(WO 1999/43838和美国专利No.6,072,050)、核心35S CaMV启动子等。其他组成型启动子包括例如美国专利No.5,608,149；No.5,608,144；No.5,604,121；No.5,569,597；No.5,466,785；No.5,399,680；No.5,268,463；No.5,608,142；和No.6，177,611中所公开的，以引用的方式并入本文。
以上启动子的列表并不意指是限制性的。任何适当的启动子都可用于所述实施例。
一般来讲，表达盒将包含用于选择经转化的细胞的选择性标记基因。选择性标记基因用于选择经转化的细胞或组织。标记基因包括编码抗生素抗性的基因，诸如那些编码新霉素磷酸转移酶II(NEO)和潮霉素磷酸转移酶(HPT)的基因，以及赋予对除草化合物的抗性的基因，所述除草化合物为例如草铵膦、溴苯腈、咪唑啉酮和2,4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D)。合适的选择性标记基因的另外例子包括但不限于编码对以下物质的抗性的基因：氯霉素(Herrera Estrella，et al.，(1983)EMBO J.2：987-992(Herrera Estrella等人，1983年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第2卷，第987-992页))；甲氨喋呤(Herrera Estrella，etal.，(1983)Nature 303：209-213(Herrera Estrella等人，1983年，《自然》，第303卷，第209-213页)以及Meijer，et al.，(1991)Plant Mol.Biol.16：807-820(Meijer等人，1991年，《植物分子生物学》，第16卷，第807-820页))；链霉素(Jones，et al.，(1987)Mol.Gen.Genet.210：86-91(Jones等人，1987年，《分子遗传学与普通遗传学》，第210卷，第86-91页))；壮观霉素(Bretagne-Sagnard，et al.，(1996)Transgenic Res.5：131-137(Bretagne-Sagnard等人，1996年，《转基因研究》，第5卷，第131-137页))；博莱霉素(Hille，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.7：171-176(Hille等人，1990年，《植物分子生物学》，第7卷，第171-176页))；磺胺(Guerineau，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.15：127-136(Guerineau等人，1990年，《植物分子生物学》，第15卷，第127-136页))；溴苯腈(Stalker，etal.，(1988)Science 242：419-423(Stalker等人，1988年，《科学》，第242卷，第419-423页))；草甘磷(Shaw，et al.，(1986)Science 233：478-481(Shaw等人，1986年，《科学》，第233卷，第478-481页)以及美国专利申请No.10/004,357和No.10/427,692)；草胺膦(DeBlock，et al.，(1987)EMBO J.6：2513-2518(DeBlock等人，1987年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第6卷，第2513-2518页))。主要参见：Yarranton(1992)Curr.Opin.Biotech.3：506-511(Yarranton，1992年，《生物技术当前述评》，第3卷，第506-511页)；Christopherson，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：6314-6318(Christopherson等人，1992年，《美国国家科学院院刊》，第89卷，第6314-6318页)；Yao，etal.，(1992)Cell 71：63-72(Yao等人，1992年，《细胞》，第71卷，第63-72页)；Reznikoff，(1992)Mol.Microbiol.6：2419-2422(Reznikoff，1992年，《分子微生物学》，第6卷，第2419-2422页)；Barkley，et al.，(1980)in The Operon，pp.177-220(Barkley等人，1980年，载于《操纵子》，第177-220页)；Hu，et al.，(1987)Cell 48：555-566(Hu等人，1987年，《细胞》，第48卷，第555-566页)；Brown，et al.，(1987)Cell 49：603-612(Brown等人，1987年，《细胞》，第49卷，第603-612页)；Figge，et al.，(1988)Cell 52：713-722(Figge等人，1988年，《细胞》，第52卷，第713-722页)；Deuschle，et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：5400-5404(Deuschle等人，1989年，《美国国家科学院院刊》，第86卷，第5400-5404页)；Fuerst，etal.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：2549-2553(Fuerst等人，1989年，《美国国家科学院院刊》，第86卷，第2549-2553页)；Deuschle，et al.，(1990)Science 248：480-483(Deuschle等人，1990年，《科学》，第248卷，第480-483页)；Gossen，(1993)Ph.D.Thesis，University of Heidelberg(Gossen，1993年，德国海德尔堡大学博士论文)；Reines，etal.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：1917-1921(Reines等人，1993年，《(美国国家科学院院刊》，第90卷，第1917-1921页)；Labow，et al.，(1990)Mol.Cell.Biol.10：3343-3356(Labow等人，1990年，《分子细胞生物学》，第10卷，第3343-3356页)；Zambretti，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3952-3956(Zambretti等人，1992年，《美国国家科学院院刊》，第89卷，第3952-3956页)；Baim，et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：5072-5076(Baim等人，1991年，《美国国家科学院院刊》，第88卷，第5072-5076页)；Wyborski，et al.，(1991)Nucleic Acids Res.19：4647-4653(Wyborski等人，1991年，《核酸研究》，第19卷，第4647-4653页)；Hillenand-Wissman，(1989)TopicsMol.Struc.Biol.10：143-162(Hillenand-Wissman，1989年，《(分子结构生物学主题》，第10卷，第143-162页)；Degenkolb，et al.，(1991)Antimicrob.Agents Chemother.35：1591-1595(Degenkolb等人，1991年，《抗微生物制剂与化疗》，第35卷，第1591-1595页)；Kleinschnidt，et al.，(1988)Biochemistry 27：1094-1104(Kleinschnidt等人，1988年，《生物化学》，第27卷，第1094-1104页)；Bonin，(1993)Ph.D.Thesis，University ofHeidelberg(Bonin，1993年，德国海德尔堡大学博士论文)；Gossen，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5547-5551(Gossen等人，1992年，《美国国家科学院院刊》，第89卷，第5547-5551页)；Oliva，et al.，(1992)Antimicrob.AgentsChemother.36：913-919(Oliva等人，1992年，《抗微生物制剂与化疗》，第36卷，第913-919页)；Hlavka，et al.，(1985)Handbook of Experimental Pharmacology，Vol.78(Springer-Verlag，Berlin)(Hlavka等人，1985年，《实验药理学手册》，第78卷，斯普林格出版社，柏林)以及Gill，etal.，(1988)Nature 334：721-724(Gill等人，1988年，《自然》，第334卷，第721-724页)。这些公开内容以引用的方式并入本文。
以上选择性标记基因的列表并不意指是限制性的。任何选择性标记基因都可用于本发明实施例。
植物转化
本发明实施例的方法涉及将多肽或多核苷酸引入到植物中。如本文所用，“引入”意指将多核苷酸或多肽呈递给植物，使得该序列能够进入植物细胞的内部。本发明实施例的方法不依赖于将多核苷酸或多肽引入植物中的具体方法，只要多核苷酸或多肽可进入植物的至少一个细胞的内部即可。将多核苷酸或多肽引入植物中的方法是本领域已知的，包括但不限于稳定转化方法、瞬时转化方法和病毒介导的转化方法。
如本文所用，“稳定转化”意指被引入到植物中的核苷酸构建体整合到了植物的基因组中，并能够被其后代继承。如本文所用，“瞬时转化”意指将多核苷酸引入植物中但它没有整合到植物的基因组中，或者意指将多肽引入植物中。如本文所用，“植物”是指整株植物、植物器官(例如，叶、茎、根等)、种子、植物细胞、繁殖体、胚及其子代。植物细胞可以是分化的或未分化的(例如，愈伤组织、悬浮培养细胞、原生质体、叶细胞、根细胞、韧皮部细胞和花粉)。
转化方案以及将核苷酸序列引入植物中的方案可以根据转化所靶向的植物或植物细胞的类型(即单子叶植物或双子叶植物)变动。将核苷酸序列引入到植物细胞中并随后插入到植物基因组中的合适方法，包括微注射(Crossway，et al.，(1986)Biotechniques4：320-334(Crossway等人，1986年，《生物技术》，第4卷，第320-334页))、电穿孔(Riggs，etal.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5602-5606(Riggs等人，1986年，《美国国家科学院院刊》，第83卷，第5602-5606页))、农杆菌介导转化(美国专利No.5,563,055和No.5,981,840)、直接基因转移(Paszkowski，et al.，(1984)EMBO J.3：2717-2722(Paszkowski等人，1984年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第3卷，第2717-2722页))和弹道粒子加速(参见例如美国专利No.4,945,050、No.5,879,918、No.5,886,244和No.5,932,782；Tomes，et al.，(1995)in Plant Cell，Tissue，and Organ Culture：Fundamental Methods，ed.Gamborgand Phillips，(Springer-Verlag，Berlin)(Tomes等人，1995年，载于《植物细胞、组织和器官培养：基本方法》，Gamborg和Phillips编辑，施普林格出版社，柏林)以及McCabe，et al.，(1988)Biotechnology 6：923-926(McCabe等人，1988年，《生物技术》，第6卷，第923-926页))和Lecl转化(WO 00/28058)。关于马铃薯转化，参见Tu et al.(1998)Plant MolecularBiology 37：829-838(Tu等人，1998年，《植物分子生物学》，第37卷，第829-838页)和Chonget al.(2000)Transgenic Research 9：71-78(Chong等人，2000年，《转基因研究》，第9卷，第71-78页)。另外的转化程序可见于Weissinger，et al.，(1988)Ann.Rev.Genet.22：421-477(Weissinger等人，1988年，《遗传学年评》，第22卷，第421-477页)；Sanford，et al.，(1987)Particulate Science and Technology 5：27-37(Sanford等人，1987年，《颗粒科学与技术》，第5卷，第27-37页)(洋葱)；Christou，et al.，(1988)Plant Physiol.87：671-674(Christou等人，1988年，《植物生理学》，第87卷，第671-674页)(大豆)；McCabe，et al.，(1988)Bio/Technology 6：923-926(McCabe等人，1988年，《生物/技术》，第6卷，第923-926页)(大豆)；Finer and McMullen，(1991)In Vitro Cell Dev.Biol.27P：175-182(Finer和McMullen，1991年，《体外细胞和发育生物学》，第27P卷，第175-182页)(大豆)；Singh，etal.，(1998)Theor.Appl.Genet.96：319-324(Singh等人，1998年，《理论和应用遗传学》，第96卷，第319-324页)(大豆)；Datta，et al.，(1990)Biotechnology 8：736-740(Datta等人，1990年，《生物技术》，第8卷，第736-740页)(水稻)；Klein，et al.，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：4305-4309(Klein等人，1988年，《美国国家科学院院刊》，第85卷，第4305-4309页)(玉蜀黍)；Klein，et al.，(1988)Biotechnology 6：559-563(Klein等人，1988年，《生物技术》，第6卷，第559-563页)(玉蜀黍)；美国专利No.5,240,855、No.5,322,783和No.5,324,646；Klein，et al.，(1988)Plant Physiol.91：440-444(Klein等人，1988年，《植物生理学》，第91卷，第440-444页)(玉蜀黍)；Fromm，et al.，(1990)Biotechnology 8：833-839(Fromm等人，1990年，《生物技术》，第8卷，第833-839页)(玉蜀黍)；Hooykaas-Van Slogteren，et al.，(1984)Nature(London)311：763-764(Hooykaas-Van Slogteren等人，1984年，《自然(伦敦)》，第311卷，第763-764页)；美国专利No.5,736,369(谷类植物)；Bytebier，et al.，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：5345-5349(Bytebier等人，1987年，《美国国家科学院院刊》，第84卷，第5345-5349页)(百合科(Liliaceae))；De Wet，et al.，(1985)in The Experimental Manipulation of OvuleTissues，ed.Chapman，et al.，(Longman，New York)，pp.197-209(De Wet等人，1985年，载于《胚珠组织的实验操作》，Chapman等人编辑，纽约朗文出版社，第197-209页)(花粉)；Kaeppler，et al.，(1990)Plant Cell Reports 9：415-418(Kaeppler等人，1990年，《植物细胞报道》，第9卷，第415-418页)和Kaeppler，et al.，(1992)Theor.Appl.Genet.84：560-566(Kaeppler等人，1992年，《理论与应用遗传学》，第84卷，第560-566页)(晶须介导的转化)；D′Halluin，et al.，(1992)Plant Cell 4：1495-1505(D′Halluin等人，1992年，《植物细胞》，第4卷，第1495-1505页)(电穿孔)；Li，et al.，(1993)Plant Cell Reports 12：250-255(Li等人，1993年，《植物细胞报道》，第12卷，第250-255页)以及Christou and Ford，(1995)Annals of Botany 75：407-413(Christou和Ford，1995年，《植物学年鉴》，第75卷，第407-413页)(水稻)；Osjoda，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：745-750(Osjoda等人，1996年，《自然生物技术》，第14卷，第745-750页)(根瘤农杆菌介导转化的玉蜀黍)，所有这些文献都以引用方式并入本文。
在具体的实施例中，所述实施例的序列可通过多种瞬时转化方法提供给植物。此类瞬时转化方法包括但不限于直接向植物中引入PIP-47多肽或其变体和片段，或者向植物中引入PIP-47多肽转录物。这类方法包括(例如)显微注射法或粒子轰击法。参见例如Crossway，et al.，(1986)Mol Gen.Genet.202：179-185(Crossway等人，1986年，《分子遗传学与普通遗传学》，第202卷，第179-185页)；Nomura，et al.，(1986)Plant Sci.44：53-58(Nomura等人，1986年，《植物科学》，第44卷，第53-58页)；Hepler，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.91：2176-2180(Hepler等人，1994年，《美国国家科学院院刊》，第91卷，第2176-2180页)和Hush，et al.，(1994)The Journal of Cell Science 107：775-784(Hush等人，1994年，《细胞科学杂志》，第107卷，第775-784页)，所有这些文献都以引用方式并入本文。或者，可使用本领域已知的技术将PIP-47多肽多核苷酸瞬时转化到植物中。此类技术包括利用病毒载体系统以及将多核苷酸以避免DNA随后释放的方式沉淀。因此，从粒子结合的DNA可发生转录，但其释放出来而整合进基因组中的频率则大大降低。此类方法包括使用包被有聚乙基亚胺(PEI；Sigma#P3143)的粒子。
用于在植物基因组中特定位置处靶向插入多核苷酸的方法是本领域已知的。在一个实施例中，在期望的基因组位置插入多核苷酸是使用位点特异性重组系统实现的。参见，例如，WO 1999/25821、WO 1999/25854、WO 1999/25840、WO 1999/25855和WO 1999/25853，上述专利以引用的方式并入本文。简而言之，可将本发明实施例的多核苷酸包含在转移盒中，该转移盒旁侧是两个不相同的重组位点。将转移盒引入植物中，该植物基因组中稳定掺入有靶位点，其中所述靶位点旁侧是两个与该转移盒的所述位点相对应的不相同重组位点。提供适当的重组酶，将转移盒整合在该靶标位点处。所关注的多核苷酸因此被整合在植物基因组中的特定染色体位置处。
植物转化载体可由实现植物转化所需的一个或多个DNA载体构成。例如，本领域通常的做法是采用由不止一个连续DNA区段构成的植物转化载体。这些载体在本领域中常常称为“二元载体”。二元载体以及具有辅助质粒的载体最常用于农杆菌介导的转化，其中实现有效转化所需的DNA区段的大小和复杂性是相当大的，并且将功能分摊到单独的DNA分子上是有利的。二元载体通常包含质粒载体，该质粒载体含有T-DNA转移所必需的顺式作用序列(比如左边界和右边界)、经工程改造能在植物细胞中表达的选择性标记以及“所关注基因”(经工程改造能在期望产生转基因植物的植物细胞中表达的基因)。这种质粒载体上还包含细菌复制所需的序列。顺式作用序列的排列方式允许其有效转移入植物细胞中并在其中表达。例如，选择性标记基因和杀虫基因位于左边界和右边界之间。通常第二质粒载体包含介导T-DNA从农杆菌转移到植物细胞的反式作用因子。按照本领域中所理解的，该质粒通常包含允许植物细胞被农杆菌感染并通过在边界序列处的切割以及vir介导的DNA转移来转移DNA的毒性功能(Vir基因)(Hellens and Mullineaux，(2000)Trends in PlantScience 5：446-451(Hellens和Mullineaux，2000年，《植物科学趋势》，第5卷，第446-451页))。若干种类型的农杆菌菌株(例如，LBA4404、GV3101、EHA101、EHA105等)可用于植物转化。在使用其他方法(比如微喷射、显微注射、电穿孔、聚乙二醇等等)时，该第二质粒载体不是转化植物所必需的。
一般而言，植物转化方法涉及将异源DNA转移到靶植物细胞(例如，不成熟的或成熟的胚、悬浮培养物、未分化的愈伤组织、原生质体等等)中，随后应用最大阈值水平的合适选择物(取决于选择性标记基因)来从未转化细胞团块群中回收已转化的植物细胞。在将异源外来DNA整合入植物细胞中后，然后在培养基中应用最大阈值水平的合适选择物以杀死未转化的细胞，并通过定期转移至新鲜培养基来分离和增殖从该选择处理中存活的据推测已转化的细胞。通过连续传代和使用合适的选择物进行测试，可甄别和增殖用所述质粒载体转化的细胞。然后，分子和生物化学方法可用于证实整合到转基因植物的基因组中的所关注异源基因的存在。
通常将外植体转移至新鲜供应的相同培养基中并进行常规培养。随后，在放置于补充了最大阈值水平的选择剂的再生培养基上后，已转化的细胞被分化成苗。然后将所述苗转移到选择性生根培养基中，以回收生根的苗或小植株。然后将转基因小植株生长成成熟的植株并产生可育种子(例如，Hiei，et al.，(1994)The Plant Journal 6：271-282(Hiei等人，1994年，《植物杂志》，第6卷，第271-282页)；Ishida，et al.，(1996)NatureBiotechnology 14：745-750(Ishida等人，1996年，《自然生物技术》，第14卷，第745-750页))。通常将外植体转移至新鲜供应的相同培养基中并进行常规培养。有关产生转基因植物的技术和方法的一般描述可见于Ayres and Park，(1994)Critical Reviews in PlantScience 13：219-239(Ayres和Park，1994年，《植物科学评论》，第13卷，第219-239页)和Bommineni and Jauhar，(1997)Maydica 42：107-120(Bommineni和Jauhar，1997年，《Maydica》，第42卷，第107-120页)。由于经转化的材料包含许多细胞，在任何一片目标愈伤组织或组织或细胞群中都存在已转化的和未转化的细胞。杀死未转化细胞并允许已转化细胞增殖的能力产生了经转化的植物培养物。通常，去除未转化细胞的能力限制了快速回收经转化的植物细胞并成功产生转基因植物。
可依据常规方式将已转化的细胞培育成植株。参见例如McCormick，et al.，(1986)Plant Cell Reports 5：81-84(McCormick等人，1986年，《植物细胞报道》，第5卷，第81-84页)。然后可栽培这些植株并用同一转化株系或不同的株系进行授粉，并鉴定出具有所需表型特征的组成型或者诱导型表达的所得杂交种。可以培育两代或更多代以确保稳定保持和遗传所需表型特征的表达，然后收获种子以确保已经实现所需表型特征的表达。
可通过使植物与病毒或者病毒核酸接触而将本发明实施例的核苷酸序列提供给植物。通常，这种方法涉及将所关注的核苷酸构建体掺入到病毒DNA或RNA分子内。已经认识到，本发明实施例的重组蛋白最初可作为病毒聚蛋白的一部分来合成，其以后可通过体内或体外蛋白水解加工而产生所需PIP-47多肽。还认识到，这种包含本发明实施例的PIP-47多肽的氨基酸序列的至少一部分的病毒聚蛋白可具有所需的杀虫活性。这种病毒聚蛋白及其编码核苷酸序列为本发明实施例所涵盖。给植物提供核苷酸构建体并在植物中产生所编码的蛋白质的方法(涉及病毒DNA或RNA分子)是本领域已知的。参见例如美国专利No.5,889,191、No.5,889,190、No.5,866,785、No.5,589,367和No.5,316,931，将所述专利以引用的方式并入本文。
转化叶绿体的方法是本领域已知的。参见例如Svab，et al.，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8526-8530(Svab等人，1990年，《美国国家科学院院刊》，第87卷，第8526-8530页)；Svab and Maliga，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：913-917(Svab和Maliga，1993年，《美国国家科学院院刊》，第90卷，第913-917页)；Svab andMaliga，(1993)EMBO J.12：601-606(Svab和Maliga，1993年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第12卷，第601-606页)。该方法依赖于粒子枪输送含选择性标记的DNA以及通过同源重组将DNA靶向质体基因组。此外，质体转化可以通过细胞核编码和质体介导的RNA聚合酶的组织偏好表达来反式激活沉默的质体携带的转基因而完成。这种系统已经在McBride，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：7301-7305(McBride等人，1994年，《美国国家科学院院刊》，第91卷，第7301-7305页)中进行了报道。
本发明实施例还涉及本发明实施例的经转化植物的植物繁殖材料，包括但不限于种子、块茎、球茎、鳞茎、叶、以及根和苗的插条。
本发明实施例可用于转化任何植物物种，包括但不限于单子叶植物和双子叶植物。所关注的植物的例子包括但不限于玉米(Zea mays)、芸苔属物种(Brassica sp.)(例如甘蓝型油菜(B.napus)、芜菁(B.rapa)、芥菜(B.juncea))，特别是可用作种子油来源的那些芸苔属物种；苜蓿(Medicago sativa)、水稻(Oryza sativa)、黑麦(Secale cereale)、高粱(Sorghum bicolor,Sorghum vulgare)、粟(例如珍珠粟(Pennisetum glaucum)、黄米(Panicum miliaceum)、谷子(Setaria italica)、龙爪稷(Eleusine coracana))、向日葵(Helianthus annuus)、红花(Carthamus tinctorius)、小麦(Triticum aestivum)、大豆(Glycine max)、烟草(Nicotiana tabacum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、花生(Arachishypogaea)、棉花(海岛棉(Gossypium barbadense)、陆地棉(Gossypium hirsutum))、甘薯(Ipomoea batatus)、木薯(Manihot esculenta)、咖啡(Coffea spp.)、椰子(Cocosnucifera)、菠萝(Ananas comosus)、柑橘(Citrus spp.)、可可(Theobroma cacao)、茶(Camellia sinensis)、香蕉(Musa spp.)、鳄梨(Persea americana)、无花果(Ficuscasica)、番石榴(Psidium guajava)、芒果(Mangifera indica)、橄榄(Olea europaea)、木瓜(Carica papaya)、腰果(Anacardium occidentale)、澳洲坚果(Macadamiaintegrifolia)、杏仁(Prunus amygdalus)、糖用甜菜(Beta vulgaris)、甘蔗(Saccharumspp.)、燕麦、大麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
蔬菜包括番茄(Lycopersicon esculentum)、莴苣(例如Lactuca sativa)、青豆(Phaseolus vulgaris)、利马豆(Phaseolus limensis)、豌豆(香豌豆属(Lathyrus)物种)和黄瓜属(Cucumis)的成员比如黄瓜(C.sativus)、香瓜(C.cantalupensis)和甜瓜(C.melo)。观赏植物包括杜鹃(杜鹃花属(Rhododendron)物种)、八仙花(Macrophyllahydrangea)、朱槿(Hibiscus rosasanensis)、玫瑰(蔷薇属(Rosa)物种)、郁金香(郁金香属(Tulipa)物种)、水仙(水仙属(Narcissus)物种)、矮牵牛(Petunia hybrida)、康乃馨(Dianthus caryophyllus)、一品红(Euphorbia pulcherrima)和菊花。可用于实施本发明实施例的针叶树类包括例如松树，如火炬松(Pinus taeda)、沼泽松(Pinus elliotii)、美国黄松(Pinus ponderosa)、黑松(Pinus contorta)和蒙特利松(Pinus radiata)；黄杉(Pseudotsuga menziesii)；西铁杉(Tsuga canadensis)；北美云杉(Picea glauca)；红杉(Sequoia sempervirens)；枞树(true firs)如银枞(Abies amabilis)和胶枞(Abiesbalsamea)；和雪松如西部红雪松(Thuja plicata)和阿拉斯加黄雪松(Chamaecyparisnootkatensis)。本发明实施例的植物包括作物植物(例如玉米、苜蓿、向日葵、芸苔属植物、大豆、棉花、红花、花生、高粱、小麦、粟、烟草等等)，例如玉米和大豆植物。
草坪草包括，但不限于：一年生早熟禾(Poa annua)；一年生黑麦草(Loliummultiflorum)；加拿大早熟禾(Poa compressa)；紫羊茅(Festuca rubra)；细弱翦股颖(Agrostis tenuis)；匍匐翦股颖(Agrostis palustris)；光穗冰草(Agropyrondesertorum)；扁穗冰草(Agropyron cristatum)；硬羊茅(Festuca longifolia)；草地早熟禾(Poa pratensis)；果园草(Dactylis glomerata)；多年生黑麦草(Lolium perenne)；红狐茅(Festuca rubra)；红顶草(Agrostis alba)；粗茎早熟禾(Poa trivialis)；羊茅(Festuca ovina)；无芒雀麦草(Bromus inermis)；高羊茅(Festuca arundinacea)；梯牧草(Phleum pratense)；绒毛翦股颖(Agrostis canina)；碱茅草(Puccinellia distans)；蓝茎冰草(Agropyron smithii)；百慕大草(Cynodon spp.)；圣奥古斯丁草(Stenotaphrumsecundatum)；结缕草(Zoysia spp.)；百喜草(Paspalum notatum)；地毯草(Axonopusaffinis)；百足草(Eremochloa ophiuroides)；狼尾草(Pennisetum clandesinuTm)；海滨雀稗(Paspalum vaginatum)；蓝格兰马草(Bouteloua gracilis)；野牛草(Buchloedactyloids)；垂穗草(Bouteloua curtipendula)。
所关注的植物包括谷物植物(其提供所关注的种子)、油籽植物和豆科植物。所关注的种子包括谷物种子，如玉米、小麦、大麦、水稻、高粱、黑麦、粟等。油籽植物包括棉花、大豆、红花、向日葵、芸苔属植物、玉蜀黍、苜蓿、棕榈、椰子、亚麻、蓖麻、橄榄等。豆科植物包括豆类和豌豆。豆类包括瓜尔豆、槐豆、胡芦巴、大豆、四季豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、小扁豆、鹰嘴豆等。
植物转化的评估
在将异源外来DNA引入到植物细胞中以后，通过各种方法如与整合基因有关的核酸、蛋白质和代谢物的分析来证实异源基因在植物基因组中的转化或整合。
PCR分析是在移种到土壤之前筛选早期经转化的细胞、组织或苗中是否存在掺入基因的快速方法(Sambrook and Russell，(2001)Molecular Cloning：A LaboratoryManual.Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY(Sambrook和Russell，2001年，《分子克隆：实验室手册》，冷泉港实验室出版社，纽约冷泉港))。使用对所关注基因或农杆菌属载体背景等特异的寡核苷酸引物进行PCR。
植物转化可以通过基因组DNA的DNA印迹分析来确定(Sambrook和Russell，(2001)(出处同上))。一般而言，从转化体提取总DNA，用适当的限制性酶消化，在琼脂糖凝胶中进行分级分离并且转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。然后根据标准技术(Sambrook和Russell，(2001)(出处同上))，可以用例如放射性标记的32P靶DNA片段探测所述膜或“印迹”，以证实被引入的基因在植物基因组中的整合。
在RNA印迹分析中，根据本领域常规使用的标准程序(Sambrook和Russell，(2001)(出处同上))，从转化体的特定组织分离RNA，所述RNA在甲醛琼脂糖凝胶中进行分级分离，并且印迹到尼龙滤膜上。然后通过本领域内已知的方法(Sambrook和Russell，(2001)(出处同上))，使所述滤膜与源自杀虫基因的放射性探针杂交，来检测由杀虫基因编码的RNA的表达。
根据标准程序(Sambrook和Russell，(2001)(出处同上))，使用与存在于PIP-47多肽上的一个或多个表位结合的抗体，可以对转基因植物进行蛋白质印迹、生化分析等，以证实存在由杀虫基因编码的蛋白质。
转基因植物中性状的堆叠
转基因植物可包含本文所公开的一个或多个杀昆虫多核苷酸与一个或多个另外的多核苷酸的堆叠，从而导致多个多肽序列的产生或抑制。包含多核苷酸序列的堆叠的转基因植物可通过传统育种方法或通过遗传工程方法中的一者或两者来获得。这些方法包括但不限于培育各自包含所关注多核苷酸的单独品系，用后续基因转化包含本文所公开的基因的转基因植物，以及将基因共转化进单个植物细胞中。如本文所用，术语“堆叠”包括具有存在于同一植物中的多种性状(即，两种性状均掺入核基因组中、一种性状掺入核基因组中且一种性状掺入质体的基因组中或者两种性状均掺入质体的基因组中)。在一个非限制性例子中，“堆叠性状”包含序列彼此物理相邻的分子堆叠。本文所用的性状是指衍生自特定序列或序列群组的表型。可使用包含多个基因的单个转化载体或单独地携带于多个载体上的基因进行基因的共转化。如果序列通过遗传转化植株来叠加，则所关注的多核苷酸序列可在任何时间以任何顺序进行组合。可以用共转化方案将性状与所关注多核苷酸同时引入，所述多核苷酸由转化盒的任何组合提供。例如，如果将要引入两条序列，则可将该两条序列包含在单独的转化盒中(反式)或包含在同一转化盒中(顺式)。可通过相同启动子或不同启动子驱动所述序列表达。在某些情况中，可能期望引入会抑制所关注的多核苷酸的表达的转化盒。这可以与其他抑制盒或过表达盒的任何组合进行组合以在植物中生成所需的性状组合。还认识到，可使用位点特异性重组系统在所需的基因组位置堆叠多核苷酸序列。参见，例如，WO 1999/25821、WO 1999/25854、WO 1999/25840、WO 1999/25855和WO 1999/25853，上述专利以引用的方式并入本文。
在一些实施例中，编码单独的或与一种或多种另外的昆虫抗性性状堆叠的本文所公开的PIP-47多肽的多核苷酸，可与一种或多种另外的投入性状(例如，除草剂抗性、真菌抗性、病毒抗性或胁迫耐受性、抗病性、雄性不育、茎秆强度等等)或产出性状(例如，增加的产量、改性淀粉、改善的油分布、平衡的氨基酸、高赖氨酸或甲硫氨酸、增强的消化性、改善的纤维质量、抗旱性等等)堆叠。因此，可以使用多核苷酸实施例来提供具有改善的作物质量的完整农艺学方案，所述方案能够灵活地且成本有效地控制许多农艺学害虫。
可用于堆叠的转基因包括但不限于：
1.赋予对昆虫或病害的抗性并编码以下各方面的转基因：
(A)植物抗病基因。植物防御往往由该植物中抗病基因(R)的产物与病原体中相应的无毒性(Avr)基因的产物之间的特异性相互作用所激活。可用克隆的抗性基因转化植物品种，以工程构建出对特定的病原体株系有抗性的植物。参见例如Jones，et al.，(1994)Science 266：789(Jones等人，1994年，《科学》，第266卷，第789页)(克隆番茄Cf-9基因用于抵抗黄枝孢菌(Cladosporium fulvum))；Martin，et al.，(1993)Science 262：1432(Martin等人，1993年，《科学》，第262卷，第1432页)(番茄Pto基因，用于抵抗丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomato)，编码蛋白激酶)；Mindrinos，etal.，(1994)Cell 78：1089(Mindrinos等人，1994年，《细胞》，第78卷，第1089页)(拟南芥RSP2基因，用于抵抗丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)；McDowell and Woffenden，(2003)Trends Biotechnol.21(4)：178-83(McDowell和Woffenden，2003年，《生物技术趋势》，第21卷，第4期，第178-183页)以及Toyoda，et al.，(2002)Transgenic Res.11(6)：567-82(Toyoda等人，2002年，《转基因研究》，第11卷，第6期，第567-582页))。抗病植物是与野生型植物相比更能抵抗病原体的植物。
(B)编码苏云金芽孢杆菌蛋白、其衍生物或模拟其的合成多肽的基因。参见例如Geiser，et al.，(1986)Gene 48：109(Geiser等人，1986年，《基因》，第48卷，第109页)，其公开了Btδ-内毒素基因的克隆和核苷酸序列。此外，编码δ-内毒素基因的DNA分子可购自马里兰州罗克维尔市(Rockville，Md.)的美国模式培养物保藏所，例如登录号40098、67136、31995和31998。经遗传工程改造的苏云金芽孢杆菌转基因的其他非限制性例子在以下专利和专利申请中给出并为此目的以引用方式并入本文：美国专利No.5,188,960、No.5,689,052、No.5,880,275、No.5,986,177、No.6,023,013、No.6,060,594、No.6,063,597、No.6,077,824、No.6,620,988、No.6,642,030、No.6,713,259、No.6,893,826、No.7,105,332、No.7，179,965、No.7,208,474、No.7,227,056、No.7,288,643、No.7,323,556、No.7,329,736、No.7,449,552、No.7,468,278、No.7,510,878、No.7,521,235、No.7,544,862、No.7,605,304、No.7,696,412、No.7,629,504、No.7,705,216、No.7,772,465、No.7,790,846、No.7,858,849和WO1991/14778、WO 1999/31248、WO 2001/12731、WO 1999/24581和WO1997/40162。
也可堆叠编码杀虫蛋白的基因，包括但不限于：来自假单胞菌属物种的杀昆虫蛋白，诸如PSEEN3174(Monalysin，(2011)PLoS Pathogens，7：1-13(Monalysin，2011年，《公共科学图书馆病原学》，第7卷，第1-13页))；来自生防假单胞菌菌株CHA0和Pf-5(之前的荧光假单胞菌)的杀昆虫蛋白(Pechy-Tarr，(2008)Environmental Microbiology 10：2368-2386(Pechy-Tarr，2008年，《环境微生物学》，第10卷，第2368-2386页；GenBank登录号EU400157)；来自台湾假单胞菌的杀昆虫蛋白(Liu，et al.，(2010)J.Agric.Food Chem.58：12343-12349(Liu等人，2010年，《农业与食品化学杂志》，第58卷，第12343-12349页))以及来自类产碱假单胞菌的杀昆虫蛋白(Zhang，et al.，(2009)Annals of Microbiology 59：45-50(Zhang等人，2009年，《微生物学年报》，第59卷，第45-50页)和Li，et al.，(2007)Plant Cell Tiss.Organ Cult.89：159-168(Li等人，2007年，《植物细胞、组织与器官培养》，第89卷，第159-168页))；来自发光杆菌属物种和致病杆菌属物种的杀昆虫蛋白(Hinchliffe，et al.，(2010)The Open Toxinology Journal 3：101-118(Hinchliffe等人，2010年，《开放毒素学杂志》，第3卷，第101-118页)和Morgan，et al.，(2001)Appliedand Envir.Micro.67：2062-2069(Morgan等人，2001年，《应用与环境微生物学》，第67卷，第2062-2069页))；美国专利No.6,048,838和美国专利No.6,379,946；美国序列号13792861的PIP-1多肽；美国序列号13/800233的AfIP-1A和/或AfIP-1B多肽；美国序列号13/839702的PHI-4多肽；以及δ-内毒素，包括但不限于Cry1、Cry2、Cry3、Cry4、Cry5、Cry6、Cry7、Cry8、Cry9、Cry10、Cty11、Cry12、Cry13、Cru14、Cry15、Cry16、Cry17、Cry18、Cry19、Cry20、Cry21、Cry22、Cry23、Cry24、Cry25、Cry26、Cry27、Cry 28、Cry 29、Cry30、Cry31、Cry32、Cry33、Cry34、Cry35、Cry36、Cry37、Cry38、Cry39、Cry40、Cry41、Cry42、Cry43、Cry44、Cry45、Cry46、Cry47、Cry49、Cry 51和Cry55类δ-内毒素基因以及苏云金芽孢杆菌溶细胞Cyt1和Cyt2基因。这些类别的苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白的成员包括但不限于Cry1Aa1(登录号AAA22353)、Cry1Aa2(登录号AAA22552)、Cry1Aa3(登录号BAA00257)、Cry1Aa4(登录号CAA31886)、Cry1Aa5(登录号BAA04468)、Cry1Aa6(登录号AAA86265)、Cry1Aa7(登录号AAD46139)、Cry1Aa8(登录号I26149)、Cry1Aa9(登录号BAA77213)、Cry1Aa10(登录号AAD55382)、Cry1Aa11(登录号CAA70856)、Cry1Aa12(登录号AAP80146)、Cry1Aa13(登录号AAM44305)、Cry1Aa14(登录号AAP40639)、Cry1Aa15(登录号AAY66993)、Cry1Aa16(登录号HQ439776)、Cry1Aa17(登录号HQ439788)、Cry1Aa18(登录号HQ439790)、Cry1Aa19(登录号HQ685121)、Cry1Aa20(登录号JF340156)、Cry1Aa21(登录号JN651496)、Cry1Aa22(登录号KC158223)、Cry1Ab1(登录号AAA22330)、Cry1Ab2(登录号AAA22613)、Cry1Ab3(登录号AAA22561)、Cry1Ab4(登录号BAA00071)、Cry1Ab5(登录号CAA28405)、Cry1Ab6(登录号AAA22420)、Cry1Ab7(登录号CAA31620)、Cry1Ab8(登录号AAA22551)、Cry1Ab9(登录号CAA38701)、Cry1Ab10(登录号A29125)、Cry1Ab11(登录号I12419)、Cry1Ab12(登录号AAC64003)、Cry1Ab13(登录号AAN76494)、Cry1Ab14(登录号AAG16877)、Cry1Ab15(登录号AAO13302)、Cry1Ab16(登录号AAK55546)、Cry1Ab17(登录号AAT46415)、Cry1Ab18(登录号AAQ88259)、Cry1Ab19(登录号AAW31761)、Cry1Ab20(登录号ABB72460)、Cry1Ab21(登录号ABS18384)、Cry1Ab22(登录号ABW87320)、Cry1Ab23(登录号HQ439777)、Cry1Ab24(登录号HQ439778)、Cry1Ab25(登录号HQ685122)、Cry1Ab26(登录号HQ847729)、Cry1Ab27(登录号JN135249)、Cry1Ab28(登录号JN135250)、Cry1Ab29(登录号JN135251)、Cry1Ab30(登录号JN135252)、Cry1Ab31(登录号JN135253)、Cry1Ab32(登录号JN135254)、Cry1Ab33(登录号AAS93798)、Cry1Ab34(登录号KC156668)、Cry1Ab样(登录号AAK14336)、Cry1Ab样(登录号AAK14337)、Cry1Ab样(登录号AAK14338)、Cry1Ab样(登录号ABG88858)、Cry1Ac1(登录号AAA22331)、Cry1Ac2(登录号AAA22338)、Cry1Ac3(登录号CAA38098)、Cry1Ac4(登录号AAA73077)、Cry1Ac5(登录号AAA22339)、Cry1Ac6(登录号AAA86266)、Cry1Ac7(登录号AAB46989)、Cry1Ac8(登录号AAC44841)、Cry1Ac9(登录号AAB49768)、Cry1Ac10(登录号CAA05505)、Cry1Ac11(登录号CAA10270)、Cry1Ac12(登录号I12418)、Cry1Ac13(登录号AAD38701)、Cry1Ac14(登录号AAQ06607)、Cry1Ac15(登录号AAN07788)、Cry1Ac16(登录号AAU87037)、Cry1Ac17(登录号AAX18704)、Cry1Ac18(登录号AAY88347)、Cry1Ac19(登录号ABD37053)、Cry1Ac20(登录号ABB89046)、Cry1Ac21(登录号AAY66992)、Cry1Ac22(登录号ABZ01836)、Cry1Ac23(登录号CAQ30431)、Cry1Ac24(登录号ABL01535)、Cry1Ac25(登录号FJ513324)、Cry1Ac26(登录号FJ617446)、Cry1Ac27(登录号FJ617447)、Cry1Ac28(登录号ACM90319)、Cry1Ac29(登录号DQ438941)、Cry1Ac30(登录号GQ227507)、Cry1Ac31(登录号GU446674)、Cry1Ac32(登录号HM061081)、Cry1Ac33(登录号GQ866913)、Cry1Ac34(登录号HQ230364)、Cry1Ac35(登录号JF340157)、Cry1Ac36(登录号JN387137)、Cry1Ac37(登录号JQ317685)、Cry1Ad1(登录号AAA22340)、Cry1Ad2(登录号CAA01880)、Cry1Ae1(登录号AAA22410)、Cry1Af1(登录号AAB82749)、Cry1Ag1(登录号AAD46137)、Cry1Ah1(登录号AAQ14326)、Cry1Ah2(登录号ABB76664)、Cry1Ah3(登录号HQ439779)、Cry1Ai1(登录号AAO39719)、Cry1Ai2(登录号HQ439780)、Cry1A样(登录号AAK14339)、Cry1Ba1(登录号CAA29898)、Cry1Ba2(登录号CAA65003)、Cry1Ba3(登录号AAK63251)、Cry1Ba4(登录号AAK51084)、Cry1Ba5(登录号ABO20894)、Cry1Ba6(登录号ABL60921)、Cry1Ba7(登录号HQ439781)、Cry1Bb1(登录号AAA22344)、Cry1Bb2(登录号HQ439782)、Cry1Bc1(登录号CAA86568)、Cry1Bd1(登录号AAD10292)、Cry1Bd2(登录号AAM93496)、Cry1Be1(登录号AAC32850)、Cry1Be2(登录号AAQ52387)、Cry1Be3(登录号ACV96720)、Cry1Be4(登录号HM070026)、Cry1Bf1(登录号CAC50778)、Cry1Bf2(登录号AAQ52380)、Cry1Bg1(登录号AAO39720)、Cry1Bh1(登录号HQ589331)、Cry1Bi1(登录号KC156700)、Cry1Ca1(登录号CAA30396)、Cry1Ca2(登录号CAA31951)、Cry1Ca3(登录号AAA22343)、Cry1Ca4(登录号CAA01886)、Cry1Ca5(登录号CAA65457)、Cry1Ca6[1](登录号AAF37224)、Cry1Ca7(登录号AAG50438)、Cry1Ca8(登录号AAM00264)、Cry1Ca9(登录号AAL79362)、Cry1Ca10(登录号AAN16462)、Cry1Ca11(登录号AAX53094)、Cry1Ca12(登录号HM070027)、Cry1Ca13(登录号HQ412621)、Cry1Ca14(登录号JN651493)、Cry1Cb1(登录号M97880)、Cry1Cb2(登录号AAG35409)、Cry1Cb3(登录号ACD50894)、Cry1Cb样(登录号AAX63901)、Cry1Da1(登录号CAA38099)、Cry1Da2(登录号I76415)、Cry1Da3(登录号HQ439784)、Cry1Db1(登录号CAA80234)、Cry1Db2(登录号AAK48937)、Cry1Dc1(登录号ABK35074)、Cry1Ea1(登录号CAA37933)、Cry1Ea2(登录号CAA39609)、Cry1Ea3(登录号AAA22345)、Cry1Ea4(登录号AAD04732)、Cry1Ea5(登录号A15535)、Cry1Ea6(登录号AAL50330)、Cry1Ea7(登录号AAW72936)、Cry1Ea8(登录号ABX11258)、Cry1Ea9(登录号HQ439785)、Cry1Ea10(登录号ADR00398)、Cry1Ea11(登录号JQ652456)、Cry1Eb1(登录号AAA22346)、Cry1Fa1(登录号AAA22348)、Cry1Fa2(登录号AAA22347)、Cry1Fa3(登录号HM070028)、Cry1Fa4(登录号HM439638)、Cry1Fb1(登录号CAA80235)、Cry1Fb2(登录号BAA25298)、Cry1Fb3(登录号AAF21767)、Cry1Fb4(登录号AAC10641)、Cry1Fb5(登录号AAO13295)、Cry1Fb6(登录号ACD50892)、Cry1Fb7(登录号ACD50893)、Cry1Ga1(登录号CAA80233)、Cry1Ga2(登录号CAA70506)、Cry1Gb1(登录号AAD10291)、Cry1Gb2(登录号AAO13756)、Cry1Gc1(登录号AAQ52381)、Cry1Ha1(登录号CAA80236)、Cry1Hb1(登录号AAA79694)、Cry1Hb2(登录号HQ439786)、Cry1H样(登录号AAF01213)、Cry1Ia1(登录号CAA44633)、Cry1Ia2(登录号AAA22354)、Cry1Ia3(登录号AAC36999)、Cry1Ia4(登录号AAB00958)、Cry1Ia5(登录号CAA70124)、Cry1Ia6(登录号AAC26910)、Cry1Ia7(登录号AAM73516)、Cry1Ia8(登录号AAK66742)、Cry1Ia9(登录号AAQ08616)、Cry1Ia10(登录号AAP86782)、Cry1Ia11(登录号CAC85964)、Cry1Ia12(登录号AAV53390)、Cry1Ia13(登录号ABF83202)、Cry1Ia14(登录号ACG63871)、Cry1Ia15(登录号FJ617445)、Cry1Ia16(登录号FJ617448)、Cry1Ia17(登录号GU989199)、Cry1Ia18(登录号ADK23801)、Cry1Ia19(登录号HQ439787)、Cry1Ia20(登录号JQ228426)、Cry1Ia21(登录号JQ228424)、Cry1Ia22(登录号JQ228427)、Cry1Ia23(登录号JQ228428)、Cry1Ia24(登录号JQ228429)、Cry1Ia25(登录号JQ228430)、Cry1Ia26(登录号JQ228431)、Cry1Ia27(登录号JQ228432)、Cry1Ia28(登录号JQ228433)、Cry1Ia29(登录号JQ228434)、Cry1Ia30(登录号JQ317686)、Cry1Ia31(登录号JX944038)、Cry1Ia32(登录号JX944039)、Cry1Ia33(登录号JX944040)、Cry1Ib1(登录号AAA82114)、Cry1Ib2(登录号ABW88019)、Cry1Ib3(登录号ACD75515)、Cry1Ib4(登录号HM051227)、Cry1Ib5(登录号HM070028)、Cry1Ib6(登录号ADK38579)、Cry1Ib7(登录号JN571740)、Cry1Ib8(登录号JN675714)、Cry1Ib9(登录号JN675715)、Cry1Ib10(登录号JN675716)、Cry1Ib11(登录号JQ228423)、Cry1Ic1(登录号AAC62933)、Cry1Ic2(登录号AAE7169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δ-内毒素的例子还包括但不限于美国专利No.5,880,275和No.7,858,849的Cry1A蛋白；美国专利No.8,304,604和8,304,605的DIG-3或DIG-11毒素(Cry蛋白诸如Cry1A的α-螺旋1和/或α-螺旋2变体的N端缺失)；美国专利申请No.10/525,318的Cry1B；美国专利No.6,033,874的Cry1C；美国专利No.5,188,960、No.6,218,188的Cry1F；美国专利No.7,070,982、No.6,962,705和No.6,713,063的Cry1A/F嵌合体)；美国专利No.7,064,249的Cry2蛋白，诸如Cry2Ab蛋白)；Cry3A蛋白，包括但不限于经工程改造的杂合杀昆虫蛋白(eHIP)，其通过融合至少两个不同Cry蛋白的可变区和保守区的独特组合而形成(美国专利申请公布No.2010/0017914)；美国专利No.7,329,736、No.7,449,552、No.7,803,943、No.7,476,781、No.7,105,332、No.7,378,499和No.7,462,760的Cry4蛋白、Cry5蛋白、Cry6蛋白、Cry8蛋白；Cry9蛋白，诸如Cry9A、Cry9B、Cry9C、Cry9D、Cry9E和Cry9F家族的成员；Naimov，etal.，(2008)Applied and Environmental Microbiology 74：7145-7151(Naimov等人，2008年，《应用与环境微生物学》，第74卷，第7145-7151页)的Cry15蛋白；美国专利No.6,127,180、No.6,624,145和No.6,340,593的Cry22、Cry34Ab1蛋白；美国专利No.6,248,535、No.6,326,351、No.6,399,330、No.6,949,626、No.7,385,107和No.7,504,229的CryET33和CryET34蛋白；美国专利公布No.2006/0191034、No.2012/0278954和PCT公布No.WO 2012/139004的CryET33和CryET34同源物；美国专利No.6,083,499、No.6,548,291和No.6,340,593的Cry35Ab1蛋白；Cry46蛋白；Cry 51蛋白；Cry二元毒素；TIC901或相关毒素；US 2008/0295207的TIC807；PCT US 2006/033867的ET29、ET37、TIC809、TIC810、TIC812、TIC127、TIC128；美国专利No.8,236,757的AXMI-027、AXMI-036和AXMI-038；US7,923,602的AXMI-031、AXMI-039、AXMI-040、AXMI-049；WO 2006/083891的AXMI-018、AXMI-020和AXMI-021；WO2005/038032的AXMI-010；WO 2005/021585的AXMI-003；US 2004/0250311的AXMI-008；US2004/0216186的AXMI-006；US 2004/0210965的AXMI-007；US 2004/0210964的AXMI-009；US2004/0197917的AXMI-014；US 2004/0197916的AXMI-004；WO 2006/119457的AXMI-028和AXMI-029；WO 2004/074462的AXMI-007、AXMI-008、AXMI-0080rf2、AXMI-009、AXMI-014和AXMI-004；美国专利No.8,084,416的AXMI-150；US20110023184的AXMI-205；US 2011/0263488的AXMI-011、AXMI-012、AXMI-013、AXMI-015、AXMI-019、AXMI-044、AXMI-037、AXMI-043、AXMI-033、AXMI-034、AXMI-022、AXMI-023、AXMI-041、AXMI-063和AXMI-064；US 2010/0197592的AXMI-R1和相关蛋白；WO 2011/103248的AXMI221Z、AXMI222z、AXMI223z、AXMI224z和AXMI225z；WO11/103247的AXMI218、AXMI219、AXMI220、AXMI226、AXMI227、AXMI228、AXMI229、AXMI230和AXMI231；美国专利No.8,334,431的AXMI-115、AXMI-113、AXMI-005、AXMI-163和AXMI-184；US 2010/0298211的AXMI-001、AXMI-002、AXMI-030、AXMI-035和AXMI-045；US20090144852的AXMI-066和AXMI-076；美国专利No.8,318,900的AXMI128、AXMI130、AXMI131、AXMI133、AXMI140、AXMI141、AXMI142、AXMI143、AXMI144、AXMI146、AXMI148、AXMI149、AXMI152、AXMI153、AXMI154、AXMI155、AXMI156、AXMI157、AXMI158、AXMI162、AXMI165、AXMI166、AXMI167、AXMI168、AXMI169、AXMI170、AXMI171、AXMI172、AXMI173、AXMI174、AXMI175、AXMI176、AXMI177、AXMI178、AXMI179、AXMI180、AXMI181、AXMI182、AXMI185、AXMI186、AXMI187、AXMI188、AXMI189；US 2010/0005543的AXMI079、AXMI080、AXMI081、AXMI082、AXMI091、AXMI092、AXMI096、AXMI097、AXMI098、AXMI099、AXMI100、AXMI101、AXMI102、AXMI103、AXMI104、AXMI107、AXMI108、AXMI109、AXMI110、AXMI111、AXMI112、AXMI114、AXMI116、AXMI117、AXMI118、AXMI119、AXMI120、AXMI121、AXMI122、AXMI123、AXMI124、AXMI1257、AXMI1268、AXMI127、AXMI129、AXMI164、AXMI151、AXMI161、AXMI183、AXMI132、AXMI138、AXMI137；以及美国专利No.8,319,019的Cry蛋白，诸如具有经修饰的蛋白水解位点的Cry1A和Cry3A；以及美国专利申请公布No.2011/0064710的来自苏云金芽孢杆菌菌株VBTS2528的Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca毒素蛋白。其他Cry蛋白是本领域技术人员熟知的(参见链接lifesci.sussex.ac.uk/home/NeilCrickmore/Bt/(添加“www”前缀后，可在万维网上访问)，即Crickmore，et al.，“Bacillusthuringiensis toxin nomenclature”(2011)(Crickmore等人，“苏云金芽孢杆菌毒素命名法”，2011年))。Cry蛋白的杀昆虫活性是本领域技术人员所熟知的(相关综述，请参见vanFrannkenhuyzen，(2009)J.Invert.Path.101：1-16(van Frannkenhuyzen，2009年，《无脊椎动物病理学杂志》，第101卷，第1-16页)。Cry蛋白作为转基因植物性状的用途是本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于Cry1Ac、Cry1Ac+Cry2Ab、Cry1Ab、Cry1A.105、Cry1F、Cry1Fa2、Cry1F+Cry1Ac、Cry2Ab、Cry3A、mCry3A、Cry3Bb1、Cry34Ab1、Cry35Ab1、Vip3A、mCry3A、Cry9c和CBI-Bt的Cry转基因植物已取得监管批准(参见，Sanahuja，(2011)PlantBiotech Journal 9：283-300(Sanahuja，2011年，《植物生物技术杂志》，第9卷，第283-300页)和cera-gmc.org/index.php？action＝gm_crop_database(可使用“www”前缀在万维网上访问)的CERA(2010)GM Crop Database Center for Environmental Risk Assessment(CERA)，ILSI Research Foundation，Washington D.C.(CERA(2010)转基因作物数据库，环境风险评估中心(CERA)，国际生命科学学院研究基金，华盛顿特区))。本领域技术人员熟知的不止一种杀虫蛋白也可在植物中表达，诸如Vip3Ab和Cry1Fa(US2012/0317682)、Cry1BE和Cry1F(US2012/0311746)、Cry1CA和Cry1AB(US2012/0311745)、Cry1F和CryCa(US2012/0317681)、Cry1DA和Cry1BE(US2012/0331590)、Cry1DA和Cry1Fa(US2012/0331589)、Cry1AB和Cry1BE(US2012/0324606)以及Cry1Fa和Cry2Aa、Cry1I或Cry1E(US2012/0324605)。杀虫蛋白还包括杀昆虫脂肪酶，其包括美国专利No.7,491,869的脂酰基水解酶和比如来自链霉菌属的胆固醇氧化酶(Purcell et al.(1993)Biochem Biophys Res Commun 15：1406-1413(Purcell等人，1993年，《生物化学与生物物理研究通讯》，第15卷，第1406-1413页))。杀虫蛋白还包括美国专利No.5,877,012、No.6,107,279、No.6,137,033、No.7,244,820、No.7,615,686和No.8,237,020的VIP(植物性杀昆虫蛋白)毒素等等。其他VIP蛋白是本领域技术人员熟知的(参见，lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html(可使用“www”前缀在万维网上访问))。杀虫蛋白还包括毒素复合物(TC)蛋白，可得自比如致病杆菌属、发光杆菌属和类芽孢杆菌属的生物体(参见，美国专利No.7,491,698和No.8,084,418)。一些TC蛋白具有“独立”杀昆虫活性，而其他TC蛋白增强由相同给定生物体产生的独立毒素的活性。“独立”TC蛋白(例如来自发光杆菌属、致病杆菌属或类芽孢杆菌属)的毒性可通过源自不同属的来源生物体的一种或多种TC蛋白“增效剂”来增强。TC蛋白有三种主要的类型。如本文所提及的，A类蛋白(“蛋白A”)是独立毒素。B类蛋白(“蛋白B”)和C类蛋白(“蛋白C”)增强A类蛋白的毒性。A类蛋白的例子是TcbA、TcdA、XptA1和XptA2。B类蛋白的例子是TcaC、TcdB、XptB1Xb和XptC1Wi。C类蛋白的例子是TccC、XptC1Xb和XptB1Wi。杀虫蛋白还包括蜘蛛毒蛋白、蛇毒蛋白和蝎毒蛋白。蜘蛛毒肽的例子包括但不限于lycotoxin-1肽及其突变体(美国专利No.8,334,366)。
(C)编码昆虫特异性激素或信息素，如蜕皮甾类和保幼激素，其变体、基于其的模拟物或者其拮抗剂或激动剂的多核苷酸。参见例如Hammock，et al.，(1990)Nature 344：458(Hammock等人，1990年，《自然》，第344卷，第458页)，其公开了以杆状病毒来表达克隆的保幼激素酯酶(保幼激素的灭活剂)。
(D)编码昆虫特异性肽的多核苷酸，其在表达时会扰乱受影响害虫的生理机能。例如参见以下文献的公开内容：Regan，(1994)J.Biol.Chem.269：9(Regan，1994年，《生物化学杂志》，第269卷，第9页)(表达克隆产生出编码昆虫利尿激素受体的DNA)；Pratt，et al.，(1989)Biochem.Biophys.Res.Comm.163：1243(Pratt等人，1989年，《生物化学与生物物理研究通讯》，第163卷，第1243页)(在太平洋折翅蠊(Diploptera puntata)中鉴定的咽侧体抑制素)；Chattopadhyay，et al.，(2004)Critical Reviews in Microbiology 30(1)：33-54(Chattopadhyay等人，2004年，《微生物学评论》，第30卷，第1期，第33-54页)；Zjawiony，(2004)J Nat Prod 67(2)：300-310(Zjawiony，2004年，《天然产物杂志》，第67卷，第2期，第300-310页)；Carlini and Grossi-de-Sa，(2002)Toxicon 40(11)：1515-1539(Carlini和Grossi-de-Sa，2002年，《毒素》，第40卷，第11期，第1515-1539页)；Ussuf，et al.，(2001)Curr Sci.80(7)：847-853(Ussuf等人，2001年，《当代科学》，第80卷，第7期，第847-853页)，以及Vasconcelos and Oliveira，(2004)Toxicon 44(4)：385-403(Vasconcelos和Oliveira，2004年，《毒素》，第44卷，第4期，第385-403页)。还可参见授予Tomalski等人的美国专利No.5,266,317，其公开了编码昆虫特异性毒素的基因。
(E)编码负责单萜烯、倍半萜烯、类固醇、异羟肟酸、苯丙素(phenylpropanoid)衍生物或者别的具有杀昆虫活性的非蛋白分子的超量积累的酶的多核苷酸。
(F)编码如下酶的多核苷酸：参与生物活性分子的修饰(包括翻译后修饰)的酶；例如糖酵解酶、蛋白水解酶、脂肪分解酶、核酸酶、环化酶、转氨酶、酯酶、水解酶、磷酸酶、激酶、磷酸化酶、聚合酶、弹性蛋白酶、几丁质酶和葡聚糖酶，无论是天然的还是合成的。参见以Scott等人的名义的PCT申请WO 1993/02197，其公开了愈创葡聚糖酶(callase)基因的核苷酸序列。含有几丁质酶编码序列的DNA分子可例如以登录号39637和67152从获得。还可参见Kramer，et al.，(1993)InsectBiochem.Molec.Biol.23：691(Kramer等人，1993年，《昆虫生物化学分子生物学》，第23卷，第691页)，其教导了编码烟草钩虫几丁质酶的cDNA的核苷酸序列，以及Kawalleck，et al.，(1993)Plant Molec.Biol.21：673(Kawalleck等人，1993年，《植物分子生物学》，第21卷，第673页)，其提供了欧芹ubi4-2多聚泛素基因的核苷酸序列，以及美国专利No.6,563,020、No.7,145,060和No.7,087,810。
(G)编码刺激信号转导的分子的多核苷酸。例如，参见Botella，et al.，(1994)Plant Molec.Biol.24：757(Botella等人，1994年，《植物分子生物学》，第24卷，第757页)关于绿豆钙调蛋白cDNA克隆的核苷酸序列的公开内容，以及Griess，et al.，(1994)PlantPhysiol.104：1467(Griess等人，1994年，《植物生理学》，第104卷，第1467页)，其提供了玉蜀黍钙调蛋白cDNA克隆的核苷酸序列。
(H)编码疏水性矩肽的多核苷酸。参见PCT申请WO 1995/16776和美国专利No.5,580,852(公开了鲎抗菌肽的肽衍生物，其抑制真菌植物病原体)，以及PCT申请WO 1995/18855和美国专利No.5,607,914(教导了合成的抗微生物肽，其赋予抗病性)。
(I)编码膜透性酶、通道离子载体或通道阻断剂的多核苷酸。例如，参见Jaynes，etal.，(1993)Plant Sci.89：43(Jaynes等人，1993年，《植物科学》，第89卷，第43页)，其公开了异源表达天蚕杀菌肽-β裂解肽类似物以使转基因烟草植物能抵抗青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum)。
(J)编码病毒侵入性蛋白或从中衍生的复合毒素的基因。例如，病毒外壳蛋白在转化的植物细胞中的积累，可赋予对由该外壳蛋白基因衍生的病毒以及相关病毒所造成的病毒感染和/或病害发展的抗性。参见Beachy，et al.，(1990)Ann.Rev.Phytopathol.28：451(Beachy等人，1990年，《植物病理学年评》，第28卷，第451页)。已将外壳蛋白介导的抗性赋予经转化的植物以抵抗苜蓿花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草条斑病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、烟草蚀纹病毒、烟草脆裂病毒和烟草花叶病毒。同上。
(K)编码昆虫特异性抗体或自其衍生的免疫毒素的基因。因此，靶向昆虫肠道中的关键代谢功能的抗体将会灭活受影响的酶，从而杀死昆虫。Cf.Taylor，et al.，Abstract#497，SEVENTH INT′LSYMPOSIUM ON MOLECULAR PLANT-MICROBE INTERACTIONS(Edinburgh，Scotland，1994)(Cf.Taylor等人，第497号摘要，《第七届分子植物微生物国际交流会论文集》(苏格兰爱丁堡，1994年))(通过产生单链抗体片段对转基因烟草进行酶促灭活)。
(L)编码病毒特异性抗体的基因。参见例如，Tavladoraki，et al.，(1993)Nature366：469(Tavladoraki等人，1993年，《自然》，第366卷，第469页)，其显示表达重组抗体基因的转基因植物免于病毒攻击。
(M)编码在自然界由病原体或寄生物生成的发育阻滞蛋白的多核苷酸。因此，真菌内切α-1,4-D-聚半乳糖醛酸酶通过溶解植物细胞壁同型-α-1,4-D-半乳糖醛酸酶而有利于真菌定植和植物营养物释放。参见Lamb，et al.，(1992)Bio/Technology 10：1436(Lamb等人，1992年，《生物/技术》，第10卷，第1436页)。Toubart，et al.，(1992)Plant J.2：367(Toubart等人，1992年，《植物杂志》，第2卷，第367页)描述了编码菜豆内聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的基因的克隆和表征。
(N)编码在自然界由植物生成的发育阻滞蛋白的多核苷酸。例如，Logemann，etal.，(1992)Bio/Technology 10：305(Logemann等人，1992年，《生物/技术》，第10卷，第305页)已表明表达大麦核糖体灭活基因的转基因植物对真菌病害的抗性提高。
(O)参与系统获得性抗性(SAR)响应的基因和/或发病相关基因。Briggs，(1995)Current Biology 5(2)(Briggs，1995年，《当代生物学》，第5卷，第2期)；Pieterse and VanLoon，(2004)Curr.Opin.Plant Bio.7(4)：456-64(Pieterse和Van Loon，2004年，《植物生物学新见》，第7卷，第4期，第456-464页)以及Somssich，(2003)Cell 113(7)：815-6(Somssich，2003年，《细胞》，第113卷，第7期，第815-816页)。
(P)抗真菌基因(Cornelissen and Melchers，(1993)Pl.Physiol.101：709-712(Cornelissen和Melchers，1993年，《植物生理学》，第101卷，第709-712页)；Parijs，etal.，(1991)Planta 183：258-264(Parijs等人，1991年，《植物》，第183卷，第258-264页)以及Bushnell，et al.，(1998)Can.J.of Plant Path.20(2)：137-149(Bushnell等人，1998年，《加拿大植物病理学杂志》，第20卷，第2期，第137-149页))。另参见美国专利申请No.09/950,933、No.11/619,645、No.11/657,710、No.11/748,994、No.11/774,121以及美国专利No.6,891,085和No.7,306,946。用于作为抵抗真菌病原体的植物防御反应的第一步而感知几丁质片段的LysM受体样激酶(US 2012/0110696)。
(Q)解毒基因，诸如串珠镰孢菌毒素、白僵菌素、念珠菌素和玉米赤霉烯酮以及它们的结构相关衍生物的解毒基因。例如参见美国专利No.5,716,820、No.5,792,931、No.5,798,255、No.5,846,812、No.6,083,736、No.6,538,177、No.6,388,171和No.6,812,380。
(R)编码胱抑素和半胱氨酸蛋白酶抑制剂的多核苷酸。参见美国专利No.7,205,453。
(S)防御素基因。参见WO 2003/000863以及美国专利No.6,911,577、No.6,855,865、No.6,777,592和No.7,238,781。
(T)赋予对线虫的抗性的基因。参见例如PCT申请WO 1996/30517；PCT申请WO1993/19181、WO 2003/033651以及Urwin，et al.，(1998)Planta 204：472-479(Urwin等人，1998年，《植物》，第204卷，第472-479页)；Williamson，(1999)Curr Opin Plant Bio.2(4)：327-31(Williamson，1999年，《当代植物生物学观点》，第2卷，第4期，第327-331页)；美国专利No.6,284,948和No.7,301,069以及miRl64基因(WO 2012/058266)。
(U)赋予对疫霉根腐病的抗性的基因，诸如Pps 1、Pps 1-a、Pps 1-b、Pps 1-c、Pps1-d、Rps 1-e、Rps 1-k、Rps 2、Rps 3-a、Rps 3-b、Rps 3-c、Rps 4、Rps 5、Rps 6、Rps 7和其他Rps基因。参见例如，Shoemaker，et al.，Phytophthora Root Rot Resistance GeneMapping in Soybean，Plant Genome IV Conference，San Diego，Calif.(1995)(Shoemaker等人，大豆中的疫霉根腐病抗性基因定位，第四届植物基因组大会，加利福尼亚州圣地亚哥，1995年)。
(V)赋予对褐茎腐病的抗性的基因，比如美国专利No.5,689,035中所述，该专利出于此目的以引用方式并入。
(W)赋予对炭疽菌(Colletotrichum)的抗性的基因，比如美国专利申请公布US2009/0035765中所述，该专利出于此目的以引用方式并入。这包括可用作单基因座转换的Rcg基因座。
2.赋予对除草剂的抗性的转基因，例如：
(A)编码对抑制生长点或分生组织的除草剂比如咪唑啉酮或磺酰脲的抗性的多核苷酸。这个类别的示例性基因编码突变的ALS酶和AHAS酶，例如分别由Lee，et al.，(1988)EMBO J.7：1241(Lee等人，1988年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第7卷，第1241页)和Miki，et al.，(1990)Theor.Appl.Genet.80：449(Miki等人，1990年，《理论与应用遗传学》，第80卷，第449页)描述。另参见美国专利No.5,605,011、No.5,013,659、No.5,141,870、No.5,767,361、No.5,731,180、No.5,304,732、No.4,761,373、No.5,331,107、No.5,928,937和No.5,378,824；美国专利申请No.11/683,737和国际公布WO 1996/33270。
(B)编码对如下的抗性的蛋白质的多核苷酸：草甘膦(抗性分别由突变的5-烯醇式丙酮酰-3-磷酸莽草酸合酶(EPSP)基因和aroA基因赋予)和其他膦酰基化合物如草铵膦(草胺膦乙酰转移酶(PAT)基因和吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)草胺膦乙酰转移酶(bar)基因)和吡啶氧基或苯氧基丙酸(proprionic acid)和环己酮(cyclohexone)(ACC酶抑制剂编码基因)。参见例如授予Shah等人的美国专利No.4,940,835，其公开了EPSPS形式的能赋予草甘膦抗性的核苷酸序列。授予Barry等人的美国专利No.5,627,061也描述了编码EPSPS酶的基因。另参见美国专利No.6,566,587、No.6,338,961、No.6,248,876B1、No.6,040,497、No.5,804,425、No.5,633,435、No.5,145,783、No.4,971,908、No.5,312,910、No.5,188,642、No.5,094,945、No.4,940,835、No.5,866,775、No.6,225,114B1、No.6,130,366、No.5,310,667、No.4,535,060、No.4,769,061、No.5,633,448、No.5,510,471、Re.36,449；RE 37,287E和5,491,288以及国际专利公布EP 1173580；WO 2001/66704；EP1173581和EP 1173582，这些专利出于此目的以引用方式并入本文。草甘膦抗性也被赋予给能表达编码草甘膦氧化还原酶的基因的植物，如美国专利No.5,776,760和No.5,463,175中更完全地描述，这些专利出于此目的以引用方式并入本文。另外，可以通过过表达编码草甘膦N-乙酰转移酶的基因向植物赋予草甘膦抗性。参见例如美国专利No.7,462,481、No.7,405,074和美国专利申请公布No.US 2008/0234130。编码突变的aroA基因的DNA分子可以以登录号39256获得，该突变基因的核苷酸序列在授予Comai的美国专利No.4,769,061中公开。授予Kumada等人的EP申请No.0 333 033和授予Goodman等人的美国专利No.4,975,374公开了赋予对除草剂(比如L-草胺膦)的抗性的谷氨酰胺合成酶基因的核苷酸序列。草胺膦乙酰转移酶基因的核苷酸序列在授予Leemans等人的EP申请No.0 242 246和0242 236；De Greef，et al.，(1989)Bio/Technology 7：61(De Greef等人，1989年，《生物/技术》，第7卷，第61页)中提供，其描述了表达编码草胺膦乙酰转移酶活性的嵌合bar基因的转基因植物的产生。另参见美国专利No.5,969,213、No.5,489,520、No.5,550,318、No.5,874,265、No.5,919,675、No.5,561,236、No.5,648,477、No.5,646,024、No.6,177,616 B1和No.5,879,903，这些专利出于此目的以引用方式并入本文。赋予对苯氧基丙酸和环己酮(诸如烯禾啶和氟吡甲禾灵)的抗性的示例性基因是Marshall，et al.，(1992)Theor.Appl.Genet.83：435(Marshall等人，1992年，《理论与应用遗传学》，第83卷，第435页)所述的Accl-S1、Accl-S2和Accl-S3基因。
(C)编码对抑制光合作用的除草剂具有抗性的蛋白质的多核苷酸，所述除草剂为诸如三嗪(psbA和gs+基因)和苯甲腈(腈水解酶基因)。Przibilla，et al.，(1991)PlantCell 3：169(Przibilla等人，1991年，《植物细胞》，第3卷，第169页)描述了用编码突变的psbA基因的质粒转化衣藻(Chlamydomonas)。腈水解酶基因的核苷酸序列在授予Stalker的美国专利No.4,810,648中公开，含有这些基因的DNA分子可以以登录号53435、67441和67442获得。Hayes，et al.，(1992)Biochem.J.285：173(Hayes等人，1992年，《生物化学杂志》，第285卷，第173页)描述了编码谷胱甘肽S-转移酶的DNA的克隆和表达。
(D)编码对乙酰羟酸合酶的抗性的蛋白质的多核苷酸，该乙酰羟酸合酶已被发现能使表达这种酶的植物抵抗多种类型的除草剂，其已被引入到多种植物中(参见例如Hattori，et al.，(1995)Mol Gen Genet.246：419(Hattori等人，1995年，《分子遗传学与普通遗传学》，第246卷，第419页))。赋予除草剂抗性的其他基因包括：编码大鼠细胞色素P4507A1和酵母NADPH-细胞色素P450氧化还原酶的嵌合蛋白的基因(Shiota，et al.，(1994)Plant Physiol 106：17(Shiota等人，1994年，《植物生理学》，第106卷，第17页))、编码谷胱甘肽还原酶和过氧化物歧化酶的基因(Aono，et al.，(1995)Plant Cell Physiol36：1687(Aono等人，1995年，《植物细胞生理学》，第36卷，第1687页))以及编码各种磷酸转移酶的基因(Datta，et al.，(1992)Plant Mol Biol 20：619(Datta等人，1992年，《植物分子生物学》，第20卷，第619页))。
(E)编码对靶向原卟啉原氧化酶(protox)的除草剂的抗性的多核苷酸，原卟啉原氧化酶是产生叶绿素所需的。所述protox酶充当多种除草化合物的靶标。这些除草剂还抑制现有所有不同植物物种的生长，造成它们彻底毁灭。美国专利No.6,288,306 B1、6,282,837 B1和5,767,373以及国际公布WO 2001/12825中描述了含有经改变的protox活性、能抵抗这些除草剂的植物的开发。
(F)aad-1基因(最初来自鞘脂单胞菌(Sphingobium herbicidovorans))编码芳氧基链烷酸酯双加氧酶(AAD-1)蛋白。该性状赋予对2，4-二氯苯氧基乙酸和芳氧苯氧基丙酸酯(通常称为“fop”除草剂诸如喹禾灵))除草剂的耐受性。在植物中实现除草剂耐受性的aad-1基因自身首次公开于WO 2005/107437(还可参见US 2009/0093366)。aad-12基因，源自代尔夫特食酸菌(Delftia acidovorans)，其编码芳氧基链烷酸酯双加氧酶(AAD-12)蛋白，通过使若干具有芳氧基链烷酸酯部分的除草剂(包括苯氧基生长素(例如，2，4-D、MCPA)以及吡啶氧基生长素(例如，氟草烟、绿草定))失活而赋予对2，4-二氯苯氧基乙酸和吡啶氧基乙酸酯除草剂的耐受性。
(G)编码美国专利申请公布2003/0135879中公开的用于赋予麦草畏耐受性的除草剂抗性麦草畏单加氧酶的多核苷酸；
(H)编码美国专利No.4,810,648中公开的用于赋予溴苯腈耐受性的溴苯腈腈水解酶(Bxn)的多核苷酸分子；
(I)编码Misawa，et al.，(1993)Plant J.4：833-840(Misawa等人，1993年，《植物杂志》，第4卷，第833-840页)和Misawa，et al.，(1994)Plant J.6：481-489(Misawa等人，1994年，《植物杂志》，第6卷，第481-489页)中所述的用于实现哒草伏耐受性的八氢番茄红素(crtl)的多核苷酸分子。
3.赋予或促成谷物特性改变的转基因
所述特性改变例如：
(A)脂肪酸改变，例如，通过以下方式改变：
(1)下调硬脂酰-ACP以提高植物的硬脂酸含量。参见Knultzon，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：2624(Knultzon等人，1992年，《美国国家科学院院刊》，第89卷，第2624页)和WO 1999/64579(改变玉米中脂质特性的基因)。
(2)通过FAD-2基因修饰提高油酸和/或通过FAD-3基因修饰降低亚麻酸(参见美国专利No.6,063,947、No.6,323,392、No.6,372,965以及WO 1993/11245)。
(3)改变共轭亚麻酸或亚油酸含量，参见WO 2001/12800。
(4)改变LEC1、AGP、Dek1、Superall、mil ps、各种Ipa基因(如Ipa1、Ipa3、hpt或hggt)。例如，参见WO 2002/42424、WO 1998/22604、WO 2003/011015、WO 2002/057439、WO2003/011015、美国专利No.6,423,886、No.6，197,561、No.6,825,397以及美国专利申请公布No.US 2003/0079247、No.US 2003/0204870以及Rivera-Madrid，et al.，(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.92：5620-5624(Rivera-Madrid等人，1995年，《美国国家科学院院刊》，第92卷，第5620-5624页)。
(5)编码如下的基因：产生长链多不饱和脂肪酸的8-8去饱和酶(美国专利No.8,058,571和8,338，152)、降低饱和脂肪的8-9去饱和酶(美国专利No.8,063,269)、改善ω-3脂肪酸分布的报春花△6去饱和酶。
(6)与脂质和糖代谢调节相关的分离的核酸和蛋白质，具体地讲，在产生转基因植物和调节种子贮藏化合物(包括脂质、脂肪酸、淀粉或种子贮藏蛋白)水平的方法中使用的以及在调节植物种子大小、种子数量、种子重量、根长和叶片大小的方法中使用的脂质代谢蛋白(LMP)(EP 2404499)。
(7)改变高水平表达糖诱导2(HSI2)蛋白在植物中的表达以提高或降低HSI2在植物中的表达。提高HSI2的表达会增加油含量，而降低HSI2的表达会降低脱落酸敏感性和/或增强抗旱性(美国专利申请公布No.2012/0066794)。
(8)细胞色素b5(Cb5)单独表达或与FAD2一起表达以调节植物种子中的油含量，尤其是增加ω-3脂肪酸的水平并提高ω-6与ω-3脂肪酸的比率(美国专利申请公布No.2011/0191904)。
(9)编码用于调节糖代谢的wrinkledl样多肽的核酸分子(美国专利No.8,217,223)。
(B)磷含量改变，例如，通过以下方式改变：
(1)引入植酸酶编码基因将增强肌醇六磷酸的分解，从而给经转化的植物增加更多的游离磷酸盐。例如，参见Van Hartingsveldt，et al.，(1993)Gene 127：87(VanHartingsveldt等人，1993年，《基因》，第127卷，第87页)，其公开了黑曲霉(Aspergillusniger)植酸酶基因的核苷酸序列。
(2)调节降低肌醇六磷酸含量的基因。在玉蜀黍中，这例如可通过以下方式来实现：将与一种或多种等位基因如LPA等位基因(在以低水平植酸为特征的玉蜀黍突变株中鉴定到)相关的DNA进行克隆并再引入，如WO 2005/113778所述，和/或改变肌醇激酶活性，如WO 2002/059324、美国专利申请公布No.2003/0009011、WO 2003/027243、美国专利申请公布No.2003/0079247、WO 1999/05298、美国专利No.6,197,561、美国专利No.6,291,224、美国专利No.6,391,348、WO 2002/059324、美国专利申请公布No.2003/0079247、WO 1998/45448、WO 1999/55882、WO 2001/04147中所述。
(C)碳水化合物改变，例如通过改变能影响淀粉的分支模式的酶的基因来影响，或者通过改变能改变硫氧还蛋白比如NTR和/或TRX(参见美国专利No.6,531,648，其出于此目的以引用方式并入)和/或γ玉米醇溶蛋白敲除或突变体诸如cs27或TUSC27或en27(参见美国专利No.6,858,778以及美国专利申请公布No.2005/0160488、美国专利申请公布No.2005/0204418，这些专利出于此目的以引用方式并入)的基因来影响。参见Shiroza，etal.，(1988)J.Bacteriol.170：810(Shiroza等人，1988年，《细菌学杂志》，第170卷，第810页)(链球菌(Streptococcus)突变型果糖基转移酶基因的核苷酸序列)，Steinmetz，etal.，(1985)Mol.Gen.Genet.200：220(Steinmetz等人，1985年，《分子遗传学与普通遗传学》，第200卷，第220页)(枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因的核苷酸序列)，Pen，et al.，(1992)Bio/Technology 10：292(Pen等人，1992年，《生物/技术》，第10卷，第292页)(表达地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶的转基因植物的生产)，Elliot，et al.，(1993)Plant Molec.Biol.21：515(Elliot等人，1993年，《植物分子生物学》，第21卷，第515页)(番茄转化酶基因的核苷酸序列)，et al.，(1993)J.Biol.Chem.268：22480(等人，1993年，《生物化学杂志》，第268卷，第22480页)(大麦α-淀粉酶基因的定点诱变)和Fisher，et al.，(1993)Plant Physiol.102：1045(Fisher等人，1993年，《植物生理学》，第102卷，第1045页)(玉米胚乳淀粉分支酶II)，WO1999/10498(通过修饰UDP-D-木糖4-差向异构酶、Fragile 1和2、Ref1、HCHL、C4H改进消化性和/或淀粉提取)，美国专利No.6,232,529(通过修饰淀粉水平(AGP)产生高油种子的方法)。本文提到的脂肪酸修饰基因还可用来通过淀粉途径和油途径的相互关系影响淀粉含量和/或组成。
(D)改变的抗氧化物含量或组成，如生育酚或生育三烯醇的改变。例如，参见涉及操纵抗氧化物水平的美国专利No.6,787,683、美国专利申请公布No.2004/0034886和WO2000/68393以及通过改变尿黑酸牻牛儿基牻牛儿基转移酶(hggt)的WO 2003/082899。
(E)改变的必需种子氨基酸。例如，参见美国专利No.6，127,600(提高种子中的必需氨基酸的积累的方法)、美国专利No.6,080,913(提高种子中的必需氨基酸的积累的二元方法)、美国专利No.5,990,389(高赖氨酸)、WO 1999/40209(改变种子中的氨基酸组成)、WO1999/29882(改变蛋白质的氨基酸含量的方法)、美国专利No.5,850,016(改变种子中的氨基酸组成)、WO 1998/20133(必需氨基酸的水平提高的蛋白质)、美国专利No.5,885,802(高甲硫氨酸)、美国专利No.5,885,801(高苏氨酸)、美国专利No.6,664,445(植物氨基酸生物合成酶)、美国专利No.6,459,019(赖氨酸和苏氨酸提高)、美国专利No.6,441,274(植物色氨酸合酶β亚单位)、美国专利No.6,346,403(甲硫氨酸代谢酶)、美国专利No.5,939,599(高硫)、美国专利No.5,912,414(甲硫氨酸提高)、WO 1998/56935(植物氨基酸生物合成酶)、WO1998/45458(必需氨基酸的百分比更高的工程种子蛋白)、WO 1998/42831(赖氨酸提高)、美国专利No.5,633,436(含硫氨基酸含量提高)、美国专利No.5,559,223(具有确定的结构、含有可编程的必需氨基酸水平的合成贮藏蛋白，用来改进植物的营养价值)、WO 1996/01905(苏氨酸提高)、WO 1995/15392(赖氨酸提高)、美国专利申请公布No.2003/0163838、美国专利申请公布No.2003/0150014、美国专利申请公布No.2004/0068767、美国专利No.6,803,498、WO 2001/79516。
4.控制雄性不育的基因：
有几种方法可用来赋予遗传性雄性不育，比如基因组内单独位置处的多个赋予雄性不育的突变基因，如授予Brar等人的美国专利No.4,654,465和No.4,727,219中公开，以及染色体易位，如Patterson在美国专利No.3,861,709和No.3，710,511中所描述。除了这些方法外，Albertsen等人(美国专利No.5,432,068)还描述了一种核雄性不育的系统，其包括：鉴定对雄性能育性关键的基因；使这个对雄性能育性关键的天然基因沉默；从该必需的雄性能育性基因移除天然启动子并用诱导型启动子代替；将该经遗传工程改造过的基因插回至植株中；从而产生了雄性不育的植株，因为该诱导型启动子未“开启”从而导致雄性能育性基因不被转录。通过诱导(或“开启”)启动子，其继而允许赋予雄性能育性的基因被转录，来恢复能育性。
(A)在绒毡层特异性启动子的控制下和在施加化学物质N-Ac-PPT的情况下引入脱乙酰酶基因(WO 2001/29237)。
(B)引入各种雄蕊特异性启动子(WO 1992/13956、WO 1992/13957)。
(C)引入芽孢杆菌RNA酶(barnase)和芽孢杆菌RNA酶抑制剂(barstar)基因(Paul，et al.，(1992)Plant Mol.Biol.19：611-622(Paul等人，1992年，《植物分子生物学》，第19卷，第611-622页)。
有关核雄性和雌性不育系统和基因的另外的实例，另参见美国专利No.5,859,341、No.6,297,426、No.5,478,369、No.5,824,524、No.5,850,014和No.6,265,640；所有这些专利据此以引用方式并入。
5.能产生用于位点特异性DNA整合的位点的基因。
这包括引入可用于FLP/FRT系统的FRT位点和/或可用于Cre/Loxp系统的Lox位点。例如，参见Lyznik，et al.，(2003)Plant Cell Rep 21：925-932(Lyznik等人，2003年，《植物细胞报道》，第21卷，第925-932页)和WO 1999/25821，所述文献据此以引用方式并入。其他可使用的系统包括噬菌体Mu的Gin重组酶(Maeser等人，1991年；Vicki Chandler，TheMaize Handbook ch.118(Springer-Verlag 1994)(Vicki Chandler，《玉蜀黍手册》，第118章，(斯普林格出版社，1994年))、大肠杆菌的Pin重组酶(Enomoto等人，1983年)以及pSRi质粒的R/RS系统(Araki等人，1992年)。
6.影响非生物胁迫抗性的基因
包括但不限于开花、穗和种子发育、氮利用效率增强、改变的氮响应度、抗旱性或耐旱性、抗寒性或耐寒性和抗盐性或耐盐性以及胁迫下增加的产量。
(A)例如，参见：WO 2000/73475，其中通过改变苹果酸盐而改变水利用效率；美国专利No.5,892,009、No.5,965,705、No.5,929,305、No.5,891,859、No.6,417,428、No.6,664,446、No.6,706,866、No.6,717,034、No.6,801,104、WO 2000/060089、WO 2001/026459、WO 2001/035725、WO 2001/034726、WO 2001/035727、WO 2001/036444、WO 2001/036597、WO2001/036598、WO 2002/015675、WO 2002/017430、WO 2002/077185、WO 2002/079403、WO2003/013227、WO 2003/013228、WO 2003/014327、WO 2004/031349、WO 2004/076638、WO199809521。
(B)WO 199938977，其描述了能有效减轻严寒、高盐和干旱对植物的不利作用以及赋予植物表型以其他有利作用的基因，包括CBF基因和转录因子。
(C)美国专利申请公布No.2004/0148654和WO 2001/36596，其中植物中的脱落酸被改变，导致植物表型改善，比如产量提高和/或对非生物胁迫的耐受性提高。
(D)WO 2000/006341、WO 2004/090143、美国专利No.7,531,723和No.6,992,237，其中细胞分裂素表达经修饰，产生具有增强的胁迫耐受性(如耐旱性)和/或增加的产量的植物。还可参见WO 2002/02776、WO 2003/052063、JP 2002/281975、美国专利No.6,084,153、WO 2001/64898、美国专利No.6,177,275和美国专利No.6,107,547(增强氮利用和改变氮响应度)。
(E)有关乙烯改变，参见美国专利申请公布No.2004/0128719、美国专利申请公布No.2003/0166197和WO 2000/32761。
(F)有关植物转录因子或者非生物胁迫的转录调节剂，参见例如美国专利申请公布No.2004/0098764或美国专利申请公布No.2004/0078852。
(G)提高液泡焦磷酸酶诸如AVP1的表达而使产量增加的基因(美国专利No.8,058,515)；编码如下多肽的核酸：HSFA4或HSFA5(类别A4或A5的热休克因子)多肽、寡肽转运蛋白(OPT4样)多肽、叶间期2样(PLA2样)多肽或Wuschel相关同源异型盒1样(WOX1样)多肽(美国专利申请公布No.US 2011/0283420)。
(H)编码聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)蛋白的多核苷酸的下调以调节程序性细胞死亡(美国专利No.8,058,510)使活力增强。
(I)编码用于赋予抗旱性的DTP21多肽的多核苷酸(美国专利申请公布No.US2011/0277181)。
(J)编码用于调节发育、调节对胁迫的响应以及调节胁迫耐受性的ACC合成酶3(ACS3)蛋白的核苷酸序列(美国专利申请公布No.US 2010/0287669)。
(K)编码赋予耐旱性表型(DTP)以赋予抗旱性的蛋白质的多核苷酸(WO 2012/058528)。
(L)用于赋予耐旱性和耐盐性的生育酚环化酶(TC)基因(美国专利申请公布No.2012/0272352)。
(M)实现胁迫耐受性的CAAX氨基末端家族蛋白(美国专利No.8,338,661)。
(N)SALl编码基因中的突变增强了胁迫耐受性，包括增强的抗旱性(美国专利申请公布No.2010/0257633)。
(O)编码选自如下的多肽的核酸序列的表达：GRF多肽、RAAl样多肽、SYR多肽、ARKL多肽和YTP多肽，从而增强产量相关性状(美国专利申请公布No.2011/0061133)。
(P)调节编码III类海藻糖磷酸磷酸酶(TPP)多肽的核酸在植物中的表达，以增强植物中的产量相关性状，尤其是增加种子产量(美国专利申请公布No.2010/0024067)。
可将其他影响植物生长和农艺性状(比如产量、开花、植物生长和/或植物结构)的基因和转录因子引入或渐渗到植物中，参见如WO 1997/49811(LHY)、WO 1998/56918(ESD4)、WO 1997/10339和美国专利NO.6,573,430(TFL)、美国专利No.6,713,663(FT)、WO1996/14414(CON)、WO 1996/38560、WO 2001/21822(VRNl)、WO 2000/44918(VRN2)、WO1999/49064(GI)、WO 2000/46358(FR1)、WO 1997/29123、美国专利No.6,794,560、美国专利No.6,307,126(GAI)、WO 1999/09174(D8和Rht)以及WO 2004/076638和WO 2004/031349(转录因子)。
7.赋予增加的产量的基因
(A)由1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶样多肽(ACCDP)编码核酸所转化的转基因作物，其中该核酸序列在作物中的表达导致与植物的野生型品种相比，植物根生长增加和/或产量增加，和/或对环境胁迫的耐受性增强(美国专利No.8,097,769)。
(B)使用种子偏好型启动子过表达玉蜀黍锌指蛋白基因(Zm-ZFP1)已显示出能增强植物生长，增加籽粒数量和单株植物的总籽粒重量(美国专利申请公布No.2012/0079623)。
(C)玉蜀黍侧生器官边界(LOB)结构域蛋白(Zm-LOBDP1)的组成性过表达已显示出能增加籽粒数量和单株植物的总籽粒重量(美国专利申请公布No.2012/0079622)。
(D)通过调节编码VIM1(甲基化变体1)样多肽或VTC2样(GDP-L-半乳糖磷酸化酶)多肽或DUF1685多肽或ARF6样(生长素响应因子)多肽的核酸在植物中的表达来增强植物中的产量相关性状(WO 2012/038893)。
(E)调节编码Ste20样多肽或其同源物的核酸在植物中的表达得到相对于对照植物具有增加的产量的植物(EP 2431472)。
(F)编码用于改变植物根构型的二磷酸核苷激酶(NDK)多肽及其同源物的基因(美国专利申请公布No.2009/0064373)。
8.赋予植物消化性的基因。
(A)通过调节木聚糖合酶的表达来改变存在于植物细胞壁中的木聚糖的水平(美国专利No.8,173,866)。
在一些实施例中，堆叠的性状可为已取得监管批准的性状或事件，包括但不限于表4A-表4F中的事件。
表4A小麦(Triticum aestivum)
表4B向日葵(Helianthus annuus)
表4C大豆(Glycine max L.)
表4D苜蓿(Medicago sativa)
表4E水稻(Oryza sativa)
表4F玉蜀黍(Zea mays L.)
其他监管批准的事件是本领域技术人员熟知的并且可见于环境风险评估中心(cera-gmc.org/？action＝gm_crop_database，可使用www前缀对其进行访问)和国际农业生物技术应用服务组织(International Service for the Acquisition of Agri-Biotech Applications)(isaaa.org/gmapprovaldatabase/default.asp，可使用www前缀对其进行访问)。
基因沉默
在一些实施例中，堆叠性状可为所关注的一种或多种多核苷酸的沉默形式，从而造成对一种或多种靶标害虫多肽的抑制。在一些实施例中，所述沉默通过使用抑制DNA构建体而实现。
在一些实施例中，编码PIP-47多肽或其片段或变体的多肽的一种或多种多核苷酸可与如上文所述的编码具有杀昆虫活性或农艺性状的一种或多种多肽的一种或多种多核苷酸堆叠，并且任选地还可包含使如下文讨论的一种或多种靶多核苷酸发生基因沉默的一种或多种多核苷酸。
“抑制DNA构建体”是这样的重组DNA构建体，当其被转化或稳定整合到植物的基因组中时导致植物中靶基因的“沉默”。靶基因对于植物可为内源的或转基因的。如本文相对于靶基因所用的“沉默”一般是指对由靶基因表达的mRNA或蛋白质/酶的水平和/或酶活性或蛋白质功能性的水平的抑制。术语“抑制”包括降低、减少、下降、减小、抑制、消除和防止。“沉默”或“基因沉默”并不规定机制，并且包括但不限于反义、共抑制、病毒抑制、发夹抑制、茎-环抑制、基于RNAi的方法以及基于小RNA的方法。
抑制DNA构建体可包含源自所关注的靶基因的区域，并且可包含所关注的靶基因的有义链(或反义链)的全部或部分核酸序列。根据将要采用的方法，该区域可与所关注的基因的全部或部分有义链(或反义链)100％相同或少于100％相同(例如，至少50％相同或51％与100％相同之间的任何整数)。
抑制DNA构建体是本领域熟知的，易于在选择所关注的靶基因后进行构建，并且包括但不限于共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制构建体、茎-环抑制构建体、产生双链RNA的构建体，以及更一般地，RNAi(RNA干扰)构建体和小RNA构建体诸如siRNA(短干扰RNA)构建体和miRNA(微RNA)构建体。
“反义抑制”是指产生能够抑制靶蛋白的表达的反义RNA转录物。
“反义RNA”是指与靶初级转录物或mRNA的全部或部分互补，并且能阻断靶分离核酸片段的表达的RNA转录物(美国专利No.5，107,065)。反义RNA的互补性可存在于特定基因转录物的任何部分，即在5′非编码序列、3′非编码序列、内含子或者编码序列。
“共抑制”是指产生能够抑制靶蛋白的表达的有义RNA转录物。“有义”RNA指包括该mRNA并且可在细胞内或者在体外被翻译成蛋白质的RNA转录物。此前，植物中的共抑制构建体的设计是通过聚焦与天然mRNA具有同源性的核酸序列在有义取向上的过表达，使得所有与过表达序列具有同源性的RNA减少(参见Vaucheret，et al.，(1998)Plant J.16：651-659(Vaucheret等人，1998年，《植物杂志》，第16卷，第651-659页)和Gura，(2000)Nature 404：804-808(Gura，2000年，《自然》，第404卷，第804-808页))。
另一种变型描述了植物病毒序列在指导近端mRNA编码序列的抑制上的用途(PCT公布WO 1998/36083)。
最近的研究已描述了“发夹”结构的用途，所述“发夹”结构掺入了互补取向的全部或部分mRNA编码序列，从而使所表达的RNA产生可能的“茎-环”结构(PCT公布WO 1999/53050)。在这种情况下，茎由与相对于启动子在有义或反义取向上插入的所关注基因相对应的多核苷酸形成，而环由所关注基因的在构建体中不具有互补序列的一些多核苷酸形成。这增加了在回收的转基因植物中共抑制或沉默的频率。有关发夹抑制的综述，参见Wesley，et al.，(2003)Methods in Molecular Biology，Plant Functional Genomics：Methods and Protocols 236：273-286(Wesley等人，2003年，《分子生物学方法》，植物功能基因组学：方法和方案，第236卷，第273-286页)。
一种构建体也已经有效地用于抑制，该构建体的茎由至少30个来自待抑制的基因的核苷酸形成，而环由随机的核苷酸序列形成(PCT公布WO 1999/61632)。
还描述了多聚T和多聚A序列在建立茎-环结构中的茎上的用途(PCT公布WO 2002/00894)。
又一种变型包括，使用合成的重复序列来促进茎-环结构中的茎的形成。已经证实，用这样的重组DNA片段制备的转基因生物体具有降低水平的蛋白质，该蛋白质由形成环的核苷酸片段编码，如PCT公布WO 2002/00904所述。
RNA干扰是指由短干扰RNA(siRNA)介导的动物中序列特异性的转录后基因沉默的过程(Fire，et al.，(1998)Nature 391：806(Fire等人，1998年，《自然》，第391卷，第806页))。植物中的相应过程通常称作转录后基因沉默(PTGS)或RNA沉默，而在真菌中也称作压制(quelling)。转录后基因沉默的过程被认为是用于阻止外来基因的表达的进化上保守的细胞防御机制，并且通常由不同的植物区系和门共有(Fire，et al.，(1999)TrendsGenet.15：358(Fire等人，1999年，《遗传学趋势》，第15卷，第358页))。这种防止外来基因表达的保护可响应于双链RNA(dsRNA)的生成而逐渐形成，所述双链RNA源自病毒感染，或源自通过特异性破坏病毒基因组RNA的同源单链RNA的细胞反应而将转座子元件随机整合到宿主基因组中。dsRNA在细胞中的存在会通过有待充分表征的机制触发RNAi反应。
长dsRNA在细胞中的存在会刺激称作切丁酶(dicer)的核糖核酸酶III酶的活性。切丁酶参与了将dsRNA加工成为称作短干扰RNA(siRNA)的dsRNA短片段的过程(Berstein，et al.，(2001)Nature 409：363(Berstein等人，2001年，《自然》，第409卷，第363页))。由切丁酶活性得到的短干扰RNA的长度通常是约21至约23个核苷酸，并且包含约19碱基对的双链体(Elbashir，et al .，(2001)Genes Dev.15：188(Elbashir等人，2001年，《基因与发育》，第15卷，第188页))。切丁酶也涉及从参与翻译控制的保守结构的前体RNA中切除21-核苷酸和22-核苷酸的小时序RNA(stRNA)(Hutvagner，et al.，(2001)Science 293：834(Hutvagner等人，2001年，《科学》，第293卷，第834页))。RNAi反应也表征了通常称作RNA诱导的沉默复合物(RISC)的内切核酸酶复合物，其介导与siRNA双链体的反义链具有序列互补性的单链RNA的裂解。靶RNA的裂解发生在与siRNA双链体的反义链互补的区域的中部(Elbashir，et al.，(2001)Genes Dev.15：188(Elbashir等人，2001年，《基因与发育》，第15卷，第188页))。此外，RNA干扰还涉及小RNA(例如miRNA)介导的基因沉默，假定是经由调节染色质结构并由此防止靶基因序列转录的细胞机制(参见例如Allshire，(2002)Science297：1818-1819(Allshire，2002年，《科学》，第297卷，第1818-1819页)；Volpe，et al.，(2002)Science 297：1833-1837(Volpe等人，2002年，《科学》，第297卷，第1833-1837页)；Jenuwein，(2002)Science 297：2215-2218(Jenuwein，2002年，《科学》，第297卷，第2215-2218页)以及Hall，et al.，(2002)Science 297：2232-2237(Hall等人，2002年，《科学》，第297卷，第2232-2237页))。这样，本公开的miRNA分子可用于通过与RNA转录物的相互作用或通过与特定基因序列的相互作用而介导基因沉默，其中这样的相互作用导致在转录或转录后层面的基因沉默。
还提供了使由沉默元件产生的RNAi增加的方法和组合物。在这些实施例中，所述方法和组合物使用包含靶害虫序列的沉默元件的第一多核苷酸，所述沉默元件被有效连接至在植物细胞中有活性的启动子；和包含抑制增强元件的第二多核苷酸，所述抑制增强元件包含靶害虫序列或者其活性变体或片段，并被有效连接至在植物细胞中有活性的启动子。沉默元件与抑制增强元件的联合表达使得由沉默元件产生的抑制性RNA的扩增较仅沉默元件单独表达可实现的扩增有所增加。除增强特定RNAi物质本身的扩增之外，所述方法和组合物还允许产生不同种群的RNAi物质，其可增强干扰靶基因表达的效力。因此，当抑制增强元件在植物细胞中与沉默元件联合表达时，所述方法和组合物可允许在整个植物内系统地产生RNAi；与只有沉默元件构建体时观察到的相比，产生更大量的RNAi；和改善RNAi进入植物韧皮部的载入，因此，通过RNAi方法对以韧皮部为食的昆虫提供更好的防治。因而，各种方法和组合物提供了将抑制性RNA递送至靶生物体的改善方法。参见例如美国专利申请公布2009/0188008。
如本文所用，“抑制增强元件”包含多核苷酸，所述多核苷酸包含待抑制的靶序列或其活性片段或变体。已认识到，抑制增强元件无需与靶序列相同，相反，抑制增强元件可以包含靶序列的变体，只要抑制增强元件与靶序列具有足够的序列同一性，从而允许由沉默元件产生的RNAi的水平与仅使用沉默元件表达可获得的相比有所提高。类似地，抑制增强元件可包含靶序列的片段，其中片段具有足够长度从而允许由沉默元件产生的RNAi的水平与仅使用沉默元件表达可获得的相比有所提高。
已认识到，可采用来自相同靶序列或来自不同靶序列或来自相同靶序列的不同区域的多个抑制增强元件。例如，所采用的抑制增强元件可以包含源自靶序列的不同区域的靶序列片段(即，源自3′UTR、编码序列、内含子和/或5′UTR)。此外，如本文别处所述，抑制增强元件可包含在表达盒中，并且在具体实施例中，抑制增强元件是在相同或不同的DNA载体或构建体上作为沉默元件。抑制增强元件可以被有效连接至本文公开的启动子。已认识到，抑制增强元件可以组成性表达，或者，它可以通过使用在本文别处讨论的各种诱导型、组织偏好型或发育调节型启动子以阶段特异性的方式产生。
在具体实施例中，采用沉默元件和抑制增强元件两者时，RNAi的系统性产生贯穿整个植物体。在其他实施例中，与沉默元件构建体单独表达所观察到的相比，本公开的植物或植物部分改善了RNAi进入植物韧皮部的载入，因而通过RNAi方法对进食韧皮部的昆虫提供更好的防治。在具体的实施例中，本公开的植物、植物部分和植物细胞的特征还可以是，允许产生能增强干扰靶基因表达效力的多样化的RNAi物质。
在具体实施例中，与沉默元件单独表达时所实现的水平相比，沉默元件和抑制增强元件的联合表达增加了植物细胞、植物、植物部分、植物组织或韧皮部的抑制性RNA的浓度。
如本文所用，“抑制性RNA水平增加”包括，与合适的对照植物相比，在具有联合表达的植物中产生的RNAi的水平的任何统计学上显著的增加。例如，植物、植物部分或植物细胞中RNAi水平增加可包括，与合适的对照物相比，植物、植物部分、植物细胞或韧皮部中的RNAi水平增加至少约1％、约1％-5％、约5％-10％、约10％-20％、约20％-30％、约30％-40％、约40％-50％、约50％-60％、约60-70％、约70％-80％、约80％-90％、约90％-100％或更高。在其他实施例中，植物、植物部分、植物细胞或韧皮部中的RNAi水平增加可包括，与合适的对照物相比，植物、植物部分、植物细胞或韧皮部中的RNAi水平增加至少约1倍、约1倍-5倍、约5倍-10倍、约10倍-20倍、约20倍-30倍、约30倍-40倍、约40倍-50倍、约50倍-60倍、约60倍-70倍、约70倍-80倍、约80倍-90倍、约90倍-100倍或更高。用于防治椿象和草盲蝽的沉默元件与抑制增强元件的联合表达的例子可见于美国专利申请公布2011/0301223和美国专利申请公布2009/0192117。
一些实施例涉及通过干扰核糖核酸(RNA)分子来下调昆虫害虫物种中靶基因的表达。PCT公布WO 2007/074405描述了抑制无脊椎害虫(包括科罗拉多马铃薯甲虫)中的靶基因的表达的方法。PCT公布WO 2005/110068描述了作为防治昆虫侵染的一种方式而抑制无脊椎害虫(尤其包括西方玉米根虫)中的靶基因的表达的方法。此外，PCT公布WO 2009/091864描述了用于抑制来自昆虫害虫物种(包括来自草盲蝽属的害虫)的靶基因的组合物和方法。核酸分子，包括用于靶向空泡型ATP酶H亚基的RNAi，可用于防治鞘翅目害虫群体和侵染，如美国专利申请公布2012/0198586中所述。PCT公布WO 2012/055982描述了抑制或下调靶基因表达的核糖核酸(RNA或双链RNA)，该靶基因编码：昆虫核糖体蛋白如核糖体蛋白L19、核糖体蛋白L40或核糖体蛋白S27A；昆虫蛋白酶亚基如Rpn6蛋白、Pros 25、Rpn2蛋白、蛋白酶β1亚基蛋白或Prosβ2蛋白；昆虫COPI囊泡的β-外被体、COPI囊泡的γ-外被体、COPI囊泡的β′-外被体蛋白或ζ-外被体；昆虫四跨膜蛋白(Tetraspanine)2A蛋白，它是推定的跨膜结构域蛋白；属于肌动蛋白家族的昆虫蛋白如肌动蛋白5C；昆虫泛素-5E蛋白；昆虫Sec23蛋白，它是一种GTP酶激活因子，参与细胞内蛋白质转运；昆虫皱缩蛋白，它是非常规的肌球蛋白，参与肌动活动；昆虫歪脖蛋白，其参与细胞核选择性mRNA剪接的调节；昆虫空泡型H+-ATP酶G亚基蛋白和昆虫Tbp-1如Tat-结合蛋白。美国专利申请公布2012/029750、US20120297501和2012/0322660描述了干扰核糖核酸(RNA或双链RNA)，其在被昆虫害虫物种摄入后起下调所述昆虫害虫中靶基因的表达的作用，其中所述RNA包含至少一个沉默元件，其中所述沉默元件为双链RNA区域，所述双链RNA区域包含退火的互补链，其中的一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分互补的核苷酸序列或由其组成。美国专利申请公布2012/0164205描述了用于干扰双链核糖核酸而抑制无脊椎害虫的潜在靶标，包括：Chd3同源序列、β微管蛋白同源序列、40kDa V-ATP酶同源序列、EF1α同源序列、26S蛋白酶体亚基p28同源序列、保幼激素环氧化物水解酶同源序列、依赖溶胀的氯通道蛋白同源序列、葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶蛋白同源序列、Act42A蛋白同源序列、ADP-核糖基化因子1同源序列、转录因子IIB蛋白同源序列、几丁质酶同源序列、泛素缀合酶同源序列、甘油醛-3-磷酸脱氢酶同源序列、泛素B同源序列、保幼激素酯酶同源物以及α微管蛋白同源序列。
杀虫防治的用途
将包含所述实施例的核酸序列或其变体的菌株用于杀虫剂防治或用于将其他生物体工程改造为杀虫剂的一般方法在本领域中是已知的。参见例如美国专利No.5,039,523和EP 0480762A2。
可选择已知占据一种或多种所关注的作物的“植物圈”(叶面、叶围、根围和/或根面)的微生物宿主。选择这些微生物以便能够在特定环境中成功地与野生型微生物竞争，提供表达PIP-47多肽的基因的稳定维持和表达，并且理想的是，提供对该杀虫剂的改善保护使其不受环境降解和失活。
此类微生物包括细菌、藻类和真菌。特别要关注的是细菌类微生物例如假单胞菌属、欧文氏菌属(Erwinia)、沙雷氏菌属(Serratia)、克雷伯氏杆菌属(Klebsiella)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、链霉菌属、根瘤菌属、红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)、甲基菌属(Methylius)、农杆菌属、醋酸杆菌属(Acetobacter)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、节细菌属(Arthrobacter)、固氮菌属(Azotobacter)、明串珠菌属(Leuconostoc)和产碱杆菌属(Alcaligenes)，真菌尤其是酵母如酵母属(Saccharomyces)、隐球菌属(Cryptococcus)、克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)、红酵母属(Rhodotorula)和短梗霉属(Aureobasidium)。特别要关注的是植物圈细菌物种如丁香假单胞菌、荧光假单胞菌、绿针假单胞菌、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、木醋杆菌(Acetobacterxylinum)、农杆菌属、球形红假单胞菌(Rhodopseudomonas spheroides)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)、苜蓿根瘤菌(Rhizobium melioti)、真养产碱杆菌(Alcaligenes entrophus)、木质棍状杆菌(Clavibacter xyli)和棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)，以及植物圈酵母物种例如深红类酵母菌(Rhodotorularubra)、粘红酵母(R.glutinis)、海滨红酵母(R.marina)、橙黄红酵母(R.aurantiaca)、浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)、流散隐球酵母(C.diffluens)、罗伦隐球酵母(C.laurentii)、罗斯酵母(Saccharomyces rosei)、普地酵母(S.pretoriensis)、酿酒酵母(S.cerevisiae)、玫红掷孢酵母(Sporobolomyces roseus)、香气掷孢酵母(S.odorus)、维罗纳克鲁维酵母(Kluyveromyces veronae)和普鲁兰短梗霉(Aureobasidium pollulans)。特别要关注的是有色素微生物。特别值得关注的宿主生物体包括酵母，如红酵母属物种、短梗霉属物种、酵母属物种(如酿酒酵母)、掷孢酵母属物种、叶面生物如假单胞菌属物种(如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、荧光假单胞菌)、欧文氏菌属物种和黄杆菌属(Flavobacterium)物种和其他此类生物体，包括根瘤农杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)等。
可将编码本发明实施例的PIP-47多肽的基因引入到在植物表面繁殖的微生物(体表寄生菌)中，以将PIP-47多肽递送到潜在的靶标害虫。体表寄生菌例如可以是革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。
根定殖细菌可通过例如本领域已知的方法从所关注的植物分离。具体而言，定殖于根的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株可从植物的根分离(参见例如，Handelsmanet al.(1991)Appl.Environ.Microbiol.56：713-718(Resch M.等人，2008年，《核酸研究》，第36卷，第4391-4401页)。可通过本领域已知的标准方法将编码本发明实施例的PIP-47多肽的基因引入到定殖根的蜡状芽孢杆菌中。
可通过电转化手段将编码PIP-47多肽的基因引入到例如定殖根的芽孢杆菌属中。具体而言，可将编码PIP-47多肽的基因克隆到穿梭载体如pHT3101中(Lerecius，et al.，(1989)FEMS Microbiol.Letts.60：211-218(Lerecius等人，1989年，《欧洲微生物学会联合会微生物学快报》，第60卷，第211-218页))。含有特定PIP-47多肽基因的编码序列的穿梭载体pHT3101可例如通过电穿孔手段转化到定殖根的芽孢杆菌属中(Lerecius，et al.，(1989)FEMS Microbiol.Letts.60：211-218(Lerecius等人，1989年，《欧洲微生物学会联合会微生物学快报》，第60卷，第211-218页))。
可设计表达系统，使得PIP-47多肽被分泌到革兰氏阴性细菌(诸如大肠杆菌)的细胞质之外。分泌PIP-47多肽的好处是：(1)避免所表达的PIP-47多肽的潜在细胞毒性作用；和(2)改善PIP-47多肽的纯化效率，包括但不限于提高每体积细胞培养液的蛋白质回收和纯化效率和降低每单位蛋白质的回收和纯化时间和/或成本。
可例如通过将适当的大肠杆菌信号肽与PIP-47多肽的氨基末端融合，使PIP-47多肽在大肠杆菌中分泌。被大肠杆菌识别的信号肽可存在于已知在大肠杆菌中分泌的蛋白质中，例如OmpA蛋白(Ghrayeb，et al.，(1984)EMBO J，3：2437-2442(Ghrayeb等人，1984年，《欧洲分子生物学组织杂志》，第3卷，第2437-2442页))。OmpA是大肠杆菌外膜的主要蛋白质，因此它的信号肽被认为在易位过程中有效。另外，在加工前不需要对OmpA信号肽进行修饰，而其他信号肽例如脂蛋白信号肽则需要(Duffaud，et al.，(1987)Meth.Enzymol.153：492(Duffaud等人，1987年，《酶学方法》，第153卷，第492页))。
可在细菌宿主中发酵本发明实施例的PIP-47多肽，并且将所得的细菌加工并以与Bt菌株已被用作杀昆虫喷雾剂相同的方式用作微生物喷雾剂。在PIP-47多肽从芽孢杆菌分泌的情况中，用本领域已知的程序将分泌信号移除或者突变。这种突变和/或缺失能防止PIP-47多肽在发酵过程中被分泌到生长培养基中。将PIP-47多肽保持在细胞内，然后将细胞进行加工以得到包囊的PIP-47多肽。任何合适的微生物都可用于这个目的。已用假单胞菌属将Bt毒素表达为包囊蛋白，并且将所得的细胞进行加工并作为杀虫剂喷施(Gaertner，et al.，(1993)，in：Advanced Engineered Pesticides，ed.Kim(Gaertner等人，1993年，载于《高级工程化杀虫剂》，Kim编辑))。
或者，通过将异源基因引入细胞宿主中来产生PIP-47多肽。异源基因的表达直接或间接导致该杀虫剂的胞内产生和维持。然后将这些细胞在下述条件下进行处理：当将细胞施用于靶标害虫的环境时，所述条件能延长所产生的毒素在细胞中的活性。所得的产物保持该毒素的毒性。然后可按照常规技术配制这些天然包囊的PIP-47多肽以便施用于靶标害虫的寄生环境，例如土壤、水和植物的叶。参见例如EPA 0192319，以及其中引用的参考文献。
杀虫组合物
在一些实施例中，活性成分可以组合物的形式施用，并且可以同时或相继地与其他化合物一起施用于待处理的作物区域或植物。这些化合物可以是肥料、除草剂、冷冻保护剂、表面活性剂、洗涤剂、杀虫皂、休眠油、聚合物和/或定时释放或可生物降解的载体制剂，其允许在单次施用所述制剂后对靶区域进行长期给药。它们还可以是选择性除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或若干种这些制剂的混合物，如果需要，与其他农业上可接受的载体、表面活性剂或在配制领域中通常使用的促进施用的助剂一起使用。合适的载体和助剂可以是固体或者液体，并对应于通常用于配制技术的物质，例如天然或者再生的矿物质、溶剂、分散剂、湿润剂、增粘剂、粘合剂或者肥料。同样地，可将所述制剂制备成可食用的“诱饵”或塑造成害虫“陷阱”，以允许靶标害虫摄食或摄取所述杀虫制剂。
施用活性成分或农业化学组合物(包含至少一种由细菌菌株产生的PIP-47多肽)的方法包括叶面施用、种子包衣和土壤施用。施用次数和施用速度取决于相应害虫侵染的强度。
可以将组合物配制成散剂、粉剂、小丸剂、颗粒剂、喷雾剂、乳剂、胶体剂、溶液剂等，并且可以通过常规方法，例如包含所述多肽的细胞培养物的干燥、冻干、均质化、提取、过滤、离心、沉淀或浓缩来制备所述组合物。在包含至少一种此类杀虫多肽的所有这些组合物中，所述多肽可以约1重量％到约99重量％的浓度存在。
可通过本发明的方法在给定区域内杀死鳞翅目、双翅目、异翅目、线虫、半翅目或鞘翅目害虫或减少其数目，或者可将本发明的方法预防性地应用于环境区域以防止被易感害虫侵染。优选地，害虫摄取杀虫有效量的多肽，或与杀虫有效量的多肽接触。如本文所用，“杀虫有效量”是指这样的杀虫剂的量，所述量能够引起至少一只害虫死亡，或者明显减少害虫生长、取食或正常的生理发育。该量将随下列因素而变化：例如，待防治的具体的靶标害虫，待处理的特定的环境、地点、植物、作物或农业场所，环境条件，以及施用杀虫有效的多肽组合物的方法、速率、浓度、稳定性和数量。所述制剂还可以随气候条件、环境考虑和/或施用频率和/或害虫侵染的严重程度而变化。
可通过将细菌细胞、晶体和/或孢子悬液或者分离的蛋白质组分与所需的农业上可接受的载体配制在一起来制备所述的杀虫剂组合物。在施用前，可以合适的方法例如冻干、冷冻干燥、干燥，或者在水性载体、介质或合适稀释剂例如盐水或其他的缓冲液中配制所述组合物。配制的组合物可以为粉尘剂或颗粒材料的形式，或者在油(植物或矿物油)中的悬浮液的形式，或者水或油/水乳剂的形式，或者作为可湿性粉剂，或者与适合于农业应用的任何其他载体材料相组合。合适的农业载体可以是固体或液体，并且是本领域熟知的。术语“农业上可接受的载体”包括通常用于杀虫剂配制技术的所有助剂、惰性组分、分散剂、表面活性剂、增粘剂、粘合剂等；这些物质是杀虫剂配制领域的技术人员所熟知的。所述制剂可以与一种或多种固体或液体助剂相混合，并且可以通过多种方法来制备，例如通过使用常规配制技术将杀虫组合物与合适的助剂一起均匀地混合、掺合和/或研磨。合适的制剂和施用方法描述于美国专利No.6,468,523中，其以引用方式并入本文。还可以用一种或多种化学组合物来处理植物，这些化学组合物包括一种或多种除草剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。示例性的化学组合物包括：水果/蔬菜除草剂：莠去津、除草定、敌草隆、草甘膦、利谷隆、嗪草酮、西玛津、氟乐灵、吡氟禾草灵、草铵膦、氯吡嘧磺隆(Halo sulfuron Gowan)、百草枯、炔苯酰草胺、稀禾定、氟丙嘧草酯、氯吡嘧磺隆(Halosulfuron)、三嗪茚草胺；水果/蔬菜杀 昆虫剂：涕灭威、苏云金芽孢杆菌、甲萘威、克百威、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、地亚农、马拉硫磷、阿维菌素、氟氯氰菊酯/β-氟氯氰菊酯、顺式氰戊菊酯、λ-三氟氯氰菊酯、灭螨醌、联苯肼酯、甲氧虫酰肼、双苯氟脲、环虫酰肼、噻虫啉、呋虫胺、嘧螨酯、唑虫酰胺、噻虫胺、螺螨酯、γ-氯氟氰菊酯、螺甲螨酯、多杀菌素、氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、乙基多杀菌素、杀铃脲、螺虫乙酯、吡虫啉、氟虫双酰胺、硫双威、氰氟虫腙、氟啶虫胺腈、丁氟螨酯、腈吡螨酯、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、乙基多杀菌素、硫双威、氟啶虫酰胺、甲硫威、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、茚虫威、噻唑膦、苯线磷、硫线磷、吡丙醚、苯丁锡氧化物、噻螨酮、灭多威、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮；水果/蔬菜杀真菌剂：多菌灵、百菌清、EBDC、硫、甲基硫菌灵、嘧菌酯、霜脲氰、氟啶胺、福赛得、异菌脲、醚菌酯、甲霜灵/精甲霜灵、肟菌酯、噻唑菌胺、丙森锌、肟菌酯、环酰菌胺、富马酸恶咪唑、氰霜唑、咪唑菌酮、苯酰菌胺、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、环氟菌胺、啶酰菌胺；谷类除草剂：异丙隆、溴苯腈、碘苯腈、苯氧基类、氯磺隆、炔草酯、禾草灵、吡氟草胺、恶唑禾草灵、双氟磺草胺、氟草烟、甲磺隆、醚苯磺隆、氟酮磺隆、碘甲磺隆、丙苯磺隆、氟吡酰草胺、甲基二磺隆、氟丁酰草胺、唑啉草酯、酰嘧磺隆、噻磺隆、苯磺隆、氟啶嘧磺隆、磺酰磺隆、磺酰草吡唑、甲氧磺草胺、氟噻草胺、肟草酮、派罗克杀草砜；谷类杀真菌剂：多菌灵、百菌清、嘧菌酯、环丙唑醇、嘧菌环胺、丁苯吗啉、氟环唑、醚菌酯、苯氧喹啉、戊唑醇、肟菌酯、硅氟唑、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌胺、丙硫菌唑、氟嘧菌酯；谷类杀昆虫剂：乐果、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、α-氯氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、联苯菊酯、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、毒死蝶(Clorphyriphos)、甲胺磷、乙酰甲胺磷、抗蚜威、甲硫威；玉蜀黍除草剂：莠去津、甲草胺、溴苯腈、乙草胺、麦草畏、二氯吡啶酸、(s-)二甲吩草胺、草铵膦、草甘膦、异恶唑草酮、(S-)异丙甲草胺、甲基磺草酮、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、玉嘧磺隆、磺草酮、甲酰胺磺隆、苯吡唑草酮、环磺酮、苯嘧磺草胺、酮脲磺草吩、氟噻草胺、派罗克杀草砜；玉蜀黍杀昆虫剂：克百威、毒死蜱、联苯菊酯、氟虫腈、吡虫啉、高三氟氯氰菊酯、七氟菊酯、特丁硫磷、噻虫嗪、噻虫胺、螺甲螨酯、氟虫双酰胺、杀铃脲、氯虫苯甲酰胺、溴氰菊酯、硫双威、β-氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、联苯菊酯、虱螨脲、杀虫隆、七氟菊酯、丁基嘧啶磷、乙虫腈、溴氰虫酰胺、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、阿维菌素、甲硫威、螺螨酯、螺虫乙酯；玉蜀黍杀真菌剂：种衣酯、福美双、丙硫菌唑、戊唑醇、肟菌酯；水稻除 草剂：丁草胺、敌稗、四唑嘧磺隆、苄嘧磺隆、氰氟草酯、杀草隆、四唑酰草胺、咪唑磺隆、苯噻草胺、恶嗪草酮、吡嘧磺隆、稗草畏、二氯喹啉酸、禾草丹、茚草酮、氟噻草胺、四唑酰草胺、氯吡嘧磺隆、恶嗪草酮、双环磺草酮、环酯草醚、五氟磺草胺、双草醚、丙炔恶草酮、乙氧磺隆、丙草胺、甲基磺草酮、特呋三酮、草酮、恶唑禾草灵、嘧磺草胺(Pyrimisulfan)；水稻杀昆虫 剂：地亚农、杀螟硫磷、仲丁威、久效磷、丙硫克百威、噻嗪酮、呋虫胺、氟虫腈、吡虫啉、异丙威、噻虫啉、环虫酰肼、噻虫啉、呋虫胺、噻虫胺、乙虫腈、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺、溴氰菊酯、啶虫脒、噻虫嗪、溴氰虫酰胺、多杀菌素、乙基多杀菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、氯氰菊酯、毒死蜱、杀螟丹、甲胺磷、醚菊酯、三唑磷、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、克百威、丙硫克百威；水稻杀真菌剂：甲基硫菌灵、嘧菌酯、环丙酰菌胺、敌瘟磷、嘧菌腙、异稻瘟净、稻瘟灵、戊菌隆、烯丙苯噻唑、咯喹酮、三环唑、肟菌酯、双氯氰菌胺、稻瘟酰胺、硅氟唑、噻酰菌胺；棉花除草剂：敌草隆、伏草隆、MSMA、乙氧氟草醚、扑草净、氟乐灵、唑草酮、烯草酮、精吡氟禾草灵、草甘膦、氟草敏、二甲戊灵、嘧草硫醚、三氟啶磺隆、吡喃草酮、草铵膦、丙炔氟草胺、噻苯隆；棉花杀昆虫剂：乙酰甲胺磷、涕灭威、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、马拉硫磷、久效磷、阿维菌素、啶虫脒、甲胺基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威、高三氟氯氰菊酯、多杀菌素、硫双威、γ-氯氟氰菊酯、螺甲螨酯、啶虫丙醚、氟啶虫酰胺、氟虫双酰胺、杀铃脲、氯虫苯甲酰胺、β-氟氯氰菊酯、螺虫乙酯、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、呋虫胺、氟虫双酰胺、溴氰虫酰胺、多杀菌素、乙基多杀菌素、γ氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、硫双威、阿维菌素、氟啶虫酰胺、啶虫丙醚、螺甲螨酯、氟啶虫胺腈、丙溴磷、三唑磷、硫丹；棉花杀真菌剂：土菌灵、甲霜灵、五氯硝基苯；大豆除草剂：甲草胺、灭草松、氟乐灵、氯嘧磺隆、氯酯磺草胺、恶唑禾草灵、氟磺胺草醚、吡氟禾草灵、草甘膦、甲氧咪草烟、咪唑喹啉酸、咪唑乙烟酸、(S-)异丙甲草胺、嗪草酮、二甲戊灵、吡喃草酮、草铵膦；大豆杀昆虫剂：高三氟氯氰菊酯、灭多威、对硫磷、硫双威、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、多杀菌素、乙基多杀菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、氟虫腈、乙虫腈、溴氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、γ和λ氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、螺虫乙酯、螺螨酯、杀铃脲、氟啶虫酰胺、硫双威、β-氟氯氰菊酯；大豆杀真菌剂：嘧菌酯、环丙唑醇、氟环唑、粉唑醇、吡唑醚菌酯、戊唑醇、肟菌酯、丙硫菌唑、四氟醚唑；甜菜除草剂：氯草敏、双苯胺灵、乙氧呋草黄、甲双苯胺灵、野麦畏、二氯吡啶酸、吡氟禾草灵、环草定、苯嗪草酮、氯甲喹啉酸、噻草酮、氟胺磺隆、吡喃草酮、喹禾灵；甜菜杀昆虫剂：吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、溴氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、γ/λ氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、七氟菊酯、氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、氟虫腈、克百威；卡诺拉油菜除草剂：二氯吡啶酸、禾草灵酸、吡氟禾草灵、草铵膦、草甘膦、吡唑草胺、氟乐灵、胺苯磺隆、氯甲喹啉酸、喹禾灵、烯草酮、吡喃草酮；卡诺拉油菜杀真 菌剂：嘧菌酯、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、咪鲜胺、乙烯菌核利；卡诺拉油菜杀昆虫剂：克百威、有机磷酸酯类、拟除虫菊酯类、噻虫啉、溴氰菊酯、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、啶虫脒、呋虫胺、β-氟氯氰菊酯、γ和λ氯氟氰菊酯、τ-氟胺氰菊酯、乙虫腈、多杀菌素、乙基多杀菌素、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮。
在一些实施例中，除草剂是莠去津、除草定、敌草隆、氯磺隆、甲磺隆、噻吩磺隆、苯磺隆、乙草胺、麦草畏、异恶唑草酮、烟嘧磺隆、砜嘧磺隆、嘧草硫醚、丙炔氟草胺、氯嘧磺隆、嗪草酮、喹禾灵、S-异丙甲草胺、环嗪酮(Hexazinne)或它们的组合。
在一些实施例中，杀昆虫剂是高效氰戊菊酯、氯虫苯甲酰胺、灭多威、茚虫威、杀线威或它们的组合。
杀虫和杀昆虫活性
“害虫”包括但不限于昆虫、真菌、细菌、线虫、螨虫、壁虱等等。昆虫害虫包括选自以下各目的昆虫：鞘翅目、双翅目、膜翅目(Hymenoptera)、鳞翅目、食毛目(Mallophaga)、同翅目(Homoptera)、半翅目、直翅目(Orthroptera)、缨翅目(Thysanoptera)、革翅目(Dermaptera)、等翅目(Isoptera)、虱目(Anoplura)、蚤目(Siphonaptera)、毛翅目(Trichoptera)等，特别是鳞翅目和鞘翅目。
本领域技术人员将会认识到，并不是所有的化合物都对所有的害虫同等有效。所述实施例的化合物显示出对昆虫害虫的活性，这些昆虫害虫可包括经济上重要的农艺害虫、森林害虫、温室害虫、苗圃害虫、观赏植物害虫、食物和纤维害虫、公共健康和动物健康害虫、家庭和商业设施害虫、居室害虫和仓储害虫。
鳞翅目幼虫包括但不限于夜蛾科(Noctuidae)的粘虫、切根虫、尺蠖和棉铃虫：秋夜蛾(Spodoptera frugiperda JE Smith，fall armyworm)；甜菜夜蛾(S.exigua Hübner，beet armyworm)；斜纹夜蛾，茶蚕(S.litura Fabricius，tobacco cutworm，clustercaterpillar)；披肩粘虫(Mam estra configurata Walker，bertha armyworm)；甘蓝夜蛾(M.brassicae Linnaeus，cabbage moth)；小地老虎(Agrotis ipsilon Hufnagel，blackcutworm)；西部夜蛾(A.orthogonia Morrison，western cutworm)；颗粒夜蛾(A.subterranea Fabricius，granulate cutworm)；棉叶虫(Alabama argillacea Hübner，cotton leaf worm)；粉纹夜蛾(Trichoplusia ni Hübner，cabbage looper)；大豆尺蠖(Pseudoplusia includens Walker，soybean looper)；黎豆毛虫(Anticarsia gemmatalisHübner，velvetbean caterpillar)；苜蓿绿夜蛾(Hypena scabra Fabricius，greencloverworm)；烟青虫(Heliothis virescens Fabricius，tobacco budworm)；粘虫(Pseudaletia unipuncta Haworth，armyworm)；糙肤切根虫(Athetis mindara Barnesand Mcdunnough，rough skinned cutworm)；暗缘地老虎(Euxoa messoria Harris，darksided cutworm)；埃及金刚钻(Earias insulana Boisduval，spiny bollworm)；翠纹金刚钻(E.vittella Fabricius，spotted bollworm)；美洲螟蛉(Helicoverpa armigera Hübner，American bollworm)；玉米穗虫或棉铃虫(H.zea Boddie，corn earworm or cottonbollworm)；斑马纹夜蛾(Melanchra picta Harris，zebra caterpillar)；柑橘夜蛾(Egira(Xylomyges)curialis Grote，citrus cutworm)；来自螟蛾科(Pyralidae)的钻心虫、鞘蛾、结网毛虫、梢斑螟和雕叶虫：欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalis Hübner，European cornborer)；脐橙螟蛾(Amyelois transitella Walker，naval orangeworm)；地中海粉斑螟(Anagasta kuehniella Zeller，Mediterranean flour moth)；粉斑螟(Cadra cautellaWalker，almoBd moth)；水稻螟虫(Chilo suppressalis Walker，rice stem borer)；高粱钻心虫(C.partellus，sorghum borer)；米蛾(Corcyra cephalonica Stainton，ricemoth)；玉米根网虫(Crambus caliginosellus Clemens，corn root webworm)；早熟禾草螟(C.teterrellus Zincken，bluegrass webworm)；稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalisrice leaf roller)；葡萄卷叶虫(Desmiafuneralis Hübner，grapeleaffolder)；甜瓜野螟(Diaphania hyalinata Linnaeus，melon worm)；泡菜虫(D.nitidalis Stoll，pickleworm)；西南玉米钻心虫(Diatraea grandiosella Dyar，southwestern corn borer)、甘蔗钻心虫(D.saccharalis Fabricius，surgarcaneborer)；墨西哥稻螟(Eoreuma loftini Dyar，Mexican rice borer)；烟草粉螟(Epheshaelutella Hübner，obacco(cacao)moth)；大蜡螟(Galleria mellonella Linnaeus，greater wax moth)；草地螟(Herpetogramma licarsisalis Walker，sod webworm)；向日葵斑螟(Homoeosoma electelluin Hulst，sunflower moth)；小玉米茎钻心虫(Elasmopalpus lignosellus Zeller，lesser cornstalk borer)；小蜡螟(Achroiagrisella Fabricius，lesser wax moth)；甜菜网螟(Loxostege sticticalis Linnaeus，beet webworm)；茶树网蛾(Orthaga thyrisalis Walker，tea tree web moth)；豆野螟(Maruca testulalis Geyer，bean pod borer)；印度谷螟(Plodia interpunctella Hübner，Indian meal moth)；三化螟(Scirpophaga incertulas Walker，yellow stemborer)；芹菜网螟(Udea rubigaliscelery leaftier)；以及卷蛾科(Tortricidae)的卷叶虫、蚜虫、种实虫以及果实虫：西部黑头长翅卷蛾(Aclerisgloverana Walsingham，Western blackheaded budworm)；东部黑头长翅卷蛾(A.varianaFernald，Eastern blackheaded budworm)；果树黄卷蛾(Archips argyrospila Walker，fruit tree leaf roller)；欧洲卷叶蛾(A.rosana Linnaeus，European leaf roller)；以及其他黄卷蛾属(Archips)物种，棉褐带卷蛾(Adoxophtes orana Fischer vonsummer fruit tortrix moth)；向日葵细卷叶蛾(Cochylis hospesWalsingham，banded sunflower moth)；棒小卷蛾(Cvdia latiferreana Walsingham，filbertworm)；苹果蠹蛾(C.pomonella Linnaeus，coding moth)；杂色卷叶蛾(Platynotaflavedana Clemens，variegated leafroller)；荷兰石竹小卷蛾(P.stultanaWalsingham，omnivorous leafroller)；葡萄花翅小卷蛾(Lobesia botrana Denis&Schiffermüller，European grape vine moth)；苹果芽小卷叶蛾(Spilonota ocellanaDenis&Schiffermüller，eyespotted bud moth)；葡萄浆果蛾(Endopiza viteanaClemens，grape berry moth)；葡萄果蠹蛾(Eupoecilia ambiguella Hübner，vine moth)；巴西苹果巻叶蛾(Bonagota salubricola Meyrick，Brazilian apple leafroller)；东方果蛾(Grapholita molesta Busck，oriental fruit moth)；向日葵芽蛾(Suleimahelianthana Riley，sunflower bud moth)；带卷蛾属物种(Argyrotaenia spp.)；色卷蛾属物种(Choristoneura spp.)。
鳞翅目中入选的其他农艺学害虫包括但不限于秋星尺蠖(Alsophila pometariaHarris，fall cankerworm)；桃条麦蛾(Anarsia lineatella Zeller，peach twig borer)；橙色条纹橡树虫(Anisota senatoria J.E.Smith，orange striped oakworm)；中国橡树柞蚕蛾(Anthcraca pernyi Guérin-Méneville，Chinese Oak Silk moth)；蚕(Bombyx moriLinnaeus，Silkworm)；棉叶潜蛾(Bucculatrix thurberiella Busck，cotton leafperforator)；苜蓿粉蝶(Colias eurytheme Boisduval，alfalfa caterpillar)；核桃天社蛾(Datana integerrima Grote&Robinson，walnut caterpillar)；落叶松毛虫(Dendrolimus sibiricus Tschetwerikov，Siberian silk moth)、榆树尺蠖(Ennomossubsignaria Hübner，elm spanworm)；椴尺蠖(Erannis tiliaria Harris，lindenlooper)；黄毒蛾(Euproctis chrysorrhoea Linnaeus，browntail moth)；葡萄叶烟翅斑蛾(Harrisina americana Guérin-Méneville，grapeleaf skeletonizer)；牧草天蚕蛾(Hemileuca oliviae Cockrell，range caterpillar)；美国白蛾(Hyphantria cuneaDrury，fall webworm)；番茄蛲虫(Keiferia lycopersicella Walsingham，tomatopinworm)；东部铁杉尺蠖(Lambdina fiscellaria fiscellaria Hulst，Eastern hemlocklooper)；西部铁杉尺蠖(L.fiscellaria lugubrosa Hulst，Western hemlock looper)；缎蛾(Leucoma salicis Linnaeus，satin moth)；舞毒蛾(Lymantria dispar Linnaeus，gypsy moth)；五点天蛾，番茄天蛾幼虫(Manduca quinquemaculata Haworth，fivespotted hawk moth，tomato hornworm)；番茄天蛾幼虫，烟草天蛾幼虫(M sexta Haworth，tomato hornworm，tobacco hornworm)；果园秋尺蛾(Operophtera brumata Linnaeus，winter moth)；春尺蠖(Paleacrita vernata Peck，spring cankerworm)；巨燕尾蝶，桔凤蝶(Papilio cresphontes Cramer，giant swallowtail，orange dog)；加州橡树虫(Phryganidia californica Packard，California oakworm)；柑桔潜叶蛾(Phyllocnistiscitrella Stainton，citrus leafminer)；斑幕潜叶蛾(Phyllonorycter blancardellaFabricius，spotted tentiform leafminer)；大白粉蝶(Pieris brassicae Linnaeus，large white butterfly)；小菜蛾(P.rapae Linnaeus，small white butterfly)；暗脉菜粉蝶(P.napi Linnaeus，green veined white butterfly)；洋蓟羽蛾(Platyptiliacarduidactyla Riley，artichoke plume moth)；菱纹背蛾(Plutella xylostellaLinnaeus，diamondback moth)；棉红铃虫(Pectinophora gossypiella Saunders，pinkbollworm)；南方菜青虫(Pontia protodice Boisduval&Leconte，Southerncabbageworm)；杂食尺蠖(Sabulodes aegrotata Guenée，omnivorous looper)；红驼背毛虫(Schizura conclnna J.E.Smith，red humped caterpillar)；麦蛾(Sitotrogacerealella Olivier，Angoumois grain moth)；松异带蛾(Thaumetopoea pityocampaSchiffermuller，pine processionary caterpillar)；结网衣蛾(Tineola bisselliellaHummel，webbing clothesmoth)；番茄斑潜蝇(Tuta absoluta Meyrick，tomatoleafminer)；巢蛾(Yponomeuta padella Linnaeus，ermine moth)；Heliothis subflexaGuenée；天幕毛虫属物种(Malacosoma spp.)和古毒蛾属物种(Orgyia spp)。
值得关注的是鞘翅目的幼虫和成虫，包括来自长角象科(Anthribidae)、豆象科(Bruchidae)和象甲科(Curculionidae)的象鼻虫(包括但不限于：棉铃象甲(Anthonomusgrandis Boheman，boll weevil)；稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel，ricewater weevil)；谷象(Sitophilus granarius Linnaeus，granary weevil)；米象(S.oryzae Linnaeus，rice weevil)；车轴草叶象(Hypera punctata Fabricius，cloverleaf weevil)；密点细枝象(Cylindrocopturus adspersus LeConte，sunflower stemweevil)；红色葵花籽象甲(Smicronyx fulvus LeConte，red sunflower seed weevil)；灰色葵花籽象甲(S.sordidus LeConte，gray sunflower seed weevil)；玉米象虫(Sphenophorus maidisChittenden，maize billbug)；叶甲科(Chrysomelidae)的跳甲、黄瓜叶甲、根虫、叶甲、马铃薯叶甲和潜叶虫(包括但不限于：科罗拉多马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata Say，Colorado potato beetle)；西方玉米根虫(Diabrotica virgifera virgifera LeConte，western corn rootworm)；北方玉米根虫(D.barberi Smith&Lawrence northern corn rootworm)；南方玉米根虫(D.undecimpunctata howardi Barber，southern corn rootworm)；玉米跳甲(Chaetocnema pulicaria Melsheimer，corn flea beetle)；十字花科跳甲(Phyllotretacruciferae Goeze，corn flea beetle)；葡萄肖叶甲(Colaspis brunnea Fabricius，grape colaspis)；谷叶甲虫(Oulema melanopus Linnaeus，cereal leaf beetle)；向日葵叶甲(Zygogramma exclamationis Fabricius，sunflower beetle))；来自瓢甲科(Coccinellidae)的甲虫(包括但不限于：墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis Mulsant，Mexican bean beetle))；来自金龟科(Scarabaeidae)的金龟子和其他甲虫(包括但不限于：日本金龟子(Popillia japonica Newman，Japanese beetle)；北方独角仙，白蛴螬(Cyclocephala borealis Arrow，northern masked chafer，white grub)；南方独角仙，白蛴螬(C.immaculata Olivier，southern masked chafer，white grub)；欧洲金龟子(Rhizotrogus majalis Razoumowsky，European chafer)；白蛴螬(Phyllophaga crinitaBurmeister，white grub)；胡萝卜金龟(Ligyrus gibbosus De Geer，carrot beetle))；来自皮蠹科(Dermestidae)的地毯圆皮蠹；来自叩头虫科(Elateridae)的金针虫，伪金针虫属物种(Eleodes spp.)、纹叩甲属物种(Melanotus spp.)；宽胸叩头虫属物种(Conoderusspp.)；甜菜叩甲属物种(Limonius spp.)；细胸叩甲属物种(Agrtotes spp.)；旱地金针虫属物种(Ctenicera spp.)；Aeolus spp.；来自小蠹科(Scolytidae)的树皮甲虫以及来自拟步甲科(Tenebrionidae)的甲虫。
双翅目的成虫和未成熟虫是值得关注的，包括：潜叶虫如玉米斑潜叶蝇(Agromyzaparvicornis Loew，corn blotch leafminer)；摇蚊(包括但不限于：高粱瘿蚊(Contariniasorghicola Coquillett，sorghum midge)；黑森瘿蚊(Mayetiola destructor Say，Hessian fly)；小麦吸浆虫(Sitodiplosis mosellana Géhin，wheat midge)；向日葵籽瘿蚊(Neolasioptera murtfeldtiana Felt，sunflower seed midge))；果蝇(实蝇科(Tephritidae))、瑞典秆蝇(Oscinella frit Linnaeus，frit flies)；蛆虫(包括但不限于：玉米种蝇(Delia platura Meigen，seedcorn maggot)；麦种蝇(D.coarctata Fallen，wheat bulb fly)；及其他地种蝇属物种(Delia spp.)、麦秆蝇(Meromyza americanaFitch，wheat stem maggot)；家蝇(Musca domestica Linnaeus，house flies)；夏厕蝇(Fannia canicularis Linnaeus)、小家厕蝇(F.femoralis Stein，lesser house flies)；螫蝇(Stomoxys calcitrans Linnaeus，stable flies))；面蝇、角蝇、丽蝇、金蝇属物种(Chrysomya spp.)；伏蝇属物种(Phormia spp.)；及其他蝇类害虫、马蝇类虻属物种(Tabanus spp.)；肤蝇类胃蝇属物种(Gastrophilus spp.)；狂蝇属物种(Oestrus spp.)；牛蝇类皮蝇属物种(Hypoderma spp.)；鹿蝇类斑虻属物种(Chrysops spp.)；蜱蝇属(Melophagus)羊蝶蝇(ovinus Linnaeus，keds)；及其他短角亚目(Brachyceta)、蚊类伊蚊属物种(Aedes spp.)；按蚊属物种(Anopheles spp.)；库蚊属物种(Culex spp.)；黑蝇类原蚋属物种(Prosimulium spp.)；蚋属物种(Simulium spp.)；蠓、沙蝇、尖眼蕈蚊和其他长角亚目(Nematocera)。
作为所关注的昆虫而包括的是半翅目和同翅目的成虫和若虫，例如但不限于：球蚜科(Adelgidae)的球蚜、盲蝽科(Miridae)的盲蝽、蝉科(Cicadidae)的蝉、叶蝉科(Cicadellidae)的叶蝉、小绿叶蝉属(Empoasca)物种；菱飞虱科(Cixiidae)、蛾蜡蝉科(Flatidae)、蜡蝉总科(Fulgoroidea)、圆飞虱科(Issidae)以及稻虱科(Delphacidae)的飞虱；角蝉科(Membracidae)的角蝉；木虱科(Psyllidae)的木虱；粉虱科(Aleyrodidae)的粉虱；蚜科(Aphididae)的蚜虫；根瘤蚜科(Phylloxeridae)的根瘤蚜；粉蚧科(Pseudococcidae)的粉蚧；链介壳虫科(Asterolecanidae)、软介壳虫科(Coccidae)、洋红蚧科(Dactylopiidae)、盾介壳虫科(Diaspididae)、绒蚧科(Eriococcidae)、旌介壳虫科(Ortheziidae)、刺葵介壳虫科(Phoenicococcidae)以及硕介壳虫科(Margarodidae)的介壳虫；网蝽科(Tingidae)的网蝽；蝽科(Pentatomidae)的椿象，麦长蝽属(Blissus)物种；长蝽科(Lygaeidae)的其他长蝽(seed bug)、沫蝉科(Cercopidae)的沫蝉、缘蝽科(Coreidae)的南瓜缘蝽以及红蝽科(Pyrrhocoridae)的红蝽和棉蝽象。
来自同翅目的在农业上重要的成员还包括但不限于：豌豆蚜虫(Acyrthisiphonpisum Harris，pea aphid)；豇豆蚜虫(Aphis craccivora Koch，cowpea aphid)；黑豆蚜虫(A.fabae Scopoli，black bean aphid)；棉花蚜虫，甜瓜蚜虫(A.gossypu Glover，cottonaphid，melon aphid)；玉米根蚜虫(A.maideradicis Forbes，corn root aphid)；苹果蚜虫(A.pomi De Geer，apple aphid)；绣线菊蚜虫(A.spiraecola Patch，spirea aphid)；毛地黄蚜虫(Aulacorthum solani Kaltenbach，foxglave aphid)；草莓蚜虫(Chaetosiphonfragaefolii Cockerell，strawberry aphid)；俄罗斯小麦蚜虫(Diuraphis noxiaKurdjumov/Mordvilko，Russian wheat aphid)；红苹果蚜虫(Dysaphis plantagineaPaaserini，rosy apple aphid)；苹果绵蚜(Eriosoma lanigerum Hausmann，woolly appleaphid)；甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae Linnaeus，cabbage aphid)；桃大尾蚜(Hyalopterus pruni Geoffroy，mealy plum aphid)；萝卜蚜(Lipaphis erysimiKaltenbach，turnip aphid)；麦蚜虫(Metopolophium dirrhodum Walker，cereal aphid)；马铃薯蚜虫(Macrosiphum euphorbiae Thomas，potato aphid)；桃-马铃薯蚜虫，绿桃蚜虫(Myzus persicae Sulzer，peach-potato aphid，green peach aphid)；莴苣蚜虫(Nasonovia ribisnigri Mosley，lettuce aphid)；根蚜和瘿蚜(Pemphigus spp.，rootaphids and gall aphids)；玉米蚜(Rhopalosiphum maidis Fitch，corn leaf aphid)；禾谷缢管蚜(R.padi Linnaeus，bird cherry-oat aphid)；麦二叉蚜(Schizaphis graminumRondani，greenbug)；甘蔗黄蚜(Sipha flava Forbes，yellow sugarcane aphid)；麦长管蚜(Sitobion avenae Fabricius，English grain aphid)；苜蓿采斑蚜(Therioaphismaculata Buckton，spotted alfalfa aphid)；桔二叉蚜(Toxoptera aurantu Boyer deFonscolombe，black citrus aphid)；以及褐橘声蚜(T.citricida Kirkaldy，browncitrus aphid)；球蚜(Adelges spp.，adelgids)；美核桃根瘤蚜(Phylloxera devastatrixPergande，pecan phylloxera)；烟草粉虱，甘薯粉虱(Bemisia tabaci Gennadius，tobaccowhitefly，sweetpotato whitefly)；银叶粉虱(B.argentifplii Bellows&Perring，silverleaf whitefly)；柑桔粉虱(Dialeurodes citri Ashmead，citrus whitefly)；纹翅粉虱(Trialeurodes abutiloneus，bandedwinged whitefly)及温室粉虱(T.vaporariorumWestwood，greenhouse whitefly)；马铃薯叶蝉(Empoasca fabae Harris，potatoleafhopper)；灰飞風(Laodelphax striatellus Fallen，smaller brown planthopper)；紫菀叶蝉(Macrolestes quadrilineatus Forbes，aster leafhopper)；绿叶蝉(Nephotettix cinticeps Uhler，green leafhopper)；稻叶蝉(N.nigropictus riceleafhopper)；稻褐飞虱(Nilaparvata lugens brown planthopper)；玉米花翅飞虱(Peregrinus maidis Ashmead，com planthopper)；白背飞虱(Sogatella furciferaHorvath，white-backed planthopper)；稻飞虱(Sogatodes orizicola Muir，ricedelphacid)；苹果白叶蝉(Typhlocyba pomaria McAtee，white apple leafhopper)；葡萄斑叶蝉(Erythroneoura spp.，grape leafhoppers)；周期蝉(Magicicada septendecimLinnaeus，periodical cicada)；吹绵蚧(Icerya purchasi Maskell，cottony cushionscale)；梨圆蚧(Quadraspidiotus perniciosus Comstock，San Jose scale)；桔粉蚧(Planococcus citri Risso，citrus mealybug)；粉蚧属物种(Pseudococcus spp.)(其他粉蚧)；梨黄木虱(Cacopsylla pyricola Foerster，pear psylla)；柿木虱(Triozadiospyri Ashmead，persimmon psylla)。
来自半翅目的在农业上重要的所关注的物种包括但不限于：稻绿蝽(Acrosternumhilare Say，green stink bug)；南瓜缘蝽(Anasa tristis De Geer，squash bug)；麦长蝽(Blissus leucopterus leucopterus Say，chinch bug)；棉网蝽(Corythuca gossypuFabricius，cotton lace bug)；番茄蝽(Cyrtopeltis modesta Distant，tomato bug)；棉蝽(Dysdercus suturelluscotton stainer)；褐臭蝽(Euschistusservus Say，brown stink bug)；一斑臭蝽(E.variolarius Palisot de Beauvois，one-spotted stink bug)；长蝽属物种(Graptostethus spp.)(长蝽系群)；松叶根蝽(Leptoglossus corculus Say，leaf-footed pine seed bug)；美国牧草盲蝽(Lyguslineolaris Palisot de Beauvois，tarnished plantbug)；豆荚草盲蝽(L.HesperusKnight，Western tarnished plant bug)；牧草盲蝽(L.pratensis Linnaeus，commonmeadow bug)；长毛草盲蝽(L.rugulipennis Poppius，European tarnished plant bug)；长绿盲蝽(Lygocoris pabulinus Linnaeus，common green capsid)；稻绿蝽(Nezaraviridula Linnaeus，southern green stink bug)；稻蝽(Oebalus pugnax Fabricius，rice stink bug)；大马利筋长蝽(Oncopeltus fasciatus Dallas，large milkweed bug)；棉盲蝽(Pseudatomoscelis seriatus Reuter，cotton fleahopper)。
此外，实施例可有效对抗例如如下半翅目昆虫：草莓蝽(Calocoris norvegicusGmelin，strawberry bug)；奥盲蝽(Orthops campestris Linnaeus)；苹盲蝽(Plesiocorisrugicollis Fallen，apple capsid)；番茄蝽(Cyrtopeltis modestus Distant，tomatobug)；烟草小盲蝽(Cyrtopeltis notatus Distant，suckfly)；白斑盲蝽(Spanagonicusalbofasciatus Reuter，whitemarked fleahopper)；皂荚蝽(Diaphnocoris chlorionisSay，honeylocust plant bug)；洋葱蝽(Labopidicola allii Knight，onion plant bug)；棉盲蝽(Pseudatomoscelis seriatus Reuter，cotton fleahopper)；苜蓿褐盲蝽(Adelphocoris rapidus Say，rapid plant bug)；四线盲蝽(Poecilocapsus lineatusFabricius，four-lined plant bug)；拟麦长蝽(Nysius ericae Schilling(假麦长蝽)；茶黄蓟马(Nysius raphanus Howard)(假麦长蝽)；南方绿蝽(Nezara viridula Linnaeus，Southern green stink bug)；扁盾蝽属物种(Eurygaster spp.)；缘蝽属物种(Coreidaespp.)；红蝽属物种(Pyrrhocoridae spp.)；谷蛾属物种(Tinidae spp.)；负子蝽属物种(Blostomatidae spp.)；猎蝽属物种(Reduviidae spp.)；以及臭蝽属物种(Cimicidaespp.)。
还包括在内的是蜱螨目(Acari)(螨类)的成虫和幼虫，如小麦卷叶螨(Aceriatosichella Keifer，wheat curl mite)；褐色小麦螨(Petrobia latens Müller，brownwheat mite)；叶螨科(Tetranychidae)的叶螨和红螨，欧洲红螨(Panonychus ulmi Koch，European red mite)；二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch，two spotted spidermite)；迈叶螨(T.mcdanieli McGregor，McDaniel mite)；朱砂叶螨(T.cinnabarinusBoisduval，carmine spider mite)；土耳其斯坦叶螨(T.turkestani Ugarov&Nikolski，strawberry spider mite)；细须螨科(Tenuipalpidae)的扁平螨类：葡萄短须螨(Brevipalpus lewisi McGregor，citrus flat mite)；瘿螨科(Eriophyidae)的锈螨和芽蜱以及其他食叶螨和对人类和动物健康重要的螨，即表皮螨科(Epidermoptidae)中的尘螨，蠕形螨科(Demodicidae)中的毛囊螨，食甜螨科(Glycyphagidae)的谷螨，硬蜱科(Ixodidae)的蜱虫，鹿蜱(Ixodes scapularis Say，deer tick)；全环硬蜱(Ixodesholocyclus Neumann，Australian paralysis tick)；美洲犬蜱(Dermacentor variabilisSay，American dog tick)；美洲钝眼蜱(Amblyomma americanum Linnaeus，lone startick)；以及痒螨科(Psoroptidae)、蒲螨科(Pyemotidae)和疥螨科(Sarcoptidae)的痒螨和疥螨。
缨尾目的昆虫害虫是值得关注的，例如衣鱼(Lepisma saccharina Linnaeus，silverfish)；家衣鱼(Thermobia domestica Packard，firebrat)。
所涵盖的其他节肢害虫包括：蜘蛛目(Araneae)中的蜘蛛，如褐色隐士蜘蛛(Loxosceles reclusa Gertsch&Mulaik，brown recluse spider)和黑寡妇蜘蛛(Latrodectus mactans Fabricius，black widow spider)以及蚰蜓目(Scutigeromorpha)的多足类例如蚰蜒(Scutigera coleoptrata Linnaeus，house centipede)。
所关注的昆虫害虫包括椿象和其他相关昆虫的总科，包括但不限于属于蝽科(稻绿蝽(Nezara viridula)、茶翅蝽(Halyomorpha halys)、璧蝽(Piezodorus guildini)、褐臭蝽(Euschistus servus)、喜绿蝽(Acrosternum hilare)、大豆褐椿(Euschistusheros)、Euschistus tristigmus、喜绿蝽、Dichelops furcatus、Dichelops melacanthus和Bagrada hilaris(菘蝽))、龟蝽科(筛豆龟蝽(Megacopta cribraria)-豆圆蝽(Beanplataspid))和土蝽科(Scaptocoris castanea-根椿象)的物种，以及鳞翅目物种，包括但不限于：小菜蛾，例如玉米穗虫(Helicoverpa zea Boddie)；大豆尺蠖，例如大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens Walker)；以及黎豆毛虫，例如黎豆夜蛾(Anticarsiagemmatalis Hübner)。
用于测量杀虫活性的方法是本领域熟知的。参见例如，Czapla and Lang，(1990)J.Econ.Entomol.83：2480-2485(Czapla和Lang，1990年，《经济昆虫学杂志》，第83卷，第2480-2485页)；Andrews，et al.，(1988)Biochem.J.252：199-206(Andrews等人，1988年，《生物化学杂志》，第252卷，第199-206页)；Marrone，et al.，(1985)J.of EconomicEntomology78：290-293(Marrone等人，1985年，《经济昆虫学杂志》，第78卷，第290-293页)以及美国专利No.5,743,477，所有这些文献全文以引用方式并入本文。一般而言，将蛋白质混合并用于摄食测定。参见例如Marrone，et al.，(1985)J.of Economic Entomology 78：290-293(Marrone等人，1985年，《经济昆虫学杂志》，第78卷，第290-293页)。此类测定法可包括将植物与一种或多种害虫接触并测定植物存活和/或造成害虫死亡的能力。
线虫包括寄生线虫如根结线虫、胞囊线虫和根腐线虫，包括异皮线虫属物种(Heterodera spp.)、根结线虫属物种(Meloidogyne spp.)和球异皮线虫属物种(Globodera spp.)；特别是孢囊线虫的成员，大豆胞囊线虫(Heterodera glycines，soybean cyst nematode)；甜菜胞囊线虫(Heterodera schachtii，beet cyst nematode)；禾谷胞囊线虫(Heterodera avenae，cereal cyst nematode)以及马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)和马铃薯白线虫(Globodera pailida)(马铃薯胞囊线虫)。根腐线虫包括短体线虫属物种(Pratylenchus spp.)。
种子处理剂
为了保护并提高产率产量和性状技术，种子处理剂的选用可提供额外的作物计划灵活性以及对于昆虫、杂草和病害的经济有效的防治。可用包含化学或生物除草剂、除草剂安全剂、杀昆虫剂、杀真菌剂、萌发抑制剂和增强剂、营养素、植物生长调节剂和活化剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀鸟剂和/或杀软体动物剂的组合的组合物，对种子材料进行处理，通常进行表面处理。这些化合物通常与在配制领域中惯常使用的其他载体、表面活性剂或促进施用的助剂一起配制。包衣可以通过用液体制剂浸渍增殖材料或通过用混合的湿或干制剂涂覆来实施。可用作种子处理剂的各种类型化合物的例子在由英国农作物保护委员会(British Crop Production Council)出版的The Pesticide Manual：A WorldCompendium，C.D.S.Tomlin Ed.(《杀虫剂手册：世界纲要》，C.D.S.Tomlin编辑)中提供，该文献据此以引用方式并入。
可用于作物种子上的一些种子处理剂包括但不限于如下的一种或多种：脱落酸、阿拉酸式苯-S-甲基、阿维菌素、杀草强、氧环唑、固氮螺菌、印楝素、嘧菌酯、芽孢杆菌属物种(包括蜡样芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌(B.firmus)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、短小芽孢杆菌(B.pumilis)、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和/或苏云金芽孢杆菌中的一种或多种)、慢生根瘤菌属物种(bradyrhizobium spp.)(包括甜菜慢生根瘤菌(B.betae)、加那利慢生根瘤菌(B.canariense)、埃氏慢生根瘤菌(B.elkanii)、西表岛慢生根瘤菌(B.iriomotense)、大豆慢生根瘤菌(B.japonicum)、辽宁慢生根瘤菌(B.liaonigense)、地瓜慢生根瘤菌(B.pachyrhizi)和/或圆明慢生根瘤菌(B.yuanmingense)中的一种或多种)、克菌丹、萎锈灵、壳聚糖、噻虫胺、铜、氰虫酰胺、苯醚甲环唑、土菌灵、氟虫腈、咯菌腈、氟嘧菌酯、氟喹唑、解草胺、氟草肟、超敏蛋白、抑霉唑、吡虫啉、种菌唑、异黄酮、脂壳寡糖、代森锰锌、锰、代森锰、精甲霜灵、甲霜灵、叶菌唑、腈菌唑、PCNB、戊苯吡菌胺、青霉菌、吡噻菌胺、氯菊酯、啶氧菌酯、丙硫菌唑、吡唑醚菌酯、氯虫苯甲酰胺、S-异丙甲草胺、皂苷、氟唑环菌胺、TCMTB、戊唑醇、噻苯哒唑、噻虫嗪、硫双灭多威、福美双、甲基立枯磷、三唑醇、木霉、肟菌酯、灭菌唑和/或锌。PCNB种子包衣是指EPA注册号00293500419，含有五氯硝基苯和依得利。TCMTB是指2-(硫氰基甲基硫代)苯并噻唑。
可测试具有特定转基因性状的种子品种和种子以确定哪种种子处理剂选项和施用速率可补充此类品种和转基因性状以提高产量。例如，具有良好产量潜力但存在丝黑穗病易感性的品种可受益于提供防丝黑穗病的保护的种子处理剂的使用，具有良好产量潜力但存在胞囊线虫易感性的品种可受益于提供防胞囊线虫的保护的种子处理剂的使用，以此类推。同样地，涵盖赋予昆虫抗性的转基因性状的品种可受益于种子处理剂所赋予的第二作用模式，涵盖赋予除草剂抗性的转基因性状的品种可受益于用增强植物对该除草剂的抗性的安全剂进行的种子处理，等等。此外，由种子处理剂的适当使用所引起的良好根系建成和提早出苗可使得在与种子处理剂结合时包含特定性状的一个品种或多个品种更有效地使用氮、抵御干旱的能力更佳、以及产量潜力总体增加。
用于杀灭昆虫害虫并防治昆虫种群的方法
在一些实施例中，提供了杀灭昆虫害虫的方法，包括使所述昆虫害虫同时地或顺序地与杀昆虫有效量的重组PIP-47多肽接触。在一些实施例中，提供了杀灭昆虫害虫的方法，包括使所述昆虫害虫与杀昆虫有效量的SEQ ID NO：18的重组杀虫蛋白和/或SEQ IDNO：20的蛋白或其变体接触。
在一些实施例中，提供了防治昆虫害虫种群的方法，包括使所述昆虫害虫种群同时地或顺序地与杀昆虫有效量的重组PIP-47多肽接触。在一些实施例中，提供了防治昆虫害虫种群的方法，包括使所述昆虫害虫种群与杀昆虫有效量的SEQ ID NO：18的重组杀虫蛋白和/或SEQ ID NO：20的蛋白或其变体接触。如本文所用，“防治害虫种群”或“防治害虫”是指针对害虫的、使其造成的损害受到限制的任何效应。防治害虫包括但不限于以一定方式杀灭害虫、抑制害虫发育、改变害虫繁殖力或生长，使得害虫对植物造成的损害减轻，减少所产生后代的数量，产生适应力较弱的害虫，产生易受捕食者攻击的害虫，或阻止害虫啃食植物。
在一些实施例中，提供了防治对杀虫蛋白具有抗性的昆虫害虫种群的方法，包括使所述昆虫害虫种群同时地或顺序地与杀昆虫有效量的重组PIP-47多肽接触。在一些实施例中，提供了防治对杀虫蛋白具有抗性的昆虫害虫种群的方法，包括使所述昆虫害虫种群与杀昆虫有效量的SEQ ID NO：18的重组杀虫蛋白和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体接触。
在一些实施例中，提供了保护植物免受昆虫害虫影响的方法，包括在植物或其细胞中表达编码PIP-47多肽的重组多核苷酸。在一些实施例中，提供了保护植物免受昆虫害虫影响的方法，包括在植物或其细胞中表达编码SEQ ID NO：18的杀虫蛋白和/或SEQ IDNO：20的蛋白质或其变体的重组多核苷酸。
昆虫抗性治理(IRM)策略
已证实，在转基因玉米植物中表达苏云金芽孢杆菌δ-内毒素是防治农业上重要的昆虫害虫的有效手段(Perlak等人，1990年；1993年)。然而，昆虫已进化成能抵抗在转基因植物中表达的苏云金芽孢杆菌δ-内毒素。此类抗性如果广泛分布的话将明显限制包含编码此类苏云金芽孢杆菌δ-内毒素的基因的种质的商业价值。
增加转基因杀昆虫剂应对靶标害虫的效力并且同时降低具有杀昆虫剂抗性的害虫的发育的一种方法是，提供非转基因(即，非杀昆虫蛋白)庇护所(非杀昆虫作物/玉米的一部分)以与产生对于靶标害虫有活性的单一杀昆虫蛋白的转基因作物一起使用。美国环境保护局(United States Environmental Protection Agency)(epa.gov/oppbppdl/biopesticides/pips/bt_corn_refuge_2006.htm，可使用www前缀对其进行访问)公布了与产生对于靶标害虫有活性的单一Bt蛋白的转基因作物一起使用的要求。此外，全国玉米种植者协会(National Corn Growers Association)在其网站上：(ncga.com/insect-resistance-management-fact-sheet-bt-corn，可使用www前缀对其进行访问)也提供了有关庇护所要求的类似指南。由于庇护区域内的昆虫所造成的损失，较大的庇护所可能会降低总产量。
增加转基因杀昆虫剂应对靶标害虫的效力并且同时降低具有杀昆虫剂抗性的害虫的发育的另一种方法将是，保有能有效抵抗昆虫害虫种群并通过不同作用模式显示其效应的杀昆虫基因的库。
在植物中表达对相同的昆虫物种具有毒性的两种或更多种杀昆虫组合物(每种杀昆虫剂以有效水平表达)将是实现控制抗性发展的另一种方法。这是基于这样的原理：相比仅一种作用模式，进化出针对两种单独作用模式的抗性更加不可能。Roush例如概括了双重毒素策略，也称为“金字塔堆砌”或“堆叠”，以用于管理杀昆虫转基因作物。(The RoyalSociety.Phil.Trans.R.Soc.Lond.B.(1998)353：1777-1786(英国皇家学会，《伦敦皇家学会哲学汇刊：B辑》，1998年，第353卷，第1777-1786页))。均能有效抵抗靶标害虫且具有很少或没有交叉抗性的两种不同蛋白的堆叠或金字塔堆砌可允许使用较小的庇护所。美国环境保护局所要求种植的非Bt玉米的结构庇护所(一般5％)显著小于单一性状产品(一般20％)。存在提供庇护所的IRM效应的多种方法，包括田间中的多种几何种植模式和包装好(in-bag)的种子混合物，如Roush所进一步讨论的。
在一些实施例中，本发明的PIP-47多肽可与其他杀虫蛋白组合(即，金字塔堆砌)用作昆虫抗性治理策略，所述其他杀虫蛋白包括但不限于Bt毒素、致病杆菌属物种或发光杆菌属物种杀昆虫蛋白等等。
提供了在转基因植物中防治鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染的方法，所述方法促进了昆虫抗性治理，包括在植物中表达具有不同作用模式的至少两种不同的杀昆虫蛋白。
在一些实施例中，防治转基因植物中的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染并促进昆虫抗性治理的方法，所述杀昆虫蛋白中的至少一种包含对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的PIP-47多肽。
在一些实施例中，防治转基因植物中的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染并促进昆虫抗性治理的方法，所述杀昆虫蛋白中的至少一种包含对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的SEQ ID NO：18的蛋白质和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体。
在一些实施例中，防治转基因植物中的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染并促进昆虫抗性治理的方法，包括在转基因植物中表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性且具有不同作用模式的PIP-47多肽以及Cry蛋白。
在一些实施例中，防治转基因植物中的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染并促进昆虫抗性治理的方法，包括转基因植物中对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性且具有不同作用模式的SEQ ID NO：18的蛋白质和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体以及Cry蛋白。
还提供了降低鳞翅目和/或鞘翅目昆虫出现对在植物中表达杀昆虫蛋白的转基因植物的抗性的可能性以防治昆虫物种的方法，包括表达对昆虫物种具有杀昆虫性的PIP-47多肽，同时联合表达对昆虫物种具有杀昆虫性且具有不同作用模式的第二杀昆虫蛋白。
还提供了降低鳞翅目和/或鞘翅目昆虫出现对在植物中表达杀昆虫蛋白的转基因植物的抗性的可能性以防治昆虫物种的方法，包括表达对昆虫物种具有杀昆虫性的SEQ IDNO：18的蛋白质和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体，同时联合表达对昆虫物种具有杀昆虫性且具有不同作用模式的第二杀昆虫蛋白。
还提供了用于转基因植物的、有效的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性治理的方式，包括以高水平在植物中共表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有毒性但各自表现出实现其杀灭活性的不同模式的两种或更多种杀昆虫蛋白，其中所述两种或更多种杀昆虫蛋白包括PIP-47多肽以及Cry蛋白。还提供了用于转基因植物的、有效的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性治理的方式，包括以高水平在植物中共表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有毒性但各自表现出实现其杀灭活性的不同模式的两种或更多种杀昆虫蛋白，其中所述两种或更多种杀昆虫蛋白包括SEQ ID NO：18的蛋白质和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体以及Cry蛋白。
此外，提供了用于获得表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的蛋白质的植物的种植或商业化的监管批准的方法，包括参考、提交或依据昆虫测定结合数据的步骤，所述昆虫测定结合数据表明，在此类昆虫中，PIP-47多肽不与Cry蛋白竞争结合位点。此外，提供了用于获得表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的蛋白质的植物的种植或商业化的监管批准的方法，包括参考、提交或依据昆虫测定结合数据的步骤，所述昆虫测定结合数据表明，在此类昆虫中，SEQ ID NO：18的蛋白质和/或SEQ ID NO：20的蛋白质或其变体不与Cry蛋白竞争结合位点。
用于增加植物产量的方法
提供了用于增加植物产量的方法。所述方法包括提供表达编码本文所公开的杀虫多肽序列的多核苷酸的植物或植物细胞，以及在被害虫侵染的田间使该植物或其种子生长，其中所述多肽对所述害虫具有杀虫活性。在一些实施例中，所述多肽对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、半翅目或线虫害虫具有杀虫活性，并且所述田地被鳞翅目、半翅目、鞘翅目、双翅目或线虫害虫侵染。
如本文所定义，植物的“产量”是指由植物产生的生物质的质量和/或数量。如本文所用，“生物质”是指任何被测量的植物产品。生物质产生的增加是被测量植物产品的产量上的任何改善。增加植物产量具有若干商业应用。例如，增加植物叶片生物质可以增加用于人或动物消费的叶菜类的产量。另外，增加叶片生物质可以用于增加植物衍生的药用或工业产品的生产。产量的增加可以包括任何统计学上显著的增加，包括但不限于与不表达杀虫序列的植物相比，产量增加至少1％、增加至少3％、增加至少5％、增加至少10％、增加至少20％、增加至少30％、增加至少50％、增加至少70％、增加至少100％或增加更多。
在具体方法中，植物产量由于表达本文所公开的PIP-47多肽的植物对害虫的抗性增强而增加。PIP-47多肽的表达导致害虫侵染或采食植物的能力降低，从而提高植物产量。
加工方法
还提供了加工植物、植物部分或种子以从包含PIP-47多肽的植物、植物部分或种子获得食物或饲料产品的方法。可加工本文提供的植物、植物部分或种子以产生油、蛋白质产品和/或副产品，所述油、蛋白质产品和/或副产品是通过加工获得的具有商业价值的衍生物。非限制性例子包括包含编码PIP-47多肽的核酸分子的转基因种子，可加工所述转基因种子以产生大豆油、大豆产品和/或大豆副产品。
“加工”是指用于获得任何大豆产品的任何物理和化学方法，并且包括但不限于热调节、压片和研磨、挤出、溶剂提取或水浸以及完整或部分种子的提取。
以下实例是以说明性而非限制性方式提供的。
实验
实例1-从菌株SS62E1鉴定对于西方玉米根虫(WCRW)有活性的杀昆虫蛋白
按照如下方式通过蛋白质纯化、液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)和PCR克隆从恶臭假单胞菌菌株SS62E1鉴定西方玉米根虫(WCRW，Diabrotica virgifera)杀昆虫蛋白PIP-47Aa(SEQ ID NO：1)。
假单胞菌菌株SS62E1在30℃和250rpm下在胰酶大豆肉汤中生长2天。通过离心收获细胞，并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞沉淀物一次，再保存于-70℃。为进行蛋白质提取，将细胞解冻并重悬于50mM醋酸钠缓冲液pH 5(缓冲液A)中，该醋酸钠缓冲液包含得自的蛋白酶抑制剂混合物V。通过使细胞以30,000psi穿过匀浆器，然后以13,800×g离心20分钟，而获得粗制澄清裂解物。
使用与熔融低熔WCRW饲料(阿肯色州莱克村的南部产品公司(SouthlandProducts Inc.，Lake Village，Arkansas))在96孔格式中混合的10微升细胞裂解物样品进行WCRW生物测定。在96孔板的每个孔中放入西方玉米切根虫新生幼虫。将该测定在25℃下运行4天，然后对昆虫死亡率和昆虫生长迟缓进行评分。评分被记录为死亡、生长极度迟缓(很少或无生长但存活)、生长迟缓(生长到二龄期，但不等同于对照)或无活性。
使用西格玛细菌基因组DNA提取试剂盒(目录号NA2110-KT，Sigma-Aldrich，POBox 14508，St.Louis，MO 63178(密苏里州圣路易斯的西格玛奥德里奇公司第14508号信箱，邮编63178))根据制造商使用说明从菌株SS62E1提取基因组DNA。使用NanoDropTM分光光度计(Thermo Scientific，3411Silverside Road，Bancroft Building，Suite 100，Wilmington，DE 19810(特拉华州威尔明顿银边路3411号班克罗夫特大厦100室的热电科技公司，邮编19810))测定DNA浓度，并用无菌水将基因组DNA稀释到40ng/μl。通过组合如下物质来设置25μl PCR反应：80ng基因组DNA、2μl(5μM)16S核糖体DNA引物TACCTTGTTACGACTT(SEQ ID NO：421)和AGAGTTTGATCMTGGCTCAG(SEQ ID NO：422)、1μl 10mM dNTP、1×PhusionHF缓冲液以及1单位高保真DNA聚合酶(New England Biolabs，Cat#M0530L，240County Road，Ipswich，MA 01938-2723(新英格兰实验室，目录号M0530L，马萨诸塞州伊普斯威奇市县公路240号，邮编01938-2723))。在MJ Research PTC-200热循环仪(Bio-RadLaboratories，Inc.，1000Alfred Nobel Drive，Hercules，California，94547，USA(伯乐实验室公司，美国加利福尼亚州赫拉克勒斯的阿尔弗雷德π诺贝尔大道1000号，邮编94547))中以下列程序运行PCR反应：96℃1分钟；96℃15秒、52℃2分钟和72℃2分钟，进行30个循环；72℃10分钟；并且保持在4℃。用纯化试剂盒(Cat#28104，QIAGEN Inc.，27220Turnberry Lane，Valencia，CA 91355(目录号28104，凯杰公司，加利福尼亚州瓦伦西亚坦伯利巷27220号，邮编91355))纯化PCR产物。对纯化的PCR样品进行DNA测序，并将所得的16S核糖体DNA序列针对NCBI数据库进行BLAST搜索，结果表明SS62E1是恶臭假单胞菌菌株。恶臭假单胞菌菌株SS62E1以登录号NRRL B-50845于2013年8月13日保藏于农业研究菌种保藏中心(NRRL)，1815Norrh University Street，Peoria，Illinois 61604(伊利诺州皮奥里亚北方大学街道1815号，邮编61604)(nrrl.ncaur.usda.gov，可使用“www”前缀在万维网上访问)。
还根据IlluminaTM开发的文库构建方案制备分离的菌株SS62E1基因组DNA，并且使用IlluminaTM基因组分析仪IIx(Cat#SY-301-1301，Illumina Inc.，9885Towne CenterDrive，San Diego，CA92121(目录号SY-301-1301，亿明达公司，加利福尼亚州圣地亚哥的镇中心大道9885号，邮编92121))进行测序。组装这些核酸重叠群序列以产生开放阅读框。
为进行杀昆虫蛋白的纯化，将细胞解冻并重悬于50mM醋酸钠缓冲液pH 5(缓冲液A)中，该缓冲液包含得自CaibiochemTM的蛋白酶抑制剂混合物V。通过使细胞以30,000psi穿过匀浆器，然后以13,800g离心20分钟，而获得粗制澄清裂解物。通过用缓冲液A稀释，而将上清液调节到小于5毫西门子/厘米的电导率。将该材料上样到SP-HP HiTrapTM柱(阳离子交换，通用电气医疗集团(GE Healthcare))上并在缓冲液A中以线性梯度增加到1M NaCl来洗脱。将级分脱盐并进行杀昆虫活性的鉴定。将活性级分合并，缓冲液交换为50mM Tris，pH9(缓冲液B)，并且施加到Mono QTM柱(阴离子交换，通用电气医疗集团(GE Healthcare))。用缓冲液B中的0至1M NaCl的盐梯度实现蛋白质洗脱。在人工饲料昆虫取食测定法中鉴定活性级分。通过尺寸排阻层析法实现进一步纯化。通过SDS-PAGE分析高度富集的活性级分。切离候选蛋白质条带，用胰蛋白酶消化，并在与NanoLC 1-DTMPlus纳升级液相色谱系统(AB Sciex)相连的Thermo Q Exactive OrbitrapTM质谱仪(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))上通过纳升级液相色谱/电喷雾串联质谱(nano-LC/ESI-MS/MS)进行分析。在MS1全谱扫描后以数据依赖性采集模式收集十个产物离子谱。
使用Mascot(Matrix Science)通过数据库搜索进行蛋白质鉴定。针对杜邦先锋公司(DuPont Pioneer)内部数据库的搜索鉴定了SEQ ID NO：1的蛋白质，所述数据库将内部细菌蛋白质序列和SWISS-PROT蛋白质数据库相结合，所述SEQ ID NO：1的蛋白质被指定为PIP-47Aa，其由来自菌株SS62E1的SEQ ID NO：2的多核苷酸编码。
实例2-PIP-47Aa的同源蛋白的鉴定
可通过进行默认参数下的BLAST(基本局部比对20搜索工具；Altschul，et al.，(1993)J.Mol.Biol.215：403-410(Altschul等人，1993年，《分子生物学杂志》，第215卷，第403-410页)；还可参见ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/，可使用www前缀访问)搜索，获得与公众可用的BLAST“nr”数据库(包含所有非冗余GenBank CDS翻译序列、源自三维结构布鲁克海文蛋白质数据库、SWISS-PROT蛋白质序列数据库的最新主要发布版本、EMBL和DDBJ数据库的序列)中所含的序列的相似性，来确定基因身份。除了公共数据库，还搜索了杜邦先锋公司(DuPont Pioneer)内部数据库。分析了SEQ ID NO：1的多肽序列。
该搜索鉴定了PIP-47Aa(SEQ ID NO：1)的若干同源物，它们与PIP-47Aa(SEQ IDNO：1)具有不同的同一性百分比。从分别来自恶臭假单胞菌、黄褐假单胞菌和绿针假单胞菌的公司内部细菌基因组数据库鉴定了被指定为PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ IDNO：6)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)的PIP-47Aa同源物。PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)分别由SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7的DNA序列编码。从NCBI公共数据库鉴定了更远缘的PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)同源物、假定蛋白Plu2048(登录号NP_929309)、假定蛋白plu2046(登录号NP_929307)、保守假定蛋白(登录号YP_003041397)、保守假定蛋白(登录号YP_003041380)、假定蛋白HMPREF9690_02266(登录号ZP_17107944)、以及假定蛋白(登录号ZP_05881874)，并且本文中被分别指定为：Plu2048(由SEQ ID NO：9的多核苷酸编码的SEQ ID NO：10)、Plu2046(由SEQ ID NO：11编码的SEQ ID NO：12)、YP003041397(由SEQ ID NO：13编码的SEQ ID NO：14)、YP003041380(由SEQ ID NO：15编码的SEQ ID NO：16)、ZPl7107944(由SEQ ID NO：15编码的SEQ ID NO：16)、以及ZP05881874(由SEQ ID NO：17编码的SEQ ID NO：18)。图1A-1B示出了PIP-47Aa(SEQ IDNO：1)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)、PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)与如下远缘同源物的氨基酸序列比对：Plu2048(SEQ ID NO：10)、Plu2046(SEQ ID NO：12)、YP003041397(SEQ ID NO：14)、YP003041380(SEQ ID NO：16)、ZPl7107944(SEQ ID NO：18)以及ZP05881874(SEQ ID NO：20)。图3示出了PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)、PIP-47Ba(SEQ IDNO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列的比对。PIP-47同源物的同一性百分比在表5中示出。
表5
实例3-PIP-47Aa和同源蛋白的大肠杆菌表达
使用分离自菌株SS62E5的基因组DNA，利用PIP-47Aa正向引物(SEQ ID NO：423)和PIP-47Aa反向引物(SEQ ID NO：424)进行PCR，来扩增PIP-47Aa基因。对所得PCR产物进行DNA序列验证并与后接Xa因子裂解位点的N端His-6标签一起被框内亚克隆到pCOLDTM-1(Takara Bio Inc.，Seta 3-4-1，Otsu，Shiga，Japan 520-2193(宝生物工程株式会社，日本滋贺县大津市濑田3丁目4番1号，邮编520-2193))中。使用其相应基因组DNA制备物作为PCR基因扩增的模板并分别使用引物对：SEQ ID NO：425/SEQ ID NO：426、SEQ ID NO：427/SEQID NO：428和SEQ ID NO：429/SEQ ID NO：430，以类似方式克隆编码同源物PIP-47Ba(SEQID NO：3)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：5)和PIP-47Fa(SEQ ID NO：7)的核酸序列。
通过基因合成来获得同源物Plu2046(SEQ ID NO：10)的编码序列(SEQ ID NO：9)，其具有相容的5’和3’端以便下游克隆到pCOLDTM-1中。
将包含相应PIP-47基因插入序列的pCOLDTM-1质粒DNA转化到感受态BL21-DE3大肠杆菌细胞中进行重组蛋白表达。将大肠杆菌细胞在羧苄青霉素选择下于37℃生长过夜，然后接种到新鲜2xYT培养基(1：25)并进一步生长到约0.8的光密度。此时将细胞在存在1mMITPG的情况下冷冻，并在16℃下进一步生长16小时以诱导蛋白质表达。根据制造商方案，通过固相金属离子色谱法，使用Ni-NTA琼脂糖(德国凯杰公司(Qiagen，Germany))纯化大肠杆菌表达的带组氨酸标签的蛋白质。
实例4-PIP-47Aa和同源蛋白的杀昆虫活性
针对鞘翅目、鳞翅目和半翅目物种测定一系列浓度的经纯化的PIP-47Aa蛋白(SEQID NO：2)及同源物PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)、PIP-47Fa(SEQ IDNO：8)和Plu2048(SEQ ID NO：10)。在两个独立实验中，计算了50％死亡率(LC50)或50％个体受抑制(IC50)的浓度。
为测量针对西方玉米根虫(WCRW，Diabrotica virgifera)的杀昆虫活性，使用20μl经纯化的sdf蛋白质样品进行生物测定，将所述经纯化的蛋白质样品局部施加于96孔生物测定板(BD Falcon 353910)每孔中的75μl人工WCRW饲料(基于Bio-Serv F9800B)上方，然后风干。将数量不等的初孵西方玉米根虫幼虫(3至9只)放入96孔板的每孔中。该测定在无光照的情况下在25℃下运行四天，然后对死亡率和生长迟缓进行评分。
以类似方式评估了南方玉米根虫(SCRW，Diabrotica undecimpunctatahowardi)、北方玉米根虫(NCRW，Diabrotica barberi)、圣安东尼奥甲虫(Diabroticaspeciosa)的敏感性。将20μl经纯化的蛋白质样品局部施加于96孔生物测定板(BD Falcon353910)每孔中的75μl人工SCRW饲料(基于Bio-Serv F9800B)上方，然后风干。将数量不等的初孵幼虫(3至5只)放入96孔板的每孔中。该测定在无光照的情况下在25℃下运行4天，然后对死亡率和生长迟缓进行评分。
用田间收集的野生种群进行十字花科跳甲测定。在用于测定之前使这些甲虫饥饿48小时。使用小滴取食生物测定技术在各种剂量下测试经纯化的蛋白质。将一部分蛋白质样品与补充有卡诺拉油菜幼苗汁液的蔗糖悬浮液混合，并每天递送给测试昆虫，共计三天。在三天后，为所有存活的甲虫提供卡诺拉油菜叶片。在10天后，监测甲虫的死亡率。
在96孔板设置中的人工饲料上进行鳞翅目取食测定。按照10μl蛋白质和40μl饲料混合物的比率，将纯化的蛋白质与鳞翅目特异性人工饲料掺混在一起。每孔放入2到5只新生幼虫，随意饲喂取食5天。对于比如发育迟缓和/或死亡的幼虫反应，结果表示为阳性。如果幼虫与饲喂只加入上述缓冲液的食物的阴性对照相似，则结果表示为阴性。
针对玉米穗虫、黑地蚕、秋夜蛾和大豆尺蠖测定PIP-47Aa、PIP-47Ba和PIP-47Bb蛋白。杀昆虫活性示于表6中。
表6
实例5-WCRW的mCry3A抗性株系中缺乏PIP-47Aa交叉抗性
通过在mCry3A转基因玉蜀黍植物上选择WCRW，开发对mCry3A有抗性的WCRW菌株，其中在根中mCry3A的T0表达水平为占总蛋白质的10,000ppm(美国序列号13/800233)。对F3、F6、F7、F8、F10、F12、F14幼虫进行了七次选择。mCry3A抗性昆虫的F16卵具有与敏感性实验室集落相比对mCry3A＞46倍的抗性比率(RR)，并且被用于PIP-47Aa的交叉抗性测试。将标准化WCRW饲料掺入生物测定用于评估PIP-47Aa对WCRW幼虫的效应。将WCRW初孵幼虫放在包含生物测定饲料和杀昆虫蛋白的平板上，在每个生物测定开始后用每个浓度处理3天并重复4次。对昆虫死亡率和严重生长迟缓进行评分，并用于基于概率元分析来计算抑制浓度(IC50和LC50)。抗性比率(RR)计算如下：RR＝(抗性WCRW的LC/IC50)/(敏感性WCRW的LC/IC50)。如表7中所示，mCry3A抗性WCRW昆虫对PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)敏感。
表7
实例6-农杆菌介导的玉蜀黍稳定转化
为进行农杆菌介导的玉蜀黍转化，采用了Zhao的方法(美国专利No.5,981,840和国际专利公布No.WO 1998/32326，据此将它们的内容以引用方式并入)。简而言之，从玉蜀黍分离出未成熟胚，并使胚与农杆菌悬液接触，其中细菌能够将PIP-47Aa编码序列(SEQ IDNO：1)转移到至少一个未成熟胚的至少一个细胞中(步骤1：感染步骤)。在这个步骤中，将未成熟胚浸入农杆菌悬液中以启动接种。使胚与农杆菌共培养一段时间(步骤2：共培养步骤)。为了消除农杆菌以及为了受感染细胞的静息期，将未成熟胚在含有抗生素但不含选择剂的固体培养基上培养。接着，在含有选择剂的培养基上培养接种的胚，并且回收生长的、经转化的愈伤组织(步骤4：选择步骤)。在含有选择剂的固体培养基上培养未成熟胚，从而导致经转化的细胞的选择性生长。然后使愈伤组织再生成植株(步骤5：再生步骤)，并且在固体培养基上培养在选择性培养基上培育的愈伤组织以便再生植株。
为了检测叶组织中的PIP-47Aa蛋白(SEQ ID NO：2)，将4个冻干叶圆片/样品粉碎并重悬于含有0.1％吐温20的100μL PBS(PBST)、含有1片/7mL小量完全性蛋白酶抑制剂(罗氏公司(Roche)1183615301)的1％β-巯基乙醇中。对悬液超声处理2分钟，然后在4℃、20,000g下离心15分钟。向上清液等分试样中加入1/3体积的3XLDS样品缓冲液(美国加利福尼亚州的英杰公司(InvitrogenTM(CA，USA))、含有1片/7mL小量完全性蛋白酶抑制剂的1％B-ME。将反应液在80℃下加热10分钟，然后离心。按照制造商(英杰公司(InvitrogenTM))说明将上清液样品上样于含MES电泳缓冲液的4-12％Bis-Tris Midi凝胶上，并使用设备(英杰公司(InvitrogenTM))转移到硝化纤维膜上。将硝化纤维膜在含有5％脱脂奶粉的PBST中温育2小时，然后在PBST中的亲和纯化的兔抗PIP-47Aa中过夜温育。将膜用PBST冲洗三次再在PBST中温育15分钟，接着冲洗两次并温育5分钟，然后与混于PBST中的山羊抗兔HRP一起温育2小时。使用ECL蛋白质印迹试剂(通用电气医疗集团(GEHealthcare)目录号RPN2106)和MR胶片，使检测到的蛋白质显影。为了检测根中的PIP-47Aa蛋白，将根冻干并将每个样品的2mg粉末重悬于LDS中，加入含有1片/7mL小量完全性蛋白酶抑制剂的1％β-巯基乙醇。将反应液在80℃下加热10分钟，然后在4℃、20,000g下离心15分钟。按照制造商(英杰公司(InvitrogenTM))说明将上清液样品上样于含MES电泳缓冲液的4-12％Bis-Tris Midi凝胶上，并使用设备(英杰公司(InvitrogenTM))转移到硝化纤维膜上。将硝化纤维膜在含有5％脱脂奶粉的PBST中温育2小时，然后在PBST中的亲和纯化的多克隆兔抗PIP-47Aa抗体中过夜温育。将膜用PBST冲洗三次再在PBST中温育15分钟，接着冲洗两次并温育5分钟，然后与PBST中的山羊抗兔HRP一起温育2小时。使用ECLTM蛋白质印迹试剂(通用电气医疗集团(GE Healthcare)目录号RPN2106)和MR胶片，检测抗体结合的杀昆虫蛋白。
使用本领域已知的标准生物测定法，测试对杀昆虫蛋白表达呈阳性的转基因玉蜀黍植物的杀虫活性。此类方法包括例如根切除生物测定和整株植物生物测定。参见例如美国专利申请公布No.US 2003/0120054和国际公布No.WO 2003/018810。
实例7-用于在植物中表达PIP-47Aa的表达载体构建体
构建植物表达载体PHP61246以包括包含PIP-47Aa基因(SEQ ID NO：2)的转基因盒，并处于Sb-RCc3启动子(美国专利申请13/371526)与增强元件组合的控制下。PIP-47Aa基因融合于叶绿体转运肽的N端，目的是将杀昆虫蛋白引导并积累在根内的质体中。还构建了处于相同增强子-启动子组合下但无叶绿体靶向的另一种载体PHP61185，并在转基因玉蜀黍事件中测试了抵抗玉米根虫的功效。
由PHP61246和PHP61185构建体产生的事件的T0GH功效结果示于图4中。相对阴性对照事件观察了源自这两种构建体的事件的功效，这种功效由保护根免受西方玉米根虫侵害的效果衡量。使用Oleson，et al.(2005)[J.Econ Entomol.98(1)：1-8](Oleson等人，2005年，《经济昆虫学杂志》，第98卷，第1期，第1-8页)开发的方法，根据受损根结节数(CRWNIS＝玉米根虫结节损伤评分)衡量根受保护的程度。根损伤评分由“0”至“3”量度，其中“0”指示无可见根损伤；“1”指示有1个根结节损坏；“2”指示有2个根结节损坏；“3”是最大评分，指示有3个根结节损坏。中间评分(例如，1.5)表示额外部分的结节损坏(例如，一又二分之一结节损伤)。
图4表明，来自PHP61246和PHP61185的大多数事件(每个星号表示单个事件)表现好于阴性对照，并且具有＜1.0的根虫损伤评分。来自PHP61246的一定比例的事件显示＜0.5的优异CRWNIS评分。
实例8-具有多个氨基酸置换的PIP-47Aa的变体的形成
为了形成具有多个氨基酸改变的PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)的变体，通过编码如下PIP-47同源物的基因的家族改组(Chia-Chun J.Chang et al，1999，NatureBiotechnology 17，793-797(Chia-Chun J.Chang等人，1999年，《自然生物技术》，第17卷，第793-797页))来产生变体文库：PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)；PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)；PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)；以及PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)。为了有利于基因间的同源重组，根据PIP-47Aa的密码子用法来归一化PIP-47Ba和PIP-47Bb的密码子用法。通过将来自PIP-47Ba(SEQ ID NO：3)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：5)的片段化DNA的不同部分与PIP-47Aa(SEQ ID NO：1)的不同部分混合，来控制文库的突变率。产生预期具有不同突变率的四种亚文库。来自PIP-47-Aa、PIP-47Ba和PIP-47Bb的改组文库的该家族的所得变体被命名为“lib-XXX”，其中“XXX”是每种克隆及其亚文库来源的独特名称。
为了形成另外的PIP-47多肽变体，使用PIP-47Bb编码序列(SEQ ID NO：5)作为骨架，通过半合成DNA改组(Stutzman-Engwall et al，2005，Metabolic Engineer，7：27-37(Stutzman-Engwall等人，2005年，《代谢工程》，第7卷，第27-37页))产生另一种类型的文库，并且通过掺加携带来自PIP-47Fa编码序列(SEQ ID NO：7)的多样性的DNA寡核苷酸来产生文库。通过改变掺加到片段化PIP-047Fa DNA的寡核苷酸的量来控制文库突变率。产生具有不同突变率的5种亚文库。来自该文库的变体被命名为“Fablib2-XXX”、“Fablib3-XXX”或“Fablib4-XXX”，其中“XXX”是每种克隆及其亚文库来源的独特名称。
通过将N端52个氨基酸替换为PIP-047Fa的N端52个氨基酸，来产生PIP-047Aa和PIP-047Bb的另一序列多样性。所得的活性变体被命名为Fa-Aa-Chim 2和Fa-Bb-Chim-1。
在将来自文库的所得变体转化到大肠杆菌细胞中后，挑取菌落并培养于96孔板中进行蛋白质表达。通过得自赛默飞世尔科技公司(3747 N Meridian Rd，Rockford，IL USA61101(美国伊利诺伊州罗克福德子午线北路3747号，邮编61101))的蛋白质提取试剂产生细胞裂解物，并且针对WCRW杀昆虫活性进行筛选。从所有文库筛选出的变体总数为1128。对有WCRW活性的PIP-47变体进行DNA测序并推导出氨基酸序列。
所得“lib-XXX”系列WCRW活性PIP-47多肽变体克隆名称、对应编码序列标识符以及对应蛋白质序列标识符示于表8中。所得“Fablib2-XXX”、“Fablib3-XXX”或“Fablib4-XXX”系列WCRW活性PIP-47多肽变体克隆名称、对应编码序列标识符以及对应蛋白质序列标识符示于表8中。
表8
与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比PIP-47多肽变体的同一性百分比以及与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比氨基酸改变的数量示于表9中。与PIP-41Aa(SEQ ID NO：2)相比在有WCRW活性的PIP-47多肽变体的每个位置处的所得氨基酸置换的多样性示于表10中。与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比有WCRW活性的PIP-47多肽变体的氨基酸置换示于表11中。
表9
表10
表11
实例9-影响PIP-47Aa的蛋白质稳定性和功能的氨基酸位置的鉴定
图1A-1B中示出了如下序列的蛋白质序列比对：PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)；紧密相关活性PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)；远缘相关活性同源物PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)；以及无活性同源物：Plu2048(SEQ ID NO：10)；Plu2046(SEQ ID NO：12)；YP003041397(SEQ ID NO：14)；YP003041380(SEQ ID NO：16)；ZP17107944(SEQ ID NO：18)；以及ZP05881874(SEQ ID NO：20)。为了理解各PIP-47多肽之间某些保守的位置在杀昆虫活性和蛋白质稳定性方面的作用，选择相对于PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)的氨基酸T47、Y73、Q95、P138、L142、G170、Q205、Y221、W256和T279进行饱和诱变。使用如表12中所示的诱变寡核苷酸专门对所选位置进行饱和诱变。使用每个位点的简并寡核苷酸并使用每个位点的N端(无突变)和C端(含突变)的两个重叠片段的拼接和拯救PCR策略，来产生突变体，使用N端(无突变)和C端(含突变)基因的两个重叠片段的拼接和拯救PCR策略。作为执行饱和诱变的替代方法，使用得自安捷伦科技公司(AgilentTM Technologies)的QuikChangeTMLightning试剂盒。表12示出了在每个经诱变的所选位置处所鉴定出的氨基酸置换、表达细胞裂解物中的可溶蛋白的氨基酸置换，并且鉴定出允许保留杀昆虫活性的序列变异。
表12
*显著减少的可溶性表达
实例10-影响PIP-47Aa的蛋白质稳定性和功能的基序的鉴定
为了进一步鉴定影响蛋白质结构稳定性和杀昆虫功能的序列空间，鉴定了三种基序(PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)的SEQ ID NO：2的氨基酸A77-P87(基序1)、SEQ ID NO：2的氨基酸Y107-S120(基序2)、SEQ ID NO：2的氨基酸K233-A247(基序3)，它们被如下四种PIP-47多肽共用：PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)、PIP-47Ba(SEQ ID NO：4)、PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)以及PIP-47Fa)(图3)，并且选择这些基序进行饱和诱变。使用分别如表13、表14和表15所示的诱变寡核苷酸专门对SEQ ID NO：2的位置A77-P87、Y107-S120和K233-A247进行饱和诱变。如实例9中所述的那样产生突变体。表13、表14和表15示出了分别在基序1、基序2和基序3的每个经诱变的位置处所鉴定出的氨基酸置换、表达细胞裂解物中的可溶性蛋白的氨基酸置换(基序2和基序3)以及允许保留杀昆虫活性的序列变异。
表13
表14
表15
*显著减少的可溶性表达
实例11-柔性位置的组合诱变以产生具有多个突变的活性变体
选择PIP-47Aa(SEQ ID NO：2，图1)的基序1内的氨基酸位置A79-S85以及基序2内的氨基酸位置T114-S120，以执行组合诱变。根据制造商说明，使用得自安捷伦科技公司(AgilentTM Technologies)的QuikChangeTM Lightning试剂盒以及诱变寡核苷酸基序1(位置A79-S85)的Mot-1-comb-F：5’-CAGCTATGCCAAGGATGCGGACKSCVAKMTKKSCNNKKSCKSCGCACCAGTGAGCATCTACGAAG-3’(SEQ ID NO：528)以及基序2(位置T114-S120)的Mot-2-comb-F：5’-CTACAACCCACTGGACCAGCCGKSCVAKVAKNNKNNKNNKKSCGCCGGTGACCGTGAGCACTTC-3’(SEQ IDNO：529)，来产生文库变体。表达突变型变体并如实例8中所述的那样针对杀昆虫活性进行筛选。在筛选来自基序1(位置A79-S85)组合诱变文库的282种分离株后，鉴定出99种活性变体。表16示出了所得的PIP-47变体名称、PIP-47变体基因序列(SEQ ID NO)、PIP-47变体的基序1氨基酸序列(SEQ ID NO)以及与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比氨基酸置换(突变)的数量。
表16
在筛选来自基序2(第T114-S120位)组合诱变文库的188种分离株后，回收了69种活性变体。表17示出了所得的PIP-47变体名称、PIP-47变体基因序列(SEQ ID NO)、PIP-47变体的基序2区的氨基酸序列(SEQ ID NO)以及与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比氨基酸置换(突变)的数量。
表17
*随机突变
涵盖基序1(第A79-S85位)和基序2(第T114-S120位)的第三组合诱变文库也是使用上述的相同诱变寡核苷酸生成的。在筛选188种分离株后，鉴定出22种活性变体。表18示出了所得的PIP-47变体名称、PIP-47变体基因序列(SEQ ID NO：)、PIP-47变体的基序1区和基序2区的氨基酸序列(SEQ ID NO：)以及与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比氨基酸置换(突变)的数量。
表18
实例12-使用玉米组织提取物进行PIP-47Aa和PIP-47Bb加工产物的表征
基于使用针对PIP-47Aa所产生的多克隆抗体进行的蛋白质印迹分析，表达PIP-47Aa的转基因玉米叶和根不仅积累预期约35kDa的全长PIP-47Aa，还有大约28kDa的加工产物。将经纯化的PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)与非转基因根提取物一起温育后，显示出与包含PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)的转基因组织类似的加工模式。为了确定加工位点，通过将经纯化的PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)和PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)与来自非转基因玉米的根提取物一起在PBS缓冲液中于37℃温育2小时，生成PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)和PIP-47Bb(SEQ ID NO：6)的约28kDa玉米根加工产物。将经温育的样品在MOPS缓冲液(英杰公司(InvitrogenTM))中于4％-12％Bis-Tris凝胶上电泳，并印迹到PVDF膜上。用考马斯亮蓝(CoomassieTM Blue)R250对膜进行染色，用50％甲醇脱色，切下加工条带并进行Edman测序。对于PIP-47Aa(SEQID NO：2)，结果指示其为具有N端氨基酸ATGQSMR(SEQ ID NO：2的第46-52位氨基酸)和SGADAIN(SEQ ID NO：2的第53-59位氨基酸)的蛋白质的大致等同混合物。PIP-47Bb(SEQ IDNO：6)的结果指示其为具有N端氨基酸GLSM(SEQ ID NO：6的第44-47位氨基酸)的蛋白质。
实例13-通过对加工位点的修饰生成PIP-47Aa的加工抗性变体
为了修饰第一蛋白水解加工位点ATGQSMR(SEQ ID NO：2的第46-52位氨基酸)，将PIP-47Aa的N端的52个氨基酸替换为PIP-47Fa(SEQ ID NO：8)的N端的52个氨基酸，生成PIP-47Fa-Aa嵌合体(SEQ ID NO：73)，所述嵌合体部分地防止玉米组织提取物引起的加工并保留完整的杀昆虫活性。使用诱变寡核苷酸5’-GTTTCTCAGAAAGTTTACTCACACCTGGANNKNNKNNKNNKNNKATCAACCCCTTCTTCAGCCCGGCC-3’(SEQ ID NO：922)对PIP-47Fa-Aa嵌合体的SGADA(第53-56位氨基酸)进行饱和诱变，从而诱变第二加工位点。从文库筛选192种分离株后，鉴定出142种活性变体。通过在37℃下与玉米组织提取物一起温育2小时，然后进行蛋白质印迹分析，测试了其中47种变体的蛋白质加工，并且鉴定出4种加工抗性变体。表19示出了所得的PIP-47变体名称、PIP-47变体基因序列(SEQ ID NO)、PIP-47变体的氨基酸序列(SEQID NO)以及与PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)相比这两个蛋白水解加工位点中的氨基酸置换。在另一个实验中，在37℃下将野生型蛋白PIP-47Aa(SEQ ID NO：2)与玉米组织提取物一起温育0、1和5小时，在温育1小时时观察到明显的蛋白截短，并且在温育5小时后＞90％的蛋白质被加工(数据未示出)。相比之下，加工抗性变体蛋白B4*(SEQ ID NO：916)和D4*(SEQ IDNO：918)显示出，在温育5小时后＜10％的蛋白质被加工(数据未示出)。
表19
在PIP-47Fa-Aa嵌合体主链(SEQ ID NO：73)中；在PIP-47Aa主链(SEQ ID NO：2)中。
将编码PIP-47Aa(SEQ ID NO：1)以及PIP-47变体B4*(SEQ ID NO：910)、B4**(SEQID NO：911)、H8-2*(SEQ ID NO：914)、H1**(SEQ ID NO：915)的多核苷酸克隆到植物表达载体中，并且通过农杆菌侵染在矮菜豆(紫色四季豆(Royal Burgundy))叶盘中瞬时表达。从侵染的叶盘中提取可溶性蛋白，并使用针对PIP-47Aa产生的多克隆抗体进行蛋白质印迹分析，以检测PIP-47Aa和突变型变体的体内加工。结果表明，约50％的野生型PIP-47Aa蛋白被加工，但所有4种突变蛋白的加工产物均显著减少，H1**(SEQ ID NO：921)下降到约0，B4*(SEQ ID NO：916)、B4**(SEQ ID NO：917)和H8-2*(SEQ ID NO：920)下降到约10％(数据未示出)。
实例14-转基因植物的粒子轰击转化和再生
用含有编码杀昆虫蛋白的核苷酸序列的质粒对来自温室供体植物的未成熟玉蜀黍胚进行轰击。将穗去壳并在30％漂白剂加0.5％Micro去污剂中表面灭菌20分钟，然后用无菌水清洗两次。将未成熟胚切下，并以胚轴一侧朝下(盾片一侧朝上)放置，每板25个胚，在560Y培养基上放置4小时，然后在2.5cm靶区内排成一行准备进行轰击。用如下的CaCl2沉淀程序，将包含编码杀昆虫蛋白并被有效连接至启动子的核苷酸序列的质粒载体DNA沉淀到1.1μm(平均直径)钨小球上：100μL含有所制备的钨粒子的水、10μL含有(1μg)DNA的Tris EDTA缓冲液(1μg总DNA)、100μL 2.5M CaCl2和10μL 0.1M亚精胺。
将每种试剂依序加到钨粒子悬浮液，同时保持在多管式涡旋机上。将最终的混合物进行短暂超声处理，并且让其在恒定漩涡混合下温育10分钟。在沉淀期后，将各管进行短暂离心，除去液体，用500mL 100％乙醇洗涤，离心30秒。再次除去液体，向最终的钨粒子小球加入105μL 100％乙醇。为了进行粒子枪轰击，将钨/DNA粒子进行短暂超声处理，并取10uL点到每个巨载体(macrocarrier)的中央上，让其干燥约2分钟，再进行轰击。将样品板在粒子枪中以水平#4进行轰击。所有样品接受650PSI的单次射击，每管的制备粒子/DNA共取十个等分试样。
在轰击之后，将胚保持在560Y培养基上2天，然后转移到含有3mg/L双丙氨膦的560R选择培养基，每隔2星期进行传代培养。在进行大约10个星期的选择后，将抗选择的愈伤组织克隆转移到288J培养基以引发植物再生。在体细胞胚成熟后(2-4周)，将发育良好的体细胞胚转移到培养基中进行萌发并转移到有光照的培养室。大约7-10天后，将发育的小植株转移到管中的272V无激素培养基7-10天，直到小植株完全长好。然后将植株转移到含有盆栽土的浅箱嵌块(inserts in flats)(相当于2.5英寸盆)，在生长室中生长1个星期，随后在温室中另外生长1-2个星期，然后转移到典型的600个盆(1.6加仑)并生长至成熟。通过本领域已知的测定法，如免疫测定和蛋白质印迹，监测植株并对PIP-47Aa的表达进行评分。
使用本领域已知的标准生物测定法，测试对杀昆虫蛋白表达呈阳性的转基因玉蜀黍植物的杀虫活性。此类方法包括例如根切除生物测定和整株植物生物测定。参见例如美国专利申请公布No.US 2003/0120054和国际公布No.WO 2003/018810。
轰击培养基(560Y)包含4.0g/L N6基础盐(SIGMA C-1416)、1.0mL/L Eriksson维生素混合物(1000×SIGMA-1511)、0.5mg/L盐酸硫胺素、120.0g/L蔗糖、1.0mg/L 2，4-D和2.88g/L L-脯氨酸(用KOH调至pH 5.8后，再用去离子水定容)；2.0g/L Gelrite(在用去离子水定容后加入)和8.5mg/L硝酸银(在将培养基灭菌并冷却到室温后加入)。选择培养基(560R)包含4.0g/L N6基础盐(SIGMA C-1416)、1.0mL/L Eriksson维生素混合物(1000×SIGMA-1511)、0.5mg/L盐酸硫胺素、30.0g/L蔗糖和2.0mg/L2，4-D(用KOH调至pH 5.8后，再用去离子水定容)；3.0g/L Gelrite(在用去离子水定容后加入)以及0.85mg/L硝酸银和3.0mg/L双丙氨膦(两者均在将培养基灭菌并冷却到室温后加入)。
植物再生培养基(288J)包含4.3g/L MS盐(GIBCO 11117-074)、5.0mL/L MS维生素母液(0.100g烟酸、0.02g/l盐酸硫胺素、0.10g/L盐酸吡哆醇和0.40g/L甘氨酸，用精制去离子水定容)(Murashige and Skoog，(1962)Physiol.Plant.15：473)(Murashige和Skoog，1962年，《植物生理学》，第15卷，第473页)、100mg/L肌醇、0.5mg/L玉米素、60g/L蔗糖和1.0mL/L 0.1mM脱落酸(在调至pH 5.6后用精炼去离子水定容)；3.0g/L Gelrite(在用去离子水定容后加入)以及1.0mg/L吲哚乙酸和3.0mg/L双丙氨膦(在将培养基灭菌并冷却到60℃后加入)。无激素培养基(272V)包含4.3g/L MS盐(GIBCO 11117-074)、5.0mL/L MS维生素母液(0.100g/L烟酸、0.02g/L盐酸硫胺素、0.10g/L盐酸吡哆醇和0.40g/L甘氨酸，用精制去离子水定容)、0.1g/L肌醇和40.0g/L蔗糖(在调至pH 5.6后用精炼去离子水定容)和6g/L细菌培养用琼脂粉(bacto-agar)(在用精炼去离子水定容后加入)，灭菌并冷却至60℃。
以上对本公开各种图示实施例的描述并非旨在穷举或者将本发明限制于所公开的精确形式。尽管本发明的特定实施例以及实例出于说明性目的在本文进行了描述，但相关领域的技术人员将认识到，各种等同修改形式都可能在本发明的范围内。本文中提供的本发明的教导内容可以适用于除上述实例之外的其他目的。除了按照在前面的说明书和实例中具体描述的方式以外，本发明还可以以其他方式实施。根据上述教导，可以对本发明进行许多修改和改变，因此，这些修改和改变也在所附的权利要求的范围内。
根据以上具体描述可以对本发明做出这些变化和其他变化。一般来讲，在以下权利要求中，所使用的术语不应被解释为将本发明限制为说明书和权利要求书中所公开的具体实施例。
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已尽力确保所使用的数据(例如，数量、温度、浓度等)的准确性，但应允许一些实验误差和偏差。除非另有指明，否则份为重量份，分子量为平均分子量；温度为摄氏度；并且压力为大气压或接近大气压。

Claims (66)

1.一种DNA构建体，所述DNA构建体包含核酸分子，所述核酸分子编码具有杀昆虫活性的PIP-47多肽并有被效连接至异源调控元件。
2.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：2具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽与SEQ ID NO：2的第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、57、58、62、63、65、66、67、68、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、78、79、80、81、84、85、86、88、90、91、92、95、96、97、98、99、100、103、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、107、109、110、112、115、116、117、119、120、121、124、130、132、133、135、136、137、141、142、143、144、146、147、148、149、150、151、153、156、158、161、164、165、168、169、170、172、173、174、176、178、179、181、182、184、185、188、189、193、194、196、198、200、202、203、205、206、207、208、212、213、221、222、226、228、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、257、260、262、264、265、267、270、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含任意组合的1至60个氨基酸置换，并且任选地，所述所编码的PIP-47多肽与SEQ ID NO：2相比，还包含任意组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
4.根据权利要求1或2所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽与SEQ ID NO：2的第2、4、5、6、7、9、10、13、19、20、21、22、24、25、26、29、30、37、38、41、42、43、46、47、49、50、53、62、66、68、71、73、75、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、95、97、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、136、142、161、170、172、173、174、181、205、212、213、221、230、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、257、260、262、264、272、276、279、281、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含任意组合的1至60个氨基酸置换，并且任选地，所述所编码的PIP-47多肽与SEQ IDNO：2相比，还包含任意组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
5.根据权利要求1、2或4所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；并且第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu。
6.根据权利要求1、2或4所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Asn；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu或Val；
第13位处的Xaa是Ser或Val；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Gly或缺失；
第22位处的Xaa是Lys或Thr；
第24位处的Xaa是Asn、Lys或Arg；
第25位处的Xaa是Ala或Val；
第26位处的Xaa是Lys或Asn；
第29位处的Xaa是Ala、Thr或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Ala或Val；
第31位处的Xaa是Arg或His；
第37位处的Xaa是Gln或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln或His；
第43位处的Xaa是Leu或Gln；
第46位处的Xaa是Ala、Ser或Pro；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser或Ala；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala或Ser；
第68位处的Xaa是Thr或Ala；
第71位处的Xaa是Gly或Asp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys或Asn；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Lys、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala或Ser；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala或Lys；
第136位处的Xaa是Glu或Asn；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys或Ala；
第173位处的Xaa是Asn或Ala；
第174位处的Xaa是Gln或Lys；
第181位处的Xaa是Gln或Lys；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile或Asn；
第213位处的Xaa是Ser、Ala或Gly；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile或Val；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val或Thr；
第264位处的Xaa是Ser或Ala；
第272位处的Xaa是Gln或Glu；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
7.根据权利要求1、2或4所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Asn、Arg、Lys或Gln；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Leu、Val或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Asp、Ala、Ile或Leu；
第13位处的Xaa是Ser、Val、Thr、Ile、Leu或Ala；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Gly、Ser或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Thr、Arg或Ser；
第24位处的Xaa是Asn、Lys、Arg或Gln；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第26位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Ile、Ser、Leu、Val或Met；
第30位处的Xaa是Leu、Ala、Val、Ile；
第31位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第37位处的Xaa是Gln、His、Asn、Arg或Lys；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、His、Asn；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ile、Val或Asn；
第46位处的Xaa是Ala、Ser、Pro或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Ala、Thr；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala、Ser、Arg或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Ala、Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Lys、Asn、Arg或Gln；
第85位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第117位处的Xaa是Lys或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第121位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第136位处的Xaa是Glu、Asn、Gln或Asp；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Met；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第173位处的Xaa是Asn、Ala或Gln；
第174位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第181位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile、Asn、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Ala、Gly或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His、Lys或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Gln或Asp；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第272位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：483的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
8.根据权利要求1、2或3所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第78位处的Xaa是Asp或Asn；
第79位处的Xaa是Ala、Asn或Lys；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val或Ala；
第84位处的Xaa是Gly或Ser；
第85位处的Xaa是Ser、Thr或Lys；
第86位处的Xaa是Ala或Val；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr或Trp；
第110位处的Xaa是Leu或Asn；
第112位处的Xaa是Gln或Pro；
第115位处的Xaa是Asp、Gly或Ala；
第116位处的Xaa是Gln、Ala或Arg；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg或Asn；
第119位处的Xaa是Lys或His；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第235位处的Xaa是Thr或Ala；
第236位处的Xaa是Ile或Leu；
第237位处的Xaa是Thr或Asn；
第243位处的Xaa是Thr、Ser或Leu；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln或Pro；
第247位处的Xaa是Ala或Ser；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：484的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
9.根据权利要求1、2或3所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
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第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
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第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
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第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：485的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
10.根据权利要求1、2或3所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；
第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；
第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；
第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；
第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；
第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Pro、Ile或Val；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第235位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第236位处的Xaa是Ile、Leu或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Asn、Ser或Gln；
第243位处的Xaa是Thr、Ser、Leu、Ile或Val；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第247位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；
第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ile、Ser、Leu或Val；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：486的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
11.根据权利要求1、2或3所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第h11位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：487的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
12.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含选自如下的氨基酸基序：由相对于SEQ ID NO：487的第77-87位表示的氨基酸基序序列、由相对于SEQ ID NO：487的第107-120位表示的氨基酸基序序列、由SEQ IDNO：487的第234-247位表示的氨基酸基序序列。
13.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQ IDNO：4具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
14.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQ IDNO：6具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
15.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述编码的PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：8具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
16.一种DNA构建体，所述DNA构建体包含编码嵌合PIP-47多肽的嵌合核酸分子，所述嵌合PIP-47多肽包含第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一PIP-47多肽的一部分，并且所述第二部分包含第二PIP-47多肽的互补部分，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽在相应部分中具有不同的氨基酸序列。
17.根据权利要求16所述的DNA构建体，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽选自：
与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；以及
与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽。
18.根据权利要求16所述的DNA构建体，其中所述第一PIP-47多肽和
第二PIP-47多肽选自：
SEQ ID NO：2的多肽；
SEQ ID NO：4的多肽；
SEQ ID NO：6的多肽；以及
SEQ ID NO：8的多肽。
19.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含核酸分子，所述核酸分子编码具有杀昆虫活性的PIP-47多肽。
20.根据权利要求19所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQID NO：2具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
21.根据权利要求19或20所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽与SEQID NO：2的第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、57、58、62、63、65、66、67、68、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、78、79、80、81、84、85、86、88、90、91、92、95、96、97、98、99、100、103、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、107、109、110、112、115、116、117、119、120、121、124、130、132、133、135、136、137、141、142、143、144、146、147、148、149、150、151、153、156、158、161、164、165、168、169、170、172、173、174、176、178、179、181、182、184、185、188、189、193、194、196、198、200、202、203、205、206、207、208、212、213、221、222、226、228、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、257、260、262、264、265、267、270、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含任意组合的1至60个氨基酸置换，并且任选地，所述所编码的PIP-47多肽与SEQ ID NO：2相比，还包含任意组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
22.根据权利要求19或20所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽与SEQID NO：2的第2、4、5、6、7、9、10、13、19、20、21、22、24、25、26、29、30、37、38、41、42、43、46、47、49、50、53、62、66、68、71、73、75、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、95、97、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、136、142、161、170、172、173、174、181、205、212、213、221、230、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、257、260、262、264、272、276、279、281、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含任意组合的1至60个氨基酸置换，并且任选地，所述所编码的PIP-47多肽与SEQ ID NO：2相比，还包含任意组合的1至5个氨基酸的缺失、1至5个氨基酸的插入、在N端处一个或多个氨基酸的添加或在C端处一个或多个氨基酸的添加。
23.根据权利要求19、20或22所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；并且
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu。
24.根据权利要求19、20或22所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Asn；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu或Val；
第13位处的Xaa是Ser或Val；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Gly或缺失；
第22位处的Xaa是Lys或Thr；
第24位处的Xaa是Asn、Lys或Arg；
第25位处的Xaa是Ala或Val；
第26位处的Xaa是Lys或Asn；
第29位处的Xaa是Ala、Thr或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Ala或Val；
第31位处的Xaa是Arg或His；
第37位处的Xaa是Gln或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln或His；
第43位处的Xaa是Leu或Gln；
第46位处的Xaa是Ala、Ser或Pro；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser或Ala；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala或Ser；
第68位处的Xaa是Thr或Ala；
第71位处的Xaa是Gly或Asp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys或Asn；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Lys、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala或Ser；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala或Lys；
第136位处的Xaa是Glu或Asn；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys或Ala；
第173位处的Xaa是Asn或Ala；
第174位处的Xaa是Gln或Lys；
第181位处的Xaa是Gln或Lys；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile或Asn；
第213位处的Xaa是Ser、Ala或Gly；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile或Val；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val或Thr；
第264位处的Xaa是Ser或Ala；
第272位处的Xaa是Gln或Glu；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
25.根据权利要求19、20或22所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Asn、Arg、Lys或Gin；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Leu、Val或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Asp、Ala、Ile或Leu；
第13位处的Xaa是Ser、Val、Thr、Ile、Leu或Ala；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly、Asp，或第21位处的Xaa是Thr、Gly、Ser或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Thr、Arg或Ser；
第24位处的Xaa是Asn、Lys、Arg或Gln；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第26位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Ile、Ser、Leu、Val或Met；
第30位处的Xaa是Leu、Ala、Val、Ile；
第31位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第37位处的Xaa是Gln、His、Asn、Arg或Lys；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、His、Asn；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ile、Val或Asn；
第46位处的Xaa是Ala、Ser、Pro或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Ala、Thr；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala、Ser、Arg或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Ala、Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Lys、Asn、Arg或Gln；
第85位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第117位处的Xaa是Lys或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第121位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第136位处的Xaa是Glu、Asn、Gln或Asp；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Met；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第173位处的Xaa是Asn、Ala或Gln；
第174位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第181位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile、Asn、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Ala、Gly或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His、Lys或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Gln或Asp；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第272位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：483的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
26.根据权利要求19、20或21所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第78位处的Xaa是Asp或Asn；
第79位处的Xaa是Ala、Asn或Lys；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val或Ala；
第84位处的Xaa是Gly或Ser；
第85位处的Xaa是Ser、Thr或Lys；
第86位处的Xaa是Ala或Val；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr或Trp；
第110位处的Xaa是Leu或Asn；
第112位处的Xaa是Gln或Pro；
第115位处的Xaa是Asp、Gly或Ala；
第116位处的Xaa是Gln、Ala或Arg；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg或Asn；
第119位处的Xaa是Lys或His；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第235位处的Xaa是Thr或Ala；
第236位处的Xaa是Ile或Leu；
第237位处的Xaa是Thr或Asn；
第243位处的Xaa是Thr、Ser或Leu；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln或Pro；
第247位处的Xaa是Ala或Ser；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：484的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
27.根据权利要求19、20或21所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或TVr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：485的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
28.根据权利要求19、20或21所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
013位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；
第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；
第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；
第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；
第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；
第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Pro、Ile或Val；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第235位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第236位处的Xaa是Ile、Leu或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Asn、Ser或Gln；
第243位处的Xaa是Thr、Ser、Leu、Ile或Val；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第247位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；
第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ile、Ser、Leu或Val；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：486的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
29.根据权利要求19、20或21所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；
第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：487的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
30.根据权利要求19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQ ID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第77-87位表示的氨基酸基序1、第107-120位表示的氨基酸基序2以及第234-247位表示的氨基酸基序3。
31.根据权利要求19所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQID NO：4具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
32.根据权利要求19所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQID NO：6具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
33.根据权利要求19所述的分离的多核苷酸，其中所述所编码的PIP-47多肽包含与SEQID NO：8具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
34.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码嵌合PIP-47多肽的嵌合核酸分子，所述嵌合PIP-47多肽包含至少第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一PIP-47多肽的一部分，并且所述第二部分包含第二PIP-47多肽的互补部分，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽在相应部分中具有不同的氨基酸序列。
35.根据权利要求34所述的分离的多核苷酸，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽选自：
与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
以及
与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽。
36.根据权利要求34所述的分离的多核苷酸，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽选自：
SEQ ID NO：2的多肽；
SEQ ID NO：4的多肽；
SEQ ID NO：6的多肽；以及
SEQ ID NO：8的多肽。
37.一种表达盒，所述表达盒包含异源调控元件以及根据权利要求19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述异源调控元件被有效连接至所述多核苷酸。
38.一种转基因植物或其子代，所述转基因植物或其子代包含根据权利要求19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36中任一项所述的分离的多核苷酸。
39.根据权利要求38所述的转基因植物的种子、谷粒或其经加工的产品，其中所述种子包含所述分离的多核苷酸。
40.一种具有杀昆虫活性的PIP-47多肽。
41.根据权利要求40所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：2具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
42.根据权利要求40或41所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：2的第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、57、58、62、63、65、66、67、68、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、78、79、80、81、84、85、86、88、90、91、92、95、96、97、98、99、100、103、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、107、109、110、112、115、116、117、119、120、121、124、130、132、133、135、136、137、141、142、143、144、146、147、148、149、150、151、153、156、158、161、164、165、168、169、170、172、173、174、176、178、179、181、182、184、185、188、189、193、194、196、198、200、202、203、205、206、207、208、212、213、221、222、226、228、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、257、260、262、264、265、267、270、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含1至60个氨基酸置换。
43.根据权利要求40或41所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽与SEQ ID NO：2的第2、4、5、6、7、9、10、13、19、20、21、22、24、25、26、29、30、37、38、41、42、43、46、47、49、50、53、62、66、68、71、73、75、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、95、97、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、136、142、161、170、172、173、174、181、205、212、213、221、230、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、257、260、262、264、272、276、279、281、283、284、287和295位的天然氨基酸相比，包含1至60个氨基酸置换。
44.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；并且
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu。
45.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Asn；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu或Val；
第13位处的Xaa是Ser或Val；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Gly或缺失；
第22位处的Xaa是Lys或Thr；
第24位处的Xaa是Asn、Lys或Arg；
第25位处的Xaa是Ala或Val；
第26位处的Xaa是Lys或Asn；
第29位处的Xaa是Ala、Thr或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Ala或Val；
第31位处的Xaa是Arg或His；
第37位处的Xaa是Gln或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln或His；
第43位处的Xaa是Leu或Gln；
第46位处的Xaa是Ala、Ser或Pro；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser或Ala；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala或Ser；
第68位处的Xaa是Thr或Ala；
第71位处的Xaa是Gly或Asp；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys或Asn；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Lys、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala或Ser；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala或Lys；
第136位处的Xaa是Glu或Asn；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys或Ala；
第173位处的Xaa是Asn或Ala；
第174位处的Xaa是Gln或Lys；
第181位处的Xaa是Gln或Lys；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile或Asn；
第213位处的Xaa是Ser、Ala或Gly；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile或Val；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val或Thr；
第264位处的Xaa是Ser或Ala；
第272位处的Xaa是Gln或Glu；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：482的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
46.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Asn、Arg、Lys或Gin；
第4位处的Xaa是Pro或缺失；
第5位处的Xaa是Gly或缺失；
第6位处的Xaa是Ala或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Leu、Val或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Asp、Ala、Ile或Leu；
第13位处的Xaa是Ser、Val、Thr、Ile、Leu或Ala；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Gly、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Gly、Ser或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Thr、Arg或Ser；
第24位处的Xaa是Asn、Lys、Arg或Gln；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第26位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Ile、Ser、Leu、Val或Met；
第30位处的Xaa是Leu、Ala、Val、Ile；
第31位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第37位处的Xaa是Gln、His、Asn、Arg或Lys；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第41位处的Xaa是Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、His、Asn；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ile、Val或Asn；
第46位处的Xaa是Ala、Ser、Pro或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第49位处的Xaa是Gln、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Ala、Thr；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第66位处的Xaa是Lys、Ala、Ser、Arg或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Ala、Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第75位处的Xaa是Lys、Asn、Arg或Gln；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Lys、Asn、Arg或Gln；
第85位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第117位处的Xaa是Lys或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第121位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第136位处的Xaa是Glu、Asn、Gln或Asp；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu或His；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Met；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys或Arg；
第172位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第173位处的Xaa是Asn、Ala或Gln；
第174位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第181位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第212位处的Xaa是Asp、Ile、Asn、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Ala、Gly或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第230位处的Xaa是Ser或Thr；
第232位处的Xaa是His、Lys或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Gln或Asp；
第260位处的Xaa是Lys或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Ala或Thr；
第272位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn或Glu；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第283位处的Xaa是Arg或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：483的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
47.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第78位处的Xaa是Asp或Asn；
第79位处的Xaa是Ala、Asn或Lys；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val或Ala；
第84位处的Xaa是Gly或Ser；
第85位处的Xaa是Ser、Thr或Lys；
第86位处的Xaa是Ala或Val；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr或Trp；
第110位处的Xaa是Leu或Asn；
第112位处的Xaa是Gln或Pro；
第115位处的Xaa是Asp、Gly或Ala；
第116位处的Xaa是Gln、Ala或Arg；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg或Asn；
第119位处的Xaa是Lys或His；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第235位处的Xaa是Thr或Ala；
第236位处的Xaa是Ile或Leu；
第237位处的Xaa是Thr或Asn；
第243位处的Xaa是Thr、Ser或Leu；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln或Pro；
第247位处的Xaa是Ala或Ser；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：484的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
48.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His或Ser；
第3位处的Xaa是Ala或Thr；
第4位处的Xaa是Pro或Gln；
第5位处的Xaa是Gly、Asn或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val或Thr；
第11位处的Xaa是Lys或Glu；
第12位处的Xaa是Glu或Lys；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val或Leu；
第14位处的Xaa是Ala或Lys；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala或Trp；
第17位处的Xaa是Trp或Leu；
第18位处的Xaa是Leu或Asn；
第19位处的Xaa是Thr、Glu或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr或Ala；
第23位处的Xaa是Ala、Ser或Arg；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys或Val；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys或Glu；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu或Asn；
第27位处的Xaa是Ser或Phe；
第28位处的Xaa是Thr或Ala；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln或Ile；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val或Ala；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn或His；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile或Phe；
第35位处的Xaa是Phe或Tyr；
第36位处的Xaa是Ala、Val或Ser；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu或His；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg；
第40位处的Xaa是Asn、Ser或His；
第41位处的Xaa是Ala、Arg或His；
第42位处的Xaa是Gln、Ser或His；
第43位处的Xaa是Leu、Gln或Ser；
第44位处的Xaa是Leu、Phe或Val；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro或Ser；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly或Leu；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Leu；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg或Gly；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala或Ile；
第58位处的Xaa是Ile、Asp或Ala；
第62位处的Xaa是Phe或Tyr；
第63位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第65位处的Xaa是Ala或Thr；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala或Ser；
第67位处的Xaa是Gly或Ser；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala或Leu；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala或Asn；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg或Asn；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val或Leu；
第75位处的Xaa是Lys、Gln或Asn；
第76位处的Xaa是Asp或Ala；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu或Thr；
第90位处的Xaa是Ile、Phe或Leu；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys或His；
第92位处的Xaa是Glu、Asp或Lys；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser或Cys；
第98位处的Xaa是Ile或Val；
第99位处的Xaa是Asp或Asn；
第100位处的Xaa是Ile、Thr或Met；
第103位处的Xaa是Arg或Thr；
第106位处的Xaa是Gly或Glu；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr或Lys；
第124位处的Xaa是Arg或Tyr；
第130位处的Xaa是Phe或Leu；
第132位处的Xaa是Gln或Lys；
第133位处的Xaa是Gln或Glu；
第135位处的Xaa是Ala或Ser；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg或Asn；
第137位处的Xaa是Ile或Asn；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu或Glu；
第144位处的Xaa是Ala或Ser；
第146位处的Xaa是Gln或Ser；
第147位处的Xaa是Val或Ser；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln或Leu；
第150位处的Xaa是Ile或Val；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Met；
第153位处的Xaa是Lys或Gln；
第156位处的Xaa是Asp或Gly；
第158位处的Xaa是Asn或Asp；
第161位处的Xaa是Val或Ile；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val或Ala；
第168位处的Xaa是Phe或Ser；
第169位处的Xaa是Ile或His；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu或Ala；
第173位处的Xaa是Asn、Thr或Ala；
第174位处的Xaa是Gln、Ala或Lys；
第176位处的Xaa是Val或Ile；
第178位处的Xaa是Gln或Glu；
第179位处的Xaa是Ile或Thr；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg或Lys；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser或Lys；
第185位处的Xaa是Ser、Glu或Asn；
第188位处的Xaa是Asn、Ser或Lys；
第189位处的Xaa是Ala或Val；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu或Cys；
第194位处的Xaa是Ser、Phe或Cys；
第196位处的Xaa是Gln或Lys；
第198位处的Xaa是Glu或Asn；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn或Phe；
第203位处的Xaa是Phe或Leu；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn或His；
第207位处的Xaa是Ile或Thr；
第208位处的Xaa是Leu或Met；
第212位处的Xaa是Asp、Asn或Ile；
第213位处的Xaa是Ser、Gly或Ala；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys或Val；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp或Asn；
第232位处的Xaa是His、Gln或Lys；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val或Lys；
第250位处的Xaa是Gln或Thr；
第253位处的Xaa是Val或Gly；
第254位处的Xaa是Glu或Gly；
第255位处的Xaa是Ser或Gly；
第257位处的Xaa是Asn或Glu；
第260位处的Xaa是Lys、Ala、Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr或Ala；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala或Tyr；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg或Asn；
第267位处的Xaa是Gln或Leu；
第270位处的Xaa是Asp或Lys；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr或Lys；
第274位处的Xaa是Trp或Thr；
第275位处的Xaa是Leu、Pro或His；
第276位处的Xaa是Gly或Asp；
第277位处的Xaa是Asp、Ser或Asn；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr或Pro；
第281位处的Xaa是Gln或Pro；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala或Arg；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln或Lys；
第284位处的Xaa是Glu、Ala或Pro；
第287位处的Xaa是Lys或Ser；并且
第295位处的Xaa是Ser或Gly；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：485的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
49.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr或Ser；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、Gly、Ala、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第78位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第79位处的Xaa是Ala、Asn、Lys、Gln或Arg；
第80位处的Xaa是Asn或Asp；
第81位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Val；
第84位处的Xaa是Gly、Ser或The；
第85位处的Xaa是Ser、Thr、Lys或Arg；
第86位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Trp或Phe；
第110位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第112位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第115位处的Xaa是Asp、Gly、Ala或Glu；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Asn或Lys；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Arg、Asn或Gln；
第119位处的Xaa是Lys、His或Arg；
第120位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Pro、Ile或Val；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第169位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第235位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第236位处的Xaa是Ile、Leu或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Asn、Ser或Gln；
第243位处的Xaa是Thr、Ser、Leu、Ile或Val；
第245位处的Xaa是Ser或Thr；
第246位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第247位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；
第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ile、Ser、Leu或Val；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且
第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：486的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
50.根据权利要求40、41、42或43所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含具有下式的氨基酸序列：
其中
第2位处的Xaa是His、Ser或Thr；
第3位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第4位处的Xaa是Pro、Gln或Asn；
第5位处的Xaa是Gly、Asn、Gln或缺失；
第6位处的Xaa是Ala、His、Ser或缺失；
第7位处的Xaa是Ile、Ala、Lys、Leu、Val、Arg或缺失；
第8位处的Xaa是Pro、His或缺失；
第9位处的Xaa是Ser或Thr；
第10位处的Xaa是Glu、Val、Thr、Asp、Ile、Leu或Ser；
第11位处的Xaa是Lys、Glu、Arg或Asp；
第12位处的Xaa是Glu、Lys、Asp或Arg；
第13位处的Xaa是Ser、Gly、Val、Leu、Thr或Val；
第14位处的Xaa是Ala、Lys或Arg；
第15位处的Xaa是His或Ala；
第16位处的Xaa是Ala、Trp、Phe或Tyr；
第17位处的Xaa是Trp、Leu、Tyr、Phe、Ile或Val；
第18位处的Xaa是Leu、Asn、Ile、Val或Gln；
第19位处的Xaa是Thr、Glu、Ser、Asp或缺失；
第20位处的Xaa是Glu、Thr、Gly、Ser、Asp或缺失；
第21位处的Xaa是Thr、Ala、Glu、Lys、His、Ser、Asp、Arg或缺失；
第22位处的Xaa是Lys、Glu、Thr、Ala、Arg、Asp或Ser；
第23位处的Xaa是Ala、Ser、Arg、Thr或Lys；
第24位处的Xaa是Asn、Arg、Lys、Val、Gln、Ile或Leu；
第25位处的Xaa是Ala、Val、Lys、Glu、Ile、Leu、Arg或Asn；
第26位处的Xaa是Lys、Ser、Leu、Asn、Arg、Thr、Ile、Val或Gln；
第27位处的Xaa是Ser、Phe、Thr、Tyr或Trp；
第28位处的Xaa是Thr、Ala或Ser；
第29位处的Xaa是Ala、Thr、Gln、Ile、Ser、Asn、Leu或Val；
第30位处的Xaa是Leu、Thr、Val、Ala、Ile或Ser；
第31位处的Xaa是Ala、Arg、Asn、His、Lys或Gln；
第32位处的Xaa是Gly或Pro；
第34位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第35位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第36位处的Xaa是Ala、Val、Ser、Leu、Ile或Thr；
第37位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、His、Asn、Lys、Ile或Val；
第38位处的Xaa是Asp或Glu；
第39位处的Xaa是Tyr、Ala、Arg、Phe、Trp、His或Lys；
第40位处的Xaa是Asn、Ser、His、Gln或Thr；
第41位处的Xaa是Ala、Arg、His或Lys；
第42位处的Xaa是Gln、Ser、His、Asn或Thr；
第43位处的Xaa是Leu、Gln、Ser、Asn或Thr；
第44位处的Xaa是Leu、Phe、Val、Ile、Trp或Tyr；
第45位处的Xaa是Thr或Ser；
第46位处的Xaa是Ala、Glu、Pro、Ser、Asp或Thr；
第47位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Met、Pro、Ser、Cys、Asn、Asp、Glu、Lys、Arg、Tyr、Ile或Trp；
第48位处的Xaa是Gly、Leu、Ile或Val；
第49位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Leu、Asn、Lys、Ile或Val；
第50位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第51位处的Xaa是Met或Pro；
第52位处的Xaa是Ala、Arg、Gly或Lys；
第53位处的Xaa是Ser或Thr；
第57位处的Xaa是Ala、Ile、Leu或Val；
第58位处的Xaa是Ile、Asp、Ala、Leu、Val或Glu；
第62位处的Xaa是Phe、Tyr或Trp；
第63位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第65位处的Xaa是Ala、Thr或Ser；
第66位处的Xaa是Lys、GlrpAla、Ser、Arg或Thr；
第67位处的Xaa是Gly、Ser或Thr；
第68位处的Xaa是Thr、Gly、Ala、Leu、Ile、Val或Ser；
第71位处的Xaa是Gly、Asp、Ala、Asn、Glu或Gln；
第72位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Arg、Asn、Thr、Lys或Gln；
第73位处的Xaa是Tyr、Gly、Cys或Glu；
第74位处的Xaa是Ala、Val、Leu或Ile；
第75位处的Xaa是Lys、Gln、Asn或Arg；
第76位处的Xaa是Asp、Ala或Glu；
第77位处的Xaa是Ala、Ser、Cys、Gln、Pro或Asn；
第78位处的Xaa是Asp、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Ile、Tyr、Met、Asn、His、Thr或Lys；
第79位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Asp、Met、Phe、Ile、Cys、Ser或Thr；
第80位处的Xaa是Asn、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Tyr、Phe、Asp或Met；
第81位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Ile、Asp、Pro或Met；
第82位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Trp、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Asn、His、Phe、Ile、Asp或Met；
第83位处的Xaa是Pro、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、Phe、Ile或Asp；
第84位处的Xaa是Gly、Tyr、Ala、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Asn、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第85位处的Xaa是Ser、Gly、Ala、Val、Leu、Trp、Tyr、Thr、Cys、Gln、Glu、Arg、Phe、Asp、Pro、Lys或Met；
第86位处的Xaa是Ala、Gly、Tyr、Val、Leu、Trp、Ser、Thr、Cys、Gln、Glu、Lys、Arg、Asn、His、Phe、Ile、Asp、Pro或Met；
第88位处的Xaa是Val、Glu、Thr、Ile、Leu、Asp或Ser；
第90位处的Xaa是Ile、Phe、Leu或Val；
第91位处的Xaa是Tyr、Gln、Cys、His、Trp、Phe或Asn；
第92位处的Xaa是Glu、Asp、Lys或Arg；
第95位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Ser、Thr、Asn或His；
第96位处的Xaa是Thr或Ser；
第97位处的Xaa是Ala、Ser、Cys或Thr；
第98位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第99位处的Xaa是Asp、Asn、Glu或Gln；
第100位处的Xaa是Ile、Thr、Met、Leu、Val或Ser；
第103位处的Xaa是Arg、Thr、Lys或Ser；
第106位处的Xaa是Gly、Glu或Asp；
第107位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Trp或Leu；
第108位处的Xaa是Asn、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Gln、Arg、Ser、Thr或Trp；
第109位处的Xaa是Pro、Ala、Leu、Met、Cys、Tyr、Glu或Lys；
第110位处的Xaa是Leu、Ala、Glu、Phe、Met、Asn、Pro、Ser、Thr、Val或Trp；
第111位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Asn、Gln、Ser、Val或Tyr；
第112位处的Xaa是Gln、Cys、Pro或Val；
第113位处的Xaa是Pro、Cys或Gly；
第114位处的Xaa是Thr、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Asn、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr；
第115位处的Xaa是Asp、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr或Tyr；
第116位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Phe、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第117位处的Xaa是Lys、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Tyr；
第118位处的Xaa是Pro、Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第119位处的Xaa是Lys、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第120位处的Xaa是Ser、Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr；
第121位处的Xaa是Ala、Thr、Lys、Ser或Arg；
第124位处的Xaa是Arg、Tyr、Lys、His、Trp或Phe；
第130位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第132位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第133位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第135位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第136位处的Xaa是Glu、Ser、Ala、Arg、Asn、Asp、Thr、Lys或Gln；
第137位处的Xaa是Ile、Asn、Leu、Val或Gln；
第141位处的Xaa是Ser或Thr；
第142位处的Xaa是Leu、Gly、Val、Met、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Asp、Glu、His或Pro；
第143位处的Xaa是Leu、Glu、Ile、Val或Asp；
第144位处的Xaa是Ala、Ser或Thr；
第146位处的Xaa是Gln、Ser、Asn或Thr；
第147位处的Xaa是Val、Ser、Ile、Leu或Thr；
第148位处的Xaa是Thr或Ser；
第149位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第150位处的Xaa是Ile、Val或Leu；
第151位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Met、Asn或Lys；
第153位处的Xaa是Lys、Gln、Arg或Asn；
第156位处的Xaa是Asp、Gly或Glu；
第158位处的Xaa是Asn、Asp、Gln或Glu；
第161位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第164位处的Xaa是Phe或Cys；
第165位处的Xaa是Val、Ala、Ile或Leu；
第168位处的Xaa是Phe、Ser或Thr；
第69位处的Xaa是Ile、His、Leu或Val；
第170位处的Xaa是Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Ser、Lys、Arg或Asp；
第172位处的Xaa是Lys、Glu、Ala、Arg或Asp；
第173位处的Xaa是Asn、Thr、Ala、Gln或Ser；
第174位处的Xaa是Gln、Ala、Lys、Asn或Arg；
第176位处的Xaa是Val、Ile或Leu；
第178位处的Xaa是Gln、Glu、Asn或Asp；
第179位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第181位处的Xaa是Gln、Ala、Arg、Lys或Asn；
第182位处的Xaa是Ser、Phe或Gly；
第184位处的Xaa是Ser、Lys、Thr或Arg；
第185位处的Xaa是Ser、Glu、Asn、Thr、Gln或Asp；
第188位处的Xaa是Asn、Ser、Lys、Gln、Thr或Arg；
第189位处的Xaa是Ala、Val、Ile或Leu；
第193位处的Xaa是Tyr、Glu、Cys、Trp、Phe或Asp；
第194位处的Xaa是Ser、Phe、Cys或Thr；
第196位处的Xaa是Gln、Lys、Asn或Arg；
第198位处的Xaa是Glu、Asn、Asp或Gln；
第200位处的Xaa是Gln或Glu；
第202位处的Xaa是Asn、Phe或Gln；
第203位处的Xaa是Phe、Leu、Ile或Val；
第205位处的Xaa是Gln、Ala、Val、Pro、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Asp或Arg；
第206位处的Xaa是Asn、His或Gln；
第207位处的Xaa是Ile、Thr、Leu、Val或Ser；
第208位处的Xaa是Leu、Met、Ile或Val；
第212位处的Xaa是Asp、Asn、Ile、Glu、Gln、Leu或Val；
第213位处的Xaa是Ser、Gly、Ala或Thr；
第221位处的Xaa是Tyr、Ala、Val、Leu、Ser、Gln、Met、Ile或His；
第222位处的Xaa是Ala或Pro；
第226位处的Xaa是Thr或Ser；
第228位处的Xaa是Lys、Val、Arg、Ile或Leu；
第230位处的Xaa是Ser、Thr或Ala；
第231位处的Xaa是Ser、Asp、Asn、Thr、Glu或Gln；
第232位处的Xaa是His、Gln、Lys、Asn或Arg；
第233位处的Xaa是Lys、Glu或Arg；
第234位处的Xaa是Gly、Ala、Cys、Phe、His、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Val或Tyr；
第235位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Val或Trp；
第236位处的Xaa是Ile、Ala、Cys、Phe、Leu、Pro、Thr或Val；
第237位处的Xaa是Thr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Asn；
第238位处的Xaa是Phe、Ala、Asp、Leu、Pro、Thr、Val、Trp或Tyr；
第239位处的Xaa是Gln、Cys、Gly、Arg、Tyr、Ser、Pro、Trp、Glu、Thr、Met、Ala、Lys、His、Ile、Val、Leu或Asp；
第240位处的Xaa是Ser、Ala、Glu、Gly、His、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Thr或Val；
第241位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第242位处的Xaa是Tyr、Cys、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp；
第243位处的Xaa是Thr、Asp、Glu、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val或Tyr；
第244位处的Xaa是Leu、Ala、Cys、Phe、Gly、Lys、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr；
第245位处的Xaa是Ser、Ala、Cys、Asp、Gly、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr；
第246位处的Xaa是Gln、Ala、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro或Arg；
第247位处的Xaa是Ala、Asp、Phe、Lys、Met、Ser或Val；
第248位处的Xaa是Ile、Thr、Val、Lys、Leu、Val、Ser或Arg；
第250位处的Xaa是Gln、Thr、Asn或Ser；
第253位处的Xaa是Val、Gly、Ile或Leu；
第254位处的Xaa是Glu、Gly或Asp；
第255位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；
第257位处的Xaa是Asn、Glu、Asp或Gln；
第260位处的Xaa是Lys、Ala或Arg；
第262位处的Xaa是Val、Thr、Ala、Ile、Leu或Ser；
第264位处的Xaa是Ser、Pro、Ala、Tyr、Trp或Phe；
第265位处的Xaa是Lys、Asp、Glu、Ala、Arg、Asn或Gln；
第267位处的Xaa是Gln、Leu、Asn、Ile或Val；
第270位处的Xaa是Asp、Lys、Glu或Arg；
第272位处的Xaa是Gln、Asp、Glu或Asn；
第273位处的Xaa是Gln、Thr、Lys、Asn、Ser或Arg；
第274位处的Xaa是Trp、Thr、Tyr、Phe或Ser；
第275位处的Xaa是Leu、Pro、His、Ile或Val；
第276位处的Xaa是Gly、Asp或Glu；
第277位处的Xaa是Asp、Ser、Asn或Thr；
第279位处的Xaa是Thr、Ser、Cys、Asn、Glu或Ile；
第280位处的Xaa是Thr、Pro或Ser；
第281位处的Xaa是Gln、Pro或Asn；
第282位处的Xaa是Val、Gly、Ala、Arg、Ile、Leu或Lys；
第283位处的Xaa是Ala、Arg、Gln、Lys或Asn；
第284位处的Xaa是Glu、Ala、Pro或Asp；
第287位处的Xaa是Lys、Ser、Arg或Thr；并且第295位处的Xaa是Ser、Gly或Thr；并且其中任选地在相对于SEQ ID NO：487的第41位与第42位之间插入一个氨基酸。
51.根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含由SEQ ID NO：481、SEQ ID NO：482、SEQ ID NO：483、SEQ ID NO：484、SEQID NO：485、SEQ ID NO：486或SEQ ID NO：487的第77-87位表示的氨基酸序列基序1、第107-120位表示的氨基酸序列基序2以及第234-247位表示的氨基酸序列基序3。
52.根据权利要求40所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：4具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
53.根据权利要求40所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：6具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
54.根据权利要求40所述的PIP-47多肽，其中所述PIP-47多肽包含与SEQ ID NO：8具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
55.一种嵌合PIP-47多肽，所述嵌合PIP-47多肽包含至少第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一PIP-47多肽的一部分，并且所述第二部分包含第二PIP-47多肽的互补部分，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽在相应部分中具有不同的氨基酸序列。
56.根据权利要求55所述的嵌合PIP-47多肽，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽选自：
与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
与SEQ ID NO：6的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽；
以及
与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少80％的同一性的多肽。
57.根据权利要求56所述的嵌合PIP-47多肽，其中所述第一PIP-47多肽和第二PIP-47多肽选自：SEQ ID NO：2的多肽、SEQ ID NO：4的多肽、SEQ ID NO：6的多肽以及SEQ ID NO：8的多肽。
58.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57中任一项所述的PIP-47多肽。
59.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57中任一项所述的PIP-47多肽。
60.一种用于防治昆虫害虫种群的方法，所述方法包括使所述昆虫害虫种群与杀昆虫有效量的根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57所述的PIP-47多肽接触。
61.一种抑制生长或杀灭昆虫害虫的方法，所述方法包括使所述昆虫害虫与组合物接触，所述组合物包含杀昆虫有效量的根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57所述的PIP-47多肽。
62.一种用于防治对杀虫蛋白具有抗性的昆虫害虫种群的方法，所述方法包括使所述昆虫害虫种群与杀昆虫有效量的根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57所述的PIP-47多肽接触。
63.一种抑制生长或杀灭昆虫害虫的方法，所述方法包括使所述昆虫害虫与转基因植物接触，所述转基因植物包含根据权利要求37所述的表达盒。
64.一种用于防治对杀虫蛋白具有抗性的昆虫害虫种群的方法，所述方法包括使所述昆虫害虫种群与转基因植物接触，所述转基因植物包含根据权利要求37所述的表达盒。
65.一种在转基因植物中防治鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵染并提供昆虫抗性治理的方法，所述方法包括在所述转基因植物中表达根据权利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56或57中任一项所述的PIP-47多肽。
66.一种以登录号NRRL B-50845保藏的恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)菌株SS62E1的生物纯培养物。
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