CN105980545A - 具有增强的l-氨基酸生产能力的微生物和使用该微生物生产l-氨基酸的方法 - Google Patents

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Abstract

公开了具有增强的L‑氨基酸生产能力的重组微生物，其中所述重组微生物经转化而具有腺苷脱氨酶和AMP核苷酶中的至少一种的消除或降低的活性，和使用所述重组微生物生产L‑氨基酸的方法。所述重组微生物的使用可以使L‑氨基酸能够以高度有效的方式生产。

Description

具有增强的L-氨基酸生产能力的微生物和使用该微生物生产 L-氨基酸的方法
技术领域
本发明涉及具有增强的L-氨基酸生产能力的微生物和使用该微生物生产L-氨基酸的方法。
背景技术
腺苷-5’-三磷酸(ATP)具有高能量的磷酸键，并且当ATP被水解成腺苷二磷酸(ADP)和磷酸根时产生能量。ATP是所有活生物体的主要能源。通过微生物内的电子转运系统、底物水平磷酸等合成ATP。ATP在被降解时供应细胞需要的能量，然后经由糖酵解或氧化磷酸化的过程连续循环。另外，已知通过发酵产生有用的代谢物的微生物随着ATP生物合成的增强而需要更多的ATP样能量。
在这点上，本发明的发明人提高细胞内的ATP(其是最常用于产生L-氨基酸的能源)的比例，从而确认ATP对L-氨基酸生产的影响，从而完成本发明。
发明详述
技术问题
本发明提供了重组微生物，所述重组微生物随着其中升高的ATP水平而具有增强的L-氨基酸的生产能力。
本发明提供了使用重组微生物生产L-氨基酸的方法。
技术方案
根据本发明的一个方面，公开了具有增强的L-氨基酸生产能力的重组微生物，其中腺苷脱氨酶和AMP核苷酶的至少一种的活性被除去或降低。
如本文中使用，术语“腺苷脱氨酶(Add)”指存在于胞质溶胶中并且参与嘌呤代谢的一部分的酶。Add可以作用于腺苷的C-6位，从而使与C-6位结合的氨基基团脱氨，并且在这点上，Add可以在催化‘腺苷+H2O→肌苷+NH3’的转化反应，从而导致肌苷和铵的生成中具有作用。
可以通过已知的数据库，如NCBI的GenBank提供Add的氨基酸序列，但是数据库不限于此。详细地，Add可以包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有约80％或更多、90％或更多、或95％或更多序列同一性的氨基酸序列。另外，具有序列同一性的此类氨基酸序列包括缺失、修饰、取代或添加序列的一部分的氨基酸序列。Add的序列可以包括编码SEQ ID NO:14的氨基酸序列的多核苷酸序列。编码Add蛋白的多核苷酸序列称为add基因(NCBI基因ID:12931257)。例如，编码Add蛋白的add基因的序列可以包括SEQ ID NO:13的多核苷酸序列，或与SEQ ID NO:13的多核苷酸序列具有约80％或更多、90％或更多、或95％或更多序列同一性的多核苷酸序列。此类具有序列同一性的碱基序列包括缺失、修饰、取代或添加序列的一部分的碱基序列。
术语“AMP核苷酶(Amn)”在本文中用于指属于水解酶家族的酶，例如水解N-糖基化合物的糖基化酶，并且又称作腺苷酸核苷酶(adenylate nucleosidase)。Amn可以参与嘌呤代谢的一部分。例如，Amn可以在催化‘AMP+H2OD-核糖5-磷酸+腺嘌呤’的转化反应中具有作用。另外，当失活编码Amn的amn基因时，可以提高细胞内的ATP水平。
可以通过已知的数据库，如NCBI的GenBank提供Amn的氨基酸序列，但是数据库不限于此。详细地，Amn可以包括SEQ ID NO:16的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有约80％或更多、90％或更多、或95％或更多序列同一性的氨基酸序列。另外，具有序列同一性的此类氨基酸序列包括缺失、修饰、取代或添加序列的一部分的氨基酸序列。Amn的序列可以包括编码SEQ ID NO:16的氨基酸序列的多核苷酸序列。编码Amn蛋白的多核苷酸序列称为amn基因(NCBI基因ID:12931407)。例如，编码Amn蛋白的amn基因的序列可以包括SEQ ID NO:15的多核苷酸序列，或与SEQ ID NO:15的多核苷酸序列具有约80％或更多、90％或更多、或95％或更多序列同一性的多核苷酸序列。此类具有序列同一性的碱基序列包括缺失、修饰、取代或添加序列的一部分的碱基序列。
在本发明中，序列同一性指编码蛋白质的基因的碱基序列或氨基酸序列的相似性程度。在基因的高同一性的情况中，基因的表达产物彼此可以具有相同或相似的活性。
在本发明中，可以在微生物中除去或降低Add或Amn的活性，并且可以为了生产L-氨基酸而使用微生物。在具有增强的L-氨基酸生产能力的本发明的重组微生物中，可以分别或一起除去或降低Add和Amn的活性。例如，在重组微生物中，可以除去或降低这两种蛋白质的活性。与没有除去或降低蛋白质的活性的微生物相比，具有除去或降低的Add和Amn的活性的重组微生物导致增强的L-氨基酸的生产能力。
如本文中使用，术语“L-氨基酸”指构成生物体的机体并且具有与相同碳原子附着的氨基基团和羧酸基团两者的蛋白质的基本结构单位。例如，L-氨基酸可以选自：L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸和L-甲硫氨酸。例如，L-氨基酸可以是L-色氨酸或L-苏氨酸。
如本文中使用，术语“重组微生物”指遗传修饰的微生物。重组微生物可以是遗传工程化的微生物，并且例如，可以根据遗传工程方法将外源核酸导入微生物，或者可以转化微生物中的内源基因的序列或位置。
如本文中使用，酶或多肽的术语“除去的活性”指上文描述的蛋白质根本不在微生物中表达的情况、或上文描述的蛋白质得到表达，但是没有任何活性的情况。如本文中使用，酶或多肽的术语“降低的活性”指上文描述的蛋白质得到表达，但是其活性与内在活性相比较弱的情况。术语“除去的活性”或“降低的活性”可以用术语“失活”或“活性弱”替换。如本文中使用，术语“内在活性”指天然状态的微生物的活性，即最初存在于微生物中的活性，或者尚未遗传修饰的蛋白质的活性。
Add或Amn的活性的除去或降低可以通过除去或修饰分别编码Add或Amn的基因引起。术语“基因的除去或修饰”在本文中用于指突变、取代、缺失或用至少一个碱基插入部分或整个的基因或基因的启动子或终止子区域上的调节因子，使得不表达基因或少量表达基因，或者在不显示酶促活性的情况下或者在降低的酶促活性的情况下表达基因的情况。可以通过遗传操作，诸如同源重组、诱变或分子进化实现基因的除去或破坏。当细胞包含不同多肽的多个相同基因或至少两个同源基因时，可以在细胞中除去或破坏一个或多个基因。在一个例示性的实施方案中，编码Add的add基因或编码Amn的amn基因可以通过同源重组从微生物的基因组中除去，或者可以具有经修饰的起始密码子。
如本文中使用，术语“具有增强的L-氨基酸生产能力的重组微生物”指能够从培养基中含有的碳源生产并积累L-氨基酸的微生物。与没有修饰酶活性的微生物相比，具有除去或降低的Add或Amn活性的重组微生物导致增强的L-氨基酸的生产能力。在一个例示性的实施方案中，确认分别具有失活的上文描述的酶的产苏氨酸的菌株和产色氨酸的菌株与产苏氨酸的菌株和产色氨酸的菌株的母本菌株相比具有增强的苏氨酸和色氨酸生产能力。
重组微生物可以是埃希氏菌属(Escherichia)、肠杆菌属(Enterbacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、沙雷菌属(Serratia)、普罗威登斯菌属(Providencia)、棒杆菌属(Corynebacterium)、和短杆菌属(Brevibacterium)的微生物。例如，重组微生物可以是埃希氏菌属的微生物。埃希氏菌属的微生物可以是大肠杆菌，例如大肠杆菌KCCM11494P。大肠杆菌KCCM11494P是通过使用产苏氨酸的菌株(KCCM10910P)作为母本菌株，并且实施add和amn基因两者的缺失制备的KCCM10910PΔaddΔamn菌株。这里，发现了大肠杆菌KCCM11494P中的苏氨酸生成大于母本(KCCM10910P)中的。
大肠杆菌KCCM11494P命名为“CA03-8254P”，然后在布达佩斯条约下在2013年12月9日保藏于韩国微生物保藏中心(在下文，称为“KCCM”)。
根据本发明的另一个方面，公开了用于生产L-氨基酸的组合物，其中组合物包含重组微生物。如本文中使用，术语“用于生产L-氨基酸的组合物”指能够使用生产L-氨基酸的重组微生物或重组微生物的培养产物生产L-氨基酸作为代谢物的组合物。生产L-氨基酸的重组微生物与上文描述相同定义。例如，L-氨基酸可以选自L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸和L-甲硫氨酸。例如，L-氨基酸可以是L-苏氨酸或L-色氨酸。如本文中使用，术语“培养产物”指含有重组微生物的肉汤培养物、除去微生物细胞的培养上清液、或培养产物的稀释溶液。组合物可以进一步包含用于提高L-氨基酸的生存能力的成分。例如，组合物可以进一步包含碳源、氮源或微量元素成分。例如，碳源可以包含碳水化合物，如葡萄糖，蔗糖，乳糖，果糖，麦芽糖，淀粉和纤维素；脂肪，如大豆油，向日葵油，蓖麻油和椰子油；脂肪酸，如棕榈酸，硬脂酸，亚油酸；醇，例如甘油和乙醇；和有机酸，如乙酸，或其组合。重组微生物的培养可以通过使用葡萄糖作为碳源进行。例如，氮源可以包括有机氮源，如蛋白胨，酵母提取物，肉汁，麦芽提取物，玉米浆(CSL)和大豆粉；和无机氮源，如尿素，硫酸铵，氯化铵，磷酸铵，碳酸铵和硝酸铵；或其组合。组合物可以包括磷酸二氢钾或磷酸氢钾作为磷源。另外，组合物可包括对应于磷源的含钠盐，和金属盐，如硫酸镁或硫酸铁。另外，组合物可包括氨基酸，维生素和适当的前体。
根据本发明的另一个方面，公开了生产L-氨基酸的方法，所述方法包括：培养生产L-氨基酸的重组微生物；并且从培养产物中收集L-氨基酸。
生产L-氨基酸的重组微生物与上文的描述相同定义。
L-氨基酸可以选自：L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸和L-甲硫氨酸。例如，L-氨基酸可以是L-苏氨酸或L-色氨酸。可以适当的培养基和根据本领域中公知的培养条件实现重组微生物的培养。另外，本领域普通技术人员可以根据选定的微生物适当调节培养基和培养条件。培养方法可以包括分批培养、连续培养、补料-分批培养、或其组合。
培养基可以包含多种碳源、氮源和微量元素成分。
例如，碳源可以包含碳水化合物，如葡萄糖，蔗糖，乳糖，果糖，麦芽糖，淀粉和纤维素；脂肪，如大豆油，向日葵油，蓖麻油和椰子油；脂肪酸，如棕榈酸，硬脂酸，亚油酸；醇，例如甘油和乙醇；和有机酸，如乙酸，或其组合。重组微生物的培养可以通过使用葡萄糖作为碳源进行。例如，氮源可以包括有机氮源，如蛋白胨，酵母提取物，肉汁，麦芽提取物，玉米浆(CSL)和大豆粉；和无机氮源，如尿素，硫酸铵，氯化铵，磷酸铵，碳酸铵和硝酸铵；或其组合。培养基可以包括磷酸二氢钾或磷酸氢钾作为磷源。另外，培养基可包括对应于磷源的含钠盐，和金属盐，如硫酸镁或硫酸铁。另外，培养基可包括氨基酸，维生素和适当的前体。培养基或培养基的个别成分可以以分批或连续的方式加入到培养基中。
另外，化合物，如氢氧化铵，氢氧化钾，氨水，磷酸和硫酸可以以适当的方式在重组微生物的培养过程中加入到培养基中，以便调节培养基的pH值。此外，防沫剂，如脂肪酸聚乙二醇酯，可在重组微生物的培养过程中使用的，以便抑制气泡的产生。为了维持培养基的需氧条件，氧气或含氧气体的需氧条件(例如，空气)可以被注入到培养基中。这里，培养基的温度通常可以在约20℃至约45℃的范围内，例如约25℃至40℃。培养重组微生物的时段可以持续到获得L-氨基酸的期望量，并且例如，培养重组微生物可以持续约10小时至约160小时。
可以通过本领域中已知的适当培养条件，如分批培养、连续培养、或补料-分批培养实施从培养产物收集L-氨基酸，从而收集或回收培养产物中产生的L-氨基酸。
本发明的有益效果
根据一个方面，可以使用具有至少一种蛋白质的除去或降低的活性的微生物生产L-氨基酸，所述蛋白质选自腺苷脱氨酶和AMP核苷酶。
根据另一个方面，可以使用用于生产L-氨基酸的组合物或生产L-氨基酸的方法以高效的方式生产L-氨基酸。
附图简述
图1是显示根据本发明实施的基因缺失后产L-苏氨酸的菌株中的ATP的图。
图2是显示根据本发明实施的基因缺失后产L-色氨酸的菌株中的ATP的图。
实施例
在下文中，将通过参考以下实施例更为详细描述本发明。这些实施例仅仅用于例示性目的，而并不意图限制本发明的范围。
实施例1：制备产L-苏氨酸的菌株和产L-色氨酸的菌株，各自具有由add基因或amn基因编码的蛋白质的减弱的活性
在产L-苏氨酸的菌株，即KCICM10910P(韩国专利开放公开No:2009-0076389)和KCCM-10132(韩国专利开放公开NO:2000-0013853)，和产L-色氨酸的菌株，即KCCM10812P(韩国专利公开文本No:10-0792095)中，通过同源重组缺失分别编码Add和Amn的基因。要缺失的add和amn基因分别包含SEQ ID NO:13的碱基序列和SEQ ID NO:15的碱基序列。
详细地，使用一步失活，其是由Datsenko KA等人(Proc Natl Acad Sci USA.,(2000)97:6640-6645)开发的使用lambda Red重组酶构建突变体的技术。为了确认扩增产物对基因的插入，使用pUCprmfmloxC的氯霉素抗性基因作为标志物(韩国专利No:2009-007554)。然后，通过在下述条件下使用pUCprmfmloxC作为模板、具有这两种基因的碱基序列的一部分和pUCprmfmloxC的氯霉素抗性基因的碱基序列的一部分的SEQ ID NO:1和2的引物组、和SEQ ID NO:7和8的引物组实施聚合酶链式反应(在下文中，称为“PCR”)：于94℃变性30秒，于55℃退火30秒，和于72℃延长1分钟的30个循环，导致约1,200bp的基因片段的扩增。
在0.8％琼脂糖凝胶上电泳通过PCR扩增获得的DNA片段，洗脱，并且用作二级PCR的模板。通过在以下条件下使用洗脱的一级PCR产物作为模板、与一级PCR产物的5’和3’区具有20bp互补序列并且进一步包含基因的5’和3’区的SEQ ID NO:3和4的引物组、SEQ IDNO:9和10的引物组实施二级PCR：于94℃变性30秒，于55℃退火30秒，和于72℃延长1分钟的30个循环，导致约1,300bp的基因片段的4个类型的扩增。将从中获得的DNA片段在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，洗脱，并且重组使用。
将依照Datsenko KA等人(Proc Natl Acad Sci USA.,(2000)97:6640-6645)开发的方法转化有pKD46质粒的大肠杆菌(E.coli)制备为感受态菌株，并且通过导入通过PCR获得的1,300bp的基因产物实施转化。在补充有氯霉素的LB培养基上选择获得的菌株。因而，根据通过使用SEQ ID NO:5和6的引物组和SEQ ID NO:11和12的引物组的PCR获得的约1,440bp和2,104bp的PCR产物确认基因的缺失。
在除去pKD46质粒后，用pJW168质粒导入具有氯霉素抗性的原代重组大肠杆菌菌株，从而从菌株除去氯霉素标志物基因(Gene,(2000)247,255-264)。在最终获得的微生物细胞中，根据通过使用SEQ ID NO:5和6的引物组和SEQ ID NO:11和12的引物组的PCR获得的约340bp和1,004bp的PCR产物确认基因的缺失。
通过使用缺失add基因的菌株、SEQ ID NO:5和6的引物组和SEQ ID NO:11和12的引物组以与上文描述的相同方式实施amm基因的缺失，因而确认这两种基因的双重缺失。
根据上文描述的方法，制备了6类产L-苏氨酸的菌株，即KCCM10910PΔadd菌株、KCCM10910PΔamn菌株、KCCM10910PΔaddΔamn菌株、KCCM-10132Δadd菌株、KCCM-10132Δamn菌株、和KCCM-10132ΔaddΔamn菌株。另外，制备了3类产L-色氨酸的菌株，即KCCM10812PΔadd菌株、KCCM10812PΔamn菌株、和KCCM10812PΔaddΔamn菌株。
实施例2：测量产L-苏氨酸的菌株和产L-色氨酸的菌株中的ATP水平
为了量化存在于实施例1的菌株中的实际ATP水平，使用依照萤光素酶使用的由KIYOTAKA Y等人(J Biom Scre,(2006)V11:No.3:PP310-17)开发的“用于细胞ATP合成活性的定量测定的有效方法”(Efficient Method for Quantitative determination ofCellular ATP Synthetic Activity)。在含有葡萄糖的LB液体培养基中，将分别具有不同遗传转化的实施例1的菌株培养过夜。在通过离心除去上清液后，用100mM Tris-Cl溶液(pH7.5)清洗微生物细胞，然后用可通透(PB)缓冲液溶液(40％[v/v]葡萄糖，0.8％[v/v]Triton X-100)处理30分钟，从而将胞内APT转运到外部。在再次通过离心分开上清液后，将所得物与萤光素混合，所述萤光素用作萤光素酶的底物。在反应10分钟后，通过使用发光计测量萤光素酶的颜色显现的程度，从而量化ATP水平。图1和2中显示了结果。所有所得的数值是通过重复3次的实验获得的平均值。
如图1和2中显示，在没有基因缺失的母本菌株(即产L-苏氨酸的菌株和产L-色氨酸的菌株)和实施例1的菌株之间的比较中，确认了发现实施例1的菌株中的ATP水平升高。另外，确认了ATP水平在具有add和amn基因的组合缺失的菌株而不是具有单一基因的缺失的菌株中进一步升高。
实施例3：在含有葡萄糖的培养基中确认具有由大肠杆菌add和amn基因编码的蛋白质的减弱的活性的产L-苏氨酸的菌株的效果
在实施例1的产L-苏氨酸的菌株(KCCM10910P)中，分别或组合缺失add和amn基因，从而通过使用葡萄糖作为碳源就具有升高的胞内ATP水平的菌株而言进行效力测试。
在33℃温育中在LB固体培养基中培养分别具有不同遗传转化的菌株过夜。此后，将1铂环的每种微生物细胞在25ml如下文表1的组成中显示的含有葡萄糖的滴度培养基中接种，然后在培养箱中在33℃和以200rpm培养50小时。下文表2中显示了结果。所有所得的数值是来自3个烧瓶获得的平均值。
【表1】
【表2】
*30-hr测量值
**50-hr测量值
如上文表2中显示，确认了与母本菌株的葡萄糖消耗相比，根据本发明的具有基因缺失的菌株导致葡萄糖消耗增加约18.8％。还确认了与母本菌株中生产的苏氨酸的量相比，菌株中产生的苏氨酸的量增加约6.6％。这些结果表示考虑如图1中显示的ATP水平，经转化的菌株的活性随其APT水平升高而增加，因而，经转化的菌株的葡萄糖消耗率或氨基酸生产能力得到改善。
在这点上，具有增强的葡萄糖消耗率和苏氨酸生产能力的大肠杆菌KCCM10910PΔaddΔamn菌株命名为“CA03-8254P”(保藏号：KCCM11494P，在2013年12月9日保藏于韩国微生物保藏中心(KCCM))。
实施例4：在含有葡萄糖的培养基中确认具有由大肠杆菌add和amn基因编码的蛋白质的减弱的活性的产L-苏氨酸的菌株的效果
在实施例1的产L-苏氨酸的菌株(KCCM-10132)中，分别或组合缺失add和amn基因，从而通过使用葡萄糖作为碳源就具有升高的胞内ATP水平的菌株而言进行效力测试。
在33℃温育中在LB固体培养基中培养分别具有不同遗传转化的菌株过夜。此后，将1铂环的每种微生物细胞在25ml如下文表1的组成中显示的含有葡萄糖的滴度培养基中接种，然后在培养箱中在33℃和以200rpm培养50小时。下文表3中显示了结果。所有所得的数值是来自3个烧瓶获得的平均值。
【表3】
菌株 OD 葡萄糖消耗(g/L)* L-苏氨酸(g/L)**
KCCM-10132 25.8 32.0 20.2
KCCM-10132Δadd 22.7 34.0 21.0
KCCM-10132Δamn 22.7 35.5 21.5
KCCM-10132ΔaddΔamn 23.0 36.2 21.5
*30-hr测量值
**50-hr测量值
如上文表3中显示，确认了与母本菌株的葡萄糖消耗相比，根据本发明的具有基因缺失的菌株导致葡萄糖消耗增加约13％。还确认了与母本菌株中生产的苏氨酸的量相比，菌株中产生的苏氨酸的量增加约6.4％。
实施例5：在含有葡萄糖的培养基中确认具有由大肠杆菌add和amn基因编码的蛋白质的减弱的活性的产L-色氨酸的菌株的效果
在实施例1的产L-色氨酸的菌株(KCCM10812P)中，分开或组合缺失add和amn基因，从而通过使用葡萄糖作为碳源就具有升高的胞内ATP水平的菌株而言进行效力测试。
为了进行效力测试，将1铂环的每种微生物细胞在25ml如下文表4的组成中显示的含有葡萄糖的滴度培养基中接种，然后在培养箱中在33℃和以200rpm培养48小时。下文表5中显示了结果。所有所得的数值是来自3个烧瓶获得的平均值。
【表4】
【表5】
*33-hr测量值
**48-hr测量值
如上文表5中显示，确认了与母本菌株的葡萄糖消耗相比，根据本发明的具有基因缺失的菌株导致葡萄糖消耗增加约10％。还确认了与母本菌株中生产的色氨酸的量相比，菌株中产生的色氨酸的量增加约26.6％。这些结果表示考虑如图2中显示的ATP水平，经转化的菌株的活性随其APT水平升高而增加，因而，经转化的菌株的葡萄糖消耗率或氨基酸生产能力得到改善。
应当理解，本文中描述的示例性的实施方案应当仅在描述的意义上而不出于限制目的考虑。每个实施方案内的特征或方面的描述通常应当视为可用于其它实施方案中的其它类似的特征或方面。虽然已经参考附图描述了本发明的一个或多个实施方案，但是本领域普通技术人员应当理解，可以在不偏离以所附权利要求书限定的本发明的精神和范围的前提下对其进行形式和细节上的各种变化。
[保藏号]
保藏机构：韩国微生物保藏中心(国际)
保藏号：KCCM11494P
保藏日：2013年12月9日
国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约国际表格
至：CJ第一制糖株式会社
CJ CHEILJEDANG CENTER 在本页底部列出由国际
330,DONGHO-RO, 保藏机构按照7.1条发出
JUNG-GU,首尔100-400 的原保藏的受理证据
大韩民国
1在适用6.4(d)的情况下，此类日期是获得国际保藏机构状态的日期；在获得国际保藏机构的状态后在布达佩斯条约外进行的保藏被转化为布达佩斯条约下的保藏的情况下，此类日期是由国际保藏机构接受的微生物的日期。
BP/4表格 单页
PCT/RO/134表

Claims (6)

1.具有增强的L-氨基酸生产能力的重组微生物,其中包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的腺苷脱氨酶和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的AMP核苷酶中的至少一种的活性被除去或降低。
2.权利要求1的重组微生物，其中所述L-氨基酸是L-苏氨酸或L-色氨酸。
3.权利要求1的重组微生物，所述重组微生物属于埃希氏菌属。
4.权利要求3的重组微生物，其中所述重组微生物是大肠杆菌。
5.生产L-氨基酸的方法，所述方法包括：
培养权利要求1至4中任一项的重组微生物；并
从培养物中收集L-氨基酸。
6.权利要求5的方法，其中所述L-氨基酸是L-苏氨酸或L-色氨酸。
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