CN105622771A - 当归多糖铁及当归多糖铁咀嚼片的制备工艺 - Google Patents

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吴建军
吴红彦
邵晶
岳嘉
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    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Abstract

本发明公开了当归多糖铁及当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，其中，当归多糖铁的制备工艺包括以下步骤：一、采用水提法从当归中提取粗多糖；二、采用醇沉法对当归粗多糖进行分离纯化；三、以三氯化铁和纯化后的当归多糖为原料，在温度80-85℃、pH＝8-9的碱性条件下合成当归多糖铁。本发明的有益之处在于：采用本发明的制备工艺时，当归多糖铁中铁的含量由传统的27.40％提高到了29.23％；由于当归多糖铁是理想口服补铁剂，经过处方筛选和工艺优化后，当归多糖铁咀嚼片不仅服用方便、表面光滑、硬度适中、口感微甜，而且工艺简单，适于工业化生产。

Description

当归多糖铁及当归多糖铁咀嚼片的制备工艺
技术领域
本发明涉及当归多糖铁及当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，属于医药技术领域。
背景技术
关于合成当归多糖铁的研究已经有报道，但不同研究者在确定合成当归多糖铁的实验条件上存在差别，如华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科王凯平等(张玉,戴立泉,王凯平.正交试验优化当归多糖铁的合成条件研究.中成药.2007,29(4):581-585)以合成物中铁的含量和当归多糖铁的产量为考察指标，通过正交设计筛选研究发现影响合成的因素依次为：当归多糖与柠檬酸三钠(催化剂)的配比、温度、PH值，该研究显示最佳的合成工艺为：原料当归多糖与柠檬酸三钠的质量配比为4︰1，温度为70℃，PH值为8。成都军区总医院药剂科陈作伟等(陈作伟,张勤,王诗华,石磊.正交试验研究当归多糖铁合成工艺.西南国防医药.2003,13(4):374-376.)在研究中发现影响合成的主要因素依次为：温度、催化剂、PH值，并确定最佳的合成工艺为：温度80℃、当归多糖与柠檬酸三钠的质量配比2︰1、PH值为8。
上述两项研究中虽然结论PH值基本一致，但当归多糖与柠檬酸三钠的质量配比以及温度两个研究有差别。而根据两项研究发现当归多糖与柠檬酸三钠的质量配比和温度是影响当归多糖铁的产量和铁含量的最重要因素。另外，在不同研究中当归多糖和柠檬酸三钠加水的量也不一致，所以有必要对当归多糖铁合成工艺进行验证并探索较为可靠的合成条件。
关于当归多糖咀嚼片的合成工艺，目前国内外尚未见报道。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种当归多糖铁的制备工艺，该制备工艺能够有效提高当归多糖铁中铁的含量(铁的含量高达29.23％)，与此同时，本发明的第二个目的在于提供一种当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，该制备工艺简单，适合工业化生产。
为了实现第一个目标，本发明采用如下的技术方案：
一种当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
一、采用水提法从当归中提取粗多糖；
二、采用醇沉法对当归粗多糖进行分离纯化；
三、以三氯化铁和纯化后的当归多糖为原料，在温度80-85℃、pH＝8-9的碱性条件下合成当归多糖铁。
前述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤一中，提取当归粗多糖的方法为：
(1)称取中药饮片当归200g；
(2)向200g当归饮片中加水2000g，煎提前先浸泡60min，然后加热至微沸，保持微沸60min后停止加热，待冷却后过滤取上清液，提取3次后将上清液合并并浓缩至200ml即得当归粗多糖浓缩液。
前述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤二中，分离纯化当归多糖的方法为：
(1)醇沉分离：向200ml当归粗多糖浓缩液中加入20％的无水乙醇75ml，静置1h，再3000r/min离心30min,取上清液转移至2000ml烧杯中，加入无水乙醇使醇的浓度达到80％，冷藏24h沉淀；
(2)纯化：将醇沉物抽滤收集沉淀，先加丙酮进行冲洗，再加乙醚进行冲洗，再次抽滤后收集沉淀，将沉淀烘干、粉碎即得纯化后的当归多糖。
前述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤三中，合成当归多糖铁的方法为：
(1)称取当归多糖2g，加柠檬酸三钠1g，溶于60mL去离子水中，在25℃-40℃之间充分搅拌，使其充分溶解；
(2)在80-85℃的水浴中继续搅拌5min，在不断搅拌过程中加入20％氢氧化钠溶液调节pH，使溶液的pH保持在8-9；
(3)缓缓向上述溶液中滴加2mol/L三氯化铁，在不断搅拌过程中继续加入20％氢氧化钠控制溶液的pH，使溶液的pH保持在8-9，直至反应出现红棕色不溶物；
(4)继续在水浴中加热，搅拌1h，停止搅拌后，在4000r/min下离心15min除去沉淀，收集红棕色离心液；
(5)向离心液中加入两倍量的无水乙醇，同时不断搅拌，然后放置过夜，倾去上清液，沉淀分别用无水甲醇、95％乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤，然后将沉淀在50℃真空干燥即得当归多糖铁。
为了实现第二个目标，本发明采用如下的技术方案：
一种当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
一、按前述制备工艺制备当归多糖铁；
二、按5000片配方量投料，片重为200mg，原辅料分别过100目筛，前述原辅料包括：当归多糖铁833g、甜味剂34g、甘露醇66g、柠檬酸10g、硬脂酸镁15g、玉米淀粉42g；
三、将原辅料混合均匀，以适量75％乙醇作为粘合剂制软材，制软材的程度以手握成团、轻压即散为宜；
四、16目尼龙筛制粒，60℃干燥后14目尼龙筛整粒；
五、再次加入硬脂酸镁1.69g，混合均匀后用Φ8mm冲头压片，片剂硬度控制在4-6kg/mm2。
前述的当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，其特征在于，在步骤二中，前述甜味剂为蔗糖、山梨醇或阿巴斯甜。
本发明的有益之处在于：
(1)本发明通过正交设计和科学实验寻找到了一种当归多糖铁具体可行的、并且是最优的合成工艺，合成的最佳工艺是：合成的温度在80-85℃，pH值在8-9，当归多糖和柠檬酸三钠的配比为2﹕1，经验证该合成工艺提高了当归多糖铁中铁的含量，并且铁的含量由传统的27.40％提高到了29.23％；
(2)因为实际操作很难将反应液的温度、pH确定在如文献报道的点值上，而本发明通过正交设计设定影响因素温度在80-85℃范围，影响因素pH值在8-9范围，筛选出的工艺结论更加符合实际操作，符合大规模当归多糖铁合成实践及生产操作；
(3)当归多糖铁咀嚼片合成工艺的研究在国内尚未见报道，所以该研究首次就当归多糖铁咀嚼片工艺按照正交设计对工艺进行筛选，形成上述最终合成工艺。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
一、制备当归多糖铁
1、采用水提法从当归中提取粗多糖
称取中药饮片当归27份，每份200g，按正交试验表L9(33)设计各因素进行预提取，每种设计条件下重复3次。
表1当归多糖提取工艺优选因素水平
预提取的过程：向每份当归饮片中加指定量的水，煎提前先浸泡一段时间(60min)，然后加热至微沸，保持微沸一段时间后停止加热，待冷却后过滤取上清液，提取若干次后将上清液合并并浓缩至200ml。
测定当归多糖含量：向浓缩液(200ml)中加入无水乙醇75ml，静置24h，将醇沉物抽滤收集沉淀，先加丙酮冲洗三次，再加乙醚冲洗三次，50℃抽滤后将沉淀烘干、粉碎后称重，采用苯酚-硫酸法测定当归多糖的含量。
苯酚-硫酸法测定当归多糖的含量的具体过程：
(1)绘制标准曲线：在编号为0、1、2、3、4、5的试管中分别加入40μg/L葡萄糖溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，用蒸馏水补至0.5mL，再分别加入5％苯酚溶液0.5mL和浓硫酸2.5mL，静置10min后测其在490nm处的吸光度值。0管为空白对照。平行两组。
(2)测粗多糖液糖含量：精密称取0.1g粗多糖，溶于100mL蒸馏水中，即得0.1％粗多糖液，分别取其0.2mL，用蒸馏水补充至0.5mL，再分别加入5％苯酚溶液0.5mL和浓硫酸2.5mL，静置10min后测其在490nm处的吸光度值。平行两组。
以当归多糖的得量作为考核指标，对9次试验结果进行评价，确定最终的提取工艺为：
向每份当归饮片(200g)中加水2000g，煎提前先浸泡60min，然后加热至微沸，保持微沸60min后停止加热，待冷却后过滤取上清液，提取3次后将上清液合并并浓缩至200ml即得当归粗多糖浓缩液。
2、采用醇沉法对当归粗多糖进行分离纯化
醇沉分离：向200ml当归粗多糖浓缩液中加入20％的无水乙醇75ml，静置1h，再3000r/min离心30min,取上清液转移至2000ml烧杯中，加入无水乙醇使醇的浓度达到80％，冷藏24h沉淀。
纯化：将醇沉物抽滤收集沉淀，先加丙酮进行冲洗，再加乙醚进行冲洗，再次抽滤后收集沉淀，将沉淀烘干、粉碎即得纯化后的当归多糖。
3、在碱性条件下合成当归多糖铁
称取当归粗多糖9份，每份2g，按正交试验表L9(43)设计温度、当归多糖和柠檬酸三钠(催化剂)配比、pH值共3因素，每个因素各设三水平进行预提取，每种设计条件下重复3次。
表2正交试验条件
预提取的过程：向每份当归粗多糖中加指定量的柠檬酸三钠，溶于60mL去离子水中，在25℃-40℃之间充分搅拌，使其充分溶解，然后在指定温度下的水浴中继续搅拌大约5min，在不断搅拌过程中加入20％氢氧化钠溶液调节pH，使溶液的pH保持在指定的数值，接下来缓缓向溶液中滴加2mol/L三氯化铁，在不断搅拌过程中继续加入20％氢氧化钠控制溶液的pH使其保持不变，直至反应出现红棕色不溶物，继续在水浴中加热，搅拌约1h，停止搅拌后，在4000r/min下离心15min除去沉淀，收集红棕色离心液，向离心液中加入约两倍量的无水乙醇，同时不断搅拌，然后放置过夜，倾去上清液，沉淀分别用无水甲醇、95％乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤，然后将沉淀在50℃真空干燥即得当归多糖铁。
含铁量测定：
(1)绘制标准曲线：取7个50mL容量瓶，分别准确加入标准铁使用溶液(10μg/mL)0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL，再分别加入10％盐酸羟胺溶液1mL、邻菲罗啉显色液2.5mL和NaAc溶液(1mol/L)5mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10-15min，在510nm处以试剂溶液为空白，用UV-2201紫外分光光度计测定吸光度，制作标准曲线。
(2)测铁含量：称取合成的干燥多糖铁0.1g于小烧杯中，加入蒸馏水摇动使之完全溶解，用1000mL容量瓶定容，依绘制标准曲线的方法测定各组在510nm处的吸光度。
以铁含量作为考核指标，对9次试验结果进行评价，确定最终的合成工艺为：
向每份当归多糖(2g)中加柠檬酸三钠1g，溶于60mL去离子水中，在25℃-40℃之间充分搅拌，使其充分溶解，然后在80-85℃的水浴中继续搅拌大约5min，在不断搅拌过程中加入20％氢氧化钠溶液调节pH，使溶液的pH保持在8-9，接下来缓缓向溶液中滴加2mol/L三氯化铁，在不断搅拌过程中继续加入20％氢氧化钠控制溶液的pH使其保持不变，直至反应出现红棕色不溶物，继续在水浴中加热，搅拌约1h，停止搅拌后，在4000r/min下离心15min除去沉淀，收集红棕色离心液，向离心液中加入约两倍量的无水乙醇，同时不断搅拌，然后放置过夜，倾去上清液，沉淀分别用无水甲醇、95％乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤，然后将沉淀在50℃真空干燥即得当归多糖铁。
采用邻菲罗啉分光光度法测当归多糖铁中铁的含量，经计算，当归多糖铁中铁的含量高达29.23％，而现有工艺获得的铁含量仅为27.40％，可见本发明的方法提高了当归多糖铁中铁的含量。
我们对产物的理化特性进行了考察，考察结果为：产物为棕褐色无定形粉末，无嗅，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂。
此外，我们还对产物中游离铁、络合铁进行了鉴别。
(1)当归多糖铁中游离铁的鉴别：将一定浓度的多糖铁溶液用透析法透析24h，将透析液浓缩至100mL，加入亚铁氰化钾试剂，观察是否有铁盐的特殊反应(滴加亚铁氰化钾试剂后，若存在三价铁离子，则会变成血红色，遇亚铁盐生成沉淀)。
(2)当归多糖铁中络合铁的鉴别：采用亚铁氰化钾显色法检测，取定量的多糖铁液，加入亚铁氰化钾试液(配制0.1moL/L的亚铁氰化钾)，观察是否有铁盐的特殊反应；取当归多糖铁溶液5mL，置于带塞锥形瓶中，加水至20mL，加盐酸5mL，加热煮沸约5min观察溶液颜色，加入亚铁氰化钾试液，观察溶液是否有铁盐的普鲁士蓝沉淀反应。
鉴别结果：透析法鉴定当归多糖铁并未见铁(Ⅲ)盐的特殊反应；向多糖铁液中加入亚铁氰化钾试液，也未见有铁(Ⅲ)盐的特殊反应；酸解多糖铁液加热显橙黄色溶液，加入亚铁氰化钾试液后观察到溶液显深蓝色，有明显的铁(Ⅲ)盐的特殊反应。
鉴别反应充分说明：当归多糖铁中的铁并不是以游离的形式存在，而是与当归多糖形成了稳定的复合物，在强酸及加热的条件下，多糖被破坏，三价铁才游离出来，显示三价铁盐的定性鉴别反应。
二、制备当归多糖铁咀嚼片
1、准备原辅料
按5000片配方量投料，片重为200mg，原辅料分别过100目筛，其中，原辅料包括：当归多糖铁833g、甜味剂34g、甘露醇66g、柠檬酸10g、硬脂酸镁15g、玉米淀粉42g。甜味剂为蔗糖、山梨醇或阿巴斯甜。
在该配方中，所使用的当归多糖铁由前述制备工艺制备而来，甘露醇用作填充剂，柠檬酸用作矫味剂，硬脂酸镁用作润滑剂。
2、制软材
将原辅料混合均匀，以适量75％乙醇作为粘合剂制软材，制软材的程度以手握成团、轻压即散为宜。
3、制粒和整粒
16目尼龙筛制粒，60℃干燥后14目尼龙筛整粒。
4、压片
再次加入硬脂酸镁1.69g，混合均匀后用Φ8mm冲头压片，片剂硬度控制在4-6kg/mm2。
当归多糖铁咀嚼片性能评价：
传统补铁剂具有副作用大、吸收率低等缺点，多糖铁是一种刺激性小、生物利用率较高的补铁剂，临床应用方面的研究报告表明多糖铁是理想口服补铁剂：一方面，当归多糖铁不仅具有较理想的稳定性、水溶性和吸收率等，而且没有游离铁离子所造成的对胃肠道的刺激作用，可起到良好的高价铁治疗缺铁性贫血的作用；另一方面，在多糖铁中的铁释放之后，配体多糖由于具有多方面的生物活性，如免疫调节、抗病毒、降血糖等，亦可被机体吸收、利用，从而又可发挥当归多糖的补血活性。我们将当归多糖铁制成咀嚼片，经过处方筛选和工艺优化后，其不仅服用方便、表面光滑、硬度适中、口味微甜，而且工艺简单，适于工业化生产。
1、服用方便
只需嚼服即可，极易服用。
2、表面光滑
采用硬脂酸镁作为润滑剂，表面光滑，不仅美观，而且有利于保证咀嚼片的完整性。
3、硬度适中
以本配方和工艺制成的咀嚼片，咀嚼程度适中，无需特别用力，即可在口中破碎，咀嚼过程清脆，破碎过程伴有轻微响声，有更加的口感。
4、口味微甜
采用蔗糖、山梨醇或阿巴斯甜作为甜味剂，微甜，是容易被接受和喜欢的口味。
5、工艺简单
工艺包括：制软材、制粒和整粒、压片，过程简洁、简单，容易操控，特别适于工业化生产。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
一、采用水提法从当归中提取粗多糖；
二、采用醇沉法对当归粗多糖进行分离纯化；
三、以三氯化铁和纯化后的当归多糖为原料，在温度80-85℃、pH＝8-9的碱性条件下合成当归多糖铁。
2.根据权利要求1所述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤一中，提取当归粗多糖的方法为：
(1)称取中药饮片当归200g；
(2)向200g当归饮片中加水2000g，煎提前先浸泡60min，然后加热至微沸，保持微沸60min后停止加热，待冷却后过滤取上清液，提取3次后将上清液合并并浓缩至200ml即得当归粗多糖浓缩液。
3.根据权利要求2所述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤二中，分离纯化当归多糖的方法为：
(1)醇沉分离：向200ml当归粗多糖浓缩液中加入20％的无水乙醇75ml，静置1h，再3000r/min离心30min,取上清液转移至2000ml烧杯中，加入无水乙醇使醇的浓度达到80％，冷藏24h沉淀；
(2)纯化：将醇沉物抽滤收集沉淀，先加丙酮进行冲洗，再加乙醚进行冲洗，再次抽滤后收集沉淀，将沉淀烘干、粉碎即得纯化后的当归多糖。
4.根据权利要求3所述的当归多糖铁的制备工艺，其特征在于，在步骤三中，合成当归多糖铁的方法为：
(1)称取当归多糖2g，加柠檬酸三钠1g，溶于60mL去离子水中，在25℃-40℃之间充分搅拌，使其充分溶解；
(2)在80-85℃的水浴中继续搅拌5min，在不断搅拌过程中加入20％氢氧化钠溶液调节pH，使溶液的pH保持在8-9；
(3)缓缓向上述溶液中滴加2mol/L三氯化铁，在不断搅拌过程中继续加入20％氢氧化钠控制溶液的pH，使溶液的pH保持在8-9，直至反应出现红棕色不溶物；
(4)继续在水浴中加热，搅拌1h，停止搅拌后，在4000r/min下离心15min除去沉淀，收集红棕色离心液；
(5)向离心液中加入两倍量的无水乙醇，同时不断搅拌，然后放置过夜，倾去上清液，沉淀分别用无水甲醇、95％乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤，然后将沉淀在50℃真空干燥即得当归多糖铁。
5.一种当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
一、按权利要求1至4任意一项所述制备工艺制备当归多糖铁；
二、按5000片配方量投料，片重为200mg，原辅料分别过100目筛，所述原辅料包括：当归多糖铁833g、甜味剂34g、甘露醇66g、柠檬酸10g、硬脂酸镁15g、玉米淀粉42g；
三、将原辅料混合均匀，以适量75％乙醇作为粘合剂制软材，制软材的程度以手握成团、轻压即散为宜；
四、16目尼龙筛制粒，60℃干燥后14目尼龙筛整粒；
五、再次加入硬脂酸镁1.69g，混合均匀后用Φ8mm冲头压片，片剂硬度控制在4-6kg/mm2。
6.根据权利要求5所述的当归多糖铁咀嚼片的制备工艺，其特征在于，在步骤二中，所述甜味剂为蔗糖、山梨醇或阿巴斯甜。
7.一种由权利要求5或6所述工艺制备得到的当归多糖铁咀嚼片。
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