CN105504012A - 一种多肽的制备方法 - Google Patents

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CN105504012A CN201410526197.2A CN201410526197A CN105504012A CN 105504012 A CN105504012 A CN 105504012A CN 201410526197 A CN201410526197 A CN 201410526197A CN 105504012 A CN105504012 A CN 105504012A
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宓鹏程
刘建
马亚平
袁建成
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Abstract

本发明涉及多肽领域，特别涉及一种多肽的制备方法。该制备方法包括如下步骤：取Arg与树脂偶联，制得Arg-树脂；取Arg-树脂，逐个偶联Ala、Arg、Arg、Arg、Ala、Cys(X)后，将氮端氨基乙酰化，得到第一肽树脂；脱除第一肽树脂中Cys(X)的侧链保护基X，再与Y-Cys偶联，获得第二肽树脂，裂解，即得。该方法为纯固相工艺，操作简便，假稀释效应避免了液相反应中存在的多肽链间二硫键错配的反应(不会产生肽链间反应)。提高了多肽Velcalcetide的收率和纯度，减少了副反应的发生。

Description

一种多肽的制备方法
技术领域
本发明涉及多肽领域，特别涉及一种多肽的制备方法。
背景技术
Velcalcetide，也称AMG416，氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，结构如式Ⅰ所示。
Velcalcetide用于接受透析的慢性肾病患者的继发性甲状旁腺功能亢进。这个药物目前正在进行III期研究，预期2014年下半年将公布研究数据。
安进公司目前已经有一个同一适应症药物在市场上销售，名为Sensipar。去年，这个药物的销售额同比增长14.6％，达到10.9亿美元。
Velcalcetide可以在进行血液透析的同时通过静脉给药，这对于每天都需要使用大量药物的慢性肾病患者来说是一个福音。因此，velcalcetide很有可能会超过它的前任Sensipar。分析师预期velcalcetide的年销售峰值出现在2023年，为10亿美元。
目前未见合成方法的报道，更未见大规模合成的方法。因此，提供Velcalcetide的制备方法具有现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种多肽的制备方法。该方法为纯固相工艺，操作简便，假稀释效应避免了液相反应中存在的多肽链间二硫键错配的反应(不会产生肽链间反应)。提高了多肽Velcalcetide的收率和纯度，减少了副反应的发生。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种多肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：取Arg与树脂偶联，制得Arg-树脂；
步骤2：取所述Arg-树脂，逐个偶联Ala、Arg、Arg、Arg、Ala、Cys(X)后，将氮端氨基乙酰化，得到第一肽树脂；
步骤3：脱除所述第一肽树脂中Cys(X)的侧链保护基X，再与Y-Cys偶联，获得第二肽树脂，裂解，即得。
具体的，本发明提供的多肽的制备方法中，步骤2具体为取所述Arg-树脂(具体为D-Arg(pbf)-Resin)，逐个偶联D-Ala、D-Arg(pbf)、D-Arg(pbf)、D-Arg(pbf)、D-Ala、D-Cys(X)，将氮端氨基乙酰化后，得到第一肽树脂为Ac-D-Cys(X)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin。
具体的，本发明提供的多肽的制备方法中，第二肽树脂为
在本发明的一些实施例中，Cys的侧链保护基所述X为mmt或mtt。适于做侧链保护基的均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。作为优选，Cys含有特殊的侧链保护基Npys，一方面防止合成原料之间的二硫键合成，另一方面Npys属于良好的离去基团，能有效提高原料与链间Cys的偶联。
在本发明的一些实施例中，步骤3中所述脱除选用体积浓度为1％～5％TFA的DCM溶液，即1％～5％TFA/DCM。
在本发明的一些实施例中，所述Y为Fmoc、Boc或H。适于做保护基的均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明的一些实施例中，当所述Y为Fmoc时，步骤3中所述获得第二肽树脂与所述裂解之间还包括脱除Y的步骤。当所述Y为Boc或H时，不需要先脱除。
在本发明的一些实施例中，所述脱除Y选用的脱除剂为体积浓度为20％哌啶的DMF溶液，即20％哌啶/DMF。
作为优选，步骤3中的偶联反应条件是空气氧化。
在本发明的一些实施例中，步骤3中所述裂解采用的裂解液包括TFA、PhSMe、EDT、TIS和H2O的混合物。作为优选，TFA、PhSMe、EDT、TIS和H2O的体积比为83:5:5:5:2。
在本发明的一些实施例中，步骤1中所述树脂为氨基树脂，所述氨基树脂选自RinkAmideResin、RinkAmide-MBHAResin或RinkAmide-AMResin。
在本发明的一些实施例中，步骤3所述裂解后还包括纯化的步骤。
作为优选，Fmoc-D-Arg-Resin的替代度为0.2～0.5mmol/g。
作为优选，树脂与Fmoc-D-Arg(pbf)的摩尔比为1.6:1-4:1。
作为优选，偶联剂为HOBt/DIC。
作为优选，反应后经封闭液封闭8h，封闭液中吡啶与乙酸酐的摩尔比为1:1。
在本发明的一些实施例中，Fmoc-D-Arg-树脂与Fmoc-D-Ala-OH的摩尔比至少为1:3，优选的，Fmoc-D-Arg-树脂与Fmoc-D-Ala-OH的摩尔比为1:3。
在本发明的一些实施例中，以g/mL计，树脂与裂解液的质量体积比为1:10。作为优选，裂解剂中TFA/PhSMe/EDT/TIS/H2O的体积比为83:5:5:5:2。
在本发明的一些实施例中，粗肽精制成时，加入的酸为硫酸胺、三氟乙酸或醋酸。作为优选，硫酸胺的浓度为0.05％，pH值为2.5。作为优选，三氟乙酸的浓度为0.1％。作为优选，醋酸的浓度为0.1％。
本发明提供一种多肽的制备方法。该方法为纯固相结合进行大规模制备的Velcalcetide路线，利用固相的假稀释效应避免了液相反应中存在的多肽链间二硫键错配的反应。具体为采用了特殊的合成原料Boc-Cys(Npys)-OH或Fmoc-Cys(Npys)-OH或H-Cys(Npys)-OH，含有特殊的侧链保护基Npys，一方面防止合成原料之间的二硫键合成，另一方面Npys属于良好的离去基团，能有效提高原料与链间Cys的偶联。提高了多肽Velcalcetide的收率和纯度，减少了副反应的发生。
附图说明
图1示实施例13制备的精肽的RT-HPLC色谱图；
图2示实施例13制备的精肽的质谱图；
图3示多肽Velcalcetide标准品的质谱图。
具体实施方式
本发明公开了一种多肽的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的多肽的制备方法中所用氨基酸及试剂均可由市场购得。
缩写及英文含义
缩写及英文含义
Fmoc9-芴甲氧羰基
DIPCDI二异丙基碳二亚胺
HOBt1-羟基苯并三唑
DMFN,N-二甲基甲酰胺
DCM二氯甲烷
TFA三氟乙酸
PhSMe苯甲硫醚
TIS三异丙基硅烷
EDT乙二硫醇
Boc-Cys(Npys)-OHBoc-S-(3-硝基-2-吡啶基硫)-L-半胱氨酸
Fmoc-Cys(Npys)-OHFmoc-S-(3-硝基-2-吡啶基硫)-L-半胱氨酸
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：替代度为0.5mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-氨基树脂的合成
称取替代度为1.0mmol/g的RinkAmideresin400g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。称取162.2gFmoc-D-Arg(pbf)-OH(250mmol)和40.5gHOBt(300mmol)溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入46.9mlDIC(300mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。用DMF洗涤3次，加入1395.1ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，8mol：8mol)封闭8小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.502mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-MBHAresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-MBHA树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.508mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-AMresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-AM树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.501mmol/g。
实施例2：替代度为0.2mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-氨基树脂的合成
称取替代度为1.0mmol/g的RinkAmideresin400g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。称取64.9gFmoc-D-Arg(pbf)-OH(100mmol)和16.2gHOBt(120mmol)溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入18.8mlDIC(120mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。用DMF洗涤3次，加入1395.1ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，8mol：8mol)封闭8小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide树脂。检测替代度为0.200mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-MBHAresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-MBHA树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.203mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-AMresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-AM树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.207mmol/g。
实施例3：替代度为0.3mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-氨基树脂的合成
称取替代度为1.0mmol/g的RinkAmideresin400g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。称取97.3gFmoc-D-Arg(pbf)-OH(150mmol)和24.3gHOBt(180mmol)溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入28.1mlDIC(180mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。用DMF洗涤3次，加入1395.1ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，8mol：8mol)封闭8小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-Arg(pbf)-RinkAmideresin树脂。检测替代度为0.306mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-MBHAresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-MBHA树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.302mmol/g。
以替代度为1.0mmol/g的RinkAmide-AMresin400g为原料，采用以上相同的方法，得到Fmoc-D-Arg(pbf)-RinkAmide-AM树脂。用常规固相替代度检测方法检测替代度为0.303mmol/g。
实施例4：Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂的制备
称取实施例3中替代度为0.306mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-OH-氨基树脂326.8g(100mmol)，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。取93.4gFmoc-D-Ala-OH(300mmol)，48.6gHOBt(360mmol)，溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入56.3mlDIC(360mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1小时，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照velcalcetide主链肽序，从C端到N端依次完成Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Cys(mmt)-OH的偶联，反应结束后用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。加入348.8ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，2mol：2mol)封闭2小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次。得到Ac-D-Cys(mmt)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂。
在固相反应柱中加入1％TFA/DCM，反应10min，抽干溶液，重复反应5次，用DMF洗涤6次，DCM洗4次。然后用甲醇收缩3次，每次10min，树脂真空干燥过夜，得到Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂456.3g。
实施例5：Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂的制备
称取实施例3中替代度为0.306mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-OH-氨基树脂326.8g(100mmol)，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。取93.4gFmoc-D-Ala-OH(300mmol)，48.6gHOBt(360mmol)，溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入56.3mlDIC(360mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1小时，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照velcalcetide主链肽序，从C端到N端依次完成Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Cys(mtt)-OH的偶联，反应结束后用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。加入348.8ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，2mol：2mol)封闭2小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次。
在固相反应柱中加入3％TFA/DCM，反应10min，抽干溶液，重复反应5次，用DMF洗涤6次，DCM洗4次。然后用甲醇收缩3次，每次10min，树脂真空干燥过夜，得到Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂462.4g。
实施例6：Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂的制备
称取实施例3中替代度为0.306mmol/g的Fmoc-D-Arg(pbf)-OH-氨基树脂326.8g(100mmol)，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。取93.4gFmoc-D-Ala-OH(300mmol)，48.6gHOBt(360mmol)，溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入56.3mlDIC(360mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1小时，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照velcalcetide主链肽序，从C端到N端依次完成Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Cys(mmt)-OH的偶联，反应结束后用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。加入348.8ml封闭液(吡啶/乙酸酐＝1:1，2mol：2mol)封闭2小时(树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂)。用DMF洗涤4次，DCM洗4次。得到Ac-D-Cys(mmt)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂。
在固相反应柱中加入5％TFA/DCM，反应10min，抽干溶液，重复反应5次，用DMF洗涤6次，DCM洗4次。然后用甲醇收缩3次，每次10min，树脂真空干燥过夜，得到Ac-D-Cys(SH)-D-Ala-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Arg(pbf)-D-Ala-D-Arg(pbf)-Resin肽树脂459.1g。
实施例7：树脂的合成
取实施例4～6中肽树脂加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。取99.5gFmoc-Cys(Npys)-OH(200mmol)溶于DMF，然后加入固相反应柱中。反应5min后，加入17.4mlDIPEA(100mmol)，室温敞口搅拌反应24h。抽干反应液用DMF洗涤4次，DCM洗4次。用DBLK(20％哌啶/DMF)脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次。得到肽树脂。
实施例8：树脂的合成
取实施例4～6中肽树脂加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。取55.1gH-Cys(Npys)-OH(200mmol)溶于DMF，然后加入固相反应柱中。反应5min后，加入17.4mlDIPEA(100mmol)，室温敞口搅拌反应24h。抽干反应液用DMF洗涤4次，DCM洗4次。得到肽树脂。
实施例9：树脂的合成
取实施例4～6中肽树脂加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。取75.1gBoc-Cys(Npys)-OH(200mmol)溶于DMF，然后加入固相反应柱中。反应5min后，加入17.4mlDIPEA(100mmol)，室温敞口搅拌反应24h。抽干反应液用DMF洗涤4次，DCM洗4次。得到肽树脂。
实施例10：的制备
将实施例9中的肽树脂置于裂解反应瓶中，以10mL/g树脂的比例加入裂解试剂(TFA/PhSMe/EDT/TIS/H2O＝83:5:5:5:2)，室温搅拌2.5h。反应物用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量DCM洗涤3次，合并滤液后减压浓缩。加入冰冻的无水乙醚沉淀，用无水乙醚洗涤3次，真空干燥得到白色粉末固体，即velcalcetide粗肽
约107g，重量收率约为102.1％，HPLC纯度约63.35％。
实施例11：velcalcetide硫酸盐精肽的制备
称取实施例10任意100.0gvelcalcetide粗肽用10L水溶解后，采用Waters2545RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，常规0.2％TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5％精肽。将精肽溶液采用Waters2545RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.05％(NH4)2SO4溶液(pH2.5)/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到velcalcetide硫酸盐精肽25.6g，计算总收率26.1％，RP-HPLC纯度为99.34％。
实施例12：velcalcetide醋酸盐精肽的制备
称取实施例10任意100.0gvelcalcetide粗肽用10L水溶解后，采用Waters2545RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，常规0.2％TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5％精肽。将精肽溶液采用Waters2545RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.1％醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到velcalcetide醋酸盐精肽大于28.6g，计算总收率大于29.2％，RP-HPLC纯度为99.12％。
实施例13：velcalcetide三氟乙酸盐精肽的制备
称取实施例10任意100.0gvelcalcetide粗肽用10L水溶解后，采用Waters2545RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，常规0.2％TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5％精肽。将精肽溶液采用Waters2545RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.1％三氟乙酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到velcalcetide三氟乙酸盐精肽大于27.9g，计算总收率大于28.5％，RP-HPLC纯度为99.63％，色谱图见图1，质谱图见图2。
RP-HPLC色谱数据如下所示：
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取Arg与树脂偶联，制得Arg-树脂；
步骤2：取所述Arg-树脂，逐个偶联Ala、Arg、Arg、Arg、Ala、Cys(X)后，将氮端氨基乙酰化，得到第一肽树脂；
步骤3：脱除所述第一肽树脂中Cys(X)的侧链保护基X，再与Y-Cys偶联，获得第二肽树脂，裂解，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述X为mmt或mtt。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中所述脱除选用体积浓度为1％～5％TFA的DCM溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Y为Fmoc、Boc或H。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述Y为Fmoc时，步骤3中所述获得第二肽树脂与所述裂解之间还包括脱除Y的步骤。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述脱除Y选用的脱除剂为体积浓度为20％哌啶的DMF溶液。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中所述偶联反应的条件是空气氧化。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中所述裂解采用的裂解液包括TFA、PhSMe、EDT、TIS和H2O的混合物。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中所述树脂为氨基树脂，所述氨基树脂选自RinkAmideResin、RinkAmide-MBHAResin或RinkAmide-AMResin。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3所述裂解后还包括纯化的步骤。
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