CN103351426B - 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc‑Thr(tBu)‑OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在Ph7.8‑9条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。本发明方法不采用苏氨醇、Fmoc‑苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。

Description

一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法
技术领域
本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，具体涉及醋酸奥曲肽的固相多肽合成方法。
背景技术
奥曲肽，中文名：醋酸奥曲肽；英文名：Octreotide Acetate；分子式:C49H66N10010S2·XC2H4O2；结构式:
醋酸奥曲肽能抑制多种胃肠道激素的分泌及其它多种内分泌功能，目前已广泛用于临床治疗各型胰腺炎、胰腺瘘管、肠瘘、肝硬化食道-胃底曲张静脉出血、消化道溃疡出血、严重腹泻及肢端肥大症，并有望用于消化系统内分泌肿瘤的治疗。
在国内，肝硬化发病率超过1%，每年发生食管曲张静脉破裂引起的大出血的患者，加上消化性溃疡引起的上消化道大出血患者，总数超过300万，因此醋酸奥曲肽的市场较大。我们将致力于降低醋酸奥曲肽的生产成本，大大降低患者的治疗成本。
目前文献报导的醋酸奥曲肽的制备方法一般需使用苏氨醇或Fmoc-苏氨醇，导致生产成本较高；在并使用氟化氢切肽、三氟醋酸进行纯化，污染环境，收率较低。因此目前的方法限制了醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。
不同的多肽产品由于受其自身结构的制约，在合成工艺上存在一些局限性，不能任意选择起始原料和工艺条件完成多肽合成。虽然使用Boc-保护的氨基酸可以实现某些多肽产品的合成，但是现有技术中尚没有开发出采用Boc-苏氨酸制备醋酸奥曲肽的工艺技术，而Boc-苏氨酸相较Fmoc-苏氨醇，价格低廉，使用Boc-苏氨酸来合成醋酸奥曲肽，将极大降低醋酸奥曲肽的生产成本，有益于醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，大幅度减少三废和降低原料成本，提高反应收率，以克服现有技术存在的上述缺陷。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。
依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
（1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs ；
Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；
碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；
（2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；
过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；
氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液（体积比）反应，抽干，DCM洗涤；
加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF, 将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（6）的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（7）的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Fmoc-D-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤（9）的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；
再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍。
用钯/碳,氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽的方法包括如下步骤：
D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取所述八肽树脂加无水甲醇，5%钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品；
5%钯/碳用量为树脂的1/10至5/10（质量比）。
在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环, 加冰醋酸，加活性碳，过滤。
粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾 :乙腈=7-8 :3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。
有益效果
与现有技术相比，本发明采用氯甲基树脂为固相载体，将第一个氨基酸Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，以DIC,HOBT为缩合剂，逐个接上保护的氨基酸，最后一个肽链采用Fmoc-D-Phe-OH,获得保护八肽树脂，不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用钯/碳加氢还原，同时将肽链切落切肽，条件温和，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。
具体实施方式
实施例1
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
No 品 名 生产厂商
1 氯甲基树脂（Cl-CH2-C6H4-Resin） 天津南开和成科技有限公司
2 Boc-Thr(tBu)-OH 吉尔生化（上海）公司
3 Boc-Cys(Trt)-OH 吉尔生化（上海）公司
4 Boc-Thr(tBu)-OH 吉尔生化（上海）公司
5 Boc-Lys(Fmoc)-OH 吉尔生化（上海）公司
6 Boc-D-Trp-OH 吉尔生化（上海）公司
7 Boc-Phe-OH 吉尔生化（上海）公司
8 Fmoc-D-Phe-OH 吉尔生化（上海）公司
9 HOBt (N-Hydroxybenzotriazole) 吉尔生化（上海）公司
10 DIC（N,N'-二异丙基碳二亚胺） 苏州昊帆生物科技有限公司
11 DMF （N,N-二甲基甲酰胺） 国药集团
12 无水甲醇 国药集团
13 盐酸 国药集团
14 异丙醇 国药集团
15 DCM（二氯甲烷） 国药集团
16 乙二硫醇 国药集团
17 三乙胺 国药集团
醋酸奥曲肽的制备方法，包括如下步骤：
一、合成肽链
（1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH（FW：275.3，110mmol)30.3g，溶于250ml甲醇与250ml水中，pH2.5。另取24g碳酸铯（147mmol）加水100ml溶解至澄清，搅拌下缓缓加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，有二氧化碳气体产生。溶液pH7.5。40-50℃水溶减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs 53.5g。
（2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂100克（100-200目，1.0mmol/g, 100mmol)，用DMF浸泡30分钟，使树脂充分溶胀，加上述107g糖浆状残留物，及700ml DMF，50-55℃反应48小时。
过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤20次，无水乙醇洗涤6次。50-55℃减压干燥，得125gBoc-Thr(tBu)-O-树脂。
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入350ml 2mol/L HCl/异丙醇溶液与350ml DCM，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加700ml的10%三乙胺的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加入Boc-Cys(Trt)-OH（MW:463.6, 200mmol）92.7g、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g, HOBT （MW:153，200mmol）30.6g，DMF 600ml, 将混合物25℃反应3小时。抽干。DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液，25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加55.1g（FW：275.3, 200mmol）Boc-Thr(tBu)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g, HOBT（MW:153,200mmol）30.6g，DMF600ml, 将混合物25℃反应 3小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（5）Fmoc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加93.7g（FW：468.6, 200mmol）Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g, HOBT（MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加60.9g（FW：304.4，200mmol）Boc-D-Trp-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g，HOBT （MW:153,200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g（FW:265.3，200mmol） Boc-Phe-OH、DIC（MW:126.2，200mmol） 25.2g ，HOBT （MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加92.7g（FW：463.6, 200mmol) Boc-Cys(Trt)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g，HOBT（MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g（FW:265.3，200mmol）Fmoc-D-Phe-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g，HOBT（MW:153,200mmol）30.6g，600ml DMF，将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 630ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃搅拌30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。
再用无水甲醇洗涤十次。抽干后，放入真空干燥器中干燥，称重，得八肽树脂约190g （MW=931，84mmol），接肽总收率约为84%。
（11）D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取190g八肽树脂加无水甲醇，加10克5%钯/碳，通入氢气，密闭，25℃搅拌4小时以上。过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤三次，减压浓缩至油状物。加入300毫升20%的六氢吡啶的无水甲醇溶液（体积比），25℃反应30分钟。减压浓缩至油状物。DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得90g还原型奥曲肽粗品。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M 氨水至pH7.8, 室温通空气使二硫键成环约24-36小时, 加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾 :乙腈（7.2 :2.8）；流速为：800ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，约得35g白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品（MW: 1019，343mmol）; 收率34.3% （以树脂的mmol数计）。用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液。
其中，2mol/L HCl/异丙醇（氯化氢/异丙醇）溶液制备方法如下：将工业用的浓硫酸滴入食用粗盐（已烘干）中，产生HCl气体，通过二个硫酸洗气瓶，通至盛有1000毫升（约重1050克）异丙醇吸收瓶中（先称好毛重和净重），待其重量增加至1123克左右即停止，装入试剂瓶内，盖紧内塞放入冰箱。

Claims (5)

1.一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
（1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs ；
Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；
碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；
（2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；
过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；
氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF, 将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（6）的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（7）的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Fmoc-D-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤（9）的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；
再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽的方法包括如下步骤：
D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取所述八肽树脂加无水甲醇，5%钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品；5%钯碳用量为树脂的1/10至5/10。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水 至pH8，室温通空气24-36小时使二硫键成环, 加冰醋酸，加活性碳，过滤。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾 :乙腈=7-8 :3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。
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