CN105191794B - 秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括外植体选择与消毒、获得无菌试管苗、胚状体诱导培养、胚状体壮苗培养和炼苗与移栽等步骤。本发明有效解决了秋枫工厂化育苗的问题，具有培养时间短，繁殖系数高，成活率高，植株健壮等优点，可满足市场对秋枫种苗的需求。
Description
技术领域
本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法。
背景技术
秋枫，别名重阳木，系高大乔木，其古朴端庄、树冠庞大、枝叶浓密，是良好的行道和庭园绿化树种。此外，秋枫根系发达，抗风力强，可营造为防护林。秋枫全身是宝，木材纹理直，较坚硬，耐久用，可作建筑家具桥梁等用；果肉可酿酒；种子含油量高，可榨油供工业用；根及树皮可用于风湿骨痛；叶可用于食道癌、胃癌、传染性肝炎、小儿疳积、肺炎、咽喉炎、疮疡等。
目前，秋枫都是采用种子进行繁殖，但种子一年只有一次，且要随采随播才能提高发芽率，种子繁殖已不能满足市场的需求。组织培养是一种植株快速繁殖技术，但采用组织培养技术快速繁殖秋枫种苗还未见报道。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，通过对秋枫进行胚性愈伤诱导，在短时间内培育出大量适合移栽的秋枫种苗，显著提高了秋枫种苗的增殖系数和种苗质量，可实现规模化生产，满足市场上对秋枫种苗的需求。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒 8-10min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于22-26℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.1-0.5mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间8-10h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于22-26℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，0.5-2.0mg/L NAA，0.1-0.5mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于22-26℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，0.5-1.5mg/L 6-BA，0.1-0.5mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量自来水，敞口放置2-4天后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
优选的是，所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
第一基质层，其由15-20重量份稻壳、10-12重量份锯末、5-8重量份草木灰和5-8重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为4-8cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20-25重量份黄壤土、15-20重量份废蜜液、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸秆、5-10重量份厩肥和0.3-0.5份酵素菌经发酵制得，其厚度为5-10cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为1-2cm的细沙层。
优选的是，所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度25-28℃、湿度为70-80％、自然光照下培养。
优选的是，所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第一培养基中的赤霉素浓度为0.3mg/L。
优选的是，所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第二培养基中的NAA浓度为1mg/L，KT浓度为0.2mg/L。
优选的是，所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第三培养基中6-BA浓度为1mg/L，NAA浓度为0.3mg/L。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、对秋枫进行胚性愈伤诱导，通过诱导其子叶，在短时间内培育出大量适合移栽的秋枫种苗，显著提高了秋枫种苗的增殖系数和种苗质量，可实现规模化生产，满足市场上对秋枫种苗的需求；
第二、在第一培养基中添加赤霉素可打破秋枫种子休眠，促使秋枫种子发芽、成苗；在第二培养基中添加NAA和KT可降低组织培养中的消耗及成本；在第三培养基中添加6-BA和NAA可有效促进叶和根的生长，获得带根完整植株，无需再单独进行生根培养，直接生根；
第三、根据幼苗的生长特点和营养需要配制专用的培养基质，幼苗在其上长势好，植株健壮，无病虫害；
第四、基质中的第一基质层由稻壳、锯末、草木灰和珍珠岩经杀菌制得，其疏松通气，吸水保水且不含病原菌；第二基质层由黄壤土、废蜜液、豆渣、秸秆、厩肥和酵素菌经发酵制得，其可为幼苗生长提供丰富的易于吸收的营养，发酵还可使第二基质层中产生大量的有益细菌，可增强幼苗的抗病虫害能力；第三基质层为细沙层，可减缓基质中养分和水分的散失；
第五、采用本发明方案所得到的秋枫组培苗的繁殖系数高达50倍，组培苗的生根率和移栽苗成活率均在95％以上，有效解决了秋枫工厂化育苗的问题。
本发明的其他优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术 人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：
一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗15min，再用添加了2滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒8min，无菌水冲洗3次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于22℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.1mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间8h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于22℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，0.5mg/L NAA，0.1mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于22℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，0.5mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量自来水，敞口放置2天，待表面角质形成后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
第一基质层，其由15重量份稻壳、10重量份锯末、5重量份草木灰和5重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为4cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20重量份黄壤土、15重量份废蜜液、10重量份豆渣、10重量份秸秆、5重量份厩肥和0.3份酵素菌经发酵制得，其厚度为5cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为1cm的细沙层。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度25℃、湿度为70％、自然光照下培养。
实施例2：
一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗18min，再用添加了2滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒9min，无菌水冲洗4次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于24℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.3mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间9h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于24℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，1.0mg/L NAA，0.2mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于24℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，1.0mg/L 6-BA，0.3mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量自来水，敞口放置3天，待表面角质形成后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
第一基质层，其由18重量份稻壳、11重量份锯末、6重量份草木灰和7重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为6cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由22重量份黄壤土、17重量份废蜜液、12重量份豆渣、12重量份秸秆、7重量份厩肥和0.4份酵素菌经发酵制得，其厚度为7.5cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为1.5cm的细沙层。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度26℃、湿度为75％、自然光照下培养。
实施例3：
一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗20min，再用添加了3滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒10min，无菌水冲洗5次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于26℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.5mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间10h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于26℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，2.0mg/L NAA，0.5mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于26℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，1.5mg/L 6-BA，0.5mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基 中加入少量自来水，敞口放置4天，待表面角质形成后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
第一基质层，其由20重量份稻壳、12重量份锯末、8重量份草木灰和8重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为8cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由25重量份黄壤土、20重量份废蜜液、15重量份豆渣、15重量份秸秆、10重量份厩肥和0.5份酵素菌经发酵制得，其厚度为10cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为2cm的细沙层。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度28℃、湿度为80％、自然光照下培养。
实施例4：
一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗20min，再用添加了3滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒8min，无菌水冲洗4次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于25℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.3mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间10h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于25℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，1.2mg/L NAA，0.4mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于25℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，1.2mg/L 6-BA，0.4mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量自来水，敞口放置4天，待表面角质形成后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
第一基质层，其由15重量份稻壳、12重量份锯末、8重量份草木灰和8重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为8cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由25重量份黄壤土、15重量份废蜜液、10重量份豆渣、10重量份秸秆、5重量份厩肥和0.5份酵素菌经发酵制得，其厚度为10cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为2cm的细沙层。
所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度25℃、湿度为70％、自然光照下培养。
对比例1：
通过对比例1来进一步说明本发明基质的有益效果。其中，对照组在所述步骤E中幼苗培养时采用沙床培养，对照组的其余操作条件同实施例1，实验结果见表1。
表1不同培养方式对幼苗的影响
| 培养方式 | 平均株高(cm) | 平均株重(g) |
| 基质 | 12.9 | 13.4 |
| 沙床 | 9.1 | 6.8 |
由表1可知，采用本发明基质培养，幼苗的平均株高和平均株重均显著高于沙床培养，其中，平均株高高41.8％，平均株重高97.1％，说明采用本发明基质培养可促进幼苗生长，幼苗植株健壮。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领 域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。
Claims (5)
1.一种秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、将秋枫种子用2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴100mg/L吐温20的0.1％的升汞溶液浸泡消毒8-10min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸去除所述秋枫种子表面水分，得消毒外植体；
B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于22-26℃、光照条件下培养35天，得无菌试管苗，其中，
所述第一培养基包括MS培养基，0.1-0.5mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
所述光照条件为，光照强度1500lux，光照时间8-10h/天；
C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于22-26℃、所述光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
所述第二培养基包括MS培养基，0.5-2.0mg/L NAA，0.1-0.5mg/L KT，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于22-26℃，所述光照条件培养30天，得完整带根健壮植株，其中，
所述第三培养基包括MS培养基，0.5-1.5mg/L 6-BA，0.1-0.5mg/L NAA，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂；
E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量自来水，敞口放置2-4天后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养，所述基质，其包括：
第一基质层，其由15-20重量份稻壳、10-12重量份锯末、5-8重量份草木灰和5-8重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为4-8cm；
第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20-25重量份黄壤土、15-20重量份废蜜液、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸秆、5-10重量份厩肥和0.3-0.5份酵素菌经发酵制得，其厚度为5-10cm；
第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为1-2cm的细沙层。
2.如权利要求1所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述基质中培养的条件为温度25-28℃、湿度为70-80％、自然光照下培养。
3.如权利要求1所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述第一培养基中的赤霉素浓度为0.3mg/L。
4.如权利要求1所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述第二培养基中的NAA浓度为1mg/L，KT浓度为0.2mg/L。
5.如权利要求1所述的秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述第三培养基中6-BA浓度为1mg/L，NAA浓度为0.3mg/L。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
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Granted publication date: 20170426 Termination date: 20170924 |