CN104936969B - 用于治疗细菌感染的甘露糖衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗或预防细菌感染的化合物。这些化合物具有式I。本发明还提供了包含所述化合物的药学上可接受的组合物和使用这些组合物治疗细菌感染的方法。最后，本发明提供了用于制备本发明化合物的方法。

Description

用于治疗细菌感染的甘露糖衍生物
相关申请的交叉参考
本发明根据35U.S.C.§119要求于2012年12月18日提交的美国临时申请号US 61/738,620、于2013年3月15日提交的美国临时申请号US 61/788,241和于2013年9月6日提交的美国临时申请号US 61/874,501的权益，将上述申请各自的全部内容引入本文参考。
附图描述
图1：化合物162晶型A的差示扫描量热测定(DSC)
图2：化合物162的X-射线粉末衍射图
图3：化合物202晶型A的差示扫描量热测定(DSC)
图4：化合物202的X-射线粉末衍射图
图5：化合物202的痕量热重分析(TGA)
发明背景
炎性肠病(IBD)是复杂性的慢性炎症性疾病，其中两种更常见的形式是溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。IBD是因易感性遗传因子、环境触发、胃肠道微生物群生态失调和不适当的炎症应答的组合导致的多因子病(Man等人,2011,Nat Rev GastroenterolHepatol,Mar,8(3)：152-68)。
对与粪便和粘液相关的细菌群落的几项研究已经证实具有克罗恩病(CD)的患者的微生物群与健康对照者和具有溃疡性结肠炎(UC)的患者的微生物群不同。尽管报道的改变并非始终一致，但是大肠杆菌(Escherichia coli)的数量一般增加，而硬壁菌门(Firmicutes)在CD患者中缺乏(Peterson等人,2008,Cell Host Microbe,3：17-27；Frank等人,2007,Proc.Natl.Acad.Sci.,104：13780-13785)。这些改变是诱发因素还是炎症的结果，仍然有争论。迄今为止，已经提出几种病原体为致病因素。特别地，据报道粘着侵害性大肠杆菌(AIEC)在几个国家(英国、法国和美国)中在CD患者中比对照组更普遍(Darfeuille-Michaud等人,2004,Gastroenterology,127：412-421；Martinez-Medina等人,2009,Inflamm Bowel Dis.,15：872-882)。与～5％的健康受试者相比，已经从～35％的CD患者的回肠损害中分离了AIEC菌株。AIEC的特征之一在于其粘着和侵入上皮细胞的能力。从不同模型中已知，认为在细菌细胞表面上表达的粘着物与宿主组织表面上确定的糖基化受体结合是发病机理中最初和关键的步骤，然后开启用于疗法的新途径，例如阻断1型菌毛与CEACAM6即已知的FimH宿主受体之间的相互作用(Barnich等人,2007,J.Clin.Invest.,117：1566–1574；Carvalho等人,2009,JEM,第206卷，第10期,2179-2189)。因此，抑制粘着和随后的AIEC在上皮细胞中的胞内复制可以防止导致粘膜炎症粘膜和上皮屏障破坏的粘膜下层感染建立。
近期还证实FimH拮抗剂能够有效地治疗尿道感染(J.Med.Chem.2010,53,8627-8641)。
发明概述
本发明提供用于治疗或预防细菌感染、例如尿道感染(UTI)和炎性肠病(IBD)的化合物。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐由如下结构式(I)表示：
其中V1、Z和V如本文所定义。
本发明还提供包含本文所述的化合物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的组合物。
本发明还提供治疗或预防受试者的细菌感染的方法，包括对所述受试者施用有效量的本文所述的化合物或组合物。本发明还提供用于制备本发明化合物的方法。
发明详述
本发明涉及用于治疗或预防细菌感染、例如尿道感染(UTI)和炎性肠病(IBD)的化合物。
本发明的一个方面提供式I的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
V1是卤素、NH2、OH或SH；
V是H、卤素、-OR7、-NR5R6、-SR7或C1-C6脂族基团；
R5是-H；X5；Q5；X5-Q5；-C(O)R9；-C(O)NHR9；或-C(O)OR9；
R6是-H；X6；Q6；X6-Q6；-C(O)R9；-C(O)NHR9；或-C(O)OR9；
R7是-H；X7；Q7；X7-Q7；-C(O)R9；或-C(O)NHR9；
R9是-H；X9；Q9；或X9-Q9；
X5、X6、X7和X9各自独立地是任选地被1-3个卤素取代的C1-C6脂族基团；
Q5、Q6、Q7和Q9各自独立地是C6-C10芳基、5-10元杂芳基、C3-C8脂环族基团或3-12元杂环基；其中所述Q5、Q6、Q7和Q9独立地和任选地被1-6次出现的J取代；
Z是
或xiii；
其中环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W、X、Y和Z各自独立地是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元饱和、完全饱和、部分不饱和或芳族单环；任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元饱和、完全饱和、部分不饱和或芳族双环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的10-14元饱和、完全饱和、部分不饱和或芳族三环；
L是其中X是C1脂族基团或-C(O)-，且Y是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或NH(C1-6脂族基团)替代；L任选地被1-3个卤素取代；
L1是其中X1是C1脂族基团或-C(O)-，且Y1是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L1任选地被1-3个卤素取代；
L2是其中X2是C1脂族基团或-C(O)-，且Y2是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L2任选地被1-3个卤素取代；
L3、L5和L16各自独立地是C1-C12脂族基团，其中C1-C12脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L3、L5和L16各自独立地和任选地被1-3个卤素取代；
L4是其中X4是C1脂族基团或-C(O)-，且Y4是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L4任选地被1-3个卤素取代；
L6是C1-C15脂族基团，其中C1-C15脂族基团的至多6个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S、-C(O)-、S(O)或S(O)2替代；L6任选地被1-3个卤素取代；
L7和L9各自独立地是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C4脂族基团)替代；L7和L9各自独立地和任选地被1-3个卤素取代；
L8是其中X8是C1脂族基团，且Y8是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L8任选地被1-3个卤素取代；
L10是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L10任选地被1-3个卤素取代；
L11是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L11任选地被1-3个卤素取代；
L12是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L12任选地被1-3个卤素取代；
L13是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L13任选地被1-3个卤素取代；
L14是其中X14是C1脂族基团，且Y14是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L14任选地被1-3个卤素取代；
L15是C1-C6脂族基团；
J、JA、JB、JC、JD、JE、JF、JG、JH、JI、JK、JM、JN、JO、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JV、JX、JY和JZ各自独立地是卤素、-CN、-NO2、XJ、QJ或XJ-QJ；或结合在同一碳原子上的两个J、JA、JB、JC、JD、JE、JF、JG、JH、JI、JK、JM、JN、JO、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JV、JW、JX、JY或JZ基团与所连接的碳原子一起任选地形成-C＝N-OH、-C(O)-或环HH；
环HH是具有0-2个选自氧、氮或硫的杂原子的3-8元饱和单环；其任选地被1-4次出现的JHH取代；
JHH是卤素、CN、氧代、XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-C(＝NOH)-、-S(O)-、-S(O)2-,P或P(O)替代；XJ任选地被0-6次出现的卤素、OH或C1-4烷基取代；或任选地被0-1次出现的CN取代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-7元单环饱和、完全不饱和、部分不饱和或芳族环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元饱和、完全不饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选地被1-6次出现的卤素、氧代、CN或C1-6烷基取代，其中所述C1-6烷基的至多2个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；
条件是在一些实施方案中，Z不是CH2CH2、
应理解，a和b表示键且表示使糖环连接至基团Z的键的特异连接性和立体化学。还应理解，当X、X1、X2、X4、X8和X14是C(O)时，X与Y；X1与Y1；X2与Y2；X4与Y4；X8与Y8和X14与Y14之间的键分别是单键。当X、X1、X2、X4、X8和X14是C1脂族基团时，X与Y；X1与Y1；X2与Y2；X4与Y4；X8与Y8和X14与Y14之间的键分别根据X、X1、X2、X4、X8和X14的性质的不同而改变。例如，如果X是“CH”，则X与Y之间的键是产生–CH＝Y的双键。
本发明的另一个方面提供式I的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
V1是卤素、NH2、OH或SH；
V是H、卤素、-OR7、-NR5R6、-SR7或C1-C6脂族基团；
R5是-H；X5；Q5；X5-Q5；-C(O)R9；-C(O)NHR9；或-C(O)OR9；
R6是-H；X6；Q6；X6-Q6；-C(O)R9；-C(O)NHR9；或-C(O)OR9；
R7是-H；X7；Q7；X7-Q7；-C(O)R9；或-C(O)NHR9；
R9是-H；X9；Q9；或X9-Q9；
X5、X6、X7和X9各自独立地是任选地被1-3个卤素取代的C1-C6脂族基团；
Q5、Q6、Q7和Q9各自独立地是C6-C10芳基、5-10元杂芳基、C3-C8脂环族基团或3-12元杂环基；其中所述Q5、Q6、Q7和Q9独立地和任选地被1-6次出现的J取代；
Z是
其中A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X各自独立地是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元完全不饱和、部分不饱和或单环芳族环；任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元完全不饱和、部分不饱和或芳族双环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的10-14元完全不饱和、部分不饱和或芳族三环；
L是其中X是C1脂族基团或-C(O)-，且Y是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或NH(C1-6脂族基团)替代；L任选地被1-3个卤素取代；
L1是-X1 Y1-，其中X1是C1脂族基团或-C(O)-，且Y1是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L1任选地被1-3个卤素取代；
L2是-X2 Y2-，其中X2是C1脂族基团或-C(O)-，且Y2是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L2任选地被1-3个卤素取代；
各自L3和L5独立地是C1-C12脂族基团，其中C1-C12脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L3和L5各自独立地和任选地被1-3个卤素取代；
L4是-X4 Y4-，其中X4是C1脂族基团或-C(O)-，且Y4是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L4任选地被1-3个卤素取代；
L6是C1-C15脂族基团，其中C1-C15脂族基团的至多6个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S、-C(O)-、S(O)或S(O)2替代；L6任选地被1-3个卤素取代；
L7和L9各自独立地是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-C(O)-、NH或N(C1-C4脂族基团)替代；L7和L9各自独立地和任选地被1-3个卤素取代；
L8是–X8 Y8-，其中X8是C1脂族基团，且Y8是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被–C(O)-、NH或N(C1-C6脂族基团)替代；L8任选地被1-3个卤素取代；
L10是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L10任选地被1-3个卤素取代；
L11是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L11任选地被1-3个卤素取代；
L12是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L11任选地被1-3个卤素取代；
L13是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S或-C(O)-替代；L11任选地被1-3个卤素取代；
J、JA、JB、JC、JD、JE、JF、JG、JH、JI、JK、JM、JN、JO、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JV、JV、JW和JX各自独立地是卤素、-CN、-NO2、XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-C(＝NOH)-、-S(O)-、-S(O)2-、P或P(O)替代；XJ任选地被0-6次出现的卤素取代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-7元完全不饱和、部分不饱和或芳族环；任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元完全不饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选地被1-6次出现的卤素、CN、NO2、C1-C6脂族基团、OH、NH2、NH(C1-C6脂族基团)、NH(C1-C6脂族基团)2、苯基、5-6元杂芳基、C3-C6脂环族基团或3-8元杂环基取代，其中所述苯基、5-6元杂芳基、C3-C6脂环族基团或3-8元杂环基任选地被卤素、CN、NO2或C1-C6脂族基团取代，其中C1-C6脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、S或CO替代；
条件是Z不是CH2CH2、或
在一些实施方案中，Q5、Q6、Q7和Q9的C6-C10芳基是苯基或萘基；5-10元杂芳基是具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基；或具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的8-10元双环杂芳基；C3-C8脂环族基团是单环C3-C8环烷基或环烯基环；且3-12元杂环基是具有1-3个选自氧、氮或硫的杂原子的3-8元单环杂环基；或具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元双环杂环基。
一些实施方案包含如下的一种或多种：
a)Z选自式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x、xi或xii；
b)环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X各自独立地是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元完全不饱和的、部分不饱和的或芳族单环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元完全不饱和的、部分不饱和的或芳族双环；和
c)XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-C(＝NOH)-、-S(O)-、-S(O)2-、P或P(O)替代；XJ任选地被0-6次出现的卤素取代。
在一些实施方案中，V1是OH。在其它实施方案中，V是OH。
在一些实施方案中，环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W、X、Y和Z是芳族的。
在另一个实施方案中，Z选自式ii、iii、v、vii或xiii。在一些实施方案中，Z选自式ii、iii或v。
在一些实施方案中，环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X是芳族的。在其它实施方案中，环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W、X、Y和Z各自独立地是苯基、萘基或具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元杂芳基。在其它实施方案中，环A、B、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X各自独立地是苯基、萘基或具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的5-6元杂芳基。在一些实施方案中，环A、B、D、M、O、T和U各自通过碳原子与所连接的甘露糖环键合。
在一些实施方案中，J、JA、JB、JC、JD、JE、JF、JG、JH、JI、JK、JM、JN、JO、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JV、JW、JX、JY和JZ各自独立地是-NO2、-CN、卤素或C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-4烷基)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代且任选地被1-3个卤素或1个CN取代。在其它实施方案中，J、JA、JB、JC、JD、JE、JF、JG、JH、JI、JK、JM、JN、JO、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JV、JW和JX各自独立地是–NO2、-CN、卤素或C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-4烷基)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代且任选地被1-3个卤素取代。
在本发明的一个方面，Z是
在一些实施方案中，环A是三唑基、噻吩基或苯基，且JA是CF3或-O(C1-6烷基)。在其它实施方案中，环A是苯基，且JA是CF3或OCH(CH3)2。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，环B和环C独立地是三唑基或苯基。在其它实施方案中，环B和环C是苯基。在一些实施方案中，JB和JC各自独立地是卤素、C1-6烷基或O(C1-6烷基)。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，环D、环E和环F各自独立地是三唑基或苯基。在其它实施方案中，环D和环E是苯基，且环E是任选取代的基团，其选自C3-6环烷基、苯基、吡啶基或吡嗪基。在一些实施方案中，环E是吡啶基。在其它实施方案中，JD、JE和JF各自独立地是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-4烷基)或C(O)替代。在一些实施方案中，这些取代基是C1-C6烷基、O(C1-C6烷基)、卤素或CH2C(O)OCH3。在其它实施方案中，这些取代基是CH3、OCH3、氟或CH2C(O)OCH3。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，L1是-C1-C6脂族基团和环G是苯基。在其它实施方案中，环G是苯基或吲哚基；且JG是C1-6烷基、卤素或-O(C1-6烷基)。在另一个实施方案中，L1是O。在其它实施方案中，L1是-C≡C-。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，
L2是C1-6脂族基团或–(C1-4脂族基团)-C(O)NH-；
L3是C1-6脂族基团或–C(O)NH-(C1-4脂族基团)-；
环H是苯基或萘基；且
JH是卤素、CN、NO2、C1-6脂族基团、-OC1-6脂族基团或C(O)O(C1-6脂族基团)。
在其它实施方案中，
L2是C1-6脂族基团或–(C1-4脂族基团)-C(O)NH-；
L3是C1-6脂族基团或–NHC(O)-(C1-4脂族基团)-；
环H是苯基或萘基；且
JH是卤素、CN、NO2、C1-6脂族基团、-OC1-6脂族基团或C(O)O(C1-6脂族基团)，其中所述JH任选地被1-3次出现的卤素取代。
在其它实施方案中，JH是卤素、CN、NO2、苯基或C1-10脂族基团，其中至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-4烷基)、S、C(O)、SO或SO2替代；其中所述JH任选地被1-3次出现的CN、卤素或苯基取代。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，
L4和L5各自独立地是C1-6脂族基团；
环I和环K各自独立地是苯基；
JI和JK各自独立地是卤素、CN、NO2、C1-6脂族基团、-OC1-6脂族基团或C(O)O(C1-6脂族基团)。
在另一个实施方案中，L4是–CH2CH＝CH-，且L5是-C≡C-。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，L6是C1-C15脂族基团，其中C1-C15脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被–O-或C(O)NH替代。在其它实施方案中，L6是-C≡C-C≡C-、-C(O)NH-、-NHC(O)NH-、-(C1-6烷基)-、-C(O)NH-(C1-8烷基)-NHC(O)-、-C(O)NH-(CH2CH2)-O-(CH2CH2)-O-(CH2CH2)-NHC(O)-或-CH2N(CH2C≡CH)CH2-。在其它实施方案中，M是苯基；N是苯基；且JM和JN各自各自独立地是H或C1-6烷基。
另一个方面提供化合物其中Z是
在一些实施方案中，环O、环P和环Q各自独立地是苯基、三唑基或噻吩基。在一些实施方案中，L7是–C(O)NH-或C1-4烷基。在其它实施方案中，环O、环P和环Q是苯基。
另一个方面提供化合物，其中Z是
在一些实施方案中，环R和环S是苯基，且L8是C1-C6烷基。在其它实施方案中，环R和环S是噻吩基。在一些实施方案中，JR是C1-6烷基。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，环T是苯基或萘基，且L10是C1-C6脂族基团，其中C1-C6脂族基团的至多1个亚甲基单元任选地被-O-替代。在一些实施方案中，L10是-C≡C-或-CH2CH2-。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，L11、L12和L13各自独立地是-C(O)NH-或C1-4烷基，且环U、V、W和X各自独立地是苯基。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，L是C3-C6脂族基团。在一些实施方案中，L是任选取代的C1-6脂族基团。在其它实施方案中，L是-C≡C-C≡C-。
根据另一个方面，Z是
在一些实施方案中，环Y和环Z是苯基。在一些实施方案中，L14和L16是C≡C-。在一些实施方案中，L15是C1-4脂族基团。在一些实施方案中，L15是-C(CH3)2-。在一些实施方案中，环Y和环Z是苯基；L14和L16是C≡C-；且L15是-C(CH3)2-。
根据另一个方面，L1、L2、L3、L6和L10各自独立地是C1-C4烯基或C1-C4炔基。
另一个方面提供具有式IA的化合物：
另一个方面提供具有式IB的化合物：
在一些实施方案中，L2和L3通过碳原子与甘露糖环键合。在一些实施方案中，L2和L3各自独立地是C1-C6烯基或C1-C6炔基。在一些实施方案中，L2和L3的至少一个是-C≡C-。在其它实施方案中，L2和L3均为-C≡C-。
另一个方面提供具有式IC的化合物：
在一些实施方案中，L6与所连接的苯环的间位或对位键合。在其它实施方案中，L6与所连接的苯环的对位键合。在其它实施方案中，L6与如式IC-a中所示的苯环的间位键合：
在一些实施方案中，L6是-C≡C-C≡C-。在其它实施方案中，L6是C1-6脂族基团、-O-(C1-4烷基)-O-、-C(O)NH-、-NHC(O)NH-、-C(O)NH-(C1-10烷基)-NHC(O)-、-(CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2)-。在其它实施方案中，L6是-CH2-或-C(CH3)2-。
另一个方面提供具有式ID的化合物：
在一些实施方案中，环H是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环芳族环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元双环芳族环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的10-14元三环芳族环。为清楚起见，如果包含至少一个芳族环，则双环或三环被视为芳族环。
在其它实施方案中，环H是任选取代的苯基、萘基、噻吩基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、噻吩基硫苯基(thienylthiophenyl)、喹啉基、喹唑啉基、苯并噻二唑基或芴基。在其它实施方案中，环H是任选取代的苯基或萘基。
根据另一个实施方案，环H与JH和JHH一起选自如下：
在一些实施方案中，JH是卤素、氧代、CN、XJ、QJ或XJ-QJ；其中
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-替代；
QJ是苯基；且
JH任选地被0-3次出现的卤素或0-1次出现的CN取代。
在一些实施方案中，环H是任选取代的苯基或萘基。
在其它实施方案中，JH是卤素、CN、C(CH3)2CN、C3-6环烷基、苯基、-O-CH2苯基或C1-6烷基，其中至多1个亚甲基单元任选地被-O-、-S-、-NH-、-N(C1-6烷基)-或-C(O)-替代。在其它实施方案中，环H是苯基，且JH是卤素、CN、–C(CH3)2CN、C3-6环烷基、苯基、CH2苯基、-O-CH2苯基或C1-6烷基，其中至多1个亚甲基单元任选地被-O-、-S-、-NH-、-N(C1-6烷基)-或-C(＝O)-替代。在一些实施方案中，JH被0-3个卤素或0-1个CN取代。
根据另一个实施方案，环H是
其中G是O、S、S(O)、S(O)2、CF2、C(JH1)(JH2)、–C(JH3)2-C(JH4)2–或N(JH5)；
JH1是H、OH或C1-6烷基，其中至多2个亚甲基单元任选地被-O-、-NH-、-NH(C1-C6脂族基团)-、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；JH1任选地和独立地被1-3次出现的OH取代；
JH2是XJH、QJH或XJH-QJH；JH2任选地被1-3次出现的OH取代；
XJH是C1-6烷基，其中C1-6烷基的至多3个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；
QJH是C3-6环烷基、苯基或具有1-3个选自氧、氮或硫的杂原子的5-7元单环杂环基；
或JH1和JH2与所连接的碳原子一起形成C＝N-OH、C＝O或环HH；
环HH是具有0-2个选自氧、氮或硫的杂原子的5-7元饱和单环；其中所述环任选地被1-4次出现的JHH取代；
JHH是卤素、CN、XJ、QJ或XJ-QJ；
JH5是XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；XJ任选地被0-6次出现的卤素或0-1次出现的CN取代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-6元饱和、部分不饱和或芳族单环；或任选地具有1-6个选自氧、氮或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或芳族双环；其中QJ各自任选地被1-6次出现的卤素、氧代、CN、NO2或C1-C6脂族基团取代，其中C1-C6脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NR、S或CO替代；
JH、JH3和JH4各自独立地是H、卤素、CN或C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、S、-C(O)-、-S(O)-或SO2-替代；JH、JH3和JH4各自独立地和任选地被0-2次出现的卤素、OH或C1-4烷基或1次出现的CN取代；且
R是H或C1-4烷基。
在一些实施方案中，
G是C(JH1)(JH2)；
JH1是OH、F或-CH2CH2OH；
JH2是OH、CH3、环丙基、F、CH2CH3、-CH2CH2OH、-CH2CH(OH)CH2OH或任选被OCH3取代的苯基；
或JH1和JH2与所连接的碳原子一起形成＝N-OH或具有0-2个选自氧、氮或硫的杂原子的6-元饱和单环；其中所述环任选地被C1-6烷基、OH、NH2、-C(O)OCH3、-C(O)OC(CH3)3、-C(O)C(CH3)2OH或–S(O)2CH3取代。
在一些实施方案中，环HH选自环戊基、环己基、哌啶基、哌嗪基、1,3-二噻烷基或四氢吡喃基。在一些实施方案中，XJH是C1-6烷基，且QJH是C3-6脂环族基团、氧杂环丁烷基、四氢吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
根据另一个实施方案，环H与环HH一起选自下式之一：
根据另一个实施方案，环H是H2：
在一些实施方案中，
JH5是XJ、QJ或XJ-QJ；其中
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)或-S-替代；XJ任选地被1-2次出现的卤素取代；且
QJ是具有1-2个选自氧、氮或硫的杂原子的单环3-6元饱和单环；QJ任选地被1-4次出现的卤素、CN、NO2、氧代或C1-C6脂族基团取代，其中C1-C6脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NR、S或CO替代。
在一些实施方案中，JH5是H、苯基、CH2CH2OH、CH2CH2OD3、CH2C(O)OH、CH2C(O)OCH2CH3、CH2C(O)N(CH3)2、CH2CH(OH)CH2OH、CH2CH(OH)CH2N(CH3)2、
根据另一个实施方案，环H是H1；
在一些实施方案中，
JH1是H、OH、-(C1-4烷基)OH或-(C1-4烷基)OC(O)(C1-4烷基)；
JH2是XJH、QJH或XJH-QJH；其中
XJH是C1-6烷基，其中C1-6烷基的至多3个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)或-C(O)-替代；
QJH是C3-6环烷基、任选地被–O(C1-4烷基)取代的苯基或任选地被C1-4烷基取代的哌嗪基。
在其它实施方案中，
JH1是H、OH、CH2OH、CH2CH2OH或CH2OC(O)CH3；
JH2是H、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2CH(CH3)2、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2C(O)OH、CH2CH(OH)CH2OH、CH2OC(O)CH3、N(CH3)CH2CH2N(CH3)2、苯基、3-甲氧基苯基、4-甲基哌嗪基或CH2-环己基；且
JH不存在(即JH是H或JH不存在)。
在其它实施方案中，XJH是C1-6烷基，且QJH是C3-6脂环族基团、氧杂环丁烷基、四氢吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
另一个实施方案提供具有式ID-a的化合物：
在一些实施方案中，
环HH是具有0-2个选自氧、氮或硫的杂原子的3-8元饱和单环；
JHH是XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-；XJ任选地被0-6次出现的卤素或0-1次出现的CN取代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-7元单环饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选地被1-6次出现的卤素、CN、NO2或C1-C6脂族基团取代，其中至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、NH(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代；且
JH是卤素、CN、NO2或C1-C6脂族基团，其中至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、NH(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代。
在一些实施方案中，环HH是环戊基、环己基、四氢吡喃基、1,3二噻烷基、哌嗪基、哌啶基或氧杂庚环基。在其它实施方案中，环HH是哌啶基或四氢吡喃基。
另一个实施方案提供具有式ID-b的化合物：
在一些实施方案中，
JHH是XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C4脂族基团，其中C1-C4脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-6元单环饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选取代地被1-3次出现的卤素、CN或C1-C6脂族基团取代，其中所述C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、NH(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代；且
JH是卤素或C1-4烷基。
在一些实施方案中，JHH是H、C(O)(C1-6烷基)、C(O)O(C1-6烷基)、S(O)2(C1-6烷基)、C(O)(C3-6环烷基)、C(O)(3-6元杂环基)、C(O)(5-6元杂芳基)、C(O)-(C1-4烷基)-(5-6元杂芳基)、C(O)-(C1-4烷基)-(杂环基)；其中所述杂芳基或杂环基具有1-3个选自氧、氮或硫的杂原子；JHH任选地被OH、O(C1-6烷基)、氧代、C1-6烷基、CN或卤素取代。
在其它实施方案中，JHH是H、C(O)CH3、C(O)OC(CH3)3、C(O)OCH(CH3)2、C(O)OCH2CH3、C(O)OC(OH)(CH3)2、S(O)2CH3、C(O)CH(CH3)2、C(O)C(CH3)3、C(O)CH(CH3)OCH3、
另一个实施方案提供由选自如下的结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐。
另一个实施方案提供由选自如下的结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐。
另一个实施方案提供由选自如下的结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述化合物是化合物162：
在其它实施方案中，所述化合物是化合物202：
在其它实施方案中，所述化合物是化合物53：
另一个实施方案提供用于制备本发明化合物的方法。
一个实施方案提供用于制备下式的化合物的方法，
其中环H和JH如本文所定义；该方法包括使式XX的化合物：
其中Hal是卤素，例如溴或碘；且JH如本文所定义；
与中间体M在Sonogashira偶联条件下反应：
形成式XXII的化合物。
另一个实施方案提供用于制备下式的化合物的方法，
其中环H和JH如本文所定义；该方法包括：
a)使式XX的化合物：
其中Hal是卤素，例如溴或碘；和JH如本文所定义；
与中间体P在Sonogashira偶联条件下反应：
b)在酸性条件下(例如TFA、THF、H2O)或用TBAF使中间体P脱保护，得到式XXII的化合物。
另一个实施方案提供用于制备式IIXX的化合物的方法，包括：
a)使式XXIII的化合物：
与
在路易斯酸催化的双重Ferrier型炔基化条件下反应，得到式XXIV的化合物：
b)对化合物XXIV进行立体特异性双-二羟基化，然后皂化，形成式XXII的化合物。
在一些实施方案中，环H是未取代的苯基，且Hal是碘。
另一个实施方案提供用于制备化合物202的方法：
包括使中间体M：
与中间体AG8：
在Sonogashira偶联条件下反应，形成化合物202。
另一个实施方案提供用于制备中间体AG8的方法，包括下列步骤：
a)使与在适合的碱例如NaH和适合溶剂例如THF的存在下反应；形成中间体AG5：
b)使中间体AG5在酸性条件下例如在二噁烷中的HCl中反应，形成中间体AG4：
c)使中间体AG4与乙酰氯、适合的碱(例如三乙胺)和适合的溶剂(例如DMF)反应，形成中间体AG8。
另一个实施方案提供用于制备化合物162的方法，
包括使中间体M：
与
在Sonogashira偶联条件下反应，形成化合物162。
另一个实施方案提供用于纯化通过上述Sonogashira偶联条件形成的粗制化合物162的方法，包括下列步骤的一个或多个：在适合的乙酰化反应条件下使化合物162乙酰化，形成式162AC的化合物：
包括下列步骤：
a)通过已知纯化方法纯化化合物162AC；和
b)使用适合的脱保护条件使化合物162AC反应，得到化合物162。脱保护方法的实例包括，例如柱色谱法。
本发明还提供包含本文所述的化合物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的组合物。
本发明还提供治疗或预防受试者的细菌感染的方法，包括对所述受试者施用有效量的本文所述的化合物或组合物。
在该方法的一个实施方案中，所述细菌感染是尿道感染或炎性肠病。
另一个实施方案提供治疗或预防受试者的细菌感染的方法，包括对所述受试者施用有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的组合物。在一些实施方案中，所述细菌感染是尿道感染或炎性肠病。在一些实施方案中，所述细菌感染是溃疡性结肠炎。在其它实施方案中，所述细菌感染是克罗恩病.在一些实施方案中，细菌感染是克罗恩病或溃疡性结肠炎的原因。在一些实施方案中，所述细菌感染由AIEC(粘着侵害性大肠杆菌(e.coli))菌株导致。
另一个实施方案提供治疗或预防受试者的炎性肠病的方法，包括对该受试者施用有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含上述化合物的组合物。在一些实施方案中，所述受试者是患者。在其它实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述炎性肠病是克罗恩病。在其它实施方案中，所述炎性肠病是溃疡性结肠炎。
另一个实施方案提供抑制来自分离自具有炎性肠病的患者的大肠杆菌菌株的细菌中FimH的方法，包括使所述细菌接触有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含上述化合物的组合物。在一些实施方案中，所述细菌菌株是LF-82。
另一个实施方案提供抑制受试者的FimH的方法，包括对该受试者施用有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含上述化合物的组合物。
另一个实施方案提供抑制受试者的大肠杆菌粘着的方法，包括对该受试者施用有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含上述化合物的组合物。在一些实施方案中，抑制粘着导致预防粘膜下层感染的建立。
另一个实施方案提供阻断受试者的1型菌毛与CEACAM6之间的相互作用的方法，包括对该受试者施用有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或包含上述化合物的组合物。
本文所述的具体原子数量范围包括其中的任意整数。例如。具有1-4个原子的基团可以具有1、2、3或4个原子。
本文所用的术语“稳定的”是指这样的化合物，该化合物在经受了能够对它们进行产生、检测、回收、储存和纯化以及用于本文所公开的一个或多个目的的条件时实质上不会发生改变。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上切实可行的化合物是当在没有水分或其它化学反应性条件存在的情况下在40℃或更低的温度下保持至少一周时实质上不会发生改变的化合物。
本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”意指直链(即无支链)或支链烃链，该烃链是完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族的。
除非另外指明，否则脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，并且在其它实施方案中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。脂族基团可为直链或支链的、取代或未取代的烷基、烯基或炔基。具体实例包括但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。烷基还可以包括氘代氢且包括例如CD3这样的基团。
本文所用的术语“烷基”是指饱和直链或支链烃。本文所用的术语“烯基”是指包含一个或多个双键的直链或支链烃。本文所用的术语“炔基”是指包含一个或多个三键的直链或支链烃。
术语“脂环族基团”(或者“碳环”或“碳环基”或“碳环的”)是指包含非芳族单环碳的可以是饱和的或包含一个或多个不饱和单元的环，其具有3-14个环碳原子。该术语包括多环稠合的、螺或桥连碳环环系。该术语还包括多环环系，其中碳环可以与一个或多个芳族碳环或杂环或一个或多个芳族环或其组合稠合，其中连接基团或连接点位于碳环上。稠合双环环系包含两个共有相邻环原子的环，桥连双环基包含两个共有3或4个相邻环原子的环，螺双环环系共有1个环原子。脂环族基团的实例包括但不限于环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于环己基、环丙烯基和环丁基。本文所用的术语“杂环”(或“杂环基”或“杂环的”)是指非芳族单环，其可以是饱和的或包含一个或多个不饱和单元，具有3-14个环原子，其中一个或多个环碳被杂原子例如N、S或O替代。该术语包括多环稠合的、螺或桥连杂环环系。该术语还包括多环环系，其中杂环可以与一个或多个芳族碳环或杂环或一个或多个芳族环或其组合稠合，其中连接基团或连接点位于杂环上。杂环的实例包括但不限于哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、氮杂庚环基、二氮杂庚环基、三氮杂庚环基、氮杂辛环基(azocanyl)、二氮杂辛环基(diazocanyl)、三氮杂辛环基(triazocanyl)、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、氧杂氮杂辛环基(oxazocanyl)、氧杂氮杂庚环基、硫杂氮杂庚环基、硫杂氮杂庚环基、苯并咪唑酮基、四氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻吩基、吗啉代包括例如3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫代吗啉代、4-硫代吗啉代、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、噻吩并噻吩基、噻吩并噻唑基、苯并硫杂环戊烷、苯并二噻烷基、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮基和1,3-二氢-咪唑-2-酮基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一者或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
本文所用的术语“不饱和的”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”是指经由氧(“烷氧基”，例如-O-烷基)或硫(“硫烷基”，例如-S-烷基)原子连接的如先前所定义的烷基。
术语“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代脂族基”和“卤代烷氧基”意指视情况而被一个或多个卤素原子取代的烷基、烯基或烷氧基。该术语包括全氟化烷基，例如–CF3和-CF2CF3。
术语“卤素”、“卤代”和“hal”是指F、Cl、Br或I。
单独使用或作为如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的较大部分中的一部分的术语“芳基”是指碳环芳族环系。术语“芳基”可以与术语“芳环”互换使用。
碳环芳族环基团仅具有碳环原子(典型地6-14个)且包括单环芳族环，例如苯基；和稠合多环芳族环环系，其中两个或多个碳环芳族环彼此稠合。实例包括1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。作为本文使用的术语“碳环芳族环”范围内还包括这样的基团，其中芳族环与一个或多个非芳族环(碳环或杂环)稠合，例如在茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、naphthimidyl、菲啶基或四氢萘基，其中连接基团或连接点位于芳族环上。
单独使用或作为如“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”的较大部分中的一部分的术语“杂芳基”、“杂芳族”、“杂芳环”、“杂芳基基团”和“杂芳族基团”是指具有五至十四个成员的杂芳族基团，包括单环杂芳族环和多环芳族环，其中单环芳族环与一个或多个其它芳族环稠合。杂芳基具有一个或多个环杂原子。作为本文使用的术语“杂芳基”在其范围内还包括这样的基团，其中芳族环与一个或多个非芳族环(碳环或杂环)稠合，其中连接基团或连接点位于芳族环上。本文所用的双环6,5杂芳族环是，例如与第二个5元环稠合的6元杂芳族环，其中连接基团或连接点位于6元环上。杂芳基的实例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基或噻二唑基，包括，例如2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁二唑基、5-噁二唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-三唑基、5-三唑基、四唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基、苯并异噁唑基、异噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。
本文所用的术语“保护基”和“保护性基团”可互换使用，指用于暂时封闭具有多个反应位点的化合物中的一个或多个所需官能团的试剂。在某些实施方案中，保护基具有如下特征中的一者或多者或优选为全部：a)以良好收率选择性地加至官能团而产生受保护的底物；b)对于在一个或多个其他反应性位点发生的反应稳定；以及c)可用不会攻击该再生的、去保护的官能团的试剂以良好的收率选择性地移除。本领域的技术人员会理解，在一些情形中，所述试剂不攻击化合物中的其它反应性基团。在其它情况下，所述试剂也可与化合物中的其它反应性基团反应。保护基的实例在Greene,T.W.,Wuts,P.G in“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，ThirdEdition,John Wiley&Sons,New York:1999(Greene,T.W.、Wuts,P.G，《有机合成中的保护基》，第三版，约翰·威利父子出版公司，纽约，1999年)(以及该书的其它版本)中有详细描述，该文献的全部内容据此以引用方式并入。本文所用的术语“氮保护基”是指用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需氮反应性位点的试剂。优选的氮保护基还具有以上对保护基所示例的特征，并且某些示例性氮保护基也在Greene,T.W.,Wuts,P.G in“Protective Groups in Organic Synthesis”，ThirdEdition,John Wiley&Sons,New York:1999(Greene,T.W.、Wuts,P.G，《有机合成中的保护基》，第三版，约翰·威利父子出版公司，纽约，1999年)的第7章中进行了详细描述，该文献的全部内容据此以引用方式并入。
在一些实施方案中，脂族链的亚甲基单元任选被另一原子或基团替代。此类原子或基团的实例包括但不限于-NR-、-O-、-C(O)-、-C(＝N-CN)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-S-、-S(O)-和–S(O)2-。这些原子或基团可结合以形成更大的基团。这些更大的基团的实例包括但不限于-OC(O)-,-C(O)CO-、-CO2-、-C(O)NR-、-C(＝N-CN)、-NRC(O)-、-NRC(O)O-、-S(O)2NR-、-NRSO2-、-NRC(O)NR-、-OC(O)NR-和-NRSO2NR-，其中R如本文所定义。
仅关注那些产生稳定结构的基团的替代和组合。任选的替代可在链内和/或在链的任一端处发生；即，在连接点处和/或也在末端。两个任选的替代也可以在链内彼此相邻，只要其产生化学上稳定的化合物即可。任选的替代还可以完全替代链内的所有碳原子。例如，C3脂族基团可任选被-NR-、-C(O)-和-NR-替代而形成-NRC(O)NR-(脲)。
除非另外指明，否则如果替代发生于末端上，那么替代原子与末端上的氢原子键合。例如，如果-CH2CH2CH3任选被-O-替代，那么所得的化合物可以是-OCH2CH3、-CH2OCH3或-CH2CH2OH。
应当理解，脂族链可以包括不饱和键且由此替代脂族基团的“亚甲基”单元的原子实际上可以替代–CH＝单元＝C＝单元或≡C-单元。本领域技术人员可以理解，替代这些单元的原子具有适合的键级以产生稳定的结构。例如，当脂族链的亚甲基单元任选地被-NR-替代时，本领域技术人员可以理解，如果脂族基团是CH＝CH-CH3和中间的亚甲基(“CH”将被替代)，则它实际上可以被“N”而不是“-NR-”替代而产生CH＝N-CH3。
除非另外指明，否则本文描绘的结构也旨在包括该结构的所有同分异构(例如，对映异构、非对映异构、几何异构、构象异构和旋转异构)形式。例如，每个非对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体和(Z)和(E)构象异构体包括在本发明内。本领域的技术人员会理解，取代基可围绕任何可旋转键自由地旋转。例如，画为的取代基也代表
因此，本发明化合物的单种立体化学异构体以及对映体、非对映体、几何、构象和旋转混合物均在本发明范围之内。
除非另外指明，否则本发明化合物的所有互变异构形式均在本发明范围之内。
另外，除非另外指明，否则本文描绘的结构也意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构，不同的是用氘或氚替换氢或用富含13C-或14C-的碳替换碳的化合物在本发明范围之内。这种化合物可用作(例如)生物测定法中的分析工具或探针。这些化合物也用于治疗细菌感染(参见，例如化合物183)。
如本文所述，如果本发明指明的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代，则例如一般如本文所示例或作为本发明具体类型、亚类和种类为典型。可以理解，措词“任选取代的”与措词“取代或未取代的”可互换使用。一般地，术语“取代的”无论位于术语“任选地”之前还是之后，都是指在指定结构上的氢基被指定取代基的基团替代。除非另有指示，否则任选取代的基团可以在该基团的每个可取代位置上具有取代基，且当在任意指定结构上的一个以上位置可以被一个以上选自指定基团的取代基取代时，取代基在每个位置上可以相同或不同。
仅关注那些产生稳定结构的取代基选择和组合。这样的选择和组合对于本领域技术人员而言显而易见且可以在不经过度实验的情况下确定。
术语“环原子”是例如C、N、O或S这样的原子，它们位于芳族基团、环烷基或非芳族杂环的环上。
芳族基团上的“可取代环原子”是与氢原子键合的环碳或氮原子。氢可以任选地被适合的取代基替代。因此，术语“可取代环原子”不包括两个环稠合时共有的环氮或碳原子。此外，“可取代环原子”不包括当结构描述它们已经结合非氢的部分时的环碳或氮原子。
应理解，带有通过多环分子的几个环所画的取代基的键表示该取代基可以键合在多环的任意环上。例如，在如下所示的图中：
JH可以在咔唑环的苯并环上以及在中心的5-元环上被取代，例如在咔唑环的氮上。因此，如果JH是“CH3”，则可以基于上述通式关注任意如下三个环：
如本文所定义的芳基可以包含一个或多个可取代环原子，它们可以键合在适合的取代基上。芳基的可取代环碳原子上的适合的取代基的实例包括R’。R’是-Ra、-Br、-Cl、-I、-F、-ORa、-SRa、-O-CORa、-CORa、-CSRa、-CN、-NO2、-NCS、-SO3H、-N(RaRb)、-COORa、-NRcNRcCORa、-NRcNRcCO2Ra、-CHO、-CON(RaRb)、-OC(O)N(RaRb)、-CSN(RaRb)、-NRcCORa、-NRcCOORa、-NRcCSRa、-NRcCON(RaRb)、-NRcNRcC(O)N(RaRb)、-NRcCSN(RaRb)、-C(＝NRc)-N(RaRb)、-C(＝S)N(RaRb)、-NRd-C(＝NRc)-N(RaRb)、-NRcNRaRb、-S(O)pNRaRb、-NRcSO2N(RaRb)、-NRcS(O)pRa、-S(O)pRa、-OS(O)pNRaRb或-OS(O)pRa；其中p是1或2。
Ra-Rd各自独立地是–H、脂族基团、芳族基团、非芳族碳环或杂环基团或-N(RaRb)，它们一起形成非芳族杂环基团。Ra-Rd表示的脂族基团、芳族基团和非芳族杂环基团和-N(RaRb)表示的非芳族杂环基团各自任选地和独立地被一个或多个R#表示的基团取代。优选Ra-Rd未被取代。
R#是卤素、R+、-OR+、-SR+、-NO2、-CN、-N(R+)2、-COR+、-COOR+、-NHCO2R+、-NHC(O)R+、-NHNHC(O)R+、-NHC(O)N(R+)2、-NHNHC(O)N(R+)2、-NHNHCO2R+、-C(O)N(R+)2、-OC(O)R+、-OC(O)N(R+)2、-S(O)2R+、-SO2N(R+)2、-S(O)R+、-NHSO2N(R+)2、-NHSO2R+、-C(＝S)N(R+)2或-C(＝NH)-N(R+)2。
R+是–H、C1-C4烷基、单环芳基、非芳族碳环或杂环基，其各自任选地被烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、-CN、-NO2、胺、烷基胺或二烷基胺取代。优选R+未被取代。
本文所用的脂族基团或非芳族杂环或碳环基团可以包含一个或多个取代基。脂族基团或非芳族杂环基团的环碳的适合的取代基的实例是R”。R”包括那些上述对R’列出的取代基和＝O、＝S、＝NNHR**、＝NN(R**)2、＝NNHC(O)R**、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)、＝NR**、螺环烷基或稠合环烷基。R**各自独立地选自氢、未取代的烷基或取代的烷基。R**表示的烷基上取代基的实例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基或卤素烷基。
当杂环基、杂芳基或杂芳烷基包含氮原子时，它可以被取代或未被取代。当杂芳基的芳族环上的氮原子具有取代基时，氮可以是季氮。
用于取代包含非芳族氮的杂环基的优选位置是氮环原子。非芳族杂环基或杂芳基氮上的适合的取代基包括–R^、-N(R^)2、C(O)R^、CO2R^、-C(O)C(O)R^、-SO2R^、SO2N(R^)2、C(＝S)N(R^)2、C(＝NH)-N(R^)2和-NR^SO2R^；其中R^是氢、脂族基团、取代的脂族基团、芳基、取代的芳基、杂环或碳环或取代的杂环或碳环。R^表示的基团上的取代基的实例包括烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰基、烷基磺酰基、卤素、硝基、氰基、羟基、芳基、碳环或杂环、氧代、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基氧基、烷氧基、羧基、烷氧羰基或烷基羰基。优选R^未被取代。
认为包含非芳族氮的在环氮上被取代并且在环碳原子上连接至分子的其余部分的杂环是N取代的。例如，N烷基哌啶基在哌啶基环的2、3或4位上连接至分子的其余部分并且在环氮上被烷基取代。认为包含非芳族氮的在环氮上被取代并且在第二个环氮原子上连接至分子的其余部分的杂环例如吡嗪基是N’取代的-N-杂环。例如，N’酰基N-吡嗪基在1个环氮原子上连接至分子的其余部分并且在第二个环氮原子上被酰基取代。
本文所用的任选取代的芳烷基可以在其烷基和芳基部分上被取代。除非另有指示，否则本文所用的任选取代的芳烷基任选地在芳基部分上被取代。
术语“价键”和“不存在”可以互换使用以表示不存在基团。
本发明的化合物在本文中根据其化学结构和/或化学名定义。如果化学结构和化学名涉及的化合物出现化学结构和化学名发生矛盾，则化学结构是化合物身份的决定者。
本发明的化合物可以以游离形式存在，以用于治疗，或如果适合，作为药学上可接受的盐存在。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适用于接触人体和低级动物组织而没有过度副作用例如毒性、刺激性、过敏反应且合理有益/风险比相当的化合物的盐。
药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19(《药物科学杂志》，1977年，第66卷，第1-19页)中详细描述了药学上可接受盐，该文献以引用方式并入本文。本发明化合物的药学上可接受的盐包括那些衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐。可在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备这些盐。可通过如下制备酸加成盐：1)使纯化的游离碱形式的化合物与适合的有机或无机酸反应并2)分离由此形成的盐。
药学上可接受无毒酸加成盐的实例为氨基的盐，其与无机酸例如氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸例如醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或通过使用本领域中所使用的其它方法例如离子交换而形成。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗换血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡糖庚酸盐(glucoheptonate)、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
可通过如下制备碱加成盐：1)使纯化的酸形式的化合物与适合的有机或无机碱反应并2)分离由此形成的盐。衍生自适当碱的盐包括碱金属(例如，钠、锂和钾)盐、碱土金属(例如，镁和钙)盐、铵盐和和N+(C1-4烷基)4盐。本发明还设想到本文所公开的化合物的任何含碱性氮的基团的季铵化。通过这种季铵化可获得水或油可溶性或可分散性的产物。
适当时，另外的药学上可接受盐包括使用抗衡离子例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。虽然其它酸和碱本身并不是药学上可接受的，但可用于制备在获得本发明化合物及其药学上可接受的酸或碱加成盐的过程中可用作中间体的盐。
应理解，本发明包括不同的药学上可接受的盐的混合物/组合，且还包括游离形式和药学上可接受的盐的混合物/组合。
除本发明的化合物外，本发明化合物的药学上可接受的衍生物或前药也可以用于治疗或预防本文鉴定的障碍的组合物中。
本文所用的和除非另有指示，否则术语“前药”是指可以在生物学条件下(体外或体内)水解、氧化或以其他方式反应以得到本发明化合物的化合物。前药在生物学条件下进行这样的反应时可以变成活性的，或它们可以在其非反应形式下具有活性。本发明关注的前药的实例包括、但不限于本发明化合物的类似物或衍生物，其包含生物可水解的部分，例如生物可水解的酰胺类、生物可水解的酯类、生物可水解的氨基甲酸酯类、生物可水解的碳酸酯类、生物可水解的酰脲类和生物可水解的磷酸酯类似物。前药的其它实例包括包含-NO、-NO2、-ONO或-ONO2部分的本发明化合物的衍生物。可以典型地使用众所周知的方法制备前药，所述众所周知的方法例如BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG DISCOVERY(1995)172-178,949-982(Manfred E.Wolff ed.,第5版)所述的那些。
“药学上可接受的衍生物”是在对需要的患者施用时能够直接或间接提供如本文另外部分所述的化合物或其残余物的加合物或衍生物。药学上可接受的衍生物的实例包括、但不限于酯类和这样的酯类的盐。
“药学上可接受衍生物或前药”包括本发明化合物的任何药学上可接受酯、酯的盐或其其它衍生物或盐，这些物质在施用给接受者后，能够直接或间接地提供本发明化合物或其具有抑制活性的代谢物或残余物。特别有利的衍生物或前药是给患者施用这些化合物时可增加本发明化合物的生物利用率(例如，通过使经口施用的化合物更容易地吸收进血液中)或相对于母体种类增强母体化合物向生物学隔室(例如脑或淋巴系统)的递送的那些衍生物或前药。
本发明化合物的药学上可接受前药包括但不限于酯类、氨基酸酯类、磷酸酯类、金属盐类以及磺酸酯类。
本文所用的措词“副作用”包括疗法(例如预防或治疗剂)的不需要的和不良的反应。副作用始终是不需要的，但不需要的作用不一定是不良的。来自疗法(例如预防或治疗剂)的不良反应可能是有害的或不适的或危险的。副作用包括、但不限于发热、恶寒、昏睡、胃肠道毒性(包括胃和肠溃疡和糜烂)、恶心、呕吐、神经毒性、肾毒性、肾脏毒性(包括例如乳头坏死和慢性间质性肾炎这样的病症)、肝毒性(包括血清肝酶水平升高)、骨髓毒性(包括白细胞减少、骨髓抑制、血小板减少症和贫血)、口干燥、金属的味觉、妊娠延长、虚弱、多寐、疼痛(包括肌肉痛、骨痛和头痛)、脱发、无力、头晕、锥体束外症状、静坐不能、心血管紊乱和性功能障碍。
在一个实施方案中，本发明是包含本发明化合物和药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的药物组合物。在一个实施方案中，本发明是包含有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的药物组合物。药学上可接受的载体包括，例如根据预期的施用形式选择并且与常规制药实际一致性的药用稀释剂、赋形剂或载体。
药学上可接受的载体可以包含不会不适当地抑制化合物的生物活性的惰性成分。药学上可接受的载体在施用于受试者时应是生物相容性的，例如无毒性的、无炎症性的、无免疫原性的或无不期望的反应或副作用。可以使用标准药物制剂技术。
本文所用的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括任何及所有的适于所需特定剂型的溶剂、稀释剂或其它液体媒介物、分散或悬浮辅助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington's Pharmaceutical Sciences,Sixteenth Edition,E.W.Mar tin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)(《雷氏药学大全》，第十六版，E.W.Martin，宾夕法尼亚州伊斯顿麦克出版有限公司，1980年)公开了在配制药学上可接受的组合物中使用的各种载体及制备其的已知技术。除非任何常规的载体介质例如由于会产生任何不合乎需要的生物学效应或以别的方式与药学上可接受的组合物的任何其它成分以有害的方式相互作用而与本发明化合物不相容，否则任何常规载体介质的使用也被认为处于本发明的范围内。
可以充当药学上可接受的载体的物质的一些实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物、羊毛脂；糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇，和磷酸盐缓冲溶液，以及其它无毒的相容性润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，而且根据配制人员的判断，着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂以及芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
可以将本发明的化合物或其药学上可接受的盐配制成用于对如本文所定义的受试者施用的药物组合物。这些包含有效治疗或预防细菌感染例如IBD和药学上可接受的载体的药物组合物是本发明的另一个实施方案。
在一个实施方案中，本发明是治疗或预防需要的受试者的细菌感染例如IBD的方法，包括对该受试者施用有效量的本发明的化合物或组合物。
本文所用的术语“受试者”、“患者”和“哺乳动物”可以互换使用。术语“受试者”和“患者”是指动物(例如鸟，例如鸡、鹌鹑或火鸡或哺乳动物)，优选哺乳动物，包括非灵长类(例如牛、猪、马、绵羊、兔、豚鼠、大鼠、猫、狗和小鼠)和灵长类(例如猴子、黑猩猩和人)，且更优选人。在一个实施方案中，受试者是非人的动物，例如家畜(例如马、牛、猪或绵羊)或宠物(例如狗、猫、豚鼠或兔)。在一个优选的实施方案中，所述受试者是人。
本文所用的“有效量”是指足以引起期望的生物学响应的用量。在本发明中，期望的生物学响应是减少或改善细菌感染的严重性、期限、进展或发作；预防细菌感染发展；导致细菌感染消退；预防与细菌感染相关的复发、发展、发作或进展；或增强或改善另一种疗法的预防或治疗作用。施用于受试者的化合物的精确用量取决于施用模式、疾病或病症的类型和严重性以及受试者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。还取决于细菌感染的程度、严重性和类型以及施用模式。本领域技术人员能够根据这些和其它因素的不同确定适合的剂量。当与其它活性剂共同施用时，例如当与细菌感染药剂共同施用时，第二种药剂的“有效量”取决于所用药物的类型。适合的剂量对于经批准的药剂而言是已知的，且可以由本领域技术人员根据受试者的病情、所治疗病症的类型和所用本发明化合物的用量调整。在未特别记录用量的情况中，有效量应推定。
本文所用的术语“治疗”是指减少或改善细菌感染的进展、严重性和/或期限或改善因施用一种或多种疗法(例如一种或多种治疗剂，例如本发明的化合物)导致的细菌感染的一种或多种症状(优选一种或多种可辨别的症状)。在具体的实施方案中，术语“治疗”是指改善细菌感染的至少一种可测定的身体参数。在其它实施方案中，术语“治疗”是指通过例如稳定可辨别的症状从身体上、通过例如稳定身体参数从生理上或通过它们两者抑制细菌感染进展。在其它实施方案中，术语“治疗”是指减轻或稳细菌感染。
本文所用的术语“预防”是指降低获得或发生给定细菌感染的风险或减少或抑制复发或细菌感染。在一个实施方案中，将本发明的化合物作为预防措施施用于患者，优选人，它们具有对本文所述的病症、疾病或障碍的遗传素质。
本发明的药学上可接受的组合物可通过经口、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、经颊、以口腔或鼻喷雾剂形式等方式施用给人和其它动物，这取决于所治疗的感染的严重性。
供口服的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，例如湿润剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用适合的分散剂或润湿剂和助悬剂配制注射剂，例如无菌可注射水性或油性混悬剂。无菌注射剂也可能是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬液或乳液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂有水，林格氏溶液，U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规上将无菌不挥发性油用作溶剂或助悬介质。为此目的，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单脂或甘油二酯。另外，将脂肪酸例如油酸用于制备注射剂。
可对注射制剂进行灭菌，例如通过滤过截留细菌的过滤器进行灭菌，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂进行灭菌，在使用之前可将该灭菌剂溶于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
为延长本发明化合物的效果，常常希望减缓化合物从皮下或肌肉注射的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。化合物的吸收速率于是取决于其溶解速率，而溶解速率又可取决于晶体大小和晶体形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒介物中来实现经肠胃外施用的化合物的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微胶囊基质来制成可注射的储库形式。根据化合物与聚合物之比以及所采用的特定聚合物的性质，可控制化合物发释放速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也可通过将化合物包封入与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备储库型注射制剂。
供直肠或阴道施用的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明化合物与适合的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述赋形剂或载体在环境温度下为固体但在体温下为液体并因而在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。
口服固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，活性化合物混有至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填料或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧基甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如石蜡，f)吸收加速剂，例如季铵化合物，g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，以及它们的混合物。就胶囊剂、片剂和丸剂而言，剂型也可包含缓冲剂。
也可采用类似类型的固体组合物作为软和硬填充明胶胶囊中的填料，所述胶囊使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物配制领域众所周知的其它包衣。它们可任选含有遮光剂并且还可具有这样的组成，该组成使得它们仅仅或优先地在肠道的某一部分中释放活性成分，任选地以延迟的方式释放。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。也可采用类似类型的固体组合物作为软和硬填充明胶胶囊中的填料，所述胶囊使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。
活性化合物也可为具有一种或多种上述赋形剂的微胶囊形式。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备有包衣和外壳，例如肠溶衣、控释包衣以及药物配制领域众所周知的其它包衣。在这种固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。如一般的做法，这种剂型还可包含非惰性稀释剂的另外的物质，例如压片润滑剂和其它压片辅助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。就胶囊剂、片剂和丸剂而言，剂型也可包含缓冲剂。它们可任选含有遮光剂并且还可具有这样的组成，该组成使得它们仅仅或优先地在肠道的某一部分中释放活性成分，任选地以延迟的方式释放。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。
本发明化合物的局部或经皮施用剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、散剂、溶液剂、喷剂、吸入剂或贴片剂。将活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或可能需要的缓冲剂相混合。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也被设想到本发明的范围之内。另外，本发明设想使用透皮贴片剂，其具有使化合物控制递送至身体的附加优点。可通过将化合物溶解或分散于恰当的介质中来制备这种剂型。吸收促进剂也可用于提高化合物穿过皮肤的通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
可以经口、肠胃外的方式、通过吸入喷剂、以局部、直肠、鼻、颊面、阴道的方式或通过植入的贮器施用本发明组合物。本文所用的术语“肠胃外”包括但不限于皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，以经口、腹膜内或静脉内的方式施用组合物。
本发明所述组合物的无菌可注射形式可为水性或油性混悬剂。这些混悬剂可根据本领域已知的技术使用适合的分散或润湿剂和助悬剂配制。无菌注射剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，常规上将无菌不挥发性油用作溶剂或助悬介质。为此目的，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单脂或甘油二酯。脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，同样的是天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是以它们的聚氧乙烯化形式。这些油溶液剂或混悬剂也可含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或在配制药学上可接受的剂型(包括乳剂和混悬剂)中常用的类似分散剂。其它常用的表面活性剂，例如吐温、司盘和在生产药学上可接受的固体、液体或其它剂型中常用的其它乳化剂或生物利用度增强剂也可用于配制目的。
可以任何口服可接受的剂型，包括但不限于胶囊剂、片剂、水混悬剂或溶液剂，来经口施用本发明药物组合物。就供口服使用的片剂而言，常用载体包括但不限于乳糖和玉米淀粉。典型地还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊剂形式口服，可用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要水混悬剂进行口服时，将活性成分与乳化剂和助悬剂组合。如果需要，还可加入某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，可以供直肠施用的栓剂形式施用本发明药物组合物。可通过将该药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠内融化而释放药物。这种物质包括但不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
还可以通过局部施用本发明的药物组合物，尤其是在治疗靶标包括通过局部施用易于达到的区域或器官，包括眼、皮肤或下肠道。易于制备适合的局部制剂用于这些区域或器官的每一种。
对下肠道的局部施加可以直肠栓剂制剂(见上文)或以适合的灌肠制剂来实现。也可使用局部透皮贴片剂。
对于局部施用而言，可将药物组合物配制为含有悬浮或溶于一种或多种载体中的活性组分的合适软膏剂。用于局部施用本发明化合物的载体包括但不限于矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将药物组合物配制为含有悬浮或溶于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油、一硬脂酸脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯60、十六醇酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苄醇和水。
对于眼科使用，可使用或不用诸如苯扎氯铵的防腐剂，将药物组合物配制为在等渗、经pH调节的无菌盐水中的微粉化混悬剂，或者优选地，制备为在等渗、经pH调节的无菌盐水中的溶液剂。或者，对于眼科使用，可将药物组合物配制在软膏例如凡士林中。
本发明的药物组合物还可以通过鼻用气溶胶或吸入施用。这种组合物根据药物配制领域中众所周知的技术制备，并且可采用苄醇或其它适合的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备成在盐水中的溶液剂。
可以根据不同因素选择使用本发明化合物的剂量方案，所述因素包括：所治疗的障碍和该障碍的严重性；所用具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和膳食；所用具体化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；受试者的肾和肝功能；和所用的具体化合物或其盐、治疗期限；与所用具体化合物联合或同时使用的药物等医学领域众所周知的因素。本领域技术人员易于确定治疗例如预防、抑制(完全或部分)或阻止疾病进展所需的本发明化合物的有效量并且开据其处方。
本发明化合物的剂量可以为约0.01至约100mg/kg体重/天，约0.01至约50mg/kg体重/天,约0.1至约50mg/kg体重/天或约1至约25mg/kg体重/天。应理解每日总量可以以单剂量施用或可以以多次给药施用，例如每日2次、3次或4次。
可以将用于本发明方法的化合物配制成单位剂型。术语“单位剂型”是指适合于作为单位剂量用于进行治疗的受试者的物理分散单元，其中每个单元包含预定量的经计算产生期望的治疗作用的活性物质任选地与适合的药用载体。单位剂型可以用于单一每日剂量或多个每日剂量之一(例如每日约1至4次或以上)。当使用多个每日剂量时，单位剂型对于每个剂量可以相同或不同。
有效量可以使用本发明的方法或药物组合物实现，所述本发明的方法或药物组合物使用单独的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或其与另一种适合的治疗剂例如癌症治疗剂的组合。当使用联合疗法时，可以使用第一种用量的本发明化合物或其药学上可接受的盐和第二种用量的另一种适合的治疗剂实现有效量。
在一个实施方式中，本发明的化合物和另外的治疗剂各自以有效量施用(即如果单独施用可以为治疗上有效的各自的用量)。在另一个实施方案中，将本发明的化合物和另一种治疗剂各自以单独无法提供治疗作用的用量(低于治疗剂量)施用。在另一个实施方案中，以有效量施用本发明的化合物，同时以低于治疗的剂量施用另一种治疗剂。在另一个实施方案中，以低于治疗的剂量施用本发明的化合物，同时以有效量施用另一种治疗剂，例如适合的癌症治疗剂。
本文所用的术语“组合”或“共同施用”可以互换使用，以指一种以上疗法的应用(例如一种或多种预防剂和/或治疗剂)。该术语的应用不限制其中将疗法(例如预防剂和/或治疗剂)施用于受试者的次序。
共同施用包括以基本上同时共同施用的方式施用第一种和第二种用量的化合物，例如在单一药物组合物中，例如具有固定比例的第一种和第二种用量的胶囊或片剂，或每种用量多个单独的胶囊或片剂。此外，这样的共同施用还包括按照依次顺序的方式使用每种化合物。
当共同施用包括单独施用第一种用量的本发明化合物和第二种用量的另一种治疗剂时，以足够紧密地时间施用所述化合物以具有期望的治疗作用。例如，可以导致期望的治疗作用的每次施用之间的时间期限可以为数分钟至数小时，且可以考虑每种化合物的特性决定，例如效能、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和动力学特性。例如，可以在彼此约24小时内、彼此约16小时内、彼此约8小时内、彼此约4小时内、彼此约1小时内或彼此约30分钟内以任意次序施用本发明的化合物和第二种治疗剂。
更具体地，可以在对受试者施用第二种疗法(例如预防剂或治疗剂，例如抗癌药)之前(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、与之同时或在其之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)施用第一种疗法(例如预防剂或治疗剂，例如本发明的化合物)。
应理解，共同施用第一种用量的本发明化合物和第二种用量的另一种治疗剂的方法可以导致增强或协同治疗作用，其中组合的效果大于可能因单独施用第一种用量的本发明化合物和第二种用量的另一种治疗剂的累加效果。
本文所用的术语“协同”是指本发明化合物与另一种疗法的组合(例如预防剂或治疗剂的组合)比所述疗法的累加效果更有效。疗法(例如预防剂或治疗剂)的组合的协同作用允许应用较低剂量的一种或多种疗法和/或减低频率的所述疗法施用于受试者。使用较低剂量疗法(例如预防剂或治疗剂)和/或以较低频率施用所述疗法降低了与将所述疗法施用于受试者的相关的毒性，但不降低所述疗法在预防、处置或治疗障碍中的效能。此外，协同作用可以导致药剂在预防、处置或治疗障碍中的效能改善。最终，疗法的组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同作用可以避免或减轻与应用每一疗法相关的不良反应或不需要的副作用。
可以使用评价药物相互作用的适合的方法确定存在协同作用。适合的方法包括，例如Sigmoid-Emax方程式(Holford,N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.6：429-453(1981))、Loewe加和性方程式(Loewe、S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.PatholPharmacol.114：313-326(1926))和中间效应方程式(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.EnzymeRegul.22：27-55(1984))。上述涉及的各方程式可以配有实验数据，以生成相应的示意图，以便辅助评价药物组合的作用。与上述涉及的方程式相关的相应示意图分别是浓度-效应曲线、等效线图解法曲线和联合指数曲线。
可以在体外或体内测定化合物作为细菌感染抑制剂的活性。体外测定法包括测定FimH活性、细菌粘着和细菌结合抑制的测定法。可选的体外测定法对抑制剂结合FimH的能力定量并且可以通过放射性标记该抑制剂、然后结合、分离抑制剂复合物和测定所结合的放射性标记的量或通过进行竞争性实验来测定，其中将新抑制剂与结合已知放射性配体的FimH一起温育。用于测定用于本发明的化合物的详细条件在下文实施例中举出。
实验细节
下列缩写用于如下实施例中：
Ac 乙酰基
AcOH 乙酸
AC2O 乙酐
BF3.OEt2 二乙基氧鎓-三氟化硼
Bn 苄基
CH3CN 乙腈
CD3OD 甲醇-D4
CDCl3 氯仿-D
CH2Cl2 二氯甲烷
conc 浓缩的
Cs2CO3 碳酸铯
CuI 碘化亚铜(I)
CuSO4 硫酸铜(II)
CV 柱体积
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DIPEA N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
Eq. 当量
EtOAc 乙酸乙酯
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基),N,N,N",N"-四甲基脲六氟磷酸盐
h 小时
Hex 己烷
M 摩尔
MeOH 甲醇
MeONa 甲醇钠
min 分钟
MTBE 甲基叔丁基醚
NaIO4 高碘酸钠
Na2SO4 硫酸钠
NMO N-甲基吗啉-N-氧化物
OsO4 四氧化锇
PdCl2 氯化钯(II)
Pd(PPh3)4 四三苯膦钯
Pd(OAc)2 乙酸钯(II)
PdCl2(dppf).CH2Cl2(1,1'-双-(二苯基膦基)-二茂铁)钯(II)二氯化物二氯甲烷络合物
Pd(OH)2 二羟基钯
Piv 三甲基乙酰基
Py 吡啶
RBF 圆底烧瓶
RT 室温
TBAF 氟化四丁基铵
TBDMSOTf 三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯
TBS 叔丁基二甲基甲硅烷基
TEA 三乙胺
Tf 三氟甲磺酰基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
TMS 三甲基甲硅烷基
TMSI 三甲基甲硅烷基碘
TMSN3 三甲基甲硅烷基叠氮化物
TMSOTf 三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯
可以根据本说明书，使用本领域技术人员一般公知的步骤制备本发明的化合物。可以通过已知方法分析那些化合物，包括但不限于LC-MS(液相色谱法质谱法)、HPLC(高效液相色谱法)和NMR(核磁共振)。应理解，如下所示的具体条件仅是实例，且并不意味着限制可以用于制备本发明化合物的条件的范围。而本发明还包括本领域技术人员根据本说明书显而易见用于制备本发明化合物的条件。除非另有指示，否则如下实施例中的所有变量如本文所定义。
用以单一MS模式与电喷雾电离操作的Waters UPLC Acquity质谱仪分析质谱样品。使用色谱法将样品导入质谱仪。用于质谱分析的流动相由0.1％甲酸和CH3CN–水混合物组成。柱梯度条件是5％-85％CH3CN–水，6分钟运行时间，AcquityHSS T3 1.8μ2.1mm ID x50mm。流速是1.0mL/min。本文所用的术语“Rt(min)”是指以分钟计的与化合物相关的LC-MS保留时间。除非另有指示，否则用于得到报道的保留时间的LC-MS方法如上文详细描述。
通过反相HPLC纯化在标准条件下使用Phenomenex Gemini 21.2mm ID x 250mm柱(5μm)、Gemini 21.2mm ID x 75mm柱(5μm),或在大部分情况中使用Waters XSELECTCSH Prep C18(5μm)ODB 19x100mm柱进行。使用线性梯度CH3CN-H2O(含有或不含0.01％TFA缓冲液或0.1％HCOH)作为流动相进行洗脱。根据化合物的极性制定溶剂系统，流速20mL/min。通过UV或Waters 3100质量检测器以ESI正模式收集化合物。合并包含期望的化合物的级分，浓缩(旋转蒸发器)以除去过量的CH3CN，并且冻干得到的水溶液，得到期望的物质，在大部分情况中，为白色泡沫体。
通用合成方法
由关键中间体、使用反应Suzuki和Sonogashira偶联制备其中所述的化合物。
可以通过如方案1中所示例的两种不同方法制备式IV的化合物(Z＝i)。在方法A中，钯催化的用I型芳基/杂芳基双-硼酸使全乙酰化烯糖的立体选择性C-糖苷化选择性地生成II型双-α-葡萄烯糖(Maddaford等人Org Letters,2001,3(13)、2013)。后者(OsO4,NMO)的立体选择性双-二羟基化得到III型芳基/杂芳基双-α-甘露糖苷类。通过皂化(MeONa/MeOH)除去乙酸酯保护基生成期望的IV型终产物(Z＝i)。或者，在方法B中，立体选择性C-糖苷化因芳基/杂芳基锌试剂的双重加成产生，所述芳基/杂芳基锌试剂衍生自(3S,4S,5R,6R)-2-溴-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三(2,2-二甲基丙酸酯)上的V型二碘芳基/杂芳基，正如Knochel报道的(Org Letters,2012,14(6)、1480)。在酸性条件(AcOH、THF、H2O)下使得到的完全新戊酸酯化的双甘露糖苷类VI，得到期望的物质IV。
方案1：用于制备式IV的化合物(Z＝i)的方法A和B
还可以使用如方案2中所示例的方法A和B制备式XI(Z＝ii)、XIV(Z＝iii)和XIX(Z＝vii)的化合物。对于基本上不对称类似物(B≠C)可以依次用方法A制备XI型联芳基或联-杂芳基化合物或更迅速地使用方法B制备，V型原料的可用性待定。在方法A中，如上所述使用VII型硼酸制备IX型中间体。在一些情况中，用由相应苄基保护的溴或碘-苯酚制备的频哪醇(pinacolo)-硼酸酯替代硼酸VII。在与葡萄烯糖偶联并且二羟基化后，通过氢解除去苄基保护基，并且转化成三氟甲磺酸酯，以便能够进行钯催化的交叉偶联。中间体IX和X的Suzuki偶联、然后皂化得到期望的双-甘露糖苷类XI。可以按照类似方式通过与双卤化的XIII型中间体的Suzuki偶联由XII型频哪醇硼酸酯制备XIV型的化合物(Z＝iii)。对于对称化合物(D＝F)该方法分两步进行(偶联和脱保护)或对于不对称(D≠F)类似物依次进行。在方法B中，如上所述分别由商购或通过交叉偶联策略制备的中间体XV、XVI和XVIII制备XI、XIV和XIX型的化合物。
方案2：用于制备式XX(Z＝ii)、XIV(Z＝iii)和XIX(Z＝vii)的化合物的方法A和B
可以通过如方案3中所示例的3种不同方法(C、D和E)制备式XXII的化合物(Z＝v)，其中L2和L3是炔。在方法C中，通过XX型二溴或二碘芳基或杂芳基化合物与((2R,3R,4R,5R,6R)-6-乙炔基-3,4,5-三((三异丙基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇或TMS保护的类似物之间的Sonogashira偶联制备中间体XXI(参见Helv.Chim.Acta.2001,84(8)、2355-2367)。在酸性条件下(TFA、THF,H2O)或使用TBAF除去XVIII的TIPS保护基，得到期望的化合物XXII。或者，在方法D中，使用未保护的α-乙炔基甘露糖((2R,3S,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇；Helv.Chim.Acta.2001,84(8)、2355-2367)进行方法C中所述的相同Sonogashira偶联。最终在方法E中，进行二乙酸(2R,3S,4R)-2-(乙酰氧基甲基)-3,4-二氢-2H-吡喃-3,4-二基酯与杂芳基型XXIII的双-TMS-乙炔芳基化合物之间的路易斯酸催化的双重Ferrier型炔基化，得到期望的中间体XXIV(TetrahedronLetters 2002,43,5437–5440。中间体XXIV的立体特异性双--二羟基化、随后皂化生成期望的最终化合物XXII。
方案3：用于制备式III的化合物(Z＝v)的方法C、D和E
通过上述反应，根据方案4方法F的合成路线制备显示与甘露糖的α-芳基和α-炔基连接基的XXVII型双-甘露糖苷类。XXVI型卤代芳基或杂芳基化合物(如对IX所述制备)与(2R,3R,4R,5R,6R)-6-乙炔基-3,4,5-三((三异丙基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇或TMS保护的类似物之间的Sonogashira偶联在乙酸酯和TIPS基依次脱保护(如果必要)后得到期望的XXVII型化合物。
方案4：用于制备式XXIII(Z＝iv)的化合物的方法F
下面是用于制备本文所述化合物的关键中间体列表。
中间体A
(乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯)的制备
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-羟基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
将乙腈(50.00mL)加入到乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(9.869g,36.25mmol)、(4-羟基苯基)硼酸(5g,36.25mmol)和Pd(OAc)2(1.221g,5.438mmol)的混合物中，将该反应混合物在RT搅拌过夜。再加入一定量的(4-羟基苯基)硼酸(1g)，将该反应混合物再搅拌2h，通过硅藻土过滤。蒸发滤液，用BiotageTMSNAP 340g硅胶柱与5％-80％EtOAc的Hex溶液梯度纯化粗制产物，得到标题产物(6.03g)。
步骤II：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(4-羟基苯基)四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-羟基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(6.03g,19.69mmol)在THF(36mL)/水(24mL)中的混悬液中加入甲磺酰胺(2.810g,29.54mmol)、OsO4(6.007g,7.4mL2.5％w/w的t-BuOH溶液,0.5907mmol)和NMO(4.613g,39.38mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜。加入1M Na2S2O3(40mL)，用EtOAc(3x 40mL)萃取该混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物(15mL)，用Na2SO4干燥。过滤该混合物，蒸发溶剂，用BiotageTMSNAP 220g硅胶柱与0％-20％MeOH的CH2Cl2溶液梯度纯化粗产物，得到标题产物(6.05g)。
LC-MS：m/z＝329.3(M+Na+)
步骤III：中间体A
向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(4-羟基苯基)四氢吡喃-2-基]甲酯(872mg,2.562mmol)在CH2Cl2(22mL)中的溶液中加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(1.190g,3.331mmol)、NEt3(518.5mg,714μL,5.124mmol)，将该反应混合物在RT搅拌过夜。蒸发溶剂，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱与0％-20％MeOH/CH2Cl2梯度、用15个柱体积纯化粗产物，得到标题产物(1.06g)。
中间体B的制备
(乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯)
通过使N2(g)充分起泡5min给乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(350mg,0.74mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(225.8mg,0.89mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(45.18mg,0.074mmol)和乙酸钾(291mg,2.96mmol)在DMF(3.7mL)中的混合物脱气。然后将该反应混合物在80℃加热5h。高度真空除去溶剂，将粗产物与EtOAc(10mL)一起研磨，过滤。浓缩滤液，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱纯化，用40％-60％EtOAc的Hex溶液和24mL/min流速在20min内梯度洗脱，得到标题产物(168mg,0.3731mmol,50.36％)，为泡沫状物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.75(d,J＝7.8Hz,2H),7.45(d,J＝7.9Hz,2H),4.96–4.90(m,1H),4.72(dd,J＝12.1,8.2Hz,1H),4.20–4.02(m,2H),3.93–3.76(m,2H),3.49(dd,J＝14.4,7.0Hz,1H),2.07(s,3H),2.05(s,3H),1.35(s,12H).
LC-MS：m/z＝451.3(M+H+).
中间体C的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(3-溴苯基)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸((2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(3-溴苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
通过使氮气充分起泡3min给乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(3.00g,11.02mmol)和(3-溴苯基)硼酸(4.43g,22.04mmol)在CH3CN(22mL)中的溶液脱气。加热乙酸钯(II)(371mg,1.65mmol)，将该反应混合物在RT搅拌5h，然后再加入部分乙酸钯(II)(371mg,1.65mmol)，持续搅拌18h。蒸发溶剂，用二氯甲烷(10mL)和饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释该混合物。通过相分离柱过滤该混合物，蒸发滤液，用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱纯化，使用5％-10％EtOAc/Hex与40mL/min流速在30min内梯度洗脱，得到标题产物(1.61g,4.36mmol,40％)，为油状物。LC-MS：m/z＝391.1,393.1(M+Na+)
步骤II：乙酸((2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-(3-溴苯基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(3-溴苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(1.60g,4.33mmol)在水(3mL)和THF(19mL)中的溶液中加入甲磺酰胺(618mg,6.50mmol)、四氧化锇(1.3mL的2.5％w/v的t-BuOH溶液,0.130mmol)和N-甲基吗啉-N-氧化物(2.030g,17.33mmol)，将该反应混合物在RT搅拌2天。再加入部分四氧化锇(1.3mL的2.5％w/v的t-BuOH溶液,0.130mmol)、甲磺酰胺(618mg,6.50mmol)和N-甲基吗啉-N-氧化物(2.030g,17.33mmol)，将该混合物再搅拌24h。蒸发溶剂，用亚硫酸氢钠(50mL)饱和溶液稀释该粗混合物，用EtOAc(3x 15mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机萃取物，蒸发溶剂。将得到的凝胶样物质溶于少量MeOH，用乙醚稀释，放入冰箱内2h。过滤该混合物，用乙醚洗涤，高度真空干燥，得到标题产物(1.480g,85％)，为固体。LC-MS：m/z＝425.1,427.1(M+Na+)
步骤III：中间体C
将乙酸((2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-(3-溴苯基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯(1.48g)溶于MeOH(20mL)，加入MeONa的MeOH溶液(187μL的25％w/v,0.87mmol)，将该反应混合物在RT搅拌4h。通过添加Amberlite IR120H树脂中和该反应混合物，直到pH改成中性为止。过滤该反应混合物，蒸发滤液，将固体与Et2O(2x 10mL)一起研磨，得到标题产物(1.08g,3.046mmol,70.3％)，为固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.68(s,1H),7.45(dd,J＝10.6,4.1Hz,2H),7.29(t,J＝7.9Hz,1H),4.91(d,J＝4.7Hz,1H),4.29(dd,J＝4.6,3.2Hz,1H),3.95-3.71(m,3H),3.61(dd,J＝7.4,3.1Hz,1H),3.55-3.47(m,1H).LC-MS：m/z＝341.1,343.1(M+Na+).
中间体D的制备
3-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)苯甲酸
步骤I：3-((2S,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)苯甲酸甲酯
使用与步骤I中所述制备中间体C相同的方法制备3-[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-6-基]苯甲酸甲酯，但使用(3-甲氧基羰基苯基)硼酸作为原料。LC-MS：m/z＝371.2(M+Na+).
步骤II：3-((2R,3S,4R,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-3,4-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)苯甲酸甲酯
使用与步骤II中所述制备中间体C相同的方法制备3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-3,4-二羟基-四氢吡喃-2-基]苯甲酸甲酯。LC-MS：m/z＝383.3(M+H+).
步骤III：中间体D
用MeONa的MeOH溶液(341μL的25％w/v,1.58mmol)处理3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-3,4-二羟基-四氢吡喃-2-基]苯甲酸甲酯(2.20g,5.75mmol)在MeOH(30mL)中的混合物，将该反应混合物在RT搅拌18h。蒸发挥发性物质，将该混合物溶于MeOH(30mL)，加入氢氧化钠水溶液(5.1mL的2M,10.3mmol)，将该反应混合物在RT搅拌15h。通过添加Amberlite IR120H树脂中和该混合物，直到pH改成中性为止。过滤该反应混合物，蒸发滤液，得到标题产物(1.57g,66％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(s,1H),7.96(d,J＝7.7Hz,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),4.99(d,J＝4.4Hz,1H),4.42-4.36(m,1H),3.93-3.74(m,3H),3.63(dd,J＝7.5,3.1Hz,1H),3.54-3.49(m,1H).LC-MS：m/z＝285.2(M+H+).
中间体E的制备
(三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(3-羟基苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯)
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(1.100g,4.040mmol)在10mL CH3CN中的溶液中加入[3-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基)氧基苯基]硼酸(2.038g,8.080mmol)和Pd(OAc)2(136.1mg,0.6060mmol)。将该混合物在RT搅拌5h，然后向其中再加入一批Pd(OAc)2(136mg,0.606mmol)和[3-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基)氧基苯基]硼酸(2.038g,8.080mmol)。然后在RT搅拌过夜。用20mL CH2Cl2稀释该混合物，用硅藻土垫过滤。浓缩滤液，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-20％)、用20个柱体积分离残余物，得到标题产物(805mg,47％)，为油状物，静置时固化。1H NMR(CDCl3,400MHz)：7.06(m,1H),6.78(m,1H),6.70(m,1H),6.60(m,1H),5.97(m,1H),5.71(m,1H),5.09(m,2H),4.08(m,1H),3.85(m,1H),3.62(m,1H),1.88和1.87(2s,6H),0.78(m,9H),0.00(m,6H).
步骤II：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基苯基]-4,5-二羟基-四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(2.500g,5.944mmol)在水(10mL)/t-BuOH(10mL)中的溶液中加入甲磺酰胺(848.0mg,8.92mmol)、2.5％OsO4/t-BuOH(1.9mL,0.149mmol)、NMO(1.393g,11.89mmol)和二甲基吡啶(689μL,5.94mmol)。将该混合物在RT搅拌过夜。然后用15％亚硫酸氢钠(15mL)猝灭，用EtOAc(40mL)稀释。然后分离水相，用水(20mL)和盐水(20mL)连续洗涤，用Na2SO4干燥。减压除去溶剂后，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度(0-6％)、用20个柱体积纯化残余物，得到标题化合物(2.20g,81％)，为油状物。1H NMR(CD3OD,400MHz)：7.06(m,1H),6.78(m,1H),6.70(m,1H),6.58(m,1H),4.85(m,1H),4.64(m,1H),4.46(m,1H),3.96(m,1H),3.85(m,1H),3.62(m,2H),1.86和1.83(2s,6H),0.78(m,9H),0.00(m,6H).
步骤III：三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
在0℃在N2气氛中向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基苯基]-4,5-二羟基-四氢吡喃-2-基]甲酯(1.00g,2.20mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入2,6-二甲基吡啶(872μL,6.60mmol)，然后加入DMAP(53.8mg,0.44mmol)和乙酐(623μL,6.60mmol)。将黄色溶液在0℃搅拌1.5h。TLC(30％EtOAc/hex)显示原料完全耗尽。用KHSO4(15％,2x 6mL)处理该反应体系，然后用盐水洗涤，干燥，蒸发。用BiotageTMSNAP硅胶柱、使用EtOAc-Hex(0-5％,3CV；5-30％,20CV)作为洗脱剂纯化粗物质，得到标题产物(1.02g)，为澄清树胶状物。
步骤IV：中间体E
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(1.02g,1.799mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入乙酸(162.0mg,153μL,2.698mmol)和TBAF(5.4mL的1M,5.397mmol)。将该混合物在RT搅拌30min，然后用EtOAc(30mL)稀释，用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(5％,5CV；5-30％,25CV；30-40％5CV,40-50％,30CV)作为洗脱剂纯化粗物质，得到标题产物(409mg,48.35％)，为白色泡沫状物。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.23(t,1H),6.92(dd,2H),6.76(dd,1H),5.86(t,1H),5.24(t,1H),5.10(dd,1H),5.01(d,1H),4.37(dd,1H),4.13(dd,1H),3.86-3.66(m,1H),2.08(d,6H),2.02(d,6H).
中间体F的制备
(三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-乙炔基苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(256mg,0.542mmol)在2.6mL CH2Cl2中的溶液中依次加入吡啶(132μL,1.63mmol)、Ac2O(128μL,1.36mmol)和DMAP(6.6mg,0.054mmol)。将该反应混合物在RT搅拌2h，用水(1mL)稀释，用Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化(10-80％EtOAc的Hex溶液)残余物，得到标题产物(232mg,77％)。
步骤II：三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(1217mg,2.187mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(178.6mg,0.2187mmol)和CuI(83.3mg,0.437mmol)在12mL DMF中的混合物中加入Et3N(1.5mL,11mmol)，然后加入乙炔基(三甲基)硅烷(1.54mL,10.9mmol)。将该反应混合物在70℃在密封试管内加热21h，冷却至RT，用水(40mL)稀释。用EtOAc(5x 20mL)萃取该反应混合物，用(3x 10mL)、10mL盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化(10-80％EtOAc的Hex溶液)残余物，得到标题产物(1.0596g,96％)。
步骤III：中间体F
在氮气气氛中向三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(1.054g,2.089mmol)在21mL THF中的溶液中依次加入AcOH(150.6mg,143μL,2.507mmol)和TBAF 1M的THF溶液(2.298mL 1M,2.298mmol)。将该反应混合物在RT搅拌2h，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化(10-80％EtOAc的Hex溶液)残余物，得到标题化合物(892mg,99％)。
中间体G的制备
((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢吡喃)
步骤I：(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-氟-四氢吡喃
在-15℃向(3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-醇(10.8g,19.98mmol)和(二乙基氨基)二氟锍四氟硼酸盐(7.075g,29.97mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液中加入DBU(4.8mL,32.1mmol)，然后搅拌20min。用饱和碳酸氢钠溶液使反应猝灭。然后用CH2Cl2(3X 20mL)萃取该混合物。用水和盐水连续洗涤合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-15％,20CV)分离残余物，得到包含标题产物的主要级分(6.40g)。LC-MS：m/z＝565.4(M+Na+).
步骤II：三甲基-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]硅烷
在-10℃向(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-氟-四氢吡喃(1120mg,2.064mmol)和三氟(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)硼氘化物(boranuide)(钾离子(1))(547.6mg,2.683mmol)在CH3CN(15mL)中的溶液中加入BF3.OEt2(351.6mg,306μL,2.48mmol)，将该混合物在氮气气氛中在相同温度下搅拌20min。然后用EtOAc(30mL)稀释，用饱和通过碳酸氢钠溶液猝灭，用水和盐水连续洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-15％,20CV)分离残余物，得到标题产物(1.06g)，为油状物。
步骤III：中间体G
向三甲基-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]硅烷(550mg,1.0mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入1M TBAF/THF(1.5mL 1M,1.500mmol)。将该混合物在RT搅拌20min。然后用EtOAc(30mL)稀释，用水和盐水连续洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用0-15％EtOAc的Hex溶液梯度、用20CV分离残余物，得到(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢吡喃(450mg)，为油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.20(m,18H),7.19-7.11(m,2H),4.87(d,1H),4.81(t,1H),4.74(d,1H),4.58(m,6H),4.09-3.91(m,3H),3.85-3.68(m,3H),2.49(d,1H).
中间体H的制备
(乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-烯丙基-四氢吡喃-2-基]甲酯)
步骤I：三乙酸(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
在0℃向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5,6-四乙酰氧基四氢吡喃-2-基]甲酯(5g,12.81mmol)和烯丙基-三甲基-硅烷(6.1mL,38.43mmol)在CH3CN(30mL)中的溶液中加入BF3.EtO2(Ether(1))(8.12mL,64.05mmol)。将该混合物在RT搅拌2天，倾入饱和NaHCO3溶液，搅拌至起泡停止。然后用CH2Cl2萃取。用水和盐水连续洗涤合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用0-50％EtOAc的Hex溶液梯度、用20个柱体积纯化残余物，得到标题产物(2.2g,46％)，其包含α/β～3：1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.76(ddt,1H),5.40–4.97(m,5H),4.28(ddd,1H),4.21–3.96(m,2H),3.96–3.81(m,1H),2.57–2.33(m,2H),2.18–1.94(m,12H).
步骤II：(3S,4R,5S,6R)-2-烯丙基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇
向搅拌的三乙酸(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(3.9g,10.47mmol)在MeOH(22.5mL)中的溶液中加入25％wt./v MeONa的MeOH溶液(241μL,1.047mmol)。将该混合物RT搅拌过夜，用树脂Amberlite 120(H)中和。过滤后，将滤液浓缩至干，用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱、使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度(0-20％)、用24个柱体积分离残余物，得到标题产物(1.9g,89％).1H NMR(400MHz,CD3OD)δ5.95–5.69(m,1H),5.08(ddd,2H),3.94–3.81(m,1H),3.81–3.54(m,5H),3.50–3.37(m,1H),2.53–2.40(m,1H),2.34(dq,1H).
步骤III：[(2R,3R,4R,5R,6R)-2-烯丙基-3,5-双[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基]-6-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]四氢吡喃-4-基]氧基-叔丁基-二甲基-硅烷
向在CH2Cl2(90mL)中的(3S,4R,5S,6R)-2-烯丙基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(1.9g,9.30mmol)加入DIPEA(8.10mL,46.52mmol)，然后加入TBDMSOTf(9.40mL,40.94mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜，然后用CH2Cl2稀释，用CuSO4饱和溶液、H2O和盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤，干燥。通过BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液0-2％、用24CV纯化粗残余物，得到标题产物(4g,65％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.89(tt,1H),5.18–4.83(m,2H),3.98–3.82(m,2H),3.82–3.67(m,4H),3.63(t,1H),2.46(dd,1H),2.00(d,1H),1.10–0.66(m,36H),0.28–-0.28(m,24H).
步骤IV：中间体H
在N2气氛中向[(2R,3R,4R,5R,6R)-2-烯丙基-3,5-双[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基]-6-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]四氢吡喃-4-基]氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(4g,6.05mmol)在干DMSO(35mL)中的溶液中加入TBAF(26.6mL 1M的THF溶液,26.62mmol)，将RM在60℃搅拌3h。将该反应体系冷却至RT，加入吡啶(5.38mL,66.54mmol)、乙酐(5.7mL,60.49mmol)和催化剂DMAP(36.94mg,0.30mmol)，持续搅拌20h。将该反应体系缓慢地倾入冰/水，用EtOAc萃取。谨慎地用饱和NaHCO3溶液、H2O和盐水洗涤有机层。用Na2SO4干燥有机相，过滤，干燥，得到标题化合物(2.00g,89％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.76(ddt,1H),5.35–4.99(m,5H),4.31(dd,1H),4.20–3.94(m,2H),3.94–3.71(m,1H),2.60–2.48(m,1H),2.47–2.29(m,1H),2.23–1.91(m,12H).
中间体I的制备
(乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(3-溴苯基)四氢吡喃-2-基]甲酯)
在0℃向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-(3-溴苯基)-4,5-二羟基-四氢吡喃-2-基]甲酯(604.8mg,1.5mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入DIPEA(969.3mg,1.31mL,7.50mmol)、DMAP(18.3mg,0.150mmol)和Ac2O(536.0mg,495μL,5.25mmol)。将该混合物在RT搅拌过夜。然后用饱和碳酸氢钠溶液猝灭。用CH2Cl2(3X15mL)萃取该混合物。用水和盐水连续洗涤合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用0-30％EtOAc的Hex溶液梯度、用20个柱体积分离残余物，得到标题产物(650mg,1.334mmol,88.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(s,1H),7.55-7.45(m,1H),7.41(dd,1H),7.29(t,1H),5.87(t,1H),5.28(t,1H),5.10(dd,1H),5.04(d,1H),4.36(dd,1H),4.14(dd,1H),3.86-3.66(m,1H),2.13(2s,6H),2.05(s,3H),2.02(s,3H)
中间体J的制备
(2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酸)
向中间体H(220mg,0.590mmol)在CH3CN(1.1mL)/CCl4(1.1mL)/H2O(1.9mL)混合物中的溶液中加入NaIO4(147.1μL,2.66mmol)，然后加入Cl3Ru(水(1))(53.27mg,0.234mmol)。将该反应混合物在RT搅拌4h，用水和CH2Cl2稀释，用硅藻土过滤，用CH2Cl2洗涤。用CH2Cl2将水相萃取2次。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到标题产物(110mg,74％)，不经进一步纯化用于下一步。LC-MS：m/z＝391.3(M+H+).
中间体K的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(3-乙炔基苯基)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在0℃将n-Bu3MgLi(2.65mL的0.65M,1.725mmol)的Hex–庚烷-二丁醚(8：20：3)溶液加入到在甲苯(2.4mL)和二丁醚(1.4mL)中的2-(3-溴苯基)乙炔基-三甲基-硅烷(1.248g,1.05mL,4.928mmol)中，在冷室内搅拌25h。滴加ZnBr2-LiBr的二丁醚溶液(2.6mL的1.05M,2.711mmol)，除去冷却浴，在RT搅拌1h。加入2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-溴-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(2.38g,4.107mmol)在甲苯(4.3mL)中的溶液，在90℃放入预热的油浴中1个周末。将该反应混合物冷却至RT，倾入1NHCl水溶液(40mL)，用EtOAc(3x 40mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(Na2SO4)，浓缩，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(0％-10％,12CV,10％,5CV)作为洗脱剂纯化，得到标题产物(765mg)，为油状物。
步骤II：中间体K
向搅拌的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(765mg,1.137mmol)在MeOH(15mL)中的亮混悬液中加入MeONa(4.6mL的0.5M,2.274mmol)，在RT搅拌24h。向得到的溶液中加入DOWEX 50WX4-400至pH 4-5，过滤，用MeOH洗脱。浓缩滤液，用BiotageTMSNAP 40g硅胶柱、使用EtOAc-MeOH-H2O(47.5：1.5：1-10：1.5：1)作为洗脱剂纯化，得到标题产物(170mg,55％)，为黄褐色固体。LC-MS：m/z＝265.28(M+H+)。
中间体L的制备
[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)四氢吡喃-2-基]甲醇
根据Jurgen Stichler-Bonaparte等人Helv.Chim.Acta.2001,84(8)、2355-2367)中所述的方法制备中间体L。
中间体M的制备
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据Jurgen Stichler-Bonaparte等人Helvetica Chimica Acta,,2001,84(8)、2355-2367所述的方法制备中间体M。
中间体N的制备
2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(4-溴苯基)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯
在0℃将n-Bu3MgLi(2.20mL的0.66M,1.45mmol)的己烷–庚烷-二丁醚(8：20：3)溶液加入到在甲苯(2.0mL)和二丁醚(1.2mL)中的1-溴-4-碘-苯(1.172g,4.141mmol)中。将该混合物在相同温度搅拌3.5h，然后滴加ZnBr2-LiBr的二丁醚溶液(2.17mL的1.05M,2.28mmol)。除去冷却浴，将该混合物在RT搅拌1h，然后加入2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-溴-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(2.00g,3.45mmol)在甲苯(3.60mL)中的溶液。在90℃将最终混合物放入预热的油浴4h(TLC显示大量原料)，在100℃持续22h。将得到的混合物冷却至RT，倾入1N HCl水溶液(40mL)，用EtOAc(3x 25mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，浓缩，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc-Hex(0％-15％,8CV)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(1.00g,44％)。(参考文献Sebastien Lemaire等人Org.Letts.2012,14,1480-1483)。
中间体O的制备：
三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
将中间体I(6.640g,13.63mmol)溶于DMF(100mL)，用室内真空和N2给该混合物脱气3次。加入4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(5.191g,20.44mmol)、KOAc(5.351g,54.52mmol)和Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(1.113g,1.363mmol)，将该混合物加热至60℃24hr。将得到的混合物冷却至RT，用硅藻土过滤。用Hex(3x100mL)洗涤DMF级分，用EtOAc(300mL)稀释。用100mL NH4Cl水溶液(20％)、水(2x100mL)、盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，然后蒸发至干。用BiotageTMSNAP 340g硅胶柱、使用EtOAc-Hex(7-60％)作为洗脱剂纯化残余物，得到伴有二氧杂环戊硼烷的标题产物。将残余物在庚烷中在0℃研磨，通过滗析分离得到的油状物，最终真空干燥，得到标题化合物，为无色油状物(7.512g)。LC-MS：m/z＝557.4(M+Na+).
中间体P的制备：
((2R,3R,4R,5R,6R)-6-乙炔基-3,4,5-三((三异丙基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇
向中间体L(1.02g,1.40mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入K2CO3(386mg,2.80mmol)。搅拌1h后，用预洗涤的Dowex 50WX4-400树脂处理该反应体系，过滤，用几部分MeOH洗涤。浓缩合并的滤液，得到无色树胶状物，通过使用BiotageTMSNAP 25g柱、应用EtOAc的Hex溶液0-20％梯度作为洗脱剂的快速色谱法纯化。浓缩合并的级分，得到标题化合物，为无色物质(878mg,96％收率)。
中间体Q的制备：
(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三(2,2-二甲基丙酸酯)
根据对中间体N所述的方法、但使用4-溴-1-碘-2-甲基-苯作为原料制备中间体Q。
中间体R的制备：
(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三(2,2-二甲基丙酸酯)
根据对中间体O所述的方法、但使用中间体Q作为原料制备中间体R。
下面是用于制备本文所述的化合物的关键中间体的列表：
中间体AG1的制备
2-(2,7-二溴咔唑-9-基)乙酸乙酯
向2,7-二溴-9H-咔唑(3.00g,9.23mmol)在CH3CN(30mL)中的溶液中加入2-碘乙酸乙酯(5.926g,3.274mL,27.69mmol)和Cs2CO3(3.008g,9.231mmol)。将该反应混合物加热至回流4h，冷却至RT，用EtOAc(50mL)稀释，通过烧结漏斗过滤，用EtOAc(20mL)和CH2Cl2(20mL)洗涤固体。用NH4Cl水溶液、盐水洗涤滤液，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到固体。将后者溶于CH2Cl2，加入庚烷，真空缓慢地除去CH2Cl2，过滤得到的沉淀，用庚烷洗涤，得到标题化合物(1.75g,3.97mmol,43％)，为淡黄色固体。ESI-MS m/z计算值410.16,测定值410.16(M+1)+
中间体AG2的制备：
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
在RT向2-(2,7-二溴咔唑-9-基)乙酸乙酯(500mg,1.216mmol)在THF(3.0mL)中的混合物中加入在THF中的硼烷(1.58mL的1M,1.58mmol)。将该反应混合物在RT搅拌5.5h(LC-MS显示80％的SM)，将反应混合物持续88h。谨慎地用THF：水(1：1,4mL)混合物猝灭，用固体K2CO3碱化，用EtOAc(2x 10mL)萃取，用盐水洗涤合并的萃取物，干燥，浓缩，得到标题化合物(440mg,88.19％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(d,J＝1.4Hz,2H),7.34(dd,J＝8.3,1.5Hz,2H),4.37(t,J＝5.4Hz,2H),4.09-4.01(m,2H).ESI-MSm/z测定值368.18(M+1)+.
中间体AG3的制备：
2,7-二溴-9-[2-(三氘代甲氧基)乙基]咔唑
向冷的(0℃)搅拌的于油中的60％NaH(51mg,1.27mmol)(用甲苯预洗涤)在DMF(1mL)中的混悬液中加入中间体AG3(260mg,0.634mmol)在DMF(1mL)中的溶液。将该反应混合物在0℃搅拌45min，用三氘代(碘)甲烷(118μL,1.90mmol)处理，搅拌20min。除去冷却浴，将该混合物搅拌45min，用NH4Cl水溶液猝灭。过滤得到的沉淀，用水洗涤，高度真空干燥，得到标题化合物(235mg,78％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(d,J＝1.5Hz,2H),7.33(dd,J＝8.3,1.6Hz,2H),4.37(t,J＝5.7Hz,2H),3.74(t,J＝5.7Hz,2H).
中间体AG4的制备：
2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶]
步骤I：2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯.中间体AG5
向冷的(0℃)搅拌的2,7-二溴-9H-芴(7.500g,23.15mmol)在THF(38mL)中的溶液中分部分加入于油中的NaH(3.7g,146.5mmol)。除去冷却浴，将混合物在RT搅拌30min(观察到氢气快速放出)，冷却至0℃。然后加入N,N-双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(4.00g,16.52mmol)在THF(6.0mL)中的溶液。将该反应混合物缓慢地温至回流，搅拌4h(浴温75℃)。将最终反应混合物冷却至RT，通过缓慢地倾倒在碎冰上猝灭，用Et2O(2x 100mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，浓缩。用BiotageTMSnap硅胶柱(340g)、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0％-10％,6CV和10％)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(5.00g,61％)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(d,J＝1.7Hz,2H),7.56(d,J＝8.1Hz,2H),7.49(dd,J＝7.9,1.5Hz,2H),3.92–3.72(m,4H),1.94–1.74(m,4H),1.53(s,9H).
步骤II：中间体AG4
在RT向HCl的二噁烷溶液(39.0mL的4M,156mmol)中加入中间体AG5,(4.50g,9.12mmol)。将该混合物在RT搅拌45min(产物在5min内沉淀)，用无水Et2O(80mL)稀释，冷却至～4℃，过滤。用Et2O(40mL)洗涤沉淀，干燥，得到标题化合物(3.567g,84％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.95(brs,2H),7.91(d,J＝1.5Hz,2H),7.88(d,J＝8.2Hz,2H),7.62(dd,J＝8.1,1.6Hz,2H),3.50-3.38(m,4H),2.08-1.97(m,4H).ESI-MS m/z计算值390.95712,测定值394.19(M+1)+.
中间体AG6的制备
2-[2,7-二溴-9-(2-羟基乙基)芴-9-基]乙醇
步骤I：2-[2,7-二溴-9-(2-氧代乙基)芴-9-基]乙醛
向搅拌的2',7'-二溴螺[环戊烯-4,9'-芴](500mg,1.33mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入MeOH(100μL,2.47mmol)，冷却至-78℃。使O3/O2混合物气流通过该溶液起泡至蓝色持续(10min)，然后用氮气清除过量的臭氧，直到溶液澄清为止。用甲基硫(0.38mL,6.85mmol)使该反应混合物猝灭，搅拌1h，除去冷却浴，搅拌1h，浓缩，得到标题化合物。将后者不经纯化用于下一步。
步骤II：中间体AG6
向冷的(0℃)搅拌的来自步骤I的2-[2,7-二溴-9-(2-氧代乙基)芴-9-基]乙醛(0.66mmol)在MeOH(2mL)和THF(2mL)的混合物中的溶液中一次加入NaBH4(100mg,2.64mmol)，在搅拌1.5h小时后，用水(5mL)和1N HCl水溶液(5mL)使该反应混合物猝灭。浓缩该混合物，用EtoAc(2x 15mL)萃取得到的水相。用盐水洗涤合并的萃取物，用Na2SO4干燥，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(25g)、使用EtOAc的Hex溶液(20％-75％)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(230mg,84％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.67(d,J＝1.7Hz,2H),7.65(d,J＝8.1Hz,2H),7.50(dd,J＝8.1,1.7Hz,2H),2.84-2.75(m,4H),2.36-2.27(m,4H).
中间体AG7的制备
(1R,2S)-2',7'-二溴螺[环戊烷-4,9'-芴]-1,2-二醇
向100mL烧瓶中加入碳酸钾(880mg,6.367mmol)、六氰基铁(3-)(钾离子(3))(2.1g,6.378mmol)、1,4-双[(S)-[(2R,4S,5R)-5-乙基奎宁环-2-基]-(6-甲氧基-4-喹啉基)甲氧基]酞嗪(17mg,0.022mmol)[(DHQD)2PHAL]和锇酸钾二水合物(2mg,0.005mmol)，向其中加入水(5.0mL)和叔丁醇(4.0mL)，搅拌15min，加入甲磺酰胺(304mg,3.196mmol)，搅拌15min。向黄-橙色混合物中加入温热的2',7'-二溴螺[环戊烯-4,9'-芴](200mg,0.5318mmol)在EtOAc(1.0mL)中的溶液，剧烈搅拌15h。用亚硫酸钠(1.4g,13.59mmol)使该反应混合物猝灭，搅拌1h，通过硅藻土柱过滤，用EtOAc(4x 5mL)冲洗烧瓶，干燥合并的滤液(Na2SO4)，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(25g)纯化残余物，用EtOAc的己烷溶液(10％-50％)梯度洗脱，得到标题化合物(200mg,91.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.04(d,J＝1.8Hz,1H),7.64-7.53(m,3H),7.49-7.38(m,2H),4.45(t,J＝4.5Hz,2H),2.31-2.12(m,4H).ESI-MS m/z计算值407.93607,测定值408.06(M+1)+.
中间体AG8的制备
1-(2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基)乙酮
在RT向搅拌的2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶](盐酸(1))、AG4(1000mg,2.142mmol)在DMF(10mL)中的混合物中加入Et3N(900μL,6.457mmol)，向得到的澄清溶液中滴加乙酰氯(180μL,2.532mmol)(放热)。将得到的反应混合物搅拌1h，用水(～20mL))稀释，搅拌20min，过滤得到的沉淀，用水(10mL)、庚烷(6mL)洗涤，高度真空干燥，得到标题化合物(885mg,94.4％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ7.99(brs,2H),7.84(d,J＝8.1Hz,2H),7.57(brd,J＝8.1Hz,2H),3.88-3.71(m,4H),2.08(s,3H),1.88-1.78(m,2H),1.76-1.65(m,2H).ESI-MS m/z计算值432.96768,测定值434.2(M+1)+.
中间体AG9的制备
1-(2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基)-2-羟基-2-甲基-丙-1-酮
在RT向搅拌的2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶](盐酸(1))、AG4(60mg,0.1397mmol)和HATU(64mg,0.1683mmol)在DMF(1mL)中的混合物中依次加入2-羟基-2-甲基-丙酸(17.5mg,0.168mmol)和Et3N(60μL,0.4305mmol)，搅拌2h，用水(～3mL)稀释，过滤得到的沉淀，用水、庚烷(1mL)洗涤，高度真空干燥，得到标题化合物(52mg,68.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(brs,J＝1.5Hz,2H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.1Hz,2H),4.37(s,1H),4.12-4.01(m,4H),1.94-1.84(m,4H),1.60(s,6H).
中间体A10的制备
2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-甲酸甲酯
向冷的(0℃)搅拌的2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶](盐酸(1))、AG4(60mg,0.1397mmol)在CH2Cl2(1mL)中的混合物中加入氯甲甲酯(16μL,0.207mmol)，然后加入Et3N(58μL,0.419mmol)，搅拌1.5h。用1N HCl(1.5mL)水溶液使反应混合物猝灭，用二氯甲烷(3x2mL)萃取。使合并的滤液通过相分离器，浓缩，得到标题化合物(59mg,88.74％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(d,J＝1.3Hz,2H),7.57(d,J＝8.1Hz,2H),7.50(dd,J＝8.1,1.5Hz,2H),3.87(s,4H),3.78(s,3H),1.84(s,4H).
中间体A11的制备
2,7-二溴-1'-甲基磺酰基-螺[芴-9,4'-哌啶]
向冷的(0℃)搅拌的2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶](盐酸(1))、AG4(60mg,0.1397mmol)在CH2Cl2(1mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(16μL,0.2096mmol)，然后加入Et3N(58μL,0.4191mmol)，搅拌1.5hr(LC-MS显示完全转化)。用1N HCl水溶液(1.5mL)使该反应混合物猝灭，用二氯甲烷(3x 2mL)萃取。使合并的滤液通过相分离器，浓缩，得到标题化合物(62mg,0.1240mmol,88.74％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(d,J＝1.5Hz,2H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(dd,J＝8.1,1.6Hz,2H),3.71-3.63(m,4H),2.99(s,3H),2.04-1.95(m,4H).
中间体AG12的制备
乙酸[9-(乙酰氧基甲基)-2,7-二溴-芴-9-基]甲酯
步骤I：[2,7-二溴-9-(羟基甲基)芴-9-基]甲醇
向[9-(羟基甲基)芴-9-基]甲醇(1.584g,7mmol)在水(5.5mL)中的溶液中加入浓H2SO4(3滴)，在50℃加热4.5h，冷却至RT，用硫代硫酸钠水溶液猝灭，用水(30mL)稀释，过滤，用水(15mL)洗涤沉淀，高度真空干燥，得到标题化合物(2.5g,70.3％)，为白色固体。产物包含～15％的未知杂质，且照此不经进一步纯化用于下一步。在LC-MS中，在349显示主峰(M-2x H2O)+
步骤II：
在RT向搅拌的[2,7-二溴-9-(羟基甲基)芴-9-基]甲醇(250mg,0.492mmol)在CH2Cl2(5mL)和吡啶(1mL)中的混合物中加入4-二甲氨基吡啶(25mg,0.205mmol)和乙酐(1mL,10.6mmol)，1.5h后，用1N HCl水溶液(3mL)猝灭，搅拌30min，用二氯甲烷(3x 5mL)萃取，用1N HCl水溶液(2x 4mL)洗涤合并的萃取物，通过相分离器，干燥(Na2SO4)，浓缩。用BiotageTM)SNAP硅胶柱(50g)、使用EtOAc的Hex溶液梯度(10％-40％,8CV)纯化残余物，得到标题化合物(120mg,52.11％)，为白色固体。在LC-MS(M-2xOAc)中在349显示峰。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71-7.67(m,2H),7.58-7.55(m,4H),4.29(s,4H),2.10(s,6H).
中间体AG13的制备
2,7-二溴螺[芴-9,5'-氧杂庚环]-2'-酮
向搅拌的2',7'-二溴螺[环己烷-4,9'-芴]-1-酮(277mg,0.6821mmol)在CH2Cl2(7mL)中的溶液中加入m-CPBA(155mg,0.8982mmol)。将该反应混合物在RT搅拌18h，加入饱和NaHCO3水溶液，用CH2Cl2萃取。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-20％,20CV)纯化残余物，得到标题化合物(205mg,71.2％)，为白色固体。
中间体AG14的制备
2,7-二溴-1'-甲基-螺[芴-9,4'-哌啶]
向搅拌的2,7-二溴螺[芴-9,4'-哌啶](盐酸(1))、AG4(100mg,0.233mmol)在1,2-二氯乙烷(2mL)中的混合物中加入甲醛水溶液(38μL的37％w/v,0.4683mmol)，然后在RT一次加入三乙酰氧基硼氘化物(钠离子(1))(148.0mg,0.698mmol)。将反应混合物在RT搅拌1h(LC-Ms显示存在澄清产物)。用10％NaOH水溶液猝灭，直到pH 6-7，用二氯甲烷(4x 5mL)萃取，干燥合并的萃取物(Na2SO4)，浓缩，得到标题化合物(91mg,93.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,J＝1.3Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),7.48(dd,J＝8.1,1.7Hz,2H),2.91-2.79(m,4H),2.54(s,3H),2.02-1.89(m,4H).ESI-MS m/z计算值404.97278,测定值406.28(M+1)+.
中间体AG15的制备
2,7-二溴-9-丙基-咔唑
向2,7-二溴-9H-咔唑(150mg,0.462mmol)在MeCN(9mL)中的溶液中加入1-碘丙烷(135μL,1.38mmol)和Cs2CO3(752mg,2.31mmol)。将该反应体系回流搅拌18h。将得到的混合物冷却至RT，过滤，用EA稀释。将有机相用饱和NH4Cl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-5％EA/Hex)纯化残余物，得到2,7-二溴-9-丙基-咔唑(145mg,86％)，为白色固体。
根据对中间体AG15所述的方法、使用适合的烷基化试剂制备中间体AG16、AG24、AG25。
中间体AG16：
2,7-二溴-9-甲基-咔唑
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.53(d,J＝1.6Hz,2H),7.33(dd,J＝8.3,1.7Hz,2H),3.77(s,3H).
中间体AG24：
2-(2,7-二溴咔唑-9-基)-1-吗啉代-乙酮
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.40(s,2H),7.35(dd,J＝8.3,1.4Hz,2H),4.96(s,2H),3.77–3.49(m,8H).
中间体AG25：
2-(2,7-二溴咔唑-9-基)-N,N-二甲基-乙酰胺
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.41(s,2H),7.34(d,J＝8.3Hz,2H),4.96(s,2H),3.17(s,3H),3.02(s,3H).
中间体AG17的制备
2,7-二溴-9-戊基-芴-9-醇
在0℃将2,7-二溴芴-9-酮(200mg,0.592mmol)在THF(2mL)中的溶液加入到用Et2O(4mL)稀释的溴化正戊基镁在Et2O中的溶液(355μL的2.0M,0.710mmol)。将该反应体系在RT搅拌18h，用1N Na2CO3猝灭。分离有机相，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-8％EA/hex)纯化残余物，得到2,7-二溴-9-戊基-芴-9-醇(150mg,62％)，为白色固体。
根据对中间体AG17所述的方法、使用适合的格氏试剂制备中间体AG18、AG19、AG20、AG21、AG22和AG23。
中间体AG26的制备
3-(2,7-二溴-9-羟基-芴-9-基)丙-1,2-二醇.
步骤I：9-烯丙基-2,7-二溴-芴-9-醇
根据对中间体AG17所述的方法、使用溴化烯丙基镁制备标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.64(d,J＝1.7Hz,2H),7.51–7.40(m,4H),5.62–5.48(m,1H),5.05–4.95(m,2H),2.77(d,J＝7.3Hz,2H),2.18(s,1H).
步骤II：中间体AG26
向来自步骤I的9-烯丙基-2,7-二溴-芴-9-醇(250mg,0.658mmol)在丙酮/H2O 4：1(6.6mL)中的溶液中加入4-甲基-4-氧化-吗啉-4-鎓(193mg,1.65mmol)和OsO42.5％的tBuOH溶液(401μL的2.5％w/v,0.03943mmol)。将该混合物在RT搅拌18h。通过添加饱和NH4Cl水溶液使反应停止，用EtOAc萃取该混合物。用饱和NH4Cl水溶液洗涤有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(30-100％EA/hex20CV)纯化残余物，得到标题化合物(174mg,64％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.82(s,1H),7.67(s,1H),7.54–7.40(m,4H),4.26–4.13(m,1H),3.76–3.67(m,1H),3.66–3.55(m,1H),3.52–3.37(m,2H),2.49–2.37(m,1H),1.86(d,J＝5.4Hz,2H),1.59(dd,J＝8.1,3.5Hz,1H).
中间体AG27的制备
(3'S,4'R)-2,7-二溴螺[芴-9,6'-四氢吡喃]-3',4'-二醇和(3'R,4'S)-2,7-二溴螺[芴-9,6'-四氢吡喃]-3',4'-二醇
步骤I：9-烯丙基-9-烯丙氧基-2,7-二溴-芴.
在0℃向NaH(60％的油混悬液,526mg,13.15mmol)在DMF(15mL)中的混悬液加入来自中间体AG26步骤I的9-烯丙基-2,7-二溴-芴-9-醇(1.00g,2.63mmol)在DMF(7.5mL)中的溶液。将该反应体系温至RT 1h，冷却至0℃，加入烯丙基溴(797μL,9.210mmol)。将该反应混合物在RT搅拌18h。用EtOAc稀释得到的混合物，用饱和NH4Cl水溶液猝灭。分离有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-8％EA/hex 20CV)纯化残余物，得到标题化合物(1.04g,94％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.60(d,J＝1.7Hz,2H),7.49(dd,J＝8.1,1.8Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),5.74(ddt,J＝17.1,10.6,5.4Hz,1H),5.45(ddt,J＝17.4,10.3,7.2Hz,1H),5.16(dq,J＝17.2,1.7Hz,1H),5.05(dq,J＝10.5,1.4Hz,1H),4.91–4.81(m,2H),3.36(dt,J＝5.4,1.5Hz,2H),2.78(d,J＝7.2Hz,2H).
步骤II：2',7'-二溴螺[2,5-二氢吡喃-6,9'-芴]
在RT向来自步骤I的9-烯丙基-9-烯丙氧基-2,7-二溴-芴(1.04g,2.48mmol)在CH2Cl2(200mL)中的溶液中加入Grubbs第二代催化剂(105mg,0.124mmol)。将该反应混合物在RT搅拌18h。浓缩得到的混合物，用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-8％EA/hex 20CV)纯化残余物，得到标题化合物(853mg,88％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68(d,J＝1.4Hz,2H),7.53–7.44(m,4H),6.18–6.02(m,1H),4.54–4.41(m,2H),2.53(s,2H).
步骤III：中间体AG27
使用来自步骤II的2',7'-二溴螺[2,5-二氢吡喃-6,9'-芴](250mg,0.6376mmol)作为原料、根据化合物196步骤II中所述的方法制备标题化合物，得到标题非对映异构体的外消旋混合物，为白色固体(201mg,74％收率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.83(s,1H),7.68(s,1H),7.57–7.41(m,4H),4.54–4.43(m,1H),4.20(d,J＝13.3Hz,1H),4.13(d,J＝8.6Hz,2H),2.46–2.33(m,2H),2.27(dd,J＝7.1,1.8Hz,1H),2.00–1.91(m,1H).
中间体AG28的制备
1-(2,7-二溴-9H-芴-9-基)-4-甲基-哌嗪
向2,7-二溴-9H-芴-9-醇(250mg,0.735mmol)在CH2Cl2(3mL)和THF(1mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(120μL,1.65mmol)。将该混合物在RT搅拌1h。将得到的混合物浓缩至干。加入MeCN(3mL)，然后加入1-甲基哌嗪(408μL,3.67mmol)，将该混合物在82℃搅拌18h。通过添加饱和NH4Cl水溶液使该反应混合物猝灭，用EtOAc稀释。分离有机相，用饱和NH4Cl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(30-100％EA/hex+1％Et3N缓冲液20CV)纯化残余物，得到标题化合物(200mg,64％收率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.75(s,2H),7.47(s,4H),4.77(s,1H),2.64(t,J＝4.1Hz,4H),2.40(s,4H),2.26(s,3H).
中间体AG29的制备
2,7-二溴螺[芴-9,2'-四氢吡喃]
向来自中间体AG27步骤II的2',7'-二溴螺[2,5-二氢吡喃-6,9'-芴](200mg,0.510mmol)在EtOAc(7mL)中的溶液中加入SiliaCat Pd0(26mg,0.0013mmol)。然后用H2起泡5分钟，将该反应体系在H2气氛中搅拌1周。过滤得到的混合物，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-8％EA/hex 17CV)纯化残余物，得到标题化合物(120mg,60％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.82(d,J＝1.6Hz,2H),7.51–7.46(m,4H),4.18–4.00(m,2H),2.11–2.03(m,2H),1.93(dt,J＝13.3,6.4Hz,4H).
中间体AG30的制备
N'-(2,7-二溴-9H-芴-9-基)-N,N,N'-三甲基-乙-1,2-二胺
根据对中间体A28所述的方法、使用N1,N1,N2-三甲基乙-1,2-二胺作为原料制备标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.73(s,2H),7.48(s,4H),4.87(s,1H),2.74(t,J＝6.3Hz,2H),2.59(t,J＝6.2Hz,2H),2.37(s,6H),2.26(s,3H).
中间体AG31的制备
2,7-二溴-9-(环戊基甲基)芴-9-醇
在RT在N2气流气氛中向Et2O洗涤的密封试管内加入在Et2O(1mL)中的碘甲基环戊烷(145μL)。加入镁(27mg,1.111mmol)和碘(0.30mg,0.0012mmol)，将该混合物回流搅拌2h(或直到全部镁耗尽)。将得到的混合物冷却至0℃，加入2,7-二溴芴-9-酮(250mg,0.740mmol)在THF(2mL)中的溶液。将该反应体系在RT搅拌18h。用饱和NaHCO3水溶液使得到的混合物猝灭，分离有机相，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-10％EA/hex 20CV)纯化残余物，得到标题化合物(62mg,13％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61(d,J＝1.8Hz,2H),7.53–7.40(m,4H),2.26(d,J＝5.9Hz,2H),1.98(s,1H),1.41(s,2H),1.27–1.14(m,5H),0.82(s,2H).
中间体AG32的制备
2,7-二溴-9-(环己基甲基)芴-9-醇
根据对中间体AG32所述的方法、但使用碘甲基环己烷作为原料制备标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61(d,J＝1.7Hz,2H),7.48(dd,J＝8.0,1.8Hz,2H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),2.07(d,J＝5.4Hz,2H),1.94(s,1H),1.46(dd,J＝9.0,3.2Hz,3H),1.22(d,J＝11.8Hz,2H),1.05–0.69(m,6H).
中间体A33的制备
2,7-二溴-9-(2-羟基乙基)芴-9-醇
在-78℃用O3使来自中间体AG26步骤I的9-烯丙基-2,7-二溴-芴-9-醇(1.00g,2.63mmol)在CH2Cl2(13mL)中的溶液起泡至溶液变蓝色。然后用氮气起泡10分钟以除去过量的O3。将该反应体系在0℃温热，加入NaBH4(597mg,15.8mmol)，将该混合物搅拌1。通过添加饱和NH4Cl水溶液使该反应混合物猝灭。分离有机相，用饱和NH4Cl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-20％EA/hex 20CV)纯化残余物，得到标题化合物(443mg,44％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.72(dd,J＝2.6,1.5Hz,2H),7.50(ddd,J＝8.1,3.0,1.6Hz,2H),7.47–7.42(m,2H),3.84(d,J＝3.9Hz,2H),3.27(s,1H),2.21(td,J＝5.9,3.0Hz,2H),2.13(td,J＝4.9,2.4Hz,1H).
中间体AG34的制备
2,7-二溴-9-(四氢-2H-吡喃-4-基)-9H-咔唑
向2,7-二溴-9H-咔唑(250mg,0.77mmol)和四氢吡喃-4-醇(146μL,1.54mmol)在甲苯2.5mL中的溶液中加入氰基亚甲基三正丁基膦(2-tributylphosphoranylideneacetonitrile)(1.54mL的1M,1.54mmol)。将该反应混合物在110℃搅拌4h，冷却至RT，使其分配在EtOAc与水之间。用Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩，用BiotageTMSNAP硅胶柱(24g)纯化，用0-50％EtOAC的Hex溶液洗脱剂，得到标题化合物(95mg,30％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.89(d,J＝8.3Hz,2H),7.70(d,J＝1.6Hz,2H),7.34(dd,J＝8.3,1.6Hz,2H),4.58(ddt,J＝12.5,8.8,4.4Hz,1H),4.24(dd,J＝11.7,4.8Hz,2H),3.64(td,J＝12.1,2.0Hz,2H),2.69(qd,J＝12.5,4.7Hz,2H),1.84(ddd,J＝12.9,4.3,1.8Hz,2H).
根据中间体AG34中所述的方法制备中间体AG35-40。
中间体AG41的制备
2',7'-二溴螺[环己烷-1,9'-芴]-4-酮
步骤I：二甲磺酸(1,3-二氧戊环-2,2-二基)双(乙-2,1-二基)酯
在10min内向冷的(0℃)2-[2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧戊环-2-基]乙醇(1000mg,6.200mmol)在CH2Cl2(10.0mL)中的溶液中滴加Et3N(2.15mL,15.4mmol)和甲磺酰氯(1.00mL,12.9mmol)。将该反应混合物在0℃搅拌45min，用水(20mL)猝灭。用饱和NaHCO3水溶液洗涤有机相，用干燥Na2SO4，过滤，浓缩，得到标题化合物(1750mg,89％)，为白色固体。
步骤II：2,7-二溴二螺[芴-9,1'-环己烷-4',2”-[1,3]二氧戊环]
向冷的(0℃)2,7-二溴-9H-芴(1.020g,3.100mmol)在THF(7.0mL)中的溶液中分3部分加入在油中的NaH(60％)(814mg,20.4mmol)。将该反应混合物在RT搅拌30min，冷却回0℃，加入来自步骤I的二甲磺酸(1,3-二氧戊环-2,2-二基)双(乙-2,1-二基)酯(700mg,2.2mmol)在THF(3.5mL)中的溶液。将该反应混合物在75℃搅拌4h，冷却至RT，用冰-水猝灭，用EtOAc(3x 10mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用Na2SO4干燥，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(24g)、使用等度50％CH2Cl2/己烷作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(750mg,76％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.75(d,J＝1.7Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(dd,J＝8.1,1.7Hz,2H),4.11-4.05(s,4H),2.06(m,4H),1.98-1.90(m,4H).
步骤III：中间体AG41
向2,7-二溴二螺[芴-9,1'-环己烷-4',2”-[1,3]二氧戊环](1400mg,3.11mmol)在THF(7.0mL)中的溶液中加入HCl(5.2mL的3M,15.6mmol)。将该反应混合物在45℃搅拌16h，冷却至RT，用水稀释，用EtOAc萃取。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(24g)纯化残余物，用Hex/EtOAc(0-50％,15CV)洗脱，得到标题化合物(923mg,73％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68(dd,J＝1.7,0.5Hz,2H),7.60(dd,J＝8.1,0.5Hz,2H),7.53(dd,J＝8.1,1.7Hz,2H),2.80(t,J＝7.0Hz,4H),2.18(dd,J＝7.4,6.5Hz,4H).
中间体AG42的制备
2',7'-二溴螺[环己烷-1,9'-芴]-4-醇
向冷的(-40℃)中间体AG41(75mg,0.18mmol)在THF(1.5mL)中的溶液中加入NaBH4(10.0mg,0.260mmol)。将该反应混合物在-40℃搅拌1h，并且在RT搅拌2h。用水使反应停止，用EtOAc萃取。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(12g)纯化残余物，用Hex/EtOAc(0-50％,15CV)洗脱，得到标题化合物(55mg,73％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.96–7.81(m,1H),7.61–7.51(m,3H),7.48(ddd,J＝12.1,8.1,1.7Hz,2H),4.19–4.00(m,1H),2.13(dq,J＝13.9,4.7Hz,2H),2.01–1.88(m,2H),1.83(dt,J＝9.9,4.7Hz,4H).
中间体AG43的制备
2',7'-二溴-4-甲基螺[环己烷-1,9'-芴]-4-醇
向冷的(-40℃)中间体AG41(75mg,0.18mmol)在THF(7.5mL)中的溶液中加入甲基锂(140μL的1.6M,0.22mmol)。将该反应混合物在-40℃搅拌1h，在RT搅拌2h，用水猝灭，用EtOAc萃取。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(12g)纯化残余物，用Hex/EtOAc(0-50％,15CV)洗脱，得到标题化合物(25mg,32％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68(dd,J＝9.5,1.8Hz,2H),7.61–7.39(m,4H),2.29–2.12(m,2H),2.06–1.93(m,2H),1.93–1.80(m,2H),1.47(s,3H).
中间体AG44的制备
2',7'-二溴螺[环己烷-1,9'-芴]-4-胺
向搅拌的中间体AG41(200mg,0.490mmol)和乙酸铵(380mg,4.90mmol)在MeOH(2.0mL)中的溶液中加入NaBH3CN(22mg,0.34mmol)。将该反应混合物在RT搅拌16h，用1NNaOH(1mL)猝灭，用CH2Cl2萃取，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(10g)纯化残余物，用CH2CL2/MeOH(0-10％)洗脱，得到标题化合物(80mg,40％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.93(d,J＝1.7Hz,1H),7.63–7.37(m,5H),3.16–2.97(m,1H),2.09–1.89(m,4H),1.86–1.71(m,2H),1.62(d,J＝13.4Hz,2H).
实施例1：化合物1的制备(方法A)
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-6-基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
通过N2(g)起泡5min给乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(1.642g,6.033mmol)和(4-二羟硼基苯基)硼酸((4-boronophenyl)boronic acid)(1.0g,6.03mmol)在CH3CN(30mL)中的溶液脱气。加入Pd(OAc)2(338.6mg,1.50mmol)，将该反应混合物在40℃搅拌5h。再加入部分Pd(OAc)2(338.6mg,1.50mmol)，再持续加热15h。蒸发溶剂，用EtOAc(25mL)稀释该混合物，通过硅藻土过滤。用饱和NaHCO3(2x 25mL)洗涤滤液，用Na2SO4干燥，蒸发溶剂。用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱纯化粗产物，用10％-30％EtOAc的Hex溶液梯度洗脱，流速为40mL/min，35min，得到标题化合物(550mg,18.14％)。为油状物。LC-MS：m/z＝525.0(M+Na).
步骤II：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-3,4-二羟基-四氢吡喃-2-基]苯基]-4,5-二羟基-四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-6-基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(550mg,1.095mmol)在水(1.6mL)/THF(9.4mL)中的溶液中加入甲磺酰胺(312.5mg,3.285mmol)、OsO4(1.1mL的2.5％w/v的t-BuOH溶液,0.1095mmol)和NMO(1.283g,10.95mmol)，将该反应混合物在RT搅拌5天。蒸发溶剂，用亚硫酸氢钠稀溶液(50mL)稀释粗混合物，15min后，用EtOAc(3x 25mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机萃取物，蒸发溶剂。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱与作为洗脱剂的5％-10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度纯化粗产物，流速为24mL/min，20min。将分离的产物溶于少量MeOH，用Et2O稀释以沉淀产物。过滤该混合物，用乙醚洗涤，得到标题化合物(145mg,23.21％)，为白色固体。LC-MS：m/z＝571.4(M+H+)
步骤III：化合物1
将乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-6-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-5-乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)-3,4-二羟基-四氢吡喃-2-基]苯基]-4,5-二羟基-四氢吡喃-2-基]甲酯(145mg,0.2541mmol)溶于MeOH(3mL)，加入MeONa的MeOH溶液(47μL的25％w/v,0.22mmol)，将该反应混合物在RT搅拌6h。通过添加Amberlite IR120H树脂中和该反应体系，直到pH变成中性为止。过滤该反应混合物，蒸发滤液，得到标题产物(108mg,0.258mmol,24％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51(s,4H),4.98(d,J＝3.4Hz,2H),4.44(t,J＝3.3Hz,2H),3.81(t,J＝8.4Hz,4H),3.74(t,J＝8.1Hz,2H),3.57(dd,J＝8.1,3.1Hz,2H),3.50-3.41(m,2H).LC-MS：m/z＝403.2(M+H+).
实施例2.化合物2-4的制备
如方法A中所述、使用适合的双-硼酸、应用实施例1中所述的类似方法制备化合物2-4。
实施例3：化合物5的制备(方法A)
(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-6,6'-([1,1'-联苯基]-3,4'-二基)双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸((2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(3'-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
将中间体B(30mg,0.066mmol)、(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(3-溴苯基)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(C,30.71mg,0.087mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(4.1mg,0.005mmol)和磷酸钾(35.7mg,0.167mmol)在脱气的DMF中在4mL密封试管中在90℃加热4h。通过硅藻土垫过滤该混合物，直接通过反相HPLC、Phenomenex C18Gemini AXIA 5μ110A21.2x75mm、在20min内0％ACN/H2O+0.01％TFA-至50％ACN+0.01％TFA、至在5min内至100％ACN-在100％ACN保持5min纯化。总运行时间：30min，得到标题产物。
步骤II：化合物5
将来自步骤I的乙酸((2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(3'-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯溶于MeOH(0.5mL)，加入MeONa的MeOH溶液(5μL的25％w/v,0.023mmol)，将该反应混合物在RT搅拌15h。通过添加Amberlite IR120H树脂中和该反应体系，直到pH变成中性为止。过滤该反应混合物，蒸发滤液，得到标题化合物，为白色固体(10.5mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.78(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.55(d,J＝8.0Hz,3H),7.44(d,J＝4.9Hz,2H),5.02(2d,J＝3.5Hz,2H),4.47(dd,J＝6.2,3.1Hz,2H),3.88-3.79(m,4H),3.74(td,J＝8.0,2.8Hz,2H),3.61(td,J＝7.9,3.1Hz,2H),3.56-3.43(m,2H).LC-MS：m/z＝479.4(M+H+)
实施例4.化合物6的制备(方法A)
(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-6,6'-([1,1'-联苯]-4,4'-二基)双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
使用如实施例3化合物5所述类似的方法、但使用中间体A和中间体B作为原料制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(t,J＝10.1Hz,4H),7.56(d,J＝8.2Hz,4H),5.03(d,J＝3.3Hz,2H),4.48(t,J＝3.3Hz,2H),3.89-3.81(m,4H),3.76(t,J＝8.1Hz,2H),3.62(dd,J＝8.1,3.0Hz,2H),3.56-3.46(m,2H).LC-MS：m/z＝479.5(M+H+).
化合物6的可选合成(方法B)
(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-6,6'-([1,1'-联苯]-4,4'-二基)双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[4-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在0℃将n-Bu3MgLi(2.195mL的0.66M,1.449mmol)在己烷-庚烷-二丁基醚(8：20：3)中的溶液加入到1-碘-4-(4-碘苯基)苯(701mg,1.726mmol)在甲苯(4.0mL)和二丁基醚(2.4mL)中的不均匀混合物中，在相同温度下搅拌3.5h。滴加ZnBr2-LiBr在二丁基醚中的溶液(2.17mL的1.05M,2.28mmol)，除去冷却浴，在RT搅拌1h。加入2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-溴-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(2g,3.451mmol,参考Sebastien Lemaire et.al.Org.Letts.2012,14,1480-1483)在甲苯(3.6mL)中的溶液，在100℃放入预加热的油浴中，搅拌30h。将该反应混合物冷却至RT，倾入1N HCl水溶液(40mL)，用EtOAc(3x 25mL)萃取，用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(Na2SO4)，浓缩。用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(0％-15％,8CV)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(400mg,0.347mmol,20％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝8.5Hz,4H),7.63(d,J＝8.4Hz,4H),6.07(t,J＝2.8Hz,2H),5.54(t,J＝9.2Hz,2H),5.19(dd,J＝9.4,2.9Hz,2H),5.13(d,J＝2.6Hz,2H),4.32(dd,J＝12.2,5.6Hz,2H),4.19(dd,J＝12.2,1.9Hz,2H),3.87-3.79(m,2H),1.28(s,36H),1.19(s,18H),1.15(s,18H).
步骤II,化合物6
向搅拌的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[4-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(165mg,0.1433mmol)在MeOH(1.8mL)中的混悬液中加入MeONa的MeOH溶液(57.0μL的0.5M,0.287mmol)，在RT搅拌66h，用乙酸(50μL,0.8792mmol)猝灭。浓缩该反应混合物，直接加载到使用DMSO-CH2Cl2的3gC18samplet，室内真空干燥，用BiotageTMSNAP 25g C18硅胶柱、使用CH3CN的水溶液(0％-50％,12CV)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(30mg,0.0613mmol,43％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(d,J＝8.4Hz,4H),7.55(d,J＝8.2Hz,4H),5.01(d,J＝3.5Hz,2H),4.46(t,J＝3.3Hz,2H),3.83(d,J＝4.7Hz,4H),3.74(t,J＝8.1Hz,2H),3.60(dd,J＝8.1,3.1Hz,2H),3.53-3.46(m,2H)
实施例5.化合物7的制备
(3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-N-[4-[[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯甲酰基]氨基]苯基]苯甲酰胺)
向中间体D(40mg,0.14mmol)、苯-1,4-二胺(7.6mg,0.07mmol)和HATU(69.20mg,0.18mmol)在DMF(350μL)中的溶液中加入三乙胺(29μL,0.21mmol)，将该反应混合物在RT搅拌18h。通过反相HPLC、Phenomenex C18Gemini AXIA Pack 5μ110A 21.2x250mm(保持在10％10min)20min内10％ACN/H2O+0.01％TFA-至60％ACN+0.01％TFA–至5min内100％ACN–保持在100％ACN 5min直接纯化该混合物。总运行时间：40min，得到标题产物(27.1mg,0.04mmol,57.22％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(s,2H),7.86(d,J＝7.8Hz,2H),7.72(d,J＝7.0Hz,6H),7.53(t,J＝7.8Hz,2H),5.02(d,J＝4.4Hz,2H),4.46-4.39(m,2H),3.97-3.75(m,6H),3.68(dd,J＝7.4,3.0Hz,2H),3.57(td,J＝6.9,3.0Hz,2H).LC-MS：m/z＝641.4(M+H+).
实施例6.化合物8-16的制备
使用与如实施例5中所述类似的方法以适合的二胺和中间体D为原料制备化合物8-16。
实施例7.化合物17的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[(2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向冷的(0℃)搅拌的三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(3-羟基苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(100mg,0.2356mmol)和乙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5,6-四乙酰氧基四氢吡喃-2-基]甲酯(92mg,0.2356mmol)在CH2Cl2(1.379mL)中的溶液中加入净BF3.OEt2(100mg,0.7068mmol)。除去冷却浴，在RT搅拌15min，然后在40℃加热18h。冷却至RT，倾入NaHCO3水溶液(4mL)，搅拌30min，用二氯甲烷(2x 4mL)萃取水溶液。干燥合并的萃取物，浓缩，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(30％-70％,8CV,70％6CV)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(130mg,0.1723mmol,73.12％)，为半白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.33(m,1H),7.23(s,1H),7.19(d,J＝7.7Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),5.92(t,J＝3.2Hz,1H),5.59-5.52(m,2H),5.45(dd,J＝3.5,1.8Hz,1H),5.39(t,J＝10.1Hz,1H),5.32(t,J＝8.7Hz,1H),5.13(dd,J＝8.9,3.1Hz,1H),5.07(d,J＝3.1Hz,1H),4.43-4.35(m,1H),4.34-4.26(m,1H),4.21-4.04(m,3H),3.88-3.75(m,1H),2.21(s,3H),2.165(s,3H),2.153(s,3H),2.064(s,3H),2.06(s,3H),2.049(s,3H),2.04(s,3H),2.037(s,3H)
步骤II：化合物17
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[(2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(118mg,0.1564mmol)在MeOH(7mL)中的溶液中加入MeONa(313μL的0.5M,0.1564mmol)，将该反应混合物在RT搅拌过夜。加入Dowex 50WX4-400离子交换树脂(H+)[用MeOH洗涤几次，直至呈无色，干燥]，直到pH 5-6，过滤出树脂，浓缩滤液。将残余物溶于CH3CN–水，冷冻干燥，得到标题化合物(55mg,79％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.21(t,J＝8.0Hz,1H),7.17(s,1H),7.03(d,J＝7.2Hz,1H),6.94(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),5.40(d,J＝1.7Hz,1H),4.85(d,J＝3.3Hz,1H),4.32(t,J＝3.3Hz,1H),3.90(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),3.85-3.44(m,9H),3.43-3.30(m,1H).
LC-MS：m/z＝491.2(M+H+).
实施例8.化合物18的制备
((2R,3S,4S,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-[4-[4-[1-[(2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[4-[1-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-叠氮基-四氢吡喃-2-基]甲酯(50mg,0.1339mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碘化铜(5.10mg,0.02678mmol)和DIPEA(25.95mg,35μL,0.201mmol)，用氮气净化。将该反应混合物在80℃搅拌5h。冷却至RT，倾入水，用EtOAc萃取，用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(Na2SO4)，浓缩。用BiotageTMSNAP12g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(15％-80％)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(20mg,34.2％)，为淡黄色固体。LC-MS：m/z＝873.57(M+H+)
步骤II：化合物18
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[4-[1-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯(20mg,0.02292mmol)在MeOH(1.000mL)中的溶液中加入MeONa(45.84μL的0.5M,0.02292mmol)，混悬液变澄清，产物开始析出。将该反应混合物在RT搅拌过夜，加入乙酸，浓缩，混悬于0.5mL MeOH，过滤，得到灰白色固体。用MeOH(0.5mL)洗涤沉淀，干燥至得到标题化合物(10.5mg,79.4％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.66(s,2H),7.95(s,4H),6.04(s,2H),5.32(d,J＝5.0Hz,2H),5.08-4.96(m,4H),4.58(t,J＝5.9Hz,2H),3.95-3.86(m,2H),3.75(dd,J＝10.9,5.5Hz,2H),3.65-3.56(m,2H),3.55-3.36(m,6H).LC-MS：m/z＝537.42(M+H+).
实施例9.化合物19的制备
((2R,3S,4S,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-[4-[3-[1-[(2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[3-[1-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在RT向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-4,5-二乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基-四氢吡喃-3-基]酯(96.6mg,0.259mmol)和1,3-二乙炔基苯(11mg,0.087mmol)在EtOH(1.1mL)和水(275μL)中的溶液中依次加入CuSO4(5.6mg,0.035mmol)和抗坏血酸钠(12.3mg,0.07mmol)。将该反应混合物在RT搅拌1个周末，用二氯甲烷稀释，通过相分离器过滤，用二氯甲烷萃取水溶液。浓缩合并的萃取物，用BiotageTMSNAP 12g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(35％-75％,15CV；75％,9CV)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(69mg,90.7％)，为白色固体。1H NMR (400MHz,CDCl3)δ8.34(t,J＝1.5Hz,1H),8.07(s,2H),7.89(dd,J＝7.8,1.7Hz,2H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),6.10(d,J＝2.9Hz,2H),6.06-6.02(m,2H),5.97(dd,J＝8.8,3.7Hz,2H),5.40(t,J＝8.8Hz,2H),4.42(dd,J＝12.5,5.5Hz,2H),4.13-4.05(m,2H),3.99-3.92(m,2H),2.20(s,6H),2.11(s,6H),2.09(s,6H),2.08(s,6H).
步骤II：化合物19
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[3-[1-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]苯基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯(68mg,0.07791mmol)在MeOH(3.4mL)中的溶液中加入MeONa(156μL的0.5M,0.078mmol)的MeOH溶液。白色沉淀在1h内开始形成。将反应混合物在RT搅拌过夜。过滤出细的白色沉淀，用干MeOH(2mL)洗涤，真空干燥，得到标题化合物，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.80(s,2H),8.41(s,1H),7.85(dd,J＝7.7,1.6Hz,2H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),5.93(d,J＝4.5Hz,2H),5.31(d,J＝5.4Hz,2H),5.10(d,J＝5.2Hz,2H),5.02(d,J＝5.4Hz,2H),4.61(t,J＝5.8Hz,2H),4.46(dd,J＝8.3,4.8Hz,2H),3.85(dd,J＝8.5,6.5Hz,2H),3.70-3.51(m,6H),3.40(td,J＝6.8,3.0Hz,2H).
1H NMR(400MHz,DMSO-D6+D2O)δ8.68(s,2H),8.33(s,1H),7.82(dd,J＝7.7,1.5Hz,2H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),5.93(d,J＝4.1Hz,2H),4.46(t,J＝3.7Hz,2H),3.84(dd,J＝7.2,3.3Hz,2H),3.65-3.51(m,6H),3.37-3.27(m,2H).LC-MS：m/z＝537.45(M+H+).
实施例10.化合物20的制备
((2R,2'R,3S,3'S,4S,4'S,5S,5'S,6S,6'S)-6,6'-(4,4'-((丙-2-炔-1-基氮杂烷二基)双(亚甲基))双(1H-1,2,3-三唑-4,1-二基))双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
向乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-4,5-二乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基-四氢吡喃-3-基]酯(96.6mg,0.259mmol)和N,N-双(丙-2-炔基)丙-2-炔-1-胺(10.3mg,11μL,0.0784mmol)在EtOH(966μL)和水(242μL)中的溶液中依次加入CuSO4(5.0mg,0.031mmol)和抗坏血酸钠(11.1mg,0.0627mmol)。将该反应混合物在RT搅拌20h，蒸发至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(2-20％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到73mg期望的产物的混合物，照此用于下一步。
向上述步骤中得到的物质在MeOH中的溶液(2mL)中加入MeONa(29μL的0.5M,0.0146mmol)的MeOH溶液。将该混合物在RT搅拌过夜，加入AcOH(1μL,0.015mmol)，将该混合物蒸发至干。通过反相HPLC纯化残余物，得到7mg标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(s,2H),5.96(s,2H),4.60(s,2H),4.30(s,4H),3.95(dd,J＝8.1,3.2Hz,2H),3.82(s,2H),3.69(m,6H),3.25(m,2H),3.13(s,1H).
实施例11.化合物21的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-(4-(1-((2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
使用如实施例10中所述类似的方法由中间体F和乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-4,5-二乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基-四氢吡喃-3-基]酯制备该化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.66(s,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,2H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),5.88(d,J＝4.4Hz,1H),4.68(d,J＝5.3Hz,1H),4.41(m,1H),4.03(dd,J＝5.3,3.1Hz,1H),3.81(dd,J＝6.7,3.2Hz,1H),3.66-3.46(m,6H),3.46-3.28(m,3H).LC-MS：m/z＝470.36(M+H+)
实施例12.化合物22和化合物23的制备(改进的方法D)
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙基]苯基]乙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)和(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丁基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：
向中间体G(104mg,0.1895mmol)在THF(4mL)中的溶液中加入1,4-二碘苯(27.8mg,0.0842mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(3.5mg,0.0043mmol)、CuI(3.2mg,0.0168mmol)和DIPEA(37μL,0.2106mmol)。将该混合物在50℃在氮气气氛中搅拌过夜。减压除去溶剂后，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液0-15％梯度、用20个柱体积分离残余物，得到不可分离的分别为(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃和(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丁-1,3-二炔基]四氢吡喃的～2：1混合物(92mg)，不经进一步纯化直接用于下一步。
LC-MS：m/z＝1193.9(M+Na+).LC-MS：m/z＝1118.9(M+Na+).
步骤II：化合物22和化合物23
向来自步骤I的～2：1混合物(92mg)在MeOH(5mL)中的溶液中加入催化量的20％Pd(OH)2/C和1滴乙酸。使用氢气囊氢化该混合物，在RT搅拌过夜。过滤后，除去溶剂，使用反相HPLC纯化残余物，得到化合物22(11mg)和化合物23(9mg)，均为白色固体。化合物22：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.13(s,4H),3.81(m,4H),3.75-3.53(m,8H),3.45(m,2H),2.75(m,2H),2.66-2.50(m,2H),2.02(m,2H),1.70(m,2H).LC-MS：m/z＝459.4(M+H+).化合物23：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.83(d,2H),3.77(m,2H),3.72-3.61(m,6H),3.58(m,2H),3.39(m,2H),1.76(m,2H),1.45(m,6H).LC-MS：m/z＝383.3(M+H+).
实施例13.化合物24的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[4-[(E)-3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[(E)-3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向中间体H(112.9mg,0.303mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入1,4-二碘苯(50mg,0.152mmol)、乙酸钯(3.4mg,0.0152mmol)、溴化四丁基铵(48.9mg,0.152mmol)和碳酸氢钠(38.2mg,0.455mmol)。将该反应混合物在85℃在N2气氛中加热过夜，浓缩，用BiotageTMSNAP(10g硅胶柱)、使用EtOAc的Hex溶液0-70％作为洗脱剂、用20个柱体积纯化，得到标题化合物(71mg,57％收率)。LC-MS：m/z＝819.5(M+H+).
此外，分离三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((E)-3-(4-碘苯基)烯丙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(33mg,20％收率)，为少量化合物。LC-MS：m/z＝575.3(M+H+).
步骤II：化合物24
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[(E)-3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(70mg,0.0855mmol)在MeOH(1.1mL)中的溶液中加入2滴25％wt/v MeONa的MeOH溶液。将该反应混合物在RT搅拌3h。用MeOH稀释该混合物，用树脂Amberlite 120(H)中和。过滤后，用MeOH、MeOH/H2O(2：1,v/v)、然后用混合物二噁烷/MeOH(1：1,v/v)洗涤树脂。将黄褐色残余物与MeOH一起研磨，得到19mg预期的化合物，再通过制备型HPLC纯化，得到(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[4-[(E)-3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇(12.9mg,31％收率).1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.21(s,4H),6.38(d,2H),6.28-6.10(m,2H),3.88(dd,2H),3.76-3.59(m,8H),3.55(t,2H),3.43(ddd,2H),2.62-2.46(m,2H),2.48-2.30(m,2H).LC-MS：m/z＝483.4(M+H+)
实施例14.化合物25的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[3-[(E)-3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
根据实施例13化合物24所述类似的方法、使用1,3-二碘苯而不是1,4-二碘苯作为原料制备化合物25。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.30(s,1H),7.12(d,3H),6.40(d,2H),6.30-6.10(m,2H),3.90(s,2H),3.79-3.33(m,12H),2.55(d,2H),2.42(dd,2H).
LC-MS：m/z＝483.4(M+H+).
实施例15.化合物26-33的制备
使用如实施例14中所述类似的方法由中间体H和适合的1,4-二碘苯衍生物制备化合物26-33。
实施例16.化合物34的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[4-[2-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[2-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((E)-3-(4-碘苯基)烯丙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(33mg,0.057mmol)、中间体F(24.9mg,0.057mmol)、Pd(dppf)(4.7mg,0.0057mmol)、CuI(2.2mg,0.0115mmol)在DMF(660μL)中的混合物中加入NEt3(24μL,0.173mmol)。用氮气净化该体系，将该混合物在N2气氛中加热至70℃过夜。用EtOAc和H2O稀释RM，用硅藻土过滤。用盐水洗涤有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，用BiotageTMSNAP(10g硅胶柱)、使用EtOAc的Hex溶液梯度(10-80％)、用25个柱体积纯化，得到标题化合物(22mg,43.5％)。LC-MS：m/z＝879.6(M+H+).
步骤II：化合物34
向在MeOH(660μL)中的来自步骤I的残余物(22mg,0.025mmol)加入2滴25％w/vMeONa的MeOH溶液。将该反应混合物在RT搅拌2h，用树脂Amberlite 120(H)中和。过滤后，用MeOH洗涤树脂，将滤液浓缩至干。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(2.6mg,20％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49-7.37(m,4H),7.32(m,4H),6.43(d,1H),6.36-6.21(m,1H),5.39(s,2H),4.30(t,1H),3.90(t,1H),3.82-3.31(m,10H),2.57(dd,1H),2.44(dd,1H).LC-MS：m/z＝543.4(M+H+).
实施例17.化合物35的制备(方法F)
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向中间体G(160mg,0.2916mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入中间体I(113.7mg,0.2333mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(9.5mg,0.0117mmol)、CuI(8.9mg,0.0467mmol)和DIPEA(102μL,0.5832mmol)。将该混合物在80℃在氮气气氛中搅拌过夜。减压除去溶剂后，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液0-15％梯度、用20CV分离产物，得到标题化合物(65mg)。LC-MS：m/z＝955.5(M+H+).
步骤II：三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(3-(((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
在密封容器内向来自步骤I的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(20mg,0.0209mmol)在CH3CN(2mL)中的溶液中加入TMSI(41.90mg,29.80μL,0.2094mmol)。将该混合物在RT搅拌过夜。然后用几滴水猝灭。减压除去溶剂后，将残余物不经纯化直接用于下一步。
步骤III：化合物35
向在MeOH(2mL)中的来自步骤II的混合物加入1滴25％MeONa的MeOH溶液。将该混合物在RT搅拌20min，然后用树脂Amberlite IR120(H)中和，过滤。浓缩滤液至干，使用制备型-HPLC纯化残余物，得到(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇(1.5mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51(s,1H),7.45-7.35(m,1H),7.28(m,2H),4.82(d,1H),4.76(d,1H),4.24(m,1H),3.91(m,1H),3.84(m,1H),3.80-3.75(m,2H),3.74-3.69(m,2H),3.67-3.60(m,2H),3.58-3.46(m,2H),3.41(m,1H).LC-MS：m/z＝427.3(M+H+).
实施例18.化合物36的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[4-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(4g,14.69mmol)在CH3CN(35mL)中的溶液中加入[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]硼酸(6.965g,29.38mmol)和Pd(OAc)2(494.6mg,2.203mmol)。将该混合物在RT搅拌过夜，然后再加入另一批[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]硼酸(6.965g,29.38mmol)和Pd(OAc)2(495mg,2.203mmol)。在RT搅拌过夜后，用CH2Cl2(35mL)稀释该混合物，用硅藻土垫过滤。减压浓缩滤液至干，用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-15％,20CV)纯化残余物，得到标题化合物(660mg)，为玻璃状固体。
步骤II：乙酸((2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-氨基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(303mg,0.7473mmol)在1mL的CH2Cl2中的溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)。将该混合物在RT搅拌20min。减压除去溶剂后，将残余物溶于10mL的CH2Cl2，用10％碳酸氢钠(2mL)和盐水(5mL)连续洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。将残余物不经进一步纯化用于下一步。混合物的LC-MS显示具有相同期望质量的两种产物。LC-MS：m/z＝306.4(M+H+).
步骤III：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-叠氮基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
在0℃向来自步骤II的混合物在2mL的ACN中的溶液中加入t-BuONO(133μL,1.121mmol)和TMSN3(119μL,0.8968mmol)，然后在RT搅拌1h。减压除去溶剂后，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度0-15％、用20CV纯化该混合物，得到包含不同化合物的混合物(190mg)，为油状物，不经进一步纯化直接用于下一步。LC-MS：m/z＝356.5(M+Na+).
步骤IV：乙酸((2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-(4-((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-叠氮基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(60mg,0.1811mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢吡喃(99.4mg,0.1811mmol)、CuI(6.9mg,0.0362mmol)和DIPEA(24mg,32μL,0.1811mmol)。将该混合物在45℃在氮气气氛中搅拌过夜。减压除去溶剂后，用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度0-45％、用20CV分离残余物，得到包含乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯的混合物(142mg)。LC-MS：m/z＝880.7(M+H+).
步骤V：乙酸((2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(4-(4-((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(160mg,0.1818mmol)在水(2mL)/t-BuOH(4mL)中的溶液中加入NMO(42.6mg,38μL,0.3636mmol)、2.5％OsO4/t-BuOH(184.9mg,973μL,0.0182mmol)、甲磺酰胺(25.9mg,0.2727mmol)和2,6-二甲基吡啶(19.48mg,21μL,0.1818mmol)。将该混合物在RT搅拌5天。然后用CH2Cl2(10mL)稀释，用10％亚硫酸氢钠溶液(5mL)猝灭，用CH2Cl2(3x10mL)萃取。用硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用MeOH的CH2Cl2 0-5％溶液梯度、用20CV纯化残余物，得到混合物(150mg)，为油状物。LC-MS：m/z＝914.7(M+H+).
步骤VI：化合物36
向来自步骤V的包含乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(60mg,0.0657mmol)的混合物在MeOH(2mL)中的溶液中加入1滴25％MeONa/MeOH。将该混合物在RT搅拌30min。然后用树脂Amberlite IR 120(H)中和，过滤，浓缩至干。纯化残余物，溶于MeOH(2mL)，然后向其中加入催化量的20％Pd(OH)2和1滴AcOH。使用氢气囊氢化该混合物，在RT搅拌过夜。过滤后，减压除去溶剂，用反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(11mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),7.78(d,2H),7.62(d,2H),5.10(d,1H),4.91(d,1H),4.45(t,1H),4.28(m,1H),3.91-3.58(m,7H),3.55(m,1H),3.47(m,1H),3.41-3.33(m,1H).LC-MS：m/z＝470.4(M+H+).
实施例19.化合物37的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(实施例17,步骤I)(32mg,0.0335mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中加入1滴25％MeONa/MeOH。将该混合物在RT搅拌30min。然后用树脂Amberlite IR 120(H)中和，过滤。将滤液浓缩至干，将残余物溶于MeOH(2mL)。然后向其中加入20％Pd(OH)2/C和1滴乙酸。使用氢气囊氢化该混合物，在RT搅拌过夜。过滤后，浓缩至干，使用反相制备型-HPLC分离残余物，得到标题化合物(11mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.38(s,1H),7.27(d,2H),7.21-7.09(m,1H),4.95(d,1H),4.44(t,1H),3.94-3.74(m,4H),3.74-3.52(m,6H),3.45(m,2H),2.80(m,1H),2.73-2.57(m,1H),2.17-1.95(m,1H),1.82-1.65(m,1H).LC-MS：m/z＝431.4(M+H+).
实施例20.化合物38的制备
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[4-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丙基]苯基]丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[4-[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丙基]苯基]丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向在MeOH(2.4mL)中的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[(E)-3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丙-1-烯基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(实施例13,步骤I)(80mg,0.097mmol)中加入Pd(OH)2(13.7mg,0.097mmol)和1滴AcOH。将该反应混合物在1个大气压的H2气氛中氢化过夜。用硅藻土过滤该反应混合物，用MeOH洗涤。浓缩滤液，用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(15-100％)纯化，得到标题化合物(36mg,44.8％)。LC-MS：m/z＝823.7(M+H+).
步骤II：化合物38
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[4-[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]丙基]苯基]丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(36mg,0.097mmol)在MeOH(1.6mL)中的溶液中加入催化的MeONa(2μL的25％w/v,0.0097mmol)。将该反应混合物在RT搅拌1h，用Amberlite IR120(H)中和。过滤后，减压除去溶剂，通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(6.9mg,14％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.00(s,4H),3.80-3.72(m,2H),3.67(dd,2H),3.63-3.54(m,4H),3.55-3.46(m,4H),3.31-3.22(m,2H),2.60-2.40(m,4H),1.64(ddd,6H),1.48-1.25(m,2H).LC-MS：m/z＝487.4(M+H+).
实施例21化合物39的制备
(3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-N-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯甲酰胺)
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯甲酰基]氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
在0℃向中间体D(40.4mg,0.142mmol)和乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(4-氨基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(来自实施例18的步骤II,43.4mg,0.142mmol)在DMF(2.7mL)中的混合物中加入2,6-二甲基吡啶(49μL,0.426mmol)，然后加入HATU(59.4mg,0.156mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜，用EtOAc稀释，用H2O、盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩。通过BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用MeOH/CH2Cl2(0-20％)纯化残余物，得到标题化合物(45mg,55％收率)，不经进一步纯化用于下一步。LC-MS：m/z＝572.4(M+H+).
步骤II：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-[[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯甲酰基]氨基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[4-[[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯甲酰基]氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(45mg,0.0788mmol)在水(0.45mL)/t-BuOH(0.45mL)的混合物中的溶液中加入甲磺酰胺(22.5mg,0.236mmol)、2.5％OsO4/t-BuOH(148.3,0.012mmol)、NMO(37mg,0.315mmol)和2,6-二甲基吡啶(18μL,0.157mmol)。将该混合物在RT搅拌2天，用15％亚硫酸氢钠猝灭，用EtOAc稀释。分离水相，用水、盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到标题化合物(29mg,36％收率)。LC-MS：m/z＝606.4(M+H+).
步骤III：化合物39
向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[4-[[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯甲酰基]氨基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(29mg,0.048mmol)在MeOH(0.45mL)中的溶液中加入2滴MeONa 25％w/v的MeOH溶液。将该反应混合物在RT搅拌1h，用MeOH稀释，用树脂Amberlite 120(H)中和，过滤，干燥。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(2.7mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.96(s,1H),7.77(d,1H),7.64(d,2H),7.58(d,1H),7.49-7.31(m,3H),4.9(m,2H),4.36(dd,2H),3.88-3.30(m,10H).LC-MS：m/z＝522.4(M+H+).
实施例22.化合物40的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[3-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
根据如实施例13中所述相同的方法、使用1,3-二碘苯而不是1,4-二碘苯制备三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((E)-3-(3-碘苯基)烯丙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯。
步骤I：三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((E)-3-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)烯丙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
向在DMF(1.1mL)中的三乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((E)-3-(3-碘苯基)烯丙基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(53mg,0.0923mmol)、三甲基-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]硅烷(中间体G的步骤II,57.3mg,0.0923mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(7.5mg,0.0092mmol)和CuI(3.5mg,0.0185mmol)中加入H2O(16.6μl,0.923mmol)和DBU(140.5mg,0.923mmol)。用氮气净化该体系，将该混合物在N2气氛中加热至70℃过夜，用EtOAc和H2O稀释该反应混合物，用硅藻土过滤。用盐水洗涤有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，不经进一步纯化用于下一步。
步骤II：(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[3-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
向在2mL的MeOH中的来自步骤I的残余物(90mg)中加入2滴MeONa(25％wt/v的MeOH溶液)。在RT搅拌2h后，用树脂Amberlite 120(H)中和滤液，过滤，浓缩至干。用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用MeOH/CH2Cl2(0-20％)、用20个柱体积纯化残余物，得到标题化合物(44mg,59％)。LC-MS：m/z＝827.6(M+H+).
步骤III：化合物40
向在CH3CN(1.3mL)中的(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[3-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇(44mg,0.0532mmol)中加入TMSI(68μL,0.479mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜，用H2O(2滴)猝灭，浓缩至干。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(4.2mg,15.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.47(s,1H),7.44-7.32(m,1H),7.27(dd,2H),6.48(d,1H),6.42-6.24(m,1H),4.84(d,1H),4.02-3.68(m,10H),3.67-3.58(m,2H),3.57-3.48(m,1H),2.63(dd,1H),2.49(dd,1H).LC-MS：m/z＝467.4(M+H+).
实施例23.化合物41的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[[4-[4-[[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]甲基]苯基]苯基]甲基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[(4-碘苯基)甲基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(β-异构体)和乙酸[(2R,3S,6R)-3-乙酰氧基-6-[(4-碘苯基)甲基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(α-异构体)
在0℃在20min内向Rieke锌在THF中的混悬液(4.80mL的10％w/v,7.35mmol)中滴加1-(溴甲基)-4-碘-苯(1.091g,3.674mmol)在THF(2mL)中的溶液。将该反应混合物在0℃搅拌2h，TLC揭示出大部分SM(苄基溴)耗尽。将该混合物温至RT，在氮气气氛中在分离的RBF中通过釉料过滤。在氮气流中除去THF，同时在温水浴中温热该溶液。将深色残余物溶于/混悬于CH2Cl2(8mL)，冷却至-30℃，加入作为固体的乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(500mg,1.837mmol)，随后加入BF3.OEt2(1.433g,1.25mL,10.10mmol)。将最终反应混合物温热至0℃，搅拌45min。TLC显示全部原料葡萄烯糖耗尽。用CH2Cl2和盐水稀释该混合物。用相分离柱分离有机级分，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(50g)、使用EtOAc的Hex溶液(10-20％)作为洗脱剂纯化得到的粗混合物。对混合级分进行第二次纯化，得到β-异构体(187mg)和α-异构体(282mg)。LC-MS：m/z＝452.81(M+Na+)，β-异构体。LC-MS：m/z＝452.77(M+Na+)，α-异构体。
步骤II：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(4-碘苯基)甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6R)-3-乙酰氧基-6-[(4-碘苯基)甲基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(α-异构体,282mg,0.616mmol)在叔丁醇(6mL)和水(2mL)中的溶液中依次加入NMO(160mg,1.37mmol)、甲磺酰胺(90.0mg,0.946mmol)、2,6-二甲基吡啶(75.0μL,0.648mmol)和最终的OsO4(300μL的2.5％w/v,0.0295mmol)。将该反应混合物在RT搅拌24h，通过LCMS监测。将该反应混合物倾入10％NaHSO3，用EtOAc稀释。分离有机层，用水、盐水洗涤，用Na2CO3干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(25g)、使用EtOAC、应用Hex(10-60％)作为洗脱剂纯化得到的粗混合物。从其中分离3组不同的级分，合并后2种级分，每次用吡啶/Ac2O在RT乙酰化过夜。浓缩混合物，与甲苯共蒸发2次，用BiotageTMSNAP硅胶柱(10g)、使用EtOAC的Hex溶液(10-50％)作为洗脱剂纯化得到的粗混合物，得到标题化合物(204mg,63.1％)，其包含5％的2,3α非对映异构体。
步骤III：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向来自步骤II的化合物(112mg,0.204mmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(73mg,0.288mmol)、乙酸钾(81mg,0.825mmol)和Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(16mg,0.0196mmol)。将得到的混悬液脱气3次(室内真空，然后N2)，在70℃搅拌6h。将得到的混合物倾入饱和NH4Cl水溶液，用Et2O萃取。用水(2x)、盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(10g)、使用EtOAc的Hex溶液(10-40％)作为洗脱剂纯化得到的粗混合物，得到标题化合物(83mg,72.6％)。
步骤IV：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[[4-[4-[[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]甲基]苯基]苯基]甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(4-碘苯基)甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯(91mg,0.166mmol)和乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯(83mg,0.148mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入K3PO4(98mg,0.462mmol)和最终的PdCl2(dppf).CH2Cl2(10mg)。将该反应混合物脱气3次(室内真空，然后氮气)，在80℃搅拌5h。将最终的深棕色混合物冷却至RT，用15mL EtOAc稀释，用硅胶垫过滤。用EtOAc(2x 15mL)洗涤后者。浓缩合并的级分，用BiotageTMSNAP硅胶柱(10g)、使用EtOAc的Hex溶液(10-80％)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(26mg)。
步骤V：化合物41
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[[4-[4-[[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]甲基]苯基]苯基]甲基]四氢吡喃-2-基]甲酯(26mg,0.031mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中加入MeONa(60μL的0.5M,0.030mmol)的MeOH溶液。将该反应混合物在RT搅拌12h。用乙酸(2.0μL,0.035mmol)使该反应混合物猝灭，然后浓缩，通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(12mg,76.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.54(d,J＝8.2Hz,4H),7.34(d,J＝8.2Hz,4H),4.16-4.07(m,2H),3.87-3.76(m,6H),3.76-3.61(m,6H),3.07(dd,J＝14.0,8.3Hz,2H),2.94(dd,J＝14.0,6.8Hz,2H).LC-MS：m/z＝507.46(M+H+).
实施例24.化合物42的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[1-[(2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-4-基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向搅拌的中间体G(76mg,0.1386mmol)和乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-4,5-二乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基-四氢吡喃-3-基]酯(70mg,0.1875mmol)在乙醇(1mL)和水(250μL)中的混合物中一次加入CuSO4(11mg,0.0689mmol)和抗坏血酸钠(22mg,0.1249mmol)。将得到的反应混合物搅拌30min，再加入一定量的乙醇(1mL)，在RT搅拌24h，用水稀释，用二氯甲烷萃取。干燥合并的萃取物，浓缩，用BiotageTMSNAP 12g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(15％-50％)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(80mg,0.08677mmol,59.84％)，为白色固体。Rf＝0.36(50％EA的Hex溶液).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(s,1H),7.40(dd,J＝7.7,1.5Hz,2H),7.37-7.21(m,16H),7.17-7.09(m,2H),5.98(dd,J＝3.6,2.7Hz,1H),5.95-5.88(m,2H),5.36(t,J＝9.1Hz,1H),5.32(d,J＝2.8Hz,1H),4.82(d,J＝11.0Hz,1H),4.77(s,2H),4.69-4.53(m,5H),4.48(d,J＝11.0Hz,1H),4.35(dd,J＝12.5,5.3Hz,1H),4.03(dd,J＝12.5,2.5Hz,1H),3.96(t,J＝8.7Hz,1H),3.86-3.77(m,2H),3.76-3.71(m,2H),3.69-3.62(m,1H),2.19(s,3H),2.07(s,3H),2.05(s,3H),2.05(s,3H).
步骤II：(2R,3S,4S,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
向搅拌的乙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]四氢吡喃-2-基]甲酯(80mg,0.0868mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(185μL的0.5M,0.0925mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜，用乙酸(10μL,0.176mmol)中和，浓缩1/4的反应混合物(1mL)，用CH3CN-水冷冻干燥，得到标题化合物(16mg,0.0191mmol,88.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(s,1H),7.37-7.11(m,20H),5.97(d,J＝2.7Hz,1H),5.24(d,J＝4.1Hz,1H),4.73-4.45(m,10H),4.42(dd,J＝4.0,2.5Hz,1H),4.04(dd,J＝8.5,3.5Hz,1H),3.98-3.89(m,2H),3.81-3.63(m,6H).LC-MS：m/z＝754.58(M+H+).
步骤III：化合物42
向(2R,3S,4S,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]四氢吡喃-3,4,5-三醇在MeOH(3mL)和乙酸(40μL,0.703mmol)中的溶液中加入二羟基钯(50mg,0.0712mmol)，在1atm的氢气气氛中搅拌48h，通过硅藻土过滤。浓缩滤液，用制备型HPLC、使用Phenomenex C18Gemini AXIA 5μ110A 21.2x75mm、在40min内0％ACN/H2O+0.01％TFA-至30％ACN+0.01％TFA–至1min内100％ACN纯化，得到标题化合物(7.4mg,0.0169mmol,26％)，为半白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.18(s,1H),6.03(d,J＝2.7Hz,1H),5.14(d,J＝2.3Hz,1H),4.72-4.67(m,1H),4.48(t,J＝2.8Hz,1H),4.06(dd,J＝8.5,3.5Hz,1H),3.86-3.65(m,7H),3.45-3.33(m,2H).
实施例25.化合物43的制备
(2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-N-[4-[[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯基]乙酰胺)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-氧代-2-[4-[[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯胺基]乙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在氮气气氛中向中间体J(128mg,0.328mmol)在3.5mL的DMF中的溶液中依次加入苯-1,4-二胺(14.2mg,0.131mmol)、DIPEA(69μL,0.394mmol)和HATU(125mg,0.328mmol)。将该反应混合物在RT搅拌20h，用水(10mL)稀释。用EtOAc(5x 10mL)萃取该反应混合物，用水(3x 5mL)、5mL盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(0-20％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(116.5mg)，照此用于下一步。
步骤II：化合物43
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-氧代-2-[4-[[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯胺基]乙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(116.5mg)在MeOH(2.3mL)中的溶液中加入MeONa(68μL的0.5M,0.034mmol)的MeOH溶液。将该混合物在RT搅拌3h。加入AcOH(2μL,0.034mmol)，将该混合物蒸发至干。通过制备型反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(34.3mg,最后2步43％)。1HNMR(400MHz,DMSO-D6)δ9.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.43(s,4H),4.77(s,2H),4.64(s,2H),4.54(s,2H),4.29(s,2H),4.09(m,2H),3.50(s,8H),3.43(s,2H),3.36(m,2H),2.51(m,4H).
实施例26.化合物44的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[3-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯氧基]丙氧基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(3-羟基苯基)四氢吡喃-2-基]甲酯(50mg,0.147mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入Cs2CO3(71.81mg,0.22mmol)，然后加入1,3-二碘丙烷(10μL,0.088mmol)。将该反应混合物在55℃加热过夜，过滤，浓缩。向在MeOH中的先前的残余物(1mL)中加入催化的MeONa(8μL的25％w/v的MeOH溶液,0.037mmol)。将该反应混合物在RT搅拌1h，用Amberlite IR120(H)中和。过滤后，减压除去溶剂，通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(4.8mg,10.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.17(t,2H),7.01(s,2H),6.92(d,2H),6.76(d,2H),4.84(m,2H),4.32(t,2H),4.09(t,4H),3.82-3.66(m,4H),3.61(t,2H),3.48(dd,2H),3.44-3.31(m,2H),2.22-2.08(m,2H).LC-MS：m/z＝553.4(M+H+).
实施例27.化合物45的制备
(N-[(2R,3R,4R,5S,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]三唑-1-基]四氢吡喃-3-基]乙酰胺)
在RT向中间体M(15mg,0.0797mmol)和N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2-叠氮基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(20mg,0.0812mmol)在乙醇(0.4mL)和水(0.1mL)中的溶液中依次加入CuSO4(6.0mg,0.0376mmol)和抗坏血酸钠(15mg,0.0757mmol)。将该反应混合物在RT搅拌24h，用水和MeOH稀释，过滤出来。浓缩滤液，用制备型HPLC、用Phenomenex C18Gemini AXIA Pack 5μ110A 21.2x250mm.40min内0％至40％ACN+0.1％甲酸-至5min内100％ACN–保持5min纯化，得到标题化合物(5mg,14％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.10(s,1H),5.66(d,J＝9.8Hz,1H),5.00(d,J＝2.1Hz,1H),4.38-4.35(m,1H),4.13(t,J＝10.0Hz,1H),3.71-3.42(m,10H),1.69(s,3H).LC-MS：m/z＝435.32(M+H+).
实施例28.化合物46和化合物47的制备(方法B)
((2R,3S,4S,5S,6S)-2-(羟基甲基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-2-噻吩基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)和((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-3-噻吩基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-2-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯和2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-3-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在0℃将n-Bu3MgLi(554μL的0.65M,0.3600mmol)的己烷-庚烷-二丁基醚(8：20：3)中的溶液加入到在甲苯(0.5mL)中的2,5-二碘噻吩(150mg,0.4465mmol)中，在相同温度下搅拌3.5h(形成浓稠沉淀)，滴加ZnBr2-LiBr在二丁基醚中的溶液(543μL的1.05M,0.57mmol)，除去冷却浴，在RT搅拌1h。加入2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-溴-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(500mg,0.8628mmol)在甲苯(0.9mL)中的溶液，在90℃放置在预热的油浴上4h。冷却至RT，倾入1N HCl水溶液(10mL)，然后用EtOAc(3x 10mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(Na2SO4)，浓缩，用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(5％-10％,8CV,10％,5CV)作为洗脱剂纯化，得到2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-2-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯(160mg,0.1480mmol,33.1％)，为白色固体。Rf＝0.38(15％EA的Hex溶液).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23(s,2H),5.87(t,J＝2.6Hz,2H),5.55(t,J＝9.6Hz,2H),5.25(dd,J＝9.8,3.0Hz,2H),5.19(d,J＝2.2Hz,2H),4.30(dd,J＝12.4,4.7Hz,2H),4.09(dd,J＝12.4,1.9Hz,2H),3.93(ddd,J＝9.3,4.6,1.8Hz,2H),1.28(s,18H),1.26(s,18H),1.16(s,18H),1.15(s,18H)和2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-3-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯(30mg,6.2％)。Rf＝0.37(15％EA-Hex)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(s,1H),7.26(s,1H),5.90(t,J＝2.6Hz,1H),5.80(t,J＝2.6Hz,1H),5.65(t,J＝9.8Hz,1H),5.56(t,J＝9.8Hz,1H),5.23(s,1H),5.21-5.14(m,2H),5.04(s,1H),4.36-4.26(m,2H),4.24-4.07(m,3H),3.88(d,J＝9.5Hz,1H),1.29(s,9H),1.29(s,9H),1.27(s,9H),1.27(s,9H),1.15(s,9H),1.14(s,9H),1.13(s,9H),1.12(s,9H).
步骤II：化合物46
向搅拌的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-2-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯(92mg,0.0851mmol)在MeOH(2mL)中的混悬液中加入MeONa(340μL的0.5M,0.1702mmol)。在RT搅拌48h，向得到的混悬液中加入DOWEX 50WX4-400，直到pH 4-5，混悬液变澄清溶液，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到标题化合物(26.5mg,0.0616mmol,72.5％)，为白色松散固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.94(s,2H),5.12(d,J＝2.2Hz,2H),4.31(t,J＝2.5Hz,2H),3.83-3.64(m,8H),3.56-3.47(m,2H).
步骤III：化合物47
向搅拌的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[5-[(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]-3-噻吩基]四氢吡喃-2-基]甲酯(33mg,0.0305mmol)在MeOH(600μL)中的溶液中加入MeONa(122μL的0.5M,0.06104mmol)，在RT搅拌48h。向得到的溶液中加入DOWEX 50WX4-400，直到pH 4-5，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到标题化合物(9.5mg,0.0221mmol,72.4％)，为白色松散固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.29(s,1H),7.11(s,1H),5.13(s,1H),4.93(s,1H),4.36(t,J＝2.8Hz,1H),4.32(t,J＝2.6Hz,1H),3.86-3.34(m,10H).
实施例29.化合物48的制备
(2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-N-[3-[[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯基]乙酰胺)
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-氧代-2-[3-[[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯胺基]乙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在0℃向中间体J(70mg,0.179mmol)在DMF(1.4mL)中的溶液中加入苯-1,3-二胺(9.7mg,0.0896mmol)、2,6-二甲基吡啶(62μL,0.538mmol)，然后加入HATU(85.2mg,0.224mmol)。将RM在RT搅拌3h，用EtOAc稀释，用H2O、盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(0-15％)、用25个柱体积纯化残余物，得到标题化合物(58mg,75.8％)，为无色油状物。LC-MS：m/z＝853.5(M+H+).
步骤II：化合物48
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-氧代-2-[3-[[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]苯胺基]乙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(58mg,0.068mmol)在MeOH(1.4mL)中的溶液中加入2滴25％w/vMeONa的MeOH溶液。搅拌1h后，用Amberlite IR120(H)中和该反应混合物。过滤后，用MeOH洗涤，减压除去溶剂，通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(11mg,23.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.84(d,1H),7.37-7.26(m,2H),7.26-7.11(m,1H),4.39-4.29(m,2H),3.87(dd,2H),3.79-3.64(m,8H),3.64-3.55(m,2H),2.71(qd,4H).LC-MS：m/z＝517.4(M+H+).
实施例30.化合物49的制备
(2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-N-[[4-[[[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙酰基]氨基]甲基]苯基]甲基]乙酰胺)
根据如实施例29中所述类似的方法、但使用中间体J和[4-(氨基甲基)苯基]甲胺而不是苯-1,3-二胺作为试剂制备化合物49。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.24(s,4H),4.46-4.15(m,6H),3.81(dt,2H),3.68(ddd,8H),3.60-3.49(m,2H),2.75-2.40(m,4H).LC-MS：m/z＝545.4(M+H+).
实施例31.化合物50的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[4-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]丁-1,3-二炔基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
将4-碘苯甲酸甲酯(37mg,0.141mmol)、CuI(4.8mg,0.025mmol)和Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(19mg,0.0233mmol)在DMF(1.0mL)中的溶液脱气(真空/N2气流)，在氮气气氛中向其中加入三乙胺(70.1mg,97μL,0.6924mmol)和中间体K(35mg,0.115mmol)，将反应混合物在RT搅拌过夜，直接加载到C-18samplet，用BiotageTMSNAP 25g C18硅胶柱、使用CH3CN–水(5％-50％)作为洗脱剂纯化，得到标题化合物(3.0mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.62(s,2H),7.51(d,J＝7.4Hz,2H),7.41(d,J＝7.7Hz,2H),7.35(t,J＝7.7Hz,2H),4.88(d,J＝4.5Hz,2H),4.29(dd,J＝4.4,3.2Hz,2H),3.84(dd,J＝11.9,6.9Hz,2H),3.76(dd,J＝11.9,3.1Hz,2H),3.71(t,J＝7.2Hz,2H),3.56(dd,J＝7.4,3.1Hz,2H),3.51-3.43(m,2H).LC-MS：m/z＝527.51(M+H+).
实施例32.化合物51的制备
(1,3-双(3-((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)苯基)脲)
步骤I：3-((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)苯甲酸
在氮气气氛中向中间体D在1.6mL的CH2Cl2中的混悬液(165mg,0.551mmol)中依次加入吡啶(312μL,3.86mmol)、DMAP(6.7mg,0.055mmol)和Ac2O(312μL,3.31mmol)。将该反应混合物在RT搅拌20h，用2M HCl(0.5mL)稀释。用Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(0-20％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到粗产物。将产物溶于5mL的CH2Cl2，用1M HCl(1mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩至干，得到标题化合物(242.2mg,97％)。
步骤II：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]氨基甲酰基氨基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在氮气气氛中向3-((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)苯甲酸(242mg,0.535mmol)在7.3mL的叔丁醇中的溶液中依次加入TEA(112μL,0.802mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(162mg,0.588mmol)。将该反应混合物加热至回流4h，冷却至RT，浓缩至干。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(2-20％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(113mg,48％)。
步骤III：化合物51
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]氨基甲酰基氨基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯在MeOH(2mL)中的溶液中加入MeONa(64μL的0.5M,0.032mmol)的MeOH溶液。将该混合物在RT搅拌过夜，用1g SCX-2SPE柱过滤。蒸发滤液至干，通过制备型HPLC纯化残余物，得到标题化合物(38mg,49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.66(s,2H),7.44(s,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),7.21(t,J＝7.9Hz,2H),7.00(d,J＝7.7Hz,2H),4.75(m,4H),4.64(m,4H),4.54(t,J＝5.8Hz,2H),4.03(m,2H),3.60(m,4H),3.54(m,2H),3.45-3.36(m,4H).
实施例33.化合物52的制备
((2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[4-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]丁基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇)
将(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[4-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]丁-1,3-二炔基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇(化合物50,5mg,0.009mmol)和10％Pd/C湿Degussa(10mg,0.0094mmol)在MeOH(3mL)中的混合物在40psi氢化4h，过滤出催化剂，浓缩。将该物质溶于水-乙腈，冷冻干燥，得到标题化合物(4.5mg,86％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.21(s,2H),7.17(d,J＝4.9Hz,4H),6.99(t,J＝3.7Hz,2H),4.86(d,J＝3.3Hz,2H),4.35(t,J＝3.3Hz,2H),3.71(d,J＝4.6Hz,4H),3.63(t,J＝8.2Hz,2H),3.47(dd,J＝8.2,3.1Hz,2H),3.41-3.32(m,2H),2.62-2.47(m,4H),1.63-1.48(m,4H).LC-MS：m/z＝535.53(M+H+).
实施例34.化合物53的制备(方法C)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇
在氮气气氛中向脱气的(真空-氮气流,30min)中间体L(836mg,1.15mmol)、1,4-二碘苯(180mg,0.545mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(44.6mg,0.0546mmol)和CuI(10.4mg,0.0546mmol)在DMF(8mL)中的溶液中加入DBU(653μL,4.37mmol)和脱气的水(29.5mg,30μL,1.64mmol)。将该反应混合物在50℃缓慢地加热4h，然后增加至55℃，加热16h。然后再加入一定量的水(10uL)，持续加热6h，冷却至rt，保持过夜。用水(25mL)稀释该反应混合物，用EtOAc(3x 25mL)萃取，用盐水洗涤合并的萃取物，干燥(Na2SO4)，浓缩。用BiotageTMSNAP100g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液(0％-20％,8CV；20％3CV)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(511mg,0.368mmol,68％)，为半白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37(d,J＝0.9Hz,4H),4.90(d,J＝8.9Hz,2H),4.44(d,J＝9.1Hz,2H),4.20(brs,2H),4.14-4.03(m,2H),4.01-3.83(m,4H),3.67-3.51(m,2H),2.1-2.0(m,2H),1.33-0.77(m,126H).
步骤II,化合物53
将[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇(471mg,0.339mmol)在THF(16.0mL)、TFA(8.0mL)和水(8.0mL)中的溶液加热至回流(浴温75℃)30h，浓缩。用BiotageTMSNAP 25g C18硅胶柱、使用CH3CN的水溶液(0％-50％,10CV)作为洗脱剂纯化残余物，得到标题化合物(146mg,0.311mmol,88％)，为半白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(s,4H),4.85(d,J＝2.1Hz,2H),3.98(dd,J＝3.1,2.2Hz,2H),3.92-3.83(m,4H),3.81-3.68(m,4H),3.61(t,J＝9.5Hz,2H).
化合物53的可选合成(方法C)
步骤I：[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇
在小瓶中加入中间体P(118mg,0.18mmol)和1,4-二碘苯(28mg,0.083mmol)，将其溶于DMF(3mL)，脱气，然后加入CuI(7.8mg,0.041mmol)和Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(8.4mg,0.010mmol)，再次脱气，然后加入Et3N(57μL,0.41mmol)，封盖该反应混合物，在40℃加热4h。用EtOAc(10mL)稀释该反应混合物，依次用饱和NH4Cl、H2O、盐水(各5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，然后用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-20％)纯化。合并纯级分，浓缩，得到标题化合物(60mg,0.043mmol,53％收率)，为无色泡沫体。
步骤II,化合物53
向[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)-四氢吡喃-2-基]甲醇(100mg,0.072mmol)在THF(1mL)中的溶液中加入氟化四丁基铵的THF溶液(575μL的1M,0.58mmol)。搅拌3.5h后，浓缩该反应混合物，通过反相快速色谱法纯化，其中使用BiotageTMSNAP 12g C18硅胶柱，应用MeCN的H2O溶液梯度(0-50％)。浓缩包含期望的化合物的合并级分，将残余物再溶于MeCN/H2O(20％MeCN)，冷冻干燥，得到52mg白色固体。
化合物53的可选合成(方法D)
向中间体M(130mg,0.6908mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入1,4-二碘苯(102.9mg,0.3119mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(13.1mg,0.0160mmol)、CuI(11.9mg,0.0625mmol)和DIPEA(163μL,0.936mmol)。将该混合物在60℃、氮气气氛中搅拌5h。减压除去溶剂后，使用制备型-HPLC纯化残余物，得到标题化合物(52mg,0.115mmol,37％)，为白色固体。LC-MS：m/z＝451.5(M+H+).
化合物53的可选合成(方法E)
步骤I：二乙酸(2R,2'R,3S,3'S,6S,6'S)-(1,4-亚苯基双(乙炔-2,1-二基))双(2-(乙酰氧基甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-6,3-二基)酯
在安装磁搅拌器和温度计的1.0L 3-颈RBF中将三甲基-[2-[4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯基]乙炔基]硅烷(25.00g,92.42mmol)和三氟甲磺酸铟(2.597g,4.621mmol)溶于CH2Cl2(125mL)。将该混合物在RT搅拌10min，然后在2h内向该反应混合物中通过加液漏斗滴加溶于100mL的CH2Cl2的乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(100.7g,369.7mmol)，保持反应温度低于25℃。在添加结束时，将该反应混合物在RT再搅拌18h。用饱和NaHCO3水溶液(250mL)使反应停止，分离各层。用150mL的CH2Cl2将水层反萃取1次，用水(250mL)洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤。将硅胶(500mL)加入到有机相中。减压蒸发该混合物至干。用大的硅胶垫纯化粗混合物，用Hex/EtOAc(10-50％)洗脱。合并包含期望的产物的级分，浓缩至300mL，然后加入庚烷(500mL)和MeOH(500mL)。浓缩该混合物，直到形成固体，过滤后者，得到31.0g(58％)标题化合物。
步骤II：二乙酸(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-(1,4-亚苯基双(乙炔-2,1-二基))双(2-(乙酰氧基甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-6,3-二基)酯
在安装磁搅拌器、N2入口和温度探头的5L 3-颈RBF中加入K2CO3(150.6g,1.090mol)、甲磺酰胺(51.83g,544.9mmol)、K3[Fe(CN)6](358.9g,1.090mol)、2-甲基丙-2-醇(1.000L)和水(1.250L)。然后加入1,4-双[(S)-[(5S)-5-乙基奎宁环-2-基]-(6-甲氧基-4-喹啉基)甲氧基]酞嗪(2.830g,3.633mmol)，然后加入K2O4Os(334.6mg,0.9082mmol)，将该混合物在RT搅拌15min。在10min内通过加液漏斗向该混合物中滴加来自步骤I的溶于EtOAc(250.0mL)的乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-[2-[4-[2-[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-2-(乙酰氧基甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-6-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(50.00g,90.82mmol)。将得到的反应混合物(棕-橙色+非常均匀，无块)在RT搅拌(300rpm)18h。再加入一定量的K2O4Os(335mg,0.908mmol)，将该反应混合物搅拌24h。将最后的操作重复2次，总量为1.340g K2O4Os，反应时间为96h。用Na2SO3(233.9g的250mL水溶液)使该反应混合物猝灭，在RT搅拌60min，通过硅藻土垫过滤。分离有机层，浓缩，得到76.74g粗化合物，为棕色树胶状物。
将粗产物和DMAP(1.110g,9.082mmol)溶于吡啶(250.0mL)。用冰/水浴冷却得到的溶液，在10分钟内滴加Ac2O(51.4mL,545mmol)，保持温度低于10℃。然后将该反应混合物在RT搅拌1.5h。在RT搅拌1h后，再加入25mL的Ac2O，将该混合物再搅拌4h。用CH2Cl2(250mL)和水(250mL)稀释得到的反应混合物，搅拌15min，然后加入2N HCl(2.25L)，使用冰/水浴搅拌5min以控制放热。分离水溶液，用CH2Cl2(2x 250mL)反萃取，再次用2N HCl(250mL,加入盐水以有助于分离)洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，然后浓缩至得到52.3g粗棕色泡沫状固体。将残余物混悬于EtOH(262mL)，回流搅拌至完全溶解，然后缓慢地冷却至RT，然后在0℃冷却30min。过滤得到的沉淀，用冷EtOH洗涤，在35℃真空烘箱干燥48hr后得到43.0g黄褐色粉末(77％收率，2步内)。
步骤III：化合物53
向1L RBF中加入来自步骤II的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯(11.55g,14.68mmol)，加入EtOH(347mL)，将该混合物在RT搅拌5分钟。加入MeONa(327μL的25％w/w,1.47mmol)，将该反应混合物在RT搅拌4天。反应不完全，加入MeOH(120mL)，再加入MeONa(981μL的25％w/w,4.41mmol)。将最终混合物搅拌2天，过滤，用EtOH洗涤得到的固体。通过27g Dowex 50W4(用EtOH预洗涤)柱中和母液。然后将固体在中和的母液中拍打15min。然后浓缩淤浆至干，得到10g灰白色固体。将后者倾入EtOH(165mL)，在70℃搅拌1h。将淤浆缓慢地冷却至RT，然后冷却，在0℃搅拌30min。过滤，用冷EtOH(2x 10mL)洗涤2次，用庚烷(10mL)洗涤1次，得到6.70g灰白色固体。在50℃真空烘箱干燥2天，得到标题化合物，为灰白色固体(6.37g,95％)。
实施例35.化合物54的制备
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]丁-1,3-二炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
向中间体M(46mg,0.2444mmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(10mg,0.0123mmol)、CuI(9.3mg,0.0488mmol)和DIPEA(85μL,0.488mmol)。将该混合物在50℃氮气气氛中搅拌过夜。减压除去溶剂后，用制备型-HPLC纯化残余物，得到标题化合物(6mg,0.0137mmol,6％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ4.73(d,2H),3.91-3.88(m,2H),3.83(m,2H),3.77-3.68(m,4H),3.66-3.60(m,2H),3.57(m,2H).LC-MS：m/z＝374.5(M+H+).
实施例36.化合物55的制备
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-(4-碘苯基)烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向中间体H(300mg,0.8057mmol)在DMF(8.0mL)中的溶液中加入1,4-二碘苯(265.8mg,0.806mmol)、乙酸钯(18.09mg,0.081mmol)、溴化四丁基铵(259.7mg,0.81mmol)和碳酸氢钠(203.0mg,2.42mmol)。将该反应混合物在85℃在N2气氛中加热过夜。向该反应混合物中加入水，用EtOAc(2x)萃取。用盐水/水(2次,1：1,v/v)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。用BiotageTMSNAP 25g硅胶、使用EtOAc的Hex溶液(0-45％，20CV；45％，2CV)纯化深色粗油状物，得到标题化合物(260mg,0.453mmol,56％)，为淡黄色油状物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(d,J＝15.9Hz,1H),6.32–6.22(m,1H),5.35(dd,J＝8.7,3.3Hz,1H),5.24(t,J＝3.4Hz,1H),5.15(t,J＝8.4Hz,1H),4.40–4.31(m,1H),4.15–4.00(m,5H),2.78–2.53(m,2H),2.10(s,4H),2.07(s,3H),2.01(d,J＝1.6Hz,5H),1.90(s,3H),1.24(t,J＝7.1Hz,2H).LC-MS：m/z＝575.35(M+H+)
步骤II：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯
将来自步骤I的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-(4-碘苯基)烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(130mg,0.226mmol)、CuI(9.4mg,0.049mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(37.3mg,0.046mmol)在DMF(4.2mL)中的溶液脱气(真空/N2气流)。在氮气气氛中向其中加入三乙胺(137.4mg,189.3μL,1.358mmol)和中间体M(42.6mg,0.226mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜。用水使反应混合物猝灭，用EtOAc(2x)萃取。用稀释的NH4Cl和盐水/水(2次,1：1,v/v)洗涤合并的有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到标题化合物(143mg)，照此用于下一步。LC-MS：m/z＝635.52(M+H+).
步骤III,化合物55
向来自步骤II的搅拌的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(E)-3-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]烯丙基]四氢吡喃-2-基]甲酯(143mg,0.225mmol)在MeOH(2.9mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(225μL的0.5M,0.113mmol)。将该反应混合物在RT搅拌过夜。使该反应混合物通过离子交换树脂Isolute SCX-2(1g柱)，用干MeOH洗涤。将合并的滤液浓缩至干，用制备型HPLC纯化残余物，得到标题化合物(22.3mg,20％)，为白色松散固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.41(s,4H),6.55(d,J＝15.9Hz,1H),6.47–6.35(m,1H),4.06–4.00(m,2H),3.96(dd,J＝9.3,3.3Hz,1H),3.90(dd,J＝11.5,2.1Hz,1H),3.87–3.73(m,6H),3.71–3.63(m,2H),3.57(ddd,J＝9.0,6.1,3.2Hz,1H),2.76–2.65(m,1H),2.60–2.49(m,1H).
实施例37.化合物56的制备(方法A)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[6-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-2-萘基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(6-羟基-2-萘基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
将乙腈(10mL)加入到乙酸[(2R,3S,4R)-3,4-二乙酰氧基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(1.49g,5.47mmol)、(6-羟基-2-萘基)硼酸(1.0g,5.32mmol)和二乙酰氧基钯(119mg,0.53mmol)的混合物中。将该反应混合物在RT在N2气氛中搅拌过夜，然后通过硅胶柱(5g)过滤，用EtOAc冲洗。浓缩合并的滤液，用BiotageTMSNAP 50g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(0-50％)纯化。合并纯的级分，浓缩，得到标题化合物(935mg,2.62mmol,49％收率)，为灰白色泡沫状固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80–7.72(m,2H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),7.18–7.08(m,2H),6.28(ddd,J＝10.4,3.1,1.6Hz,1H),6.13–6.00(m,1H),5.49–5.42(m,1H),5.36(ddd,J＝7.4,4.1,2.1Hz,1H),4.28(dd,J＝12.0,5.8Hz,1H),4.09(dd,J＝12.0,3.0Hz,1H),3.86(ddd,J＝7.8,5.8,3.0Hz,1H),2.10(s,3H),2.08(s,3H).LC-MS：m/z＝357.34(M+H+).
步骤II：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(6-羟基-2-萘基)四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,6S)-3-乙酰氧基-6-(6-羟基-2-萘基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(930mg,2.61mmol)在THF(5.6mL)/水(3.7mL)中的混悬液中加入OsO4(2.5％w/w的t-BuOH溶液,980μL,0.078mmol)，然后加入4-甲基-4-氧化-吗啉-4-鎓(917mg,7.83mmol)。搅拌23h后，再加入OsO4溶液(300μL)，再搅拌18h，然后加入1M Na2S2O3水溶液(6mL)、EtOAc(40mL)和H2O(10mL)。分离有机层，用EtOAc(2x 20mL)萃取水层。用盐水(20mL)洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗产物，为深棕色泡沫状固体，用BiotageTMSNAP50g硅胶柱、使用iPrOH的CH2Cl2溶液梯度(0-10％)纯化。浓缩合并的纯级分，得到标题化合物(281mg,0.72mmol,27％收率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.77(s,1H),7.73(d,J＝8.7Hz,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.48(dd,J＝8.6,1.7Hz,1H),7.12-7.04(m,2H),5.10(dd,J＝6.3,5.3Hz,1H),5.03(d,J＝6.2Hz,1H),4.74(dd,J＝12.1,8.1Hz,1H),4.31(dd,J＝6.2,3.2Hz,1H),4.12(dd,J＝12.1,3.2Hz,1H),3.95-3.84(m,2H),2.09(s,3H),2.06(s,3H).LC-MS：m/z＝413.34(M+Na+).
步骤III：乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[6-(三氟甲基磺酰氧基)-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-(6-羟基-2-萘基)四氢吡喃-2-基]甲酯(235mg,0.60mmol)在CH2Cl2(6mL)中的混悬液中加入Et3N(168μL,1.21mmol)、1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)-甲磺酰胺(266mg,0.7446mmol)和CH2Cl2(4mL)。搅拌4天后，浓缩该反应混合物。用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度(0-10％)纯化。合并包含产物的级分，浓缩，然后再次用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱、使用EtOAc的Hex溶液梯度(50-80％)纯化。合并纯的级分，浓缩，得到标题化合物(214mg,0.41mmol,68％收率)，为淡黄色蜡样固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝9.1Hz,1H),8.02(s,1H),8.00(d,J＝8.6Hz,1H),7.91(d,J＝2.5Hz,1H),7.74(dd,J＝8.6,1.6Hz,1H),7.47(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),5.15–5.00(m,2H),4.24–4.07(m,2H),4.02–3.97(m,1H),3.95(dd,J＝5.4,3.1Hz,1H),2.12(s,3H),2.03(s,3H).LC-MS：m/z＝545.36(M+Na+).
步骤IV：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[6-(三氟甲基磺酰氧基)-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向乙酸[(2R,3S,4R,5S,6R)-3-乙酰氧基-4,5-二羟基-6-[6-(三氟-甲基磺酰氧基)-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯(214mg,0.41mmol)在CH2Cl2(2.2mL)中的溶液中加入吡啶(100μL,1.24mmol)、DMAP(2.5mg,0.0208mmol)和Ac2O(97μL,1.03mmol)。搅拌2h后，用CH2Cl2(5mL)稀释该反应混合物，加入1N HCl(5mL)水溶液，分离各层。用CH2Cl2(2x 5mL)萃取水层。浓缩合并的有机萃取物，再溶于CH2Cl2，用预洗涤的Dowex 50WX4-400树脂处理，过滤，用几部分CH2Cl2冲洗。浓缩合并的滤液，得到标题化合物(232mg,0.38mmol,93％收率)，为灰白色泡沫状固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05(s,1H),7.99(d,J＝9.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.7Hz,1H),7.77(d,J＝2.4Hz,1H),7.72(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.43(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),6.10(t,J＝3.3Hz,1H),5.37(t,J＝8.6Hz,1H),5.27(d,J＝3.2Hz,1H),5.22(dd,J＝8.9,3.1Hz,1H),4.44(dd,J＝12.2,6.3Hz,1H),4.15(dd,J＝12.1,2.8Hz,1H),3.83–3.69(m,1H),2.17(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),2.02(s,3H).LC-MS：m/z＝607.41(M+H+).
步骤V：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[6-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在微波小瓶中向来自步骤IV的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[6-(三氟甲基磺酰氧基)-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯(45mg,0.0742mmol)、中间体M(25mg,0.13mmol和CuI(6.3mg,0.033mmol)的混合物中加入DMF(500μL)和Et3N(52μL,0.37mmol)。给该反应混合物脱气(室内-真空，然后N2,3x)，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(8mg,0.0098mmol)，再次脱气，封盖，在80℃搅拌过夜。将该反应混合物冷却至RT，用EtOAc(2mL)和H2O(1mL)稀释，通过硅藻土过滤，用EtOAc(4x 0.5mL)冲洗。用H2O和盐水(1mL)和EtOAc稀释滤液。分离各层。用H2O、盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗产物。用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱、使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度(0-20％)纯化。合并纯级分，浓缩，得到标题化合物(36mg,0.056mmol,75％收率)，为黄褐色泡沫状固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(s,1H),8.00(s,1H),7.94(d,J＝8.7Hz,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,1H),7.66(dd,J＝8.7,1.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),6.03-5.97(m,1H),5.32-5.25(m,2H),5.22(dd,J＝8.3,3.1Hz,1H),4.92(d,J＝2.1Hz,1H),4.50(dd,J＝12.1,6.7Hz,1H),4.18(dd,J＝12.2,3.0Hz,1H),4.06(dd,J＝3.2,2.1Hz,1H),3.99(dd,J＝9.3,3.3Hz,1H),3.94-3.81(m,3H),3.76(dd,J＝11.7,5.8Hz,1H),3.67(t,J＝9.6Hz,1H),2.12-2.07(m,9H),2.04(s,3H).LC-MS：m/z＝645.43(M+H+).
步骤VI,化合物56
向乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[6-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-2-萘基]四氢吡喃-2-基]甲酯(34mg,0.053mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(55μL的0.5M,0.028mmol)。将该反应混合物搅拌过夜，然后通过预洗涤的SCX-2 1g柱，用MeOH(3x 1mL)洗涤。浓缩合并的滤液，得到玻璃状固体，再溶于MeCN/H2O混合物(20％MeCN)，冷冻干燥。得到标题化合物(24mg,0.046mmol,88％收率)，为松散白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.91(s,1H),7.84(s,1H),7.77(t,J＝8.0Hz,2H),7.61(dd,J＝8.7,1.4Hz,1H),7.40(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),5.02(d,J＝3.9Hz,1H),4.81(d,J＝2.1Hz,1H),4.50-4.35(m,1H),3.95(dd,J＝3.2,2.2Hz,1H),3.89(dd,J＝9.3,3.3Hz,1H),3.84-3.72(m,4H),3.71-3.61(m,2H),3.60-3.51(m,2H),3.47-3.40(m,1H).LC-MS：m/z＝477.41(M+H+).
实施例38.化合物57的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
将中间体M(108mg,0.57mmol)溶于DMF(2.7mL)，脱气，然后加入1,3-二碘苯(87mg,0.26mmol)，然后加入CuI(21mg,0.11mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2(22mg,0.027mmol)，再次脱气，然后加入Et3N(180μL,1.291mmol)，将该反应混合物在40℃加热6h。浓缩该反应混合物至干，然后通过反相快速色谱法纯化2次，其中使用BiotageTMSNAP C18 12+M柱，应用MeCN的H2O溶液梯度0-30％。将来自第二次纯化的纯的级分浓缩至干，得到标题化合物(50mg,0.11mmol,40％收率)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,dmso-d6)δ7.51-7.38(m,4H),4.95(d,J＝4.4Hz,2H),4.76(d,J＝6.1Hz,2H),4.73-4.68(m,4H),4.47(t,J＝6.0Hz,2H),3.81-3.75(m,2H),3.70-3.61(m,4H),3.57-3.50(m,2H),3.48-3.39(m,2H),3.39-3.29(m,6H).
LC-MS：m/z＝451.49(M+H+).
实施例39.化合物58的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-2-萘基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
在微波小瓶中加入2,7-二溴萘(36mg,0.13mmol)和中间体M(54mg,0.29mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(9.2mg,0.011mmol)和CuI(14mg,0.074mmol)。加入DMF(1mL)和Et3N(88μL,0.6295mmol)，将该反应混合物脱气，在微波中在120℃加热10min，然后浓缩至干，通过反相快速色谱法纯化2次，其中使用BiotageTMSNAP C18 12+M，应用MeCN的H2O溶液梯度10-90％进行第一次纯化，10-60％进行第二次纯化。将来自第二次纯化的级分浓缩至干，用制备型HPLC纯化，得到标题化合物(11mg,0.020mmol,16％收率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.11(s,2H),7.96(d,J＝8.5Hz,2H),7.54(dd,J＝8.5,1.4Hz,2H),5.01(d,J＝3.2Hz,2H),4.84(d,J＝4.9Hz,2H),4.80-4.71(m,4H),4.53(t,J＝5.6Hz,2H),3.85(s,2H),3.71(dd,J＝18.8,6.8Hz,4H),3.65-3.55(m,2H),3.52-3.20(m,4H).
1H NMR(400MHz,DMSO-D6+D2O)δ8.09(s,2H),7.95(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(dd,J＝8.5,1.4Hz,2H),4.77(d,J＝2.1Hz,2H),3.86-3.81(m,2H),3.73(dd,J＝9.2,3.3Hz,2H),3.69(dd,J＝11.7,1.9Hz,2H),3.64-3.56(m,2H),3.56-3.43(m,2H),3.39(t,J＝9.4Hz,2H).LC-MS：m/z＝501.65(M+H+).
化合物59的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[6-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-2-萘基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
使用对化合物58所述相同的方法(除去在90℃进行反应16h)由2,6-二溴萘得到标题化合物，得到标题化合物(30mg,0.057mmol,42％收率)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.01(s,2H),7.86(d,J＝8.6Hz,2H),7.54(dd,J＝8.5,1.4Hz,2H),4.92(d,J＝2.1Hz,2H),4.05(dd,J＝3.1,2.2Hz,2H),3.98(dd,J＝9.4,3.3Hz,2H),3.94-3.82(m,4H),3.81-3.72(m,2H),3.66(t,J＝9.5Hz,2H).
LC-MS：m/z＝501.40(M+H+).
化合物60的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[5-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-1-萘基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
使用对化合物58所述相同的方法(除去在90℃进行反应16h)由1,5-二溴萘得到标题化合物，得到标题化合物(27mg,0.05mmol,24％收率)，为灰白色松散/结晶固体。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.26(d,J＝8.5Hz,2H),7.81(d,J＝6.5Hz,2H),7.66(dd,J＝8.2,7.3Hz,2H),5.05(d,J＝4.4Hz,2H),4.91(d,J＝2.1Hz,2H),4.87(d,J＝5.9Hz,2H),4.82(d,J＝5.8Hz,2H),4.57(t,J＝6.0Hz,2H),3.97-3.88(m,2H),3.83-3.61(m,6H),3.54-3.37(m,4H).LC-MS：m/z＝501.54(M+H+).
化合物62-68的制备
使用方法A，根据化合物6中所述的方法，应用适当官能化的芳基溴、苯酚或硼酸制备化合物62-64、67和68。使用方法A，根据化合物139中所述的方法，应用适当官能化的卤代芳基化合物制备化合物65和66。
化合物69的制备(改进的方法D)
(2R,3S,4R,5R,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：乙酸(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基酯
向(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-苄氧基甲基)四氢吡喃-2-醇(5,920g,10.95mmol)在吡啶(21.90mL)中的溶液中滴加乙酐(2.07mL,21.9mmol)。将该反应体系在RT搅拌5h，然后真空浓缩。用CH2Cl2稀释粗混合物，用HCl 1N和盐水洗涤得到的溶液。用Na2SO4干燥有机相，浓缩，得到乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]酯的α/β混合物，为无色油状物。
步骤II：三甲基-[2-[(2R,3S,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]硅烷
将乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]酯(1000mg,1.716mmol)、三甲基-(2-三丁基锡烷基乙炔基)硅烷(1.329g,1.260mL,3.432mmol)和活化分子筛(1g)在CH2Cl2(8.6mL)中的混合物搅拌15min，然后在RT滴加TMSOTf(620μL,3.43mmol)。将该反应体系搅拌1.5h，加入Et3N(1.00mL,7.18mmol)和CH2Cl2(8.6mL)。用硅藻土过滤得到的混合物，使用10％EA/hex作为洗脱剂，浓缩滤液，用硅胶BiotageTMSNAP柱纯化残余物，得到标题化合物(269mg,25％)，为伴有锡副产物的黄色油状物。
步骤III：(2R,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢吡喃
向三甲基-[2-[(2R,3S,4R,5R,6R)-3,4,5-三苄氧基-6-(苄氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]硅烷(269mg,0.433mmol)在MeOH(3.6mL)和CH2Cl2(722μL)中的溶液中加入1NNaOH(1.30mL的1M,1.30mmol)，在RT搅拌1h。用1N HCl使反应停止，浓缩以除去挥发性物质。加入EtOAc，分离有机相，用MgSO4干燥。将残余物溶于20％EtOAc/Hex，用硅胶垫纯化，使用20％EA/hex作为洗脱剂。浓缩滤液，得到标题化合物(83.0mg,35％)，为伴有来自上述步骤的锡副产物的无色油状物。
步骤IV：(2R,3R,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
向(2R,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-三苄氧基-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢吡喃(76.0mg,0.139mmol)在EtSH(1.4mL)中的溶液中加入BF3.OEt2(479μL,3.88mmol)，将该反应体系在RT搅拌22h。通过添加MeOH和碱性树脂用于中和使该反应体系猝灭。过滤该混合物，真空浓缩，得到标题化合物(10mg,38％)，为白色固体。
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-(4-碘苯基)乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇的制备
根据对化合物53所述的方法、但在步骤I中使用1当量的1,4-二碘苯制备标题化合物：1H NMR(400MHz,cd3od)δ7.66-7.59(m,2H),7.15-7.08(m,2H),4.75(d,J＝2.1Hz,1H),3.91-3.88(m,1H),3.82-3.74(m,2H),3.72-3.59(m,2H),3.53(t,J＝9.4Hz,1H).LC-MS：m/z＝390.94(M+H+)
步骤V：化合物69
将(2R,3R,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇(10.0mg,0.053mmol)、(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-(4-碘苯基)乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇(20.7mg,0.0531mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(8.7mg,0.011mmol)、CuI(2.3mg,0.012mmol)在DMF(511μL)中的溶液脱气(N2)，向其中加入三乙胺(44μL,0.32mmol)。将该混合物在密封试管中在氮气气氛中在RT搅拌18h。用0.45μm滤膜将该反应体系过滤，通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(5mg,20％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.45-7.37(m,4H),4.87-4.83(m,2H),3.95(s,1H),3.90-3.71(m,5H),3.71-3.56(m,4H),3.56-3.49(m,1H),3.28-3.22(m,1H).LC-MS：m/z＝451.46(M+H+)
化合物70-76的制备
根据对化合物53所述的方法制备化合物70。根据对化合物59所述的方法制备化合物71-76。
化合物77的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-苯基-4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
将三氟甲磺酸[3-苯基-4-(三氟甲基磺酰氧基)苯基]酯(由2-苯基氢醌的三氟甲磺酸化制备)(54mg,0.12mmol)、CuI(9.0mg,0.048mmol)和Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(9.0mg,0.012mmol)加入到反应试管中。加入脱气的中间体M(0.5mL的0.53M,0.27mmol)在DMF中的溶液，然后加入DIEA(105μL,0.60mmol)。密封试管，在90℃使用反应块振摇过夜。过滤该反应混合物，用DMF冲洗。通过反相HPLC纯化得到的滤液，合并包含期望的物质的级分，冷冻干燥，得到标题化合物(28mg,44％收率)，为白色松散固体。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.53-7.35(m,7H),4.88(d,J＝2.1Hz,1H),4.74(d,J＝2.0Hz,1H),4.01(dd,J＝3.2,2.1Hz,1H),3.93(dd,J＝9.4,3.3Hz,1H),3.88(dd,J＝11.5,2.1Hz,1H),3.84-3.50(m,9H).ESI-MS m/z计算值526.18,测定值527.44(M+1)+
化合物78-102的制备
根据对化合物59所述的方法制备化合物78-84和86-89。根据对化合物171所述的方法制备化合物85。根据对化合物103所述的方法制备化合物100-102。
化合物103的制备(方法C)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[3-异丙基-4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-3-异丙基-苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]
向玻璃小瓶中加入1,4-二溴-2-异丙基-苯(60mg,0.22mmol)、碘化铜(12mg,0.061mmol)和Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(20mg,0.028mmol)，封盖，脱气(真空-氮气流,3次)。加入脱气的中间体L的DMF溶液(1.6mL的0.26M,0.41mmol)和脱气的DMF(0.9mL)，然后加入脱气的DBU和H2O混合物(8：3v/v,250μL)。将小瓶转入预热的油浴(90℃)中，搅拌过夜。将该反应混合器冷却至RT，使其分配在饱和NH4Cl溶液(5mL)与EtOAc(10mL)之间。分离各层，用EtOAc(2x 2mL)反萃取水层。用Na2SO4干燥合并的有机萃取物，过滤，浓缩。通过使用BiotageTMSNAP 25g硅胶柱的快速色谱法纯化残余物，使用EtOAc的Hex溶液梯度0-20％作为洗脱剂，得到标题化合物(90mg,29％收率)，为浅黄色树胶状物。
步骤II：化合物103
将来自步骤I的[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[2-[4-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-3-异丙基-苯基]乙炔基]-3,4,5-三(三异丙基甲硅烷氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇(90mg,0.066mmol)在THF(810μL)、TFA(405μL)和H2O(405μL)的混合物中的溶液加热至回流(80℃)48h，浓缩。通过使用BiotageTMSNAP C18-12g柱的反相快速色谱法纯化残余物，使用MeCN的H2O溶液梯度0-70％作为洗脱剂。浓缩级分，冷冻干燥，得到标题化合物(13mg,40％收率)，为松散白色固体。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝1.5Hz,1H),7.26(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),4.92(d,J＝2.1Hz,1H),4.88(d,J＝2.1Hz,1H),4.04-3.98(m,2H),3.95-3.88(m,3H),3.86(dd,J＝3.3,2.1Hz,1H),3.84-3.71(m,4H),3.69-3.58(m,2H),3.41(p,J＝6.9Hz,1H),1.27(d,J＝6.9Hz,6H).ESI-MS m/z计算值492.19955,测定值(M+1)+493.36
化合物104-109的制备
根据对化合物103所述的方法制备化合物104和105。
根据对化合物59所述的方法制备化合物106,108和109。根据对化合物110所述的方法制备化合物107。
化合物110的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[9-丙基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇.
将中间体M(500μL的0.53M in DMF,0.265mmol)、AG15(43mg,0.1171mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(15mg,0.0184mmol)、CuI(15mg,0.079mmol)在DMF(200μL)中的混合物脱气(N2)。向得到的混合物中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(180μL,1.03mmol)。将最终混合物在密封试管中在氮气气氛中在100℃搅拌18h。用0.45μM滤膜过滤该反应体系，真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(7.9mg,10％)，为灰色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝7.9Hz,2H),7.63(s,2H),7.29(d,J＝7.9Hz,2H),4.90(s,2H),4.33(t,J＝7.1Hz,2H),4.04(s,2H),4.03-3.96(m,2H),3.88(t,J＝8.0Hz,4H),3.75(dd,J＝12.1,5.5Hz,2H),3.65(t,J＝9.3Hz,2H),1.87(dd,J＝14.5,7.2Hz,2H),0.93(t,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z计算值581.61,测定值582.44(M+1)+
化合物111和112的制备
根据对化合物110所述的方法、使用适合的中间体制备化合物111和112。
化合物113的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[9-羟基-9-戊基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I 2,7-二溴-9-戊基-芴-9-醇
在0℃将2,7-二溴芴-9-酮(200mg,0.592mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入到用Et2O(4mL)稀释的溴化正-戊基镁2.0M的Et2O溶液(355μL的2.0M,0.710mmol)中。将该反应体系在RT搅拌18h，用1N Na2CO3猝灭。分离有机相，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(0-8％EA/hex)纯化残余物，得到2,7-二溴-9-戊基-芴-9-醇(150mg,62％)，为白色固体。
步骤II：化合物113
将中间体M(500μL的0.53M的DMF溶液,0.265mmol)、2,7-二溴-9-戊基-芴-9-醇(50.0mg,0.122mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(15mg,0.018mmol)、CuI(15mg,0.07876mmol)在DMF(200μL)中的溶液脱气(N2)。向得到的混合物中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(180μL,1.03mmol)。将最终的混合物在密封试管中在氮气气氛中在100℃搅拌18h。用0.45μM滤膜过滤该反应体系，真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(9.4mg,11％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.55(s,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),4.80(s,2H),4.01(s,2H),3.98-3.92(m,2H),3.91-3.80(m,4H),3.73(dd,J＝11.3,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.6Hz,2H),2.15-2.07(m,2H),1.16-1.07(m,4H),0.79-0.64(m,5H).ESI-MS m/z计算值624.68,测定值625.47(M+1)+
化合物114-119的制备
根据对化合物113所述的方法、使用适合的中间体制备化合物114和115。根据对化合物59所述的方法、使用商购原料制备化合物116-119。
化合物120的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[9,9-二甲基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-2-基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇.
将中间体M(1.00g,5.31mmol)、2,7-二溴-9,9-二甲基-芴(870mg,2.47mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(141mg,0.1727mmol)、CuI(141mg,0.7404mmol)的溶液脱气(N2)，向得到的混合物中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(3.73mL,21.4mmol)。将最终混合物在密封试管中在氮气气氛中在100℃搅拌1h。将该反应体系倾入包含Ac2O(25.0mL,265mmol)和吡啶(25mL,309mmol)的圆底烧瓶，将得到的混合物在RT搅拌18h以上。然后真空浓缩该反应体系，将残余物溶于EA(100mL)，用NH4Cl(3x125mL)洗涤。用MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP 100g硅胶柱、使用EtOAc(20-80％)纯化得到的混合物，得到全乙酰化的120(1.36g,61％)，为淡黄色泡沫状固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝7.9Hz,2H),7.57(s,2H),7.52(dd,J＝7.9,1.3Hz,2H),5.60(dd,J＝10.0,3.4Hz,2H),5.48(dd,J＝3.2,2.1Hz,2H),5.36(t,J＝10.0Hz,2H),5.05(d,J＝2.0Hz,2H),4.37(dd,J＝12.2,4.8Hz,2H),4.31(ddd,J＝10.0,4.7,2.0Hz,2H),4.18(dd,J＝12.2,2.0Hz,2H),2.22(s,6H),2.14(s,6H),2.07(s,6H),2.04(s,6H),1.52(s,6H).ESI-MS m/z计算值902.29974,测定值903.73(M+1)+.
向溶于MeOH(27mL)的全乙酰化的化合物120即乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[9,9-二甲基-7-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-2-基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯(1.36g,1.506mmol)(澄清溶液)中加入MeONa的MeOH溶液(3.00mL的0.5M,1.50mmol)。1h后，用预洗涤的Dowex50WX4(使用2.9g)处理该反应混合物，过滤，浓缩。向棕色残余物中加入15mL MeOH，超声处理该混悬液，然后在40℃在N2气氛中搅拌1.5h。将该混合物冷却至RT，放入冰浴，过滤，得到标题化合物，为浅黄褐色固体(659mg,76％来自全乙酰化中间体)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.74(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(s,2H),7.43(d,J＝7.9Hz,2H),4.87(s,2H),4.02(s,2H),3.96(dd,J＝9.2,3.1Hz,2H),3.90-3.81(m,4H),3.74(dd,J＝11.2,5.2Hz,2H),3.64(t,J＝9.2Hz,2H),1.46(s,6H).[1],1H NMR(400MHz,cd3od)7.74(d,J＝7.9Hz,2H),7.57(s,2H),7.44(d,J＝7.9Hz,2H),4.92(s,2H),4.03-4.00(m,2H),3.96(dd,J＝9.4,3.0Hz,2H),3.91-3.81(m,4H),3.74(dd,J＝11.2,5.3Hz,2H),3.63(t,J＝9.2Hz,2H),1.46(s,6H).ESI-MS m/z计算值566.60,测定值567.42(M+H)+
化合物121-138的制备
根据对化合物59所述的方法、使用商购原料制备化合物121-138。
N/A是指未得到。
化合物139的制备(方法A)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[3-[4-[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[4-[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲基酯
在微波小瓶中将中间体O(101mg,0.188mmol)、1-溴-4-碘苯(86mg,0.304mmol)、Siliacat DPP-Pd(72mg,0.018mmol)、碳酸铯(135mg,0.414mmol)在CH3CN(1.9mL)中的混合物在100℃微波处理10分钟。用4mL的EtOAc稀释得到的混合物，用硅藻土过滤，蒸发至干。将残余物照此用于下一步。
步骤II：化合物139
如上所述、使用MeOH/MeONa混合物使来自步骤I的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[3-[4-[3-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯脱保护。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83(d,J＝1.5Hz,2H),7.73(s,4H),7.59(ddd,J＝5.7,3.8,2.0Hz,2H),7.46(dd,J＝4.2,1.6Hz,4H),5.04(d,J＝3.7Hz,2H),4.49(t,J＝3.4Hz,2H),3.85(m,4H),3.75(t,J＝7.8Hz,2H),3.64(dd,J＝7.9,3.1Hz,2H),3.55(ddd,J＝7.8,5.6,4.1Hz,2H).
化合物140的制备(方法A)
2-[2,5-双[3-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]苯基]乙酸甲酯
根据对化合物139所述的方法、但使用2-(2,5-二溴苯基)乙酸甲酯作为原料制备化合物140。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.82(s,1H),7.63-7.56(m,3H),7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.48-7.41(m,4H),7.34-7.30(m,1H),7.23(d,J＝7.5Hz,1H),5.04(d,J＝3.7Hz,1H),5.01(d,J＝3.6Hz,1H),4.49(t,J＝3.5Hz,1H),4.45(t,J＝3.4Hz,1H),3.87-3.81(m,4H),3.78-3.73(m,2H),3.70(s,2H),3.66-3.60(m,2H),3.58(s,3H),3.57-3.49(m,2H).ESI-MS m/z(M+1)+627.4
化合物141的制备(方法F)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-(((2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三((三异丙基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
向小瓶中加入在DMF(2.500mL)中的中间体N(100mg,0.153mmol)、中间体P(113mg,0.168mmol)。将得到的混合物脱气。加入PdCl2(dppf)2-CH2Cl2(15.8mg,0.0193mmol)和CuI(8.7mg,0.046mmol)，再次脱气，然后加入Et3N(64μL,0.46mmol)。封盖小瓶，在90℃搅拌过夜。使该混合物通过硅藻土，减压除去残留溶剂。将粗混合物照此不经进一步纯化用于下一步(201mg,0.163mmol)。
步骤II：三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-((新戊酰氧基)甲基)-6-(4-(((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
向来自步骤I的三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-(((2R,3R,4R,5R,6R)-6-(羟基甲基)-3,4,5-三((三异丙基甲硅烷基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(187mg,0.152mmol)在THF(2.1mL)中的溶液中加入TBAF(607μL的1M,0.607mmol)。将得到的混悬液在RT搅拌过夜。再用THF(1.5mL)稀释，用Amberlyst Ca2+(500mg)和Amberlyst A-15H(500mg)(预洗涤的，H2O和THF)处理。将该混悬液搅拌1.5h，然后过滤，用几部分MeOH洗涤。除去溶剂，将粗混合物不经纯化用于下一步。
步骤III：化合物141
向来自步骤II的三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-((新戊酰氧基)甲基)-6-(4-(((2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)苯基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯在MeOH(2mL)中的粗混合物中加入MeONa(607μL的0.5M,0.304mmol)。将得到的混合物在RT搅拌过夜。加入AcOH(17μL,0.30mmol)，真空浓缩得到的混合物。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(7.6mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51-7.40(m,4H),4.93(d,J＝4.0Hz,1H),4.38-4.29(m,1H),3.98(dd,J＝3.3,2.1Hz,1H),3.91(dd,J＝9.3,3.3Hz,1H),3.88-3.76(m,4H),3.76-3.68(m,J＝5.6,3.4Hz,2H),3.62(t,J＝9.5Hz,1H),3.56(dd,J＝7.7,3.1Hz,1H),3.47(td,J＝6.9,3.5Hz,1H).ESI-MS m/z计算值426.41,测定值(M+1)+427.39
化合物142-145和148的制备
根据对化合物141所述的方法制备化合物142-145、148
化合物146的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-1H-吲哚-6-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
在玻璃小瓶中加入2,5-二碘苯胺(37mg,0.11mmol)和Pd(PPh3)4(12mg,0.011mmol)，封盖小瓶，脱气(真空，然后N2,3x)，加入中间体M的溶液(400μL的0.53M的DMF溶液,0.22mmol)，然后加入DIPEA(300μL,1.72mmol)。再次脱气，转入预热的油浴(60℃)，搅拌过夜。过滤得到的混合物，通过反相HPLC纯化。合并包含期望的物质的级分，冷冻干燥，得到标题化合物(4.2mg,8％收率)，为淡黄色松散固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49-7.42(m,2H),7.09(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),6.42(t,J＝0.9Hz,1H),5.25-5.13(m,1H),4.88(d,J＝2.0Hz,1H),4.50(dd,J＝3.3,2.2Hz,1H),4.07-3.96(m,2H),3.93-3.84(m,3H),3.83-3.71(m,3H),3.71-3.60(m,2H),3.35-3.23(m,1H).ESI-MS m/z计算值465.16348,测定值(M+1)+466.47
化合物150的制备(方法A)
(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-6,6'-(2-氟-3'-甲基-[1,1'-联苯]-4,4'-二基)双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
向2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(4-溴-3-氟-苯基)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(90.2mg,0.134mmol；根据对中间体N所述的方法、但使用1-溴-2-氟-4-碘苯作为原料制备)和中间体R(96.0mg,0.134mmol)在2-甲基THF(2.7mL)中的溶液中依次加入3-(2-二环己基正膦基苯基)-2,4-二甲氧基-苯磺酸(钠盐)(13.8mg,0.0268mmol)、Pd(OAc)2(3.0mg,0.013mmol)(在0.25mL的MeTHF预混合)、K2CO3(335μL的2M,0.669mmol)，将该混合物在40℃搅拌过夜。用AcOEt(10mL)和水(5mL)稀释得到的混合物，分离各层，用10mL的AcOEt反萃取水层。用Na2SO4干燥合并的有机层，浓缩至干。将残余物溶于MeOH(2mL)，加入MeONa(1.0mL的0.5M的MeOH溶液,0.5mmol)，将该混合物在RT搅拌过夜。加入AcOH(30.5μL,0.536mmol)，将该混合物浓缩至干，通过反相制备型HPLC纯化残余物，得到标题化合物(12,4mg,18％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(t,J＝8.1Hz,1H),7.34(m,4H),5.14(d,J＝6.5Hz,1H),4.97(d,J＝4.1Hz,1H),4.37(dd,J＝4.1,3.1Hz,1H),4.26(dd,J＝6.4,3.3Hz,1H),3.99(m,2H),3.83(m,3H),3.75(m,2H),3.57(m,3H),2.49(s,3H).ESI-MS m/z计算值510.51,测定值(M+1)+511.42
化合物147、149和151的制备
根据对化合物150所述的方法制备化合物147、149和151。
化合物152的制备(改进的方法B)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-甲基-4-[2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在玻璃小瓶中加入中间体Q(259mg,0.389mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(33mg,0.040mmol)和CuI(21mg,0.11mmol)，封盖，充N2，加入DMF(2.6mL)、乙炔基(三甲基)硅烷(275μL,1.95mmol)和Et3N(270μL,1.94mmol)。将该反应混合物转入预热的(80℃)油浴，搅拌过夜。将该反应混合物冷却至RT，用EtOAc和饱和NH4Cl水溶液(各10mL)稀释。分离有机层，用饱和NH4Cl水溶液(2x 5mL)、盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，通过使用EtOAc的2g硅胶柱。浓缩滤液，然后用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱纯化，使用EtOAc的Hex溶液梯度0-20％作为洗脱剂。合并期望的级分，浓缩，得到标题化合物(246mg,93％收率)，为黄色泡沫体。
步骤II：(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(4-乙炔基-2-甲基-苯基)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
向来自步骤I的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(244mg,0.355mmol)在MeOH(2.5mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(2.1mL的0.5M,1.1mmol)，将该混合物转入预热的(60℃)油浴。搅拌3h后，将该反应混合物冷却至RT，用预洗涤的Dowex50WX4-400树脂处理，过滤，用几部分MeOH洗涤。浓缩合并的滤液，通过使用bond elut 5g硅胶柱的快速色谱法纯化合并的滤液，使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度0-20％作为洗脱剂。浓缩合并的级分，得到标题化合物(90mg,91％收率)，为琥珀色泡沫状固体。
步骤III：2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-[2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯
在玻璃小瓶中加入(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(4-乙炔基-2-甲基-苯基)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇(35.0mg,0.12mmol)、中间体Q(70.0mg,0.105mmol)、CuI(10mg,0.053mmol)和Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(10mg,0.014mmol)，封盖，充N2，加入DMF(0.7mL)和DIEA(55μL,0.32mmol)。将小瓶脱气，转入预热的油浴(90℃)，搅拌1h，缓慢地冷却至RT，保持过夜。用EtOAc和饱和NH4Cl(各10mL)稀释该反应混合物，过滤。分离各层，用EtOAc(5mL)反萃取水层。用饱和NH4Cl溶液(5mL)、盐水(5mL)洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱纯化粗产物，使用MeOH的CH2Cl2溶液梯度0-20％作为洗脱剂。浓缩合并的级分，得到标题化合物(28mg,31％收率)，为粉红棕色固体。
步骤IV：化合物152
使用步骤II中所述的方案使来自步骤III的2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-[2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙炔基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(28mg,0.32mmol)脱保护，得到标题化合物(17mg,94％收率)，为灰白色松散固体(将粗产物再溶于H2O/MeCN混合物(20％MeCN)和冷冻干燥后)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49(d,J＝8.6Hz,2H),7.34(d,J＝7.2Hz,4H),5.11(d,J＝7.0Hz,2H),4.20(dd,J＝7.0,3.3Hz,2H),4.04(dd,J＝11.9,7.4Hz,2H),3.99(dd,J＝5.5,3.3Hz,2H),3.85(dd,J＝5.5,4.3Hz,2H),3.75(dd,J＝11.9,3.8Hz,2H),3.66-3.57(m,2H),2.46(s,6H).ESI-MS m/z计算值530.2152,测定值531.55(M+1)+
化合物155的制备(方法A)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-甲基-4-[2-甲基-6-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]-3-吡啶基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-2-甲基苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
向5ml微波小瓶中加入在CH3CN(2.0mL)中的中间体R(150mg,0.209mmol)、3,6-二溴-2-甲基-吡啶(43.8mg,0.174mmol)、Siliacat DPP-Pd(70mg,0.017mmol)和Cs2CO3(171mg,0.523mmol)。在氮气气氛中封盖小瓶，在130℃在微波中照射30min。用EtOAc稀释该反应混合物，通过500mg硅胶柱，用EtOAc洗脱。减压浓缩得到的混合物，将残余物(159mg)照此用于下一步。
根据对中间体B和N所述的方法制备2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯。
步骤II：
向5ml微波小瓶中加入2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-[4-(5-溴-6-甲基-2-吡啶基)-2-甲基-苯基]-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(130mg,0.1709mmol)、中间体R(123mg,0.171mmol)、Siliacat DPP-Pd(68.4mg,0.0171mmol)和Cs2CO3(167.0mg,0.513mmol)在CH3CN(2.7mL)中的粗混合物。在氮气气氛中封盖小瓶，在130℃在微波中照射30min。用EtOAc稀释该反应混合物，通过500mg硅胶柱，用EtOAc洗脱。减压浓缩得到残留的混合物，得到标题化合物的粗混合物，照此用于下一步。
步骤III：化合物155
将残余物溶于MeOH(1.30mL)。将MeONa(46.2mg,0.855mmol)加入到该溶液中，将后者在RT搅拌48h。将AcOH(58μL,1.03mmol)加入到该混合物中，减压除去溶剂。然后通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(12.6mg,12％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.72(m,J＝8.2Hz,2H),7.66(dd,J＝18.0,8.1Hz,2H),7.58(dd,J＝7.9,5.3Hz,2H),7.26-7.18(m,2H),5.16(d,J＝6.7Hz,2H),4.27(dd,J＝6.6,2.8Hz,2H),4.07-3.92(m,4H),3.89-3.81(m,2H),3.76(dt,J＝11.9,3.5Hz,2H),3.65-3.53(m,J＝11.1,8.0,4.0Hz,2H),2.54(s,3H),2.52(s,3H),2.51(s,3H).LC-MS：m/z＝598.59(M+H+).
化合物153、154和157的制备
根据对化合物155所述的方法制备化合物153、154和157。
化合物156的制备
2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[4-[2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]环丙基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
步骤I：(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-((E)-2-(6-甲基-4,8-二氧代-1,3,6,2-二氧杂氮杂硼己环(borocan)-2-基)乙烯基)苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三(2,2-二甲基丙酸酯)
在氮气气氛中向包含乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(200mg,0.374mmol)、2-[(E)-2-溴乙烯基]-6-甲基-1,3,6,2-二氧杂氮杂硼己环-4,8-二酮(118mg,0.449mmol)的小瓶中加入C34H28Cl2FeP2Pd(27.4mg,0.0374mmol)和K3PO4(238.4mg,1.123mmol)。加入CH3CN(5.5mL)，密封小瓶，在RT搅拌3天。使该化合物通过硅胶垫，除去溶剂，得到标题化合物的粗混合物(104mg,0.1765mmol)，照此用于下一步。
步骤II：三(2,2-二甲基丙酸)(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(4-((E)-3-甲基-4-((2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(新戊酰氧基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)苯乙烯基)苯基)-6-((新戊酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯
在氮气气氛中向包含2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-6-(4-溴-2-甲基-苯基)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)四氢吡喃-2-基]甲酯(119.0mg,0.1777mmol)、乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[4-[(E)-2-(6-甲基-4,8-二氧代-1,3,6,2-二氧杂氮杂硼己环-2-基)乙烯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(104.7mg,0.1777mmol)、C34H28Cl2FeP2Pd(130.0mg,0.1777mmol)、K3PO4(113.2mg,0.5331mmol)的小瓶中加入CH3CN(1.2mL)和水(251μL)。密封小瓶，在RT搅拌24h。使该化合物通过硅胶垫，除去溶剂(CH2Cl2和EtOAc)，使用(0-80％)EtOAc的Hex溶液作为溶剂纯化残余物，得到标题化合物(46.5mg,26％)。
步骤III：[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[4-[(E)-2-[3-甲基-4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙烯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲基2,2-二甲基丙酸酯
在0℃向2,2-二甲基丙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-[(E)-2-[4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙烯基]苯基]四氢吡喃-2-基]甲酯(46.0mg,0.0450mmol)和乙酸钯(3.0mg,0.014mmol)在CH2Cl2(1.2mL)中的溶液中滴加重氮甲烷溶液(9.0mL的0.5M,4.5mmol)，将该溶液搅拌至完全转化。LCMS显示完全转化成产物。用硅藻土过滤得到的混合物，减压浓缩，得到标题化合物的粗混合物，照此用于下一步。
步骤IV：化合物156
用MeOH(1.4mL)稀释残余物，加入MeONa(540μL的0.5M,0.270mmol)。将该溶液在RT搅拌72h。加入AcOH(13μL,0.23mmol)，减压除去挥发性物质，通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(4.2mg,17％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.34(dd,J＝18.6,8.3Hz,3H),7.14(d,J＝8.3Hz,2H),7.01-6.86(m,J＝5.1Hz,2H),5.06(d,J＝6.0Hz,1H),4.94(d,J＝3.2Hz,1H),4.42(t,J＝3.2Hz,1H),4.24(dd,J＝5.8,3.2Hz,1H),4.01-3.86(m,J＝18.7,9.0,5.0Hz,2H),3.79(t,J＝4.6Hz,3H),3.77-3.67(m,J＝16.5,5.9Hz,2H),3.56(dd,J＝8.3,3.1Hz,1H),3.50-3.37(m,2H),2.41(s,3H),2.17-2.01(m,J＝14.5,6.6Hz,2H),1.52-1.29(m,2H).LC-MS：m/z＝533.52(M+H+).
化合物158的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[3-苄基-4-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]苯基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对59所述的方法制备化合物158。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.46(d,J＝7.9Hz,1H),7.36-7.24(m,4H),7.22-7.14(m,3H),4.94-4.87(m,1H),4.85(d,J＝1.9Hz,1H),4.14(s,2H),4.00-3.97(m,1H),3.97-3.94(m,1H),3.92-3.68(m,8H),3.65(d,J＝8.5Hz,1H),3.60(d,J＝9.3Hz,1H).LC-MS：m/z(M+H)+＝541.5
化合物159的制备(方法B)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-甲基-4-[(E)-2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]乙烯基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对156所述的方法制备化合物159。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.37(d,J＝10.8Hz,4H),7.11(s,2H),5.09(d,J＝6.2Hz,2H),4.24(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H),4.04-3.92(m,J＝11.9,7.5Hz,4H),3.82(t,J＝5.4Hz,2H),3.74(dd,J＝11.9,3.6Hz,2H),3.58-3.50(m,2H),2.46(s,6H).
化合物160的制备(方法B)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-甲基-4-[2-[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]环丙基]苯基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对156所述的方法制备化合物160。(400MHz,CD3OD)δ7.37-7.27(m,J＝8.6Hz,2H),6.99-6.89(m,J＝4.7Hz,4H),5.06(d,J＝5.9Hz,2H),4.24(dd,J＝5.8,3.3Hz,2H),4.01-3.87(m,J＝18.7,9.0,5.1Hz,4H),3.79(t,J＝5.8Hz,2H),3.73(dd,J＝11.8,3.6Hz,2H),3.49-3.41(m,2H),2.41(s,6H),2.12-2.02(m,J＝7.3Hz,2H),1.44-1.34(m,2H).
化合物162的制备(方法D)
(2R,2'R,3S,3'S,4R,4'R,5S,5'S,6R,6'R)-6,6'-((2',3',5',6'-四氢螺[芴-9,4'-吡喃]-2,7-二基)双(乙炔-2,1-二基))双(2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇)
步骤I：粗化合物162
通过使氮气在反应混合物中起泡将2,7-二溴螺[芴-9,4'-四氢吡喃](12.00g,30.45mmol)和中间体M(16.02g,85.14mmol)在DMF(168.0mL)中的混合物脱气5分钟。加入Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(1.680g,2.296mmol)和CuI(1.685g,8.849mmol)，使氮气在反应混合物中再次起泡5分钟。然后加入二异丙基乙胺(42.0mL,241mmol)，将最终混合物在氮气气氛中在100℃搅拌1h。将得到的反应混合物冷却至35℃，滴加水(336.0mL)。将得到的深红色混合物在RT搅拌过夜，过滤得到的沉淀(ML1)，用100mL水洗涤。将得到的粗橙色固体转入250mlRBF，在60mL的乙醇中研磨30分钟。通过过滤分离得到的固体，在真空烘箱中在45℃干燥过夜。为了进一步纯化标题化合物，将后者全乙酰化(步骤2)，进行快速色谱，脱-乙酰化(步骤3)。
步骤II：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[7-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-四氢吡喃]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯.
向来自步骤1的粗固体(13.77g)中加入DMAP(276mg,2.26mmol)和吡啶(69mL)。用冰/水浴将得到的混合物(棕色混悬液)冷却至0℃，在10分钟内滴加Ac2O(25.6mL,271mmol)，保持温度低于20℃。然后将该反应混合物在RT搅拌1h。用CH2Cl2(100mL)和水(75mL)稀释得到的深棕色溶液，搅拌15min，然后加入2N HCl(～475mL)，使用冰/水浴搅拌5min以控制放热。分离水溶液，用CH2Cl2(2x 75mL)反萃取，再用2N HCl(75mL,加入盐水以有助于分离)洗涤合并的有机萃取物1次，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到20.78g橙色玻璃状固体。将该固体溶于少量CH2Cl2，吸附在75mL硅胶上，使用BiotageTMSNAP 340g硅胶柱、使用Hex/EtOAC梯度(100％Hex 1CV,0-85％EA/hex16CV,85％EA/hex 4CV)纯化。合并包含期望的化合物的级分，用4.5gThiol在RT处理过夜，以除去痕量的钯。过滤得到的混合物，浓缩至干，得到16.87g标题化合物。
步骤III：化合物162
将来自步骤II的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[7-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-四氢吡喃]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯(15.37g,16.27mmol)溶于MeOH(344mL)，加入MeONa(290μL的25％w/w,1.30mmol的MeOH溶液)。最终达到的pH为9。将该反应体系在RT搅拌18h。过滤得到的混悬液(白色固体)，用8个体积的MeOH洗涤固体。将白色固体在真空烘箱中在40℃干燥过夜，得到标题化合物，为黄褐色固体(9.38g,15.03mmol)，其包含1.6％的单-乙酸酯杂质。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(d,J＝7.9Hz,2H),7.88(d,J＝1.4Hz,2H),7.50(dd,J＝7.8,1.3Hz,2H),4.98(d,J＝4.3Hz,2H),4.81(d,J＝5.9Hz,2H),4.78-4.67(m,4H),4.50(t,J＝6.0Hz,2H),4.09(q,J＝5.2Hz,0H),4.00(dd,J＝7.1,3.8Hz,4H),3.89-3.80(m,2H),3.80-3.65(m,4H),3.60(ddd,J＝8.8,6.3,2.0Hz,2H),3.48(dt,J＝12.0,6.2Hz,2H),3.40(td,J＝9.3,5.9Hz,2H),3.16(d,J＝5.3Hz,0H),2.03(s,0H),1.81(dd,J＝7.3,3.8Hz,4H).LC-MS：m/z＝609.57(M+H)+
化合物161、162和164的制备
根据对120所述的方法、使用商购二溴芴衍生物制备化合物161、162和164。
化合物165-170的制备
根据对113所述的方法、使用适合的中间体制备化合物165-170。
化合物171的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-1H-吲唑-4-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
向反应试管中加入商购4,7-二溴-1H-吲唑(35.0mg,0.127mmol)和Pd(PPh3)4(18.0mg,0.0156mmol)，封盖，脱气(真空，然后氮气流，2次)，加入作为在DMF中的溶液的中间体M(500μL的0.53M,0.265mmol以及DIPEA(500μL)。再次给反应试管脱气，转入预热的(80℃)油浴，搅拌48h。冷却至RT后，使该反应混合物通过200mg Si-DMT柱，用几部分MeOH冲洗，通过反相HPLC纯化。冷冻干燥级分，得到标题化合物(12.6mg,20％收率)，为松散白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),5.02(d,J＝2.1Hz,1H),5.00(d,J＝2.0Hz,1H),4.16-4.08(m,2H),4.04-3.83(m,6H),3.82-3.72(m,2H),3.71-3.59(m,2H).ESI-MS m/z：491.44(M+1)+
化合物172的制备：
1,4-双[3-甲基-4-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]哌嗪-2,5-二酮
步骤I：[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-[2-甲基-4-[4-[3-甲基-4-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三(2,2-二甲基丙酰氧基)-6-(2,2-二甲基丙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]苯基]-2,5-二氧代-哌嗪-1-基]苯基]四氢吡喃-2-基]
向反应试管中加入中间体Q(213mg,0.318mmol)、哌嗪-2,5-二酮(12.6mg,0.110mmol)、CuI(7.8mg,0.0410mmol)和K2CO3(50.0mg,0.362mmol)，封盖，脱气(真空，然后氮气流，3x)，加入脱气的DMF(1mL)，然后加入N,N'-二甲基乙-1,2-二胺(8.0μL,0.075mmol)。再次给反应试管脱气，转入预热的(110℃)油浴，搅拌过夜。将该反应混合物冷却至RT，用EtOAc(5mL)稀释，依次用饱和NH4Cl水溶液(2x5mL)、H2O(2mL)、盐水(2mL)洗涤，用Na2SO4干燥，使用EtOAc通过500mg硅胶柱。浓缩滤液，然后通过快速色谱法纯化，其中使用BiotageTMSNAP 10g硅胶柱，应用EtOAc的Hex溶液梯度0-100％作为洗脱剂。合并级分，浓缩，得到标题化合物(40mg,28％收率)，为白色结晶固体。
步骤II：化合物172
向来自上述步骤I的中间体(38.0mg,0.0294mmol)在MeOH(1.4mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(90μL的0.5M,0.0450mmol)。将该反应混合物在60℃搅拌4h，然后通过预洗涤的(MeOH)1g SCX-2柱，用几部分MeOH(3x 1mL)洗涤。浓缩合并的滤液，再溶于H2O/MeCN混合物(20％MeCN)，冷冻干燥，得到标题化合物(19mg,96％收率)，为松散白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.60(d,J＝9.1Hz,2H),7.30-7.21(m,4H),5.12(d,J＝7.0Hz,2H),4.52(s,4H),4.20(dd,J＝7.0,3.2Hz,2H),4.05(dd,J＝11.9,7.4Hz,2H),4.00(dd,J＝5.4,3.3Hz,2H),3.88-3.81(m,2H),3.75(dd,J＝11.9,3.8Hz,2H),3.63(dt,J＝7.6,3.9Hz,2H),2.50(s,6H).ESI-MS m/z：619.6(M+1)+
化合物173和174的制备
根据对59所述的方法、使用商购原料制备化合物173和174。将反应混合物在100℃搅拌1h。
化合物175的制备(方法D)
2-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-9-基]乙酸乙酯
步骤I：化合物175
将中间体AG1(200mg,0.49mmol)和M(1.96mL的0.53M,1.036mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(26.2mg,0.032mmol)、CuI(27.8mg,0.146mmol)在DMF(800.0μL)在的混合物脱气(真空/N2)。向得到的混合物中加入DIPEA(678μL,3.89mmol)，脱气。将该反应混合物在100℃在N2气氛中加热2h 45min，高度真空浓缩，溶于DMSO(1.5mL)，加载到C18Samplet。用50g C-18硅胶柱、应用IsoleraTM纯化系统与CH3CN水溶液梯度(10％-45％,12.5CV)作为洗脱剂纯化残余物，浓缩后得到标题化合物(140mg,42％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.57(s,2H),7.32(dd,J＝8.1,1.2Hz,2H),5.20(s,2H),4.89(d,J＝2.1Hz,2H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(dd,J＝3.2,2.2Hz,2H),3.98(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.91-3.84(m,4H),3.78-3.71(m,2H),3.64(t,J＝9.5Hz,2H),1.24(t,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z计算值625.21594,测定值626.56(M+1)+.
化合物176的制备(方法D)
2-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-9-基]乙酸
步骤I：化合物176
向2-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-9-基]乙酸乙酯(化合物175,140mg,0.205mmol)在EtOH(2mL)和H2O(1.5mL)中的混合物中加入NaOH水溶液(250μL的10％w/v,0.6250mmol)。将最终混合物在密封试管中在80℃加热1h(LC-MS显示澄清产物)。用DOWEX 50WX4氢型树脂使反应混合物猝灭，直到pH 4-5，形成凝胶，用水-甲醇(10mL)稀释至凝胶溶解，过滤出来，浓缩，溶于水和CH3CN，冻干，得到标题化合物(112mg,88.7％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.04(d,J＝8.1Hz,2H),7.56(s,2H),7.29(d,J＝8.1Hz,2H),4.06-3.96(m,4H),3.92-3.82(m,4H),3.80-3.70(m,2H),3.64(t,J＝9.3Hz,2H),2.64(s,4H).(C1-H质子在水峰下面).ESI-MS m/z计算值597.18463,测定值598.59(M+1)+.
化合物177的制备(方法D)
2-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-9-基]-N-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]乙酰胺
向搅拌的2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙胺(7.7mg,0.054mmol)和Et3N(20μL)在DMF(0.3mL)中的溶液中加入化合物176和HATU(23mg,0.061mmol)在DMF(0.4mL)中的预混合溶液。将反应混合物在RT搅拌3h，通过反相HPLC直接纯化该混合物，得到标题化合物(16mg,40％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.38(brs,1H),8.11(d,J＝8.1Hz,2H),7.63(s,2H),7.36(dd,J＝8.1,1.2Hz,2H),5.04(s,2H),4.90(d,J＝2.1Hz,2H),4.03(dd,J＝3.2,2.2Hz,2H),3.96(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.91-3.81(m,4H),3.73(dd,J＝11.3,5.8Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.64(s,3H),2.46(t,J＝6.0Hz,2H).1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.17(d,J＝8.1Hz,2H),8.08(t,J＝5.6Hz,1H),7.64(s,2H),7.30-7.25(m,2H),5.06(s,2H),4.76(d,J＝2.0Hz,2H),3.83(s,2H),3.77-3.65(m,4H),3.63-3.55(m,2H),3.46(dd,J＝11.7,6.2Hz,2H),3.39(t,J＝9.3Hz,2H),3.16(dd,J＝12.1,6.2Hz,2H),2.40-2.16(m,10H),2.11(s,3H).ESI-MS m/z计算值722.3163,测定值723.71(M+1)+.
化合物178-181的制备.
根据对177所述的方法、使用适合的商购原料制备化合物178-181。
化合物182的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[9-(2-羟基乙基)-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-2-基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
将中间体AG2(60mg,0.15mmol)和M(588μL的0.53M,0.311mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(7.9mg,0.01mmol)、CuI(8.4mg,0.044mmol)在DMF(215μL)中的混合物脱气(真空/N2)。向得到的混合物中加入DIPEA(204μL,1.17mmol)，脱气。将该反应混合物在100℃在N2气氛中加热2h，通过金属-清除剂柱(Si-DMT；Silicycle；SPE-R79030B-06P)，用DMF(0.5mL)洗涤。高度真空浓缩得到的滤液，溶于DMSO，通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(24mg,28％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.1Hz,2H),7.68(s,2H),7.29(d,J＝8.1Hz,2H),4.91-4.89(m,2H),4.45(t,J＝5.4Hz,2H),4.06-4.02(m,2H),3.99(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.94-3.84(m,6H),3.79-3.71(m,2H),3.65(t,J＝9.4Hz,2H).ESI-MS m/z计算值583.2054,测定值584.54(M+1)+.
化合物183的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[9-[2-(三氘代甲氧基)乙基]-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG3(63mg,0.15mmol)和M(590.0μL的0.53M,0.313mmol)制备化合物183。通过反相HPLC纯化后，经过滤分离标题化合物，为白色固体，此时其从溶液中析出(16.7mg,19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.15(d,J＝8.1Hz,2H),7.72(s,2H),7.26(d,J＝8.1Hz,2H),4.96(d,J＝4.3Hz,2H),4.82(d,J＝5.7Hz,2H),4.76(s,2H),4.72(d,J＝5.9Hz,2H),4.58(s,2H),4.50(t,J＝5.9Hz,2H),3.84(s,2H),3.79-3.55(m,8H),3.52-3.34(m,4H).ESI-MS m/z计算值600.23987,测定值(M+1)+601.58.
化合物184的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[9-四氢吡喃-4-基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]咔唑-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
将中间体M(889μL的0.53M的DMF溶液,0.47mmol)和AG34(90mg,0.22mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(13mg,0.016mmol)、CuI(13mg,0.068mmol)的混合物脱气(真空/N2)。向得到的混合物加入DIPEA(320μL,1.84mmol)。将最终混合物在密封试管中在N2气氛中在100℃搅拌2h。冷却该反应体系，用SiliCycle SiliaPrep DMT 200mg 3mL SPE柱过滤，真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物(15mg,11％)，为固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.79(s,2H),7.30(dd,J＝8.0,1.1Hz,2H),4.91(d,J＝2.1Hz,2H),4.22-4.10(m,2H),4.05(dd,J＝3.2,2.1Hz,2H),3.99(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.93-3.82(m,4H),3.81-3.60(m,7H),2.68(qd,J＝12.6,4.7Hz,2H),1.83(dd,J＝11.8,3.6Hz,2H).ESI-MS m/z计算值623.65,测定值624.56(M+1)+
化合物185-190的制备
根据对184所述的方法、使用中间体AG35-AG40制备化合物185-190。
化合物191的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[7'-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[1,3-二噻烷-2,9'-芴]-2'-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇.
步骤I：2',7'-二溴螺[1,3-二噻烷-2,9'-芴]
在RT在氩气气氛中向2,7-二溴芴-9-酮(1000mg,2.959mmol)在CH2Cl2(9.863mL)中的溶液中加入丙-1,3-二硫醇(446μL,4.44mmol)，然后加入BF3.OEt2(548μL,4.44mmol)。将得到的混合物在RT搅拌1h，然后温至60℃过夜。通过倾入饱和Na2CO3水溶液使该反应混合物猝灭，用EtOAc萃取。用Na2SO4干燥合并的有机萃取物，过滤，浓缩。在浓缩过程中，沉淀形成，通过过滤分离，得到标题化合物(0.937g,2.188mmol,73.95％)。LC-MS：m/z＝428.13(M+H+).
步骤II：化合物191
向来自步骤I的脱气的中间体M(925μL的0.53M,0.490mmol)、2',7'-二溴螺[1,3-二噻烷-2,9'-芴](100mg,0.2335mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(19.07mg,0.02335mmol)、CuI(13.34mg,0.07005mmol)在DMF(778.3μL)中的混合物中加入DIPEA(122μL,0.701mmol)。将该混合物在密封试管中在氮气气氛中在90℃搅拌过夜。用硅藻土柱过滤该反应混合物，真空浓缩。通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(37.2mg,25％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.95(s,2H),7.78(d,J＝7.9Hz,2H),7.53(dd,J＝7.9Hz,2H),4.90(d,J＝1.9Hz,3H),4.04(t,2H),3.96(dd,J＝9.4,3.2Hz,2H),3.90(d,J＝2.0Hz,1H),3.89-3.80(m,3H),3.74(dd,J＝11.4,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.38-2.28(m,2H).LC-MS：m/z＝643.51(M+H+).
化合物192的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG4(45mg,0.08940mmol)和M(360μL的0.53M,0.1908mmol)制备化合物192。将一半得到的粗混合物溶于DMSO(1mL)，通过反相HPLC纯化。将2滴氨加入到合并的级分中(pH 6-7)，然后冻干(2次)，得到标题化合物(11.8mg,43％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.85(d,J＝7.9Hz,2H),7.82(s,2H),7.55(d,J＝7.9Hz,2H),4.89(d,J＝2.1Hz,2H),4.05-3.98(m,2H),3.93(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.89-3.79(m,4H),3.74(dd,J＝11.4,5.8Hz,2H),3.67-3.57(m,6H),2.11-2.03(m,4H).ESI-MS m/z计算值607.24176,测定值608.58(M+1)+.
化合物193的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[9,9-双(2-羟基乙基)-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-2-基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG6(40mg,0.097mmol)和M(390μL的0.53M,0.207mmol)制备化合物193。得到标题化合物(24mg,40％)，冻干后为白色固体。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.75(d,J＝7.9Hz,2H),7.60(d,J＝0.7Hz,2H),7.47(dd,J＝7.9,1.4Hz,2H),4.88(d,J＝2.3Hz,2H),4.02(dd,J＝3.2,2.2Hz,2H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.91-3.80(m,4H),3.74(dd,J＝11.4,5.5Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.82-2.70(m,4H),2.39-2.29(m,4H).ESI-MS m/z计算值626.2363,测定值627.54(M+1)+.
化合物194的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[(3R,4S)-3,4-二羟基-7'-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[环戊烷-1,9'-芴]-2'-基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG7(41mg,0.01mmol)和M(400μL的0.53M,0.213mmol)制备化合物194。通过反相HPLC纯化，然后冻干，得到标题化合物(31mg,50％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.95(s,1H),7.72-7.64(m,2H),7.52(s,1H),7.46-7.38(m,2H),4.53-4.41(m,2H),4.06-3.98(m,2H),3.99-3.92(m,2H),3.91-3.78(m,4H),3.74(dd,J＝11.3,5.3Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.32-2.11(m,4H).[C-1糖的2个质子与溶剂峰重叠)。ESI-MS m/z计算值624.2207,测定值625.53(M+1)+.
化合物195-199的制备
根据对化合物182所述的方法、但使用适合的商购原料(对于化合物195)和中间体AG27-AG29(分别对于化合物196-199)制备化合物195-199。
化合物200的制备(方法D)
2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG5(42.0mg,0.0850mmol)、M(400μL的0.53M,0.2130mmol)制备化合物200。密封该反应混合物，在100℃在N2气氛中加热2h。通过反相HPLC纯化，然后冻干，得到标题化合物(11mg,18％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.75(m,4H),7.49(d,J＝7.8Hz,2H),4.02(d,J＝2.4Hz,2H),3.95(dd,J＝9.4,3.1Hz,2H),3.92-3.79(m,8H),3.73(dd,J＝11.4,5.5Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),1.83(s,4H),1.52(s,9H).(C-1糖的2个质子在溶剂峰下面)。ESI-MS m/z计算值707.2942,测定值708.22(M+1)+.
化合物201的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[1'-甲基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG14制备化合物201。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.88-7.80(m,4H),7.54(d,J＝7.9Hz,2H),4.04-4.00(m,2H),3.93(dd,J＝9.4,3.2Hz,2H),3.91-3.80(m,4H),3.74(dd,J＝11.4,5.7Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),3.52-3.44(m,4H),3.00(s,3H),2.20-1.98(m,4H).(C-1糖的2个质子在溶剂峰下面)。ESI-MS m/z(M+H)+622.59
化合物202的制备(方法D)
1-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基]乙酮
将中间体M(340μL的0.53M,0.1802mmol)、AG8(35mg,0.080mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(4.3mg,0.0053mmol)、CuI(4.6mg,0.024mmol)在DMF(140μL)中的混合物脱气(真空/N2)。向其中加入DIPEA(112μL,0.6430mmol)，脱气。将该反应混合物在100℃加热2h，再加入一定量的中间体M(152μL的0.53M,0.080mmol)，将得到的混合物在N2气氛中再加热2.5h。将该反应混合物冷却至RT，通过金属清除剂(Si-DMT；Silicycle；SPE-R79030B-06P)柱过滤，用DMF(1mL)洗涤。直接通过反相HPLC纯化滤液，得到标题化合物(42mg,80％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.82-7.78(m,4H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),4.05-3.98(m,4H),3.98-3.91(m,4H),3.91-3.79(m,4H),3.73(dd,J＝11.4,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.25-2.19(m,3H),1.98-1.89(m,2H),1.88-1.80(m,2H)(C-1糖的2个质子在溶剂峰下面)。ESI-MS m/z计算值649.2523,测定值650.6(M+1)+.
化合物202的可选制备
1-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基]乙酮
步骤I：粗化合物202
将中间体M(12.8mL的0.468M,5.99mmol)、AG8,(875mg,1.999mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(98mg,0.12mmol)、CuI(114mg,0.6mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物脱气(真空/N2气流2次，各5min)。加入DIPEA(2.80mL,16.1mmol)，将该混合物脱气2次。将最终反应混合物在100℃加热2h(1h后LC-MS显示AG8完全转化)，冷却至RT，在40℃真空浓缩，得到标题化合物，为深棕色油状物。
步骤II：乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[1'-乙酰基-7-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯
向在RT的来自步骤I的粗化合物202在吡啶(9mL)中的搅拌的溶液中依次加入在RT的DMAP(12mg,0.098mmol)和乙酐(3.8mL,40.3mmol)。将该混合物搅拌16h，用水(40mL)稀释，用EtOAc(3x 30mL)萃取。用1N HCl水溶液(3x 20mL)、盐水洗涤合并的萃取物，通过相分离器，浓缩。用BiotageTMSNAP硅胶柱(100g)纯化残余物，用EtOAC的Hex溶液梯度(10％-20％,8CV；和100％)作为洗脱剂洗脱，得到标题化合物(1.690g,86％)，为黄褐色泡沫体。向后者在EtOAc中的搅拌的溶液(10mL)中加入300mg SiliaMetS Thiol(来自Silicycle的Cat#R51030B)(1.42mmol/g)，将该混合物在RT搅拌3h，过滤，用EtOAc(15mL)洗涤，浓缩。用SiliaMetS Thio将滤液再处理1次，得到标题化合物(1.600g)。
步骤III：化合物202
向搅拌的来自步骤II的乙酸[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[2-[1'-乙酰基-7-[2-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-2-基]甲酯(1.600g)在MeOH(15mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(400μL的0.5M,0.200mmol)。将该混合物在RT搅拌7h，用AcOH(20μL,0.36mmol)猝灭。搅拌15min后，过滤得到的固体，用MeOH(10mL)洗涤，在40℃在真空烘箱中干燥40h，得到标题化合物(0.870g,来自步骤I的总收率为65％)，为灰白色固体。
化合物203-205的制备
根据对化合物182所述的方法、但分别使用中间体AG42、AG43和AG44制备化合物203、204和205。
化合物206的制备(方法D)
1-[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基]-2-羟基-2-甲基-丙-1-酮
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体M(275μL的0.53M,0.15mmol)和AG9(34mg,0.0622mmol)制备化合物206。将该反应混合物在100℃在N2气氛中加热2h，再加入一定量的中间体M(120μL的0.53M,0.064mmol)以使反应完成。将该反应混合物在100℃搅拌2h。通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(11mg,23％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.78(m,4H),7.50(dd,J＝7.8,1.3Hz,2H),4.03-4.00(m,2H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.90-3.80(m,4H),3.73(dd,J＝11.4,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),1.95-1.82(m,4H),1.51(s,6H).6个质子在溶剂峰下面。ESI-MS m/z计算值693.2785,测定值694.58(M+1)+.
化合物207的制备(方法D)
2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-甲酸甲酯
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体M(375μL的0.53M,0.199mmol)和AG10(40mg,0.08405mmol)制备化合物207。将该反应混合物在100℃在N2气氛中加热2h，再加入一定量的中间体M(160μL的0.53M,0.08480mmol)以使反应完成。将该反应混合物在100℃搅拌2h。通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(31mg,54％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.82-7.77(m,4H),7.49(dd,J＝7.9,1.0Hz,2H),4.03-4.00(m,2H),3.95(dd,J＝9.4,3.3Hz,2H),3.93-3.80(m,8H),3.76(s,3H),3.73(dd,J＝11.4,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),1.89-1.79(m,4H).C-1糖的2个质子在溶剂峰下面。ESI-MS m/z计算值665.24725,测定值666.57(M+1)+.
化合物208和209的制备
根据对化合物207所述的方法、但使用如中间体AG10中所述制备的适合的中间体制备化合物208和209。
化合物210的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[1'-甲基磺酰基-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-2-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体M(350μL的0.53M,0.186mmol)和AG11(40mg,0.08mmol)制备化合物210。将该反应混合物在100℃在N2气氛中搅拌2h，然后再加入一定量的中间体M(150μL的0.53M,0.08mmol)，将最终混合物在100℃搅拌2h。通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(23mg,41％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.85-7.77(m,4H),7.51(d,J＝9.1Hz,2H),4.02(dd,J＝3.2,2.2Hz,2H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.90-3.81(m,4H),3.76-3.66(m,6H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),3.06(s,3H),2.03-1.95(m,4H).C-1糖的2个质子在溶剂峰下面。ESI-MS m/z计算值685.2193,测定值686.55(M+1)+.
化合物211的制备(方法D)
乙酸[9-(乙酰氧基甲基)-2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-9-基]甲酯
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体M(1mL的0.53M,0.53mmol)和AG12(80mg,0.17mmol)制备化合物211。通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(36mg,29％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.82(d,J＝7.9Hz,2H),7.71(s,2H),7.55(d,J＝7.9Hz,2H),4.88(d,J＝2.1Hz,2H),4.40(s,4H),4.02(dd,J＝3.2,2.2Hz,2H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.90-3.80(m,4H),3.73(dd,J＝11.4,5.5Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),1.98(s,6H).ESI-MS m/z计算值682.22614,测定值683.22(M+1)+.
化合物212的制备(方法D)
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-(羟基甲基)-6-[2-[7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]-1H-吲唑-5-基]乙炔基]四氢吡喃-3,4,5-三醇
向反应试管中加入按照PCT国际申请2007117465中所述制备的5-溴-7-碘-1H-吲唑(45.0mg,0.139mmol)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(6.0mg,0.0082mmol)和CuI(6.0mg,0.032mmol)，封盖，脱气(真空，然后氮气流，2x)，加入作为在DMF中的溶液的中间体M(500μL的0.53M,0.265mmol)以及DIPEA(400μL)。再次给反应试管脱气，转入预热的(80℃)油浴，搅拌过夜。冷却至RT后，使该反应混合物通过200mg Si-DMT柱，用几部分MeOH冲洗，通过反相HPLC纯化。合并级分，冷冻干燥，得到标题化合物(18.2mg,27％收率)，为松散白色固体。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.14(s,1H),7.97(d,J＝1.3Hz,1H),7.60(d,J＝1.2Hz,1H),5.01(d,J＝2.1Hz,1H),4.93-4.78(m,1H),4.16-4.09(m,1H),4.06-4.01(m,1H),4.01-3.81(m,6H),3.80-3.70(m,2H),3.69-3.58(m,2H).ESI-MS m/z：491.44(M+1)+
化合物213-216的制备
根据对化合物182所述的方法、但分别使用中间体AG30-AG33制备化合物213-216。
化合物217的制备
(2R,3S,4R,5S,6R)-2-[2-[9,9-双(羟基甲基)-7-[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-2-基]乙炔基]-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇
向搅拌的化合物214(23mg,0.03201mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中加入MeONa的MeOH溶液(100μL的0.5M,0.05mmol)，将反应混合物在RT搅拌过夜，用DOWEX 50WX4氢型树脂猝灭，直到pH 4-5，过滤，浓缩，得到标题化合物(15mg,68％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.77(d,J＝7.9Hz,2H),7.72(s,2H),7.49(dd,J＝7.9,1.3Hz,2H),4.03-3.99(m,2H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.90-3.80(m,8H),3.73(dd,J＝11.3,5.4Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),C-1糖的2个质子在溶剂峰下面。ESI-MS m/z计算值598.205,测定值599.53(M+1)+
化合物218的制备(方法D)
2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,5'-氧杂环丁烷]-2'-酮
根据对化合物182所述的方法、但使用中间体AG13制备化合物218。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.90(s,1H),7.84-7.75(m,2H),7.60-7.46(m,3H),4.81-4.70(m,1H),4.04-4.00(m,2H),3.99-3.93(m,2H),3.91-3.81(m,4H),3.73(dd,J＝11.2,5.4Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),3.21-3.12(m,1H),2.85-2.74(m,1H),2.44-1.94(m,4H),1.44-1.34(m,1H).C-1糖质子在溶剂峰下。ESI-MS m/z计算值637.27(M+H)+.
化合物219的制备
3-[9-(2-羟基乙基)-2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]芴-9-基]丙酸
向化合物218(0.075mmol)在1,4-二噁烷(0.5mL)中的混悬液中加入LiOH水溶液(100μL的1M,0.100mmol)。将得到的反应混合物在RT搅拌5h，用AcOH(20μL)猝灭，通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(7mg,14％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.77(d,J＝7.9Hz,2H),7.58(s,2H),7.49(d,J＝7.9Hz,2H),4.04-4.00(m,2H),3.96(dd,J＝9.3,3.1Hz,2H),3.91-3.81(m,4H),3.73(dd,J＝11.3,5.4Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.84-2.73(m,2H),2.46-2.29(m,4H),1.48-1.34(m,2H).C-1糖质子在溶剂峰下.ESI-MS m/z计算值655.21(M+H)+.
化合物220的制备(方法D)
[2,7-双[2-[(2R,3S,4R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]乙炔基]螺[芴-9,4'-哌啶]-1'-基]-环丙基-甲酮.
步骤I：粗化合物192
将中间体AG4(84mg,0.186mmol)、M(1.1mL的0.53M,0.583mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(10.0mg,0.0123mmol)、CuI(11mg,0.058mmol)在DMF(320μL)中的混合物脱气(真空/N2)。向该反应混合物中加入DIPEA(260μL,1.493mmol)，脱气。在100℃将该反应混合物置于预热的油浴上，在N2气氛中搅拌2h，冷却至RT，得到标题化合物。将该粗反应混合物照此不经进一步后处理油浴下一步。
步骤II：化合物220
在RT向来自步骤I的1/3的粗反应混合物(0.062mmol,0.55mL)中加入HATU(25.5mg,0.067mmol)和环丙烷羧酸(5.8mg,0.067mmol)的混合物。将该反应混合物搅拌2h。通过金属清除剂(Si-DMT；Silicycle；SPE-R79030B-06P)过滤该粗反应混合物，用0.5mL的DMF洗涤。直接通过反相HPLC纯化滤液，得到标题化合物(18mg,50％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.77(m,4H),7.50(dd,J＝8.0,1.0Hz,2H),4.88(d,J＝2.1Hz,2H),4.24-4.15(m,2H),4.06-3.99(m,4H),3.95(dd,J＝9.3,3.3Hz,2H),3.90-3.80(m,4H),3.73(dd,J＝11.4,5.6Hz,2H),3.63(t,J＝9.4Hz,2H),2.14-2.04(m,1H),1.99-1.90(m,2H),1.89-1.80(m,2H),1.00-0.94(m,2H),0.90-0.82(m,2H).ESI-MS m/z计算值675.26794,测定值676.51(M+1)+.
化合物221-245的制备
根据对化合物220所述的方法、但使用适合的商购羧酸制备化合物221-245。
化合物162的差示扫描量热测定
可以使用TA Instrument DSC Q200(Asset V012390)测定化合物162晶型A的差示扫描量热。将样品(1.02mg)称重入预穿孔的针孔铝密封盘中，以10℃/min从环境温度加热至350℃。图1中观察到的DSC结果显示存在1个观察到的吸热峰，在258℃(起始温度254℃,热函50.7J/g)。
化合物162的XRPD
在室温使用安装密封试管源和Hi-Star平面检测器(Bruker AXS,Madison,WI)的Bruker D8Discover系统(Asset Tag V012842)记录XRPD。X-射线发生器在40kV电压和35mA电流下运行。将粉末样品置于Si零-背景片上。使用各120s的暴露时间储存2个范围。随后在3°-41°2-θ范围内与步长0.02°整合数据并且合并入连续图案。图3显示样品的X-射线粉末衍射图。来自化合物162的有代表性的XRPD峰：
峰(2-θ) 强度
16.86 66.6
17.51 99.6
18.07 66.9
20.44 67.4
20.82 62.8
21.97 69.2
22.37 89.1
24.41 63
25.07 67.6
26.0 66.7
26.87 62.8
31.89 59.1
化合物202的热分析
使用TA Instrument TGA Q500(Asset V014840)对化合物202进行热重量分析以便测定作为时间函数的重量百分比损失。将样品(1.29mg)加入到预先配衡的铝盘中，以10℃/min从环境温度加热至350℃。在加热至130℃时观察到重量损失约为2.2％，在>250℃时观察到降解。TGA结果如图4中所示。
化合物202的XRPD
在室温在反射模式下使用安装密封试管源和Hi-Star平面检测器(Bruker AXS,Madison,WI)的Bruker D8Discover系统(Asset Tag V012842)记录化合物202的XRPD。X-射线发生器在40kV电压和35mA电流下运行。将粉末样品置于Si零-背景片上。使用各120s的暴露时间储存2个范围。随后在3.5°-39°2-θ范围内与步长0.02°整合数据并且合并入连续图案。图4显示样品的X-射线粉末衍射图。来自化合物202的有代表性的XRPD峰：
峰(2-θ) 强度
7.42 38
9.39 65.8
14.29 91.6
14.9 100
16.24 78.7
化合物202的差示扫描量热测定
使用TA Instrument DSC Q2000(Asset V012390)测定化合物202晶型A的差示扫描量热。将样品(1.94mg)称重入预穿孔的针孔铝密封盘中，以+/-1℃/min的调节振幅、使用3℃/min变速运行至300℃。图5中观察到的DSC结果显示在约143℃观察到玻璃转变，随后是在242℃的熔化吸热峰(起始温度为239.7℃,热函17.3J/g)。
竞争性结合试验
将FimH蛋白的前177个氨基酸表达为与细菌中pET21b质粒中的凝血酶的融合蛋白。这种FimH蛋白质序列包含碳水化合物识别结构域(CRD)，且应称作FimH-CRD。在蛋白质的细菌表达后，将FimH-CRD蛋白纯化至同质性，且通过蛋白酶裂解除去凝血酶标记。使用5nM Alexa 647甘露糖苷探针和60nM FimH-CRD进行通过荧光偏振的竞争性结合试验。在小体积384孔微量滴定板中的20μl最终体积中测定样品。最终测定缓冲液条件如下：50mMTris-Cl,ph 7.0、100mM NaCl、1mM EDTA、5mMβ-巯基乙醇、0.05％BSA和2.5％DMSO。对FimH进行2次试验，称作试验1或试验2。测定条件对于2次试验而言均相同，除去如下条件：试验1具有通过用12-点剂量响应顺序稀释因子的手动稀释制备的化合物，而试验2具有通过也是通过顺序稀释因子(12点剂量响应)且最初一式两份在384孔-Corning聚丙烯圆底平板中由机器人系统制备的化合物。试验2平板具有这样的化合物，随后将其冷冻，必须在使用前融化。最初将Alexa 647探针和FimH-CRD加入到试验缓冲液中，然后加入0.5μL的测试化合物(试验1或2)，终浓度为0.4nM-75μM(12点滴定，使用3-倍顺序稀释)。用相同条件(除去添加FimH-CRD蛋白质)制备Alexa 647探针的对照孔。然后将平板在室温在黑暗中在湿条件下温育5hr，以防止干燥。使用SpectraMax Paradigm多模式平板读出器和适合的荧光极化检测柱(Alexa-647)读取平板。
使用对FAM甘露糖苷报道的类似方法制备Alexa 647甘露糖苷探针(Han,Z.等人,2010,J.Med.Chem.,53,4779)，且描述在如下方案中。
在RT向蓝色搅拌的(2S,3S,4S,5S,6R)-2-(4-氨基丁氧基)-6-(羟基甲基)四氢吡喃-3,4,5-三醇(2.21mg,0.009mmol)和(2E)-2-[(2E,4E)-5-[3,3-二甲基-5-磺酸根(sulfonato)-1-(3-磺酸根丙基)吲哚-1-鎓-2-基]戊-2,4-二烯基]-3-[6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基-6-氧代-己基]-3-甲基-1-(3-磺酸根丙基)二氢吲哚-5-磺酸盐(钾离子(3))(4.9mg,0.0044mmol)在DMF(44μL)中的溶液中加入Et3N(5.4mg,7.0μL,0.053mmol)。将该溶液在室温搅拌过夜，浓缩，溶于水，用12g C-18硅胶柱纯化，其中使用Isolera系统，应用乙腈水溶液(0-40％,10CV)，然后冻干，得到Alexa 647甘露糖苷探针(3.3mg,34％)，为深蓝色固体。
每种化合物使用12个浓度、根据剂量响应曲线测定化合物的Kd值，一式两份。使用荧光偏振竞争性置换分析使曲线与数据点拟合并且使用GraphPad Prism软件50.4版(GraphPad software Inc.,San Diego,CA,USA)从得到的曲线上内插Kds。下表1显示通过试验1和试验2得到的Kd值。
表1.
*NT是指未测试的化合物
细菌结合试验
细菌结合试验(BBA)的目的在于测定选择性FimH拮抗剂对结合糖蛋白BSA-(甘露糖)3的细菌菌株LF82的抑制活性。
下面是用于运行下述BBA的材料清单。
1.LB肉汤：供应商：Gibco,#10855
2.D-PBS：供应商：Wisent,#311-425-CL
3.LB琼脂平板
4. 96-孔黑色平板(高结合率)：供应商：Costar,#3925
5.TopSealTM-A粘性密封薄膜；供应商PerkinElmer,#6005185
6.碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液pH 9.6片，供应商：Medicago,#09-8922-24
7.水，供应商：Gibco,#15230-162
8.牛血清白蛋白(BSA)：供应商：Sigma,#A-7888
9.(Man)3-BSA(α1-3,α1-6甘露三糖-BSA,1mg),V-Labs,#NGP1336,lot#HGDX37-169-1
10.Tween 20：供应商：Sigma,#P9416
11.Bright-Glo荧光素酶测定系统：供应商：Promega,#E2610
12.LF82/荧光素酶菌株：分离自具有克罗恩病的患者回肠粘膜的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的侵害能力。Boudeau J,Glasser AL,Masseret E,Joly B,Darfeuille-Michaud A,Infect Immun.1999,67(9),4499-509
用于运行BBA的溶液和缓冲液如下所述。
1. 0.04M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液(包被缓冲液)
2. 40μg/mL BSA-(Man)3：将1mg(Man)3-BSA溶于25mL水
3. 4000μg/mL BSA
4. 40μg/mL BSA
5. 1μg/mL BSA-(Man)3：150μL的40μg/mL BSA-(Man)3+5.85mL的40μg/mL BSA
6. 0.5μg/mL BSA-(Man)3在0.02M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中
7. 20μg/mL BSA在0.02M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中
8.封闭缓冲液(2％BSA/DPBS)：1g的BSA在50mL D-PBS中
9. 2X结合缓冲液(0.2％BSA/D-PBS)：5mL的封闭缓冲液+45mL D-PBS.
10.洗涤缓冲液(D-PBS/0.01％Tween 20)：10μL的Tween 20在100mL D-PBS中
11. 1X Bright-Glo荧光素酶底物：用D-PBS 1：1稀释Bright-Glo荧光素酶测定系统
用于运行BBA的实验方案如下所述。
LF82/荧光素酶菌株的过夜培养物：进入2支Falcon 50mL试管，加入20mL的LB+20μL的50mg/mL卡那霉素，用环接种来自LF82/荧光素酶菌株的甘油储备溶液。在37℃过夜温育，不进行振摇。
96-孔平板的糖蛋白包被：加入100μL/孔的0.5-2μg/mL BSA-(Man)3。将20μg/mLBSA用作对照背景。使用粘性密封薄膜密封平板，在室温温育过夜。用150μL/孔的D-PBS洗涤96-孔平板3次，加入170μL/孔的封闭溶液，在室温温育45min(最少)。
细菌混悬液的制备：混合2支培养试管(40mL)，用LB进行1：10稀释(900μl LB+100μl培养物。测定细菌培养物的光密度(OD)。OD1～5x108细胞/mL。以3500rpm在室温离心LF82培养物20min。重新混悬细菌沉淀于D-PBS中，以3500rpm再次离心20min。将细菌沉淀重新混悬于D-PBS中，得到2x 109个细菌/mL的细菌浓度。用D-PBS稀释1/10，得到最终细菌浓度为2X 108个细菌/mL(＝107个细菌/50μL)。用LB按照1/10顺序稀释每种细菌混悬液，将10μL的稀释液在LB琼脂平板上铺板(最终稀释度为10-7)，在37℃温育过夜，计数CFUs以测定本试验中的实际细菌密度。
细菌结合试验：将147μL 2X结合缓冲液加入到化合物平板中(包含3μL的化合物)。在进行封闭步骤(至少45min)后，用200μL/孔的D-PBS将平板洗涤3次。使用100μL多通道手动移液器加入用2X结合缓冲液稀释的50μL/孔的化合物。使用100μL多通道手动移液器加入50μL/孔的细菌混悬液。以缓慢速度搅拌1min，在室温温育40-75min。用150μL/孔的洗涤缓冲液洗涤5次，然后用D-PBS洗涤1次。加入100μL/孔的1X Bright-Glo荧光素酶底物。通过使用Analyst HT平板读出器或Trilux 1450microbeta平板读出器读取发光。下表2提供了细菌结合试验中化合物1-245的IC50数据。
表2：细菌结合试验
炎性肠病(IBD)的小鼠模型：
转基因人源化-CEACAM6小鼠模型可以用于测试本发明的化合物(Carvalho FA等人(2009)J Exp Med.Sep 28；206(10)：2179-89)。如Carvalho等人所述感染转基因人源化-CEACAM6小鼠。然后用本发明的化合物治疗感染的小鼠。
尽管我们已经描述了本发明的许多实施方案，但是显而易见，可以改变我们的基本实施例以提供其它利用本发明化合物、方法和工艺的实施方案。因此，可以理解，本发明的范围由待批权利要求定义，而不是由这位本文实施例代表的具体实施方案定义。

Claims (16)

1.具有式ID-a的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
环HH是具有0-2个选自氧、氮或硫的杂原子的3-8元饱和单环；
JHH是XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C10脂族基团，其中C1-C10脂族基团的至多4个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；XJ任选地被0-6次出现的卤素或0-1次出现的CN取代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-7元单环饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选地被1-6次出现的卤素、CN、NO2或C1-C6脂族基团取代，其中C1-C6脂族基团的至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)-2替代；且
JH是卤素、CN、NO2或C1-C6脂族基团，其中至多3个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代。
2.权利要求1的化合物，其中环HH是环戊基、环己基、四氢吡喃基、1,3二噻烷基、哌嗪基、哌啶基或氧杂庚环基。
3.权利要求1的化合物，其中该化合物具有式ID-b：
其中
JHH是H、XJ、QJ或XJ-QJ；
XJ是C1-C4脂族基团，其中C1-C4脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被-O-、-NH、N(C1-C6脂族基团)、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-替代；
QJ是任选地具有1-4个选自氧、氮或硫的杂原子的3-6元单环饱和、部分不饱和或芳族环；其中QJ各自任选地被1-3次出现的卤素、CN或C1-C6脂族基团取代，其中所述C1-C6脂族基团的至多2个亚甲基单元任选地被O、NH、N(C1-C6脂族基团)、S、C(O)、S(O)或S(O)2替代；且
JH是卤素或C1-4烷基。
4.权利要求1的化合物，其中该化合物具有式ID-b：
其中
JH是卤素或C1-C4烷基；且
JHH是H,C(O)(C1-6烷基)、C(O)O(C1-6烷基)、S(O)2(C1-6烷基)、C(O)(C3-6环烷基)、C(O)(3-6元杂环基)、C(O)(5-6元杂芳基)、C(O)-(C1-4烷基)-(5-6元杂芳基)、C(O)-(C1-4烷基)-(杂环基)；其中所述杂芳基或杂环基具有1-3个选自氧、氮或硫的杂原子；JHH任选地被OH、O(C1-6烷基)、氧代、C1-6烷基、CN或卤素取代。
5.权利要求1的化合物，其中该化合物具有式ID-b：
其中
JH是卤素或C1-C4烷基；且
JHH是H、C(O)CH3、C(O)OC(CH3)3、C(O)OCH(CH3)2、C(O)OCH2CH3、C(O)OC(OH)(CH3)2、S(O)2CH3、C(O)CH(CH3)2、C(O)C(CH3)3、C(O)CH(CH3)OCH3、
6.权利要求1的化合物，由选自如下的结构式表示：
或其药学上可接受的盐。
7.权利要求1的化合物，其中所述化合物是化合物162：
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求1的化合物，其中所述化合物是化合物202：
或其药学上可接受的盐。
9.组合物，包含权利要求1-6任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。
10.权利要求1-6任一项的化合物或权利要求9的组合物用于制备药物的用途。
11.权利要求10的用途，其中所述药物用于治疗或预防受试者的细菌感染。
12.权利要求11的用途，其中所述细菌感染是尿道感染或炎性肠病。
13.权利要求11的用途，其中所述细菌感染是结肠炎。
14.权利要求11的用途，其中所述细菌感染是克罗恩病。
15.用于制备化合物202的方法：
包括使中间体M：
与中间体AG8：
在Sonogashira偶联条件下反应，形成化合物202。
16.用于制备化合物162的方法：
包括使中间体M：
与
在Sonogashira偶联条件下反应，形成化合物162。
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