CN104830772A - 一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，其通过采用氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子,并添加有微量元素、有机小分子、造血干细胞扩增剂、植物抽提物和动物抽提物的一种或多种组成造血干细胞培养基，其能快速扩增不同种属的CD34+细胞，让CD34+细胞的扩增速度、端粒长度均有明显提高；而且本发明所述造血干细胞培养基所培养的造血干细胞能保持很好的细胞功能，其能起到包括但不局限于抗肿瘤、抗衰老和延长寿命的作用，具有良好的应用前景。

Description

一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法。

背景技术

诸多研究表明造血干细胞在体液循环中发挥关键作用：一方面，体液中红细胞、淋巴细胞都是由造血干细胞分化而来，然而正常生理条件下造血干细胞主要存在于骨髓中，只有在应急或动员剂处理之后才能释放到外周血中；另一方面，体液中的细胞更新也依赖于造血干细胞的数量和分化潜能。随着个性化再生医学技术的兴起，造血干细胞在抗衰老及疾病治疗(如糖尿病、肿瘤、免疫系统疾病以及缺血性组织坏死等)起着日益重要的作用。

随着细胞治疗个性化技术的兴起，目前认为体外快速扩增造血干细胞后再回输到哺乳生物体内，有利于提高机体的造血系统功能，包括提升红细胞及免疫细胞的数量和功能、血糖的维护、抗肿瘤能力以及免疫防御能力等，其主要表现在可以提高机体抗肿瘤等疾病的治疗能力、使组织器官年轻化，延长机体寿命。

而造血干细胞培养如何实现快速扩增又不影响其功能是造血干细胞培养的关键，然而现有技术中培养造血干细胞技术不够成熟，表现在细胞的增殖速度慢和传代次数较低。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，旨在解决现有技术中造血干细胞的增殖速度比较慢和传代次数低的问题。

本发明的技术方案如下：

一种造血干细胞培养基，其中，所述造血干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子；

其中，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺及牛磺酸中的一种或多种；

所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、D-泛酸钠、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨、辅酶Q10、维生素B12、腐胺二盐酸盐、维生素C及维生素E中的一种或多种；

所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、氯化钠、丙酮酸钠、乙二胺四乙酸钠盐、肝素钠、β-巯基乙醇及酚红中的一种或多种；

所述脂类包括地塞米松、油酸、胆固醇、乙醇胺、亚油酸、硫辛酸及脂质混合物中的一种或多种；

还包括蛋白多肽和/或细胞因子；其中，所述蛋白多肽和/或细胞因子包括纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胰岛素、胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、胎盘生长因子、白细胞抑制因子、转铁蛋白、人血清白蛋白、集落刺激因子1、肿瘤坏死因子、肿瘤转化因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、白介素－2、干扰素、促红细胞生成素、促血小板生成素、干细胞因子中、胰岛素、还原性谷光甘肽的一种或多种。

所述造血干细胞培养基，其中，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

丙氨酸  0.05mM

精氨酸  2.00mM

天冬酰胺  0.55mM

天冬氨酸  0.4mM

半胱氨酸  0.15mM

谷氨酸  0.15mM

甘氨酸  0.25mM

组氨酸  0.15mM

异亮氨酸  2.50mM

亮氨酸  1.20mM

赖氨酸  1.00mM

甲硫氨酸  0.60mM

苯丙氨酸  1.05mM

脯氨酸  0.02mM

丝氨酸  0.70mM

苏氨酸  0.30mM

色氨酸  0.10mM

酪氨酸  0.15mM

缬氨酸  1.4mM

谷氨酰胺  4mM

胰岛素  2-10mg/L

转铁蛋白  5-50mg/L

人血清白蛋白  0.1g/L

抗坏血酸  50mg/L

生物素  30μM

氯化胆碱  60μM

叶酸  6μM

辅酶Q10  1μM

地塞米松  10nM

D-泛酸钠  5μM

肌醇  70μM

烟酰胺  20μM

吡哆醇盐酸盐  0.15μM

核黄素  0.55μM

盐酸硫氨  0.55μM

维生素B12  0.5μM

腐胺二盐酸盐  0.5μM

维生素C  10mg/L

维生素E  0.25mg/L

肝素钠  0.4g/L

D-葡萄糖  18mM

还原性谷胱甘肽  0.001mg/L

牛磺酸  0.0072g/L

β-巯基乙醇  0.05g/L

酚红  8.1mg/L

油酸  2.50mg/L

亚油酸  1.5mg/L

硫辛酸  0.1mg/L

脂质混合物  1ml/L

胆固醇  5mg/L

乙醇胺  60μl/L

碳酸氢钠  11.6mM

氯化钙  0.084mM

氯化钾  4.16mM

氯化镁  0.3mM

硫酸镁  0.407mM

氯化钠  120.61mM

磷酸二氢钠  0.453mM

磷酸氢二钠  0.5mM

丙酮酸钠  0.5mM

造血干细胞扩增剂  0.5mg/L。

所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

表皮生长因子  1-10μg/L

纤维细胞生长因子1  1-10μg/L

纤维细胞生长因子2  1-10μg/L

胰岛素样生长因子1  1-10μg/L

白细胞抑制因子  1-10μg/L

血小板衍生生长因子  1-10μg/L

胎盘生长因子  1-10μg/L

肿瘤坏死因子  1-10μg/L

血管内皮细胞生长因子  1-10μg/L

集落刺激因子1  1-10μg/L

巨噬细胞集落刺激因子  1-10μg/L

粒细胞集落刺激因子  1-10μg/L

促红细胞生成素  1-10μg/L

促血小板生成素  1-10μg/L

干细胞因子  1-10μg/L

白介素－2  1-10μg/L

干扰素  1-10μg/L。

所述造血干细胞培养基，其中，所述造血干细胞培养基还包括微量元素和/或有机小分子物质；

其中，所述微量元素微量元素包括氯化钴、亚硒酸钠、氯化镍、氯化锰、七钼酸铵、氯化铝、硫酸铬钾、硫酸铜、硝酸铁、硫酸亚铁或硫酸锌中的一种或多种；所述有机小分子包括β-巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、D-葡萄糖、造血干细胞扩增剂、牛磺酸或肝素钠中的一种或多种。

所述造血干细胞培养基，其中，所述造血干细胞培养基还包括经无菌及无病原体安全处理后的植物抽提物和/或动物组织细胞抽提物；

其中，所述植物抽提物来源于人参、黄芪、枸杞、当归及党参中的一种或多种；所述动物组织细胞抽提物来源于动物的血浆或血清中的一种或多种。

所述造血干细胞培养基，其中，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

人参抽提物  1-50mg/L

黄芪抽提物  1-50mg/L

枸杞抽提物  1-50mg/L

当归抽提物  1-50mg/L

幼年动物血浆或血清  1-5％的体积百分数。

一种造血干细胞培养基的应用，其中，所述造血干细胞培养基用于培养造血干细胞。

所述造血干细胞培养基的应用，其中，所述造血干细胞是从外周血或脐带血中分离得到的CD34+细胞。

一种造血干细胞培养基的干细胞培养方法，其中，包括以下步骤：

A、培养基的制备：依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中；

B、造血干细胞的制备：从外周血或脐带血中除去无核或多核细胞，分离得到CD34+细胞；

C、细胞培养：将分离得到的CD34+细胞接种到上述培养基中，并进行悬浮培养。

有益效果：本发明所述一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，其通过采用氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子作为基本培养基，并加入微量元素或有机小分子中的一种或多种、植物细胞抽提物或动物细胞抽提物中的一种或多种，组成造血干细胞培养基，其能快速扩增以CD34+为特征的造血干细胞，让造血干细胞的扩增速度以及端粒长度较常规对照培养基获得的细胞均有极大的提升；并且，经本发明所述培养基培养后的干细胞具有降低血糖、抗肿瘤以及延长机体寿命等功效。

附图说明

图1为基于本发明所述造血干细胞培养基的干细胞培养方法的流程图。

图2-3为本发明实施例1中的结果数据对照图。

图4为本发明实施例2中的结果数据对照图。

图5为本发明实施例3中的结果数据对照图。

图6为本发明实施例4中的结果数据对照图。

图7为本发明实施例5中的结果数据对照图。

图8为本发明实施例6中的结果数据对照图。

具体实施方式

本发明提供一种造血干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供一种造血干细胞培养基，其包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子。本发明所制备的造血干细胞培养基中的组分能为造血干细胞的培养提供足够的养分，加快了造血干细胞的生长速度，与普通培养基相比，本发明所述培养基不仅能更快速扩增不同来源的干细胞，延长了传代次数，还能很好的保持干细胞的潜能性。

具体地，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺及牛磺酸中的一种或多种。氨基酸是细胞生命所需的重要物质，其在细胞中能起到氮平衡，转变为糖或脂肪，参与构成酶、激素、部分维生素的作用，并且蛋白质在机体内的消化和吸收是通过氨基酸来完成的。较佳实施例中，本发明所述免疫细胞培养基中添加有上述20种氨基酸。

另外，维生素、盐类、脂类、蛋白多肽等是生命的营养素，为造血干细胞的生长提供重要的作用。具体而言，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺及牛磺酸中的一种或多种。所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、D-泛酸钠、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨、辅酶Q10、维生素B12、腐胺二盐酸盐、维生素C及维生素E中的一种或多种。所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、氯化钠、丙酮酸钠、乙二胺四乙酸钠盐、肝素钠、β-巯基乙醇及酚红中的一种或多种。所述脂类包括地塞米松、油酸、胆固醇、乙醇胺、亚油酸、硫辛酸及脂质混合物中的一种或多种。

另外，本发明所述造血干细胞培养基还包括由蛋白多肽和/或细胞因子；其中，所述蛋白多肽和/或细胞因子包括纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胰岛素、胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、胎盘生长因子、白细胞抑制因子、转铁蛋白、人血清白蛋白、集落刺激因子1、肿瘤坏死因子、肿瘤转化因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、白介素－2、干扰素、促红细胞生成素、促血小板生成素、干细胞因子中、胰岛素及原性谷光甘肽的一种或多种。

较佳实施例中，所述造血干细胞培养基还包括微量元素和/或有机小分子物质。其中，所述微量元素微量元素包括氯化钴、亚硒酸钠、氯化镍、氯化锰、七钼酸铵、氯化铝、硫酸铬钾、硫酸铜、硝酸铁、硫酸亚铁或硫酸锌中的一种或多种；所述有机小分子包括β-巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、D-葡萄糖、造血干细胞扩增剂、牛磺酸或肝素钠中的一种或多种。

优选地，本发明所述造血干细胞培养基还包括经无菌及无病原体安全处理后的植物抽提物和/或动物组织细胞抽提物。其中，所述植物抽提物来源于人参、黄芪、枸杞、当归及党参中的一种或多种；所述动物组织细胞抽提物来源于造血能力较强的动物血浆或血清中，如幼年鹿的血清或血浆。

本发明所提供的造血干细胞培养基适合于快速培养人或哺乳动物组织来源的造血干细胞，所述造血干细胞是从外周血或脐带血中分离得到的CD34+细胞。具体地，本发明所述造血干细胞细胞培养基所培养的造血干细胞细胞其包括但不局限于人、小鼠、大鼠等哺乳生物的血液系统，可从该哺乳生物的血液或组织器官中分离得到，本发明所述造血干细胞细胞培养基能让造血干细胞的扩增速度比常规培养基提高8倍以上。经本发明所述造血干细胞培养基培养的造血干细胞具有常规培养基培养的造血干细胞相同的功能，即对降低血糖、抗肿瘤或延缓衰老有明显疗效，并且本发明所述造血干细胞培养基在培养速度上具有明显的优势，能快速繁殖所需的造血干细胞。

另外，本发明还提供一种基于上述造血干细胞培养基的干细胞培养方法，如图1所示，其具体步骤为：

S100、培养基的制备：依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中。当然，对于步骤S100而言，所添加的物质依实际情况而定，如可以添加植物或动物的细胞抽提物，其具体过程为经高温抽提处理，并高速离心除去大的不溶性颗粒，再依次用0.22μm和0.1μm的滤膜进行过滤，灭活并除去不溶性沉淀、潜在病原体后，加入到所述培养基中。另外，也可以加入微量元素或有机小分子等。

S200、造血干细胞的制备：从外周血或脐带血中除去无核或多核细胞，分离得到CD34+细胞。具体地，向培养瓶中加入一定量的血清或血浆，用单核细胞富集法除去无核或多核细胞，得到单核的CD34+细胞。

S300、细胞培养：将分离得到的CD34+细胞接种到上述培养基中，在适宜的条件下进行悬浮培养。

以下通过实施例对本发明作进一步说明，在实施例1-5中，所述造血干细胞培养基按1升计算，其组成见下表：

表1.基本培养基组成

表2.细胞因子

表皮生长因子(EGF)

1-10μg/L

纤维细胞生长因子1(FGF1)	1-10μg/L
		纤维细胞生长因子2(FGF2)	1-10μg/L
胰岛素样生长因子1(IGF1)	1-10μg/L
		白细胞抑制因子(LIF)	1-10μg/L
血小板衍生生长因子(PDGF)	1-10μg/L
		胎盘生长因子(PGF)	1-10μg/L
肿瘤坏死因子(TNF)	1-10μg/L
		血管内皮细胞生长因子(VEGF)	1-10μg/L
集落刺激因子1(CSF1)	1-10μg/L
		GM-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)	1-10μg/L
G-CSF(粒细胞集落刺激因子)	1-10μg/L
		EPO(促红细胞生成素)	1-10μg/L
TPO(促血小板生成素)	1-10μg/L
		SCF(干细胞因子)	1-10μg/L
IL2(白介素－2)	1-10μg/L
		IFN(干扰素)	1-10μg/L

表3、植物抽提物及幼年动物血液抽提物浓度

人参抽提物	1-50mg/L
		黄芪抽提物	1-50mg/L
枸杞抽提物	1-50mg/L
		当归抽提物	1-50mg/L

幼年动物血浆(或血清)

1-5％的体积百分数

本发明实施例中采用Life Technologies培养造血干细胞同类产品(-34SFM)作为对照组培养基。

实施例1.造血干细胞增殖作用

为检查本发明所述造血干细胞培养基对造血干细胞扩增速度的影响，选用G-CSF动员4天之后的外周血以Ficol法制备单核细胞，将获得的单核细胞进行体外细胞培养实验，细胞按10⁴接种后加入对照培养基(对照组)和本发明所述造血干细胞培养基(实验组)中分别进行培养(37摄氏度，5％CO₂)，4-7天后用抗CD34的抗体流式分选出以CD34+为特征的造血干细胞，并计算CD34+的细胞数量和其占总细胞的比率，细胞总数用MTT法测定。

结果表明，在相同条件下，本发明所述造血干细胞培养基中的CD34+细胞比率在30％以上，且其CD34+细胞比率是对照组的2.7倍(见图2)，1升培养基所获得的细胞总素为4.2*10⁹,是对照组的8.3倍(见图3)；数据为6次独立实验的平均值±SEM(n＝6；P<0.001)。实施例2.CD34+细胞端粒长度的提高

为检查本发明所述造血干细胞培养基对造血干细胞端粒长度的影响，用G-CSF注射小鼠并动员4天之后，取外周血以Ficol法制备单核细胞，并进一步用偶联有抗CD34抗体的磁珠富集CD34+细胞。将CD34+细胞按10⁴接种至本发明所述造血干细胞培养基(实验组)和常规对照培养基(对照组)中，悬浮培养(37摄氏度，5％CO₂)1周之后，按文献(Journal of Clinical and Experimental Medicine 2008(7):14)所描述的萤光定量PCR法测定培养后细胞的端粒长度，研究结果表明实验组较对照组端粒长度长8％(见图4)；数据为12次独立实验的平均值±SEM(n＝12；P<0.001)。

实施例3.降血糖作用

为检查本发明所述造血干细胞培养基培养后的造血干细胞对糖尿病治疗效果，选用大鼠的造血干细胞做体外细胞培养实验，培养的造血干细胞按10⁵静脉脉注射STZ诱导的糖尿病SD大鼠中(实验组)，对照组为注射生理盐水(对照组)，1个月后检测STZ大鼠血液中的血糖水平。结果表明实验组较对照组血糖水平下降了78％(见图5)；数据为12次独立实验的平均值±SEM(n＝12；P<0.001)。

实施例4.对肿瘤细胞的杀伤作用

将急性B淋巴细胞系白血病细胞株(Nalm-6)用含青霉素100U/ml、链霉素100U/ml、15％重量百分比的灭活新生牛血清组成RPMI-1640完全培养液,在含5％CO₂饱和湿度(体积百分比)的培养箱中培养，培养细胞。用无菌PBS液将环磷酰胺浓度调整到10mg/ml,对小鼠的腹腔注射所述环磷酰胺(2mg/只)，连续注射2d(d指天数)；24h后,收集处于对数生长期的Nalm-6细胞并进行1000r/min离心5min后,悬浮于无菌PBS液中,调整Nalm-6细胞密度至2.5×10⁷个/ml,对小鼠进行尾静脉注射(5×10⁶个/只)，制备白血病动物模型。对于造血干细胞实验组在同一时间注射按以上方法扩增的造血干细胞2.5×10⁵个/只，而对照组不注射。每隔1～2d观察小鼠症状,以后肢出现瘫痪为发病标准,记录小鼠发病和死亡日期。待小鼠濒死时,颈椎脱臼法将其处死,立即取小鼠的各种器官,经10％(重量百分比)中性福尔马林固定脱水、透明、浸蜡、包埋,制成石蜡切片,H-E染色后在光镜下观察各个组织肿瘤细胞浸润情况。骨髓片的制作:剪掉小鼠大腿上的皮肤和肌肉,暴露股骨及两端相连的关节,然后从股骨两端关节头处取下股骨,剪断股骨一端,用抽有生理盐水的1ml注射器插入骨髓腔深处,注入0.5ml,将冲出的骨髓液滴于洁净的玻片中间,轻轻晃动使其均匀铺开,晾干固定；将制得的骨髓片用瑞氏染色,在光镜下观察，根据统计造血干细胞治疗前后肿瘤细胞数量，发现注射扩增后的造血干细胞组肿瘤细胞的数量比为注射的数量降低了62％(见图6)；数据为6次独立实验的平均值±SEM(n＝6；P<0.001)。

实施例5.急性白血病大鼠存活率的提高作用

用实施例4方法制备的白血病动物模型，并进行放疗处理。放疗处理之后辅助以造血干细胞治疗，即注射按以上方法扩增的造血干细胞2.5×10⁵个/只。4个月之后统计动物的存活率，结果表明造血干细胞治疗前动物存活率由原来的24％提高到71％(见图7)；数据为6次独立实验的平均值±SEM(n＝6；P<0.001)。

实施例6.对年老小鼠寿命的延长作用

购买18月龄的雌性小鼠50只，平均分为实验组和对照组。实验组对每只小鼠尾静脉注射本发明所述造血干细胞培养基培养之后的造血干细胞，每只小鼠尾静脉注射5x10⁵个细胞，对照组静脉注射相同体积的生理盐水，继续常规饲养并统计小鼠1年之后的存活率。统计结果表明，存活率由对照组的24％提高到实验组的83％(见图8)。数据为25次独立实验动物的平均值±SEM(n＝25；P<0.001)。

综上所述，本发明实施例中通过采用氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子,并添加有微量元素、有机小分子、造血干细胞扩增剂、植物抽提物和动物抽提物的一种或多种组成造血干细胞培养基，其能快速扩增不同种属的CD34+细胞，让CD34+细胞的扩增速度、端粒长度均有明显提高；而且本发明所述造血干细胞培养基所培养的造血干细胞能保持很好的细胞功能，其能起到包括但不局限于抗肿瘤、抗衰老和延长寿命的作用，因此具有良好的应用前景。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (9)

1.一种造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类；

其中，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺及牛磺酸中的一种或多种；

所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、D-泛酸钠、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨、辅酶Q10、维生素B12、腐胺二盐酸盐、维生素C及维生素E中的一种或多种；

所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、氯化钠、丙酮酸钠、乙二胺四乙酸钠盐、肝素钠、β-巯基乙醇及酚红中的一种或多种；

所述脂类包括地塞米松、油酸、胆固醇、乙醇胺、亚油酸、硫辛酸及脂质混合物中的一种或多种；

还包括蛋白多肽和/或细胞因子；其中，所述蛋白多肽和/或细胞因子包括纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胰岛素、胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、胎盘生长因子、白细胞抑制因子、转铁蛋白、人血清白蛋白、集落刺激因子1、肿瘤坏死因子、肿瘤转化因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、白介素－2、干扰素、促红细胞生成素、促血小板生成素、干细胞因子中、胰岛素、还原性谷光甘肽的一种或多种。

2.根据权利要求1所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

3.根据权利要求1所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

4.根据权利要求1所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基还包括微量元素和/或有机小分子物质；

其中，所述微量元素微量元素包括氯化钴、亚硒酸钠、氯化镍、氯化锰、七钼酸铵、氯化铝、硫酸铬钾、硫酸铜、硝酸铁、硫酸亚铁或硫酸锌中的一种或多种；

所述有机小分子包括β-巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、D-葡萄糖、造血干细胞扩增剂、牛磺酸或肝素钠中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基还包括经无菌及无病原体安全处理后的植物抽提物和/或动物组织细胞抽提物；

其中，所述植物抽提物来源于人参、黄芪、枸杞、当归及党参中的一种或多种；所述动物组织细胞抽提物来源于动物的血浆或血清中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述造血干细胞培养基，其特征在于，所述造血干细胞培养基按1升计，包括以下组分：

7.一种如权利要求1所述造血干细胞培养基的应用，其特征在于，所述造血干细胞培养基用于培养造血干细胞。

8.根据权利要求7所述造血干细胞培养基的应用，其特征在于，所述造血干细胞是从外周血或脐带血中分离得到的CD34+细胞。

9.一种基于权利要求1所述造血干细胞培养基的干细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、培养基的制备：依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中；

B、造血干细胞的制备：从外周血或脐带血中除去无核或多核细胞，分离得到CD34+细胞；

C、细胞培养：将分离得到的CD34+细胞接种到上述培养基中，并进行悬浮培养。