CN108559728A - 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法,包括MSC基础培养基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，MSC完全培养基、氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽，氨基酸中包含氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸，采用本培养基进行干细胞的培养是细胞的增长速度快，增长的面积更大，传代十次仍然具有原始的表型一级较高的批间一致性，本发明具有出众的扩增效率，稳定血清组织可以保证相同批次的一致性，在高密度下实现高效扩增，只需要较少的培养基，有效缩短干细胞的培养时间。

Description

一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法
技术领域
本发明涉及干细胞培养技术领域，具体为一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法。
背景技术
诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞培养是研究干细胞的作用机制及探索其在治疗人类疾病治疗方法的重要技术。
干细胞尽量含量甚微，但广泛分布于哺乳动物的各个组织器官，这些组织或器官包括但不局限于骨髓、脐带、脂肪组织、脑组织、视网膜、心脏、肝脏、肺以及皮肤等。大量研究表明，这些低含量的干细胞可在体外通过适当的方法进行进一步扩增，最常规的一种培养干细胞的培养基就是添加有胎牛血清的培养基。
发明内容
本发明的目的在于提供一种出众的扩增效率，稳定血清组织可以保证相同批次的一致性，在高密度下实现高效扩增，只需要较少的培养基，有效缩短干细胞的培养时间的一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种干细胞培养基,所述干细胞培养基中包含MSC基础培养基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，MSC完全培养基、氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽；所述MSC基础培养基的体积为500ml液体，保存温度为2-8℃，所述MSC添加物1的含量为60ml冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物2的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物3的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC完全培养基的含量为562ml的液体，保存温度为2-8℃；所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸；所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨。
优选的，所述MSC基础培养基的体积为500ml液体，保存温度为2-8℃，所述MSC添加物1的含量为60ml冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物2的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物3的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC完全培养基的含量为562ml的液体，保存温度为2-8℃。
优选的，所述培养基保存温度为4℃。
优选的，所述干细胞培养基中包含血清。
优选的，所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠。
优选的，一种干细胞培养基的干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、提前将MSC添加物放到4℃的冰箱中过夜融化，或在室温中进行融化，在融化好后立即将添加物放到培养基中；
B、在配置培养基时MSC基础培养基的体积为500ml、MSC添加物1的含量为60ml、MSC添加物2的含量为1ml、MSC添加物3的含量为1ml、MSC完全培养基的含量为562ml、血清60ml；
C、依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中；
D、将配置好的培养基避光保存在4℃的冰箱中。
优选地，所述培养基在诱导人间充质干细胞分化为角膜上皮细胞中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明种，采用本培养基进行干细胞的培养是细胞的增长速度快，
增长的面积更大，传代十次仍然具有原始的表型一级较高的批间一致性；
(2)本发明具有出众的扩增效率，稳定血清组织可以保证相同批次的一
致性，在高密度下实现高效扩增，只需要较少的培养基，有效缩短干细胞
的培养时间。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种干细胞培养基，干细胞培养基中包含MSC基础培养基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，干细胞培养基中包含血清，提前将MSC添加物放到4℃的冰箱中过夜融化，或在室温中进行融化，在融化好后立即将添加物放到培养基中,本发明为一种含有血清的培养基，培养基中还包含MSC完全培养基、氨基酸、氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸，培养基中还含有盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽，盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠,依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中。
本发明中，维生素包含维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨。
本发明种，MSC基础培养基的体积为500ml液体，保存温度为2-8℃，所述MSC添加物1的含量为60ml冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物2的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物3的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC完全培养基的含量为562ml的液体，保存温度为2-8℃，在采用培养基进行干细胞培养时候培养基保存温度为4℃,最终将配置好的培养基避光保存在4℃的冰箱中。
一种干细胞培养基地干细胞培养方法包括以下步骤：
A、提前将MSC添加物放到4℃的冰箱中过夜融化，或在室温中进行融化，在融化好后立即将添加物放到培养基中；
B、在配置培养基时MSC基础培养基的体积为500ml、MSC添加物1的含量为60ml、MSC添加物2的含量为1ml、MSC添加物3的含量为1ml、MSC完全培养基的含量为562ml、血清60ml；
C、依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中；
D、将配置好的培养基避光保存在4℃的冰箱中。
本发明中，采用本培养基进行干细胞的培养是细胞的增长速度快，增长的面积更大，传代十次仍然具有原始的表型一级较高的批间一致性；本发明具有出众的扩增效率，稳定血清组织可以保证相同批次的一致性，在高密度下实现高效扩增，只需要较少的培养基，有效缩短干细胞的培养时间。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种干细胞培养基,其特征在于：所述干细胞培养基中包含MSC基础培养基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，MSC完全培养基、氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽；所述MSC基础培养基的体积为500ml液体，保存温度为2-8℃，所述MSC添加物1的含量为60ml冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物2的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC添加物3的含量为1ml的冰冻物，保存温度为－20℃，所述MSC完全培养基的含量为562ml的液体，保存温度为2-8℃；所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸；所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基，其特征在于：所述培养基保存温度为4℃。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基，其特征在于：所述干细胞培养基中包含血清。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基，其特征在于：所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠。
5.一种干细胞培养基的干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、提前将MSC添加物放到4℃的冰箱中过夜融化，或在室温中进行融化，在融化好后立即将添加物放到培养基中；
B、在配置培养基时MSC基础培养基的体积为500ml、MSC添加物1的含量为60ml、MSC添加物2的含量为1ml、MSC添加物3的含量为1ml、MSC完全培养基的含量为562ml、血清60ml；
C、依次将氨基酸、维生素、盐类、脂类、蛋白多肽和细胞因子加入到培养基中；
D、将配置好的培养基避光保存在4℃的冰箱中。
6.一种干细胞培养基的应用，其特征在于：所述培养基在诱导人间充质干细胞分化为角膜上皮细胞中的应用。
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