CN104761618A

CN104761618A - 特利加压素的纯化制备方法

Info

Publication number: CN104761618A
Application number: CN201510004160.8A
Authority: CN
Inventors: 陈逸民; 高鲁; 孙锋; 王良友
Original assignee: SUZHOU TIANMA GROUP TIANJI BIO-PHARMACEUTICAL CO LTD
Current assignee: SUZHOU TIANMA GROUP TIANJI BIO-PHARMACEUTICAL CO LTD
Priority date: 2015-01-06
Filing date: 2015-01-06
Publication date: 2015-07-08

Abstract

本发明一种特利加压素的纯化制备方法，包括以下步骤：将特利加压素粗肽溶液溶于水中，在搅拌下加入5%的氨水，调节pH至7~8，从而获得碱性特利加压素粗肽溶液；在pH7~8的条件下加入适量1.5%双氧水水溶液氧化，过滤后获得氧化型粗肽；以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，纯化流动相A相：由磷酸三乙胺水溶液和二乙胺乙酸盐组成，B相：乙腈，将氧化型粗肽溶液进行梯度洗脱；磷酸三乙胺水溶液由水、磷酸、三乙胺按照1000∶10∶11重量份比例混合形成，将20mmol/L二乙胺乙酸盐加入磷酸三乙胺水溶液，并调pH值至4.5获得所述纯化流动相A相。本发明反应条件比较温和，反应效率高，产品纯度高，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益。

Description

特利加压素的纯化制备方法

技术领域

本发明涉及多肽药物化学合成领域，具体涉及一种特利加压素的纯化制备方法。

背景技术

特利加压素的氨基酸序列为：甘氨酰-甘氨酰-甘氨酰-L-半胱氨酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰- L-谷氨酰氨酰- L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰- L-脯氨酰- L-赖氨酰-甘氨酰胺（4→9）环二硫化物醋酸盐

其结构如下：

目前特利加压素为人工合成的三甘氨酸-赖氨酸-加压素，是合成的血管加压素类似物，本身无活性，在体内经氨基肽酶作用，脱去N末端的3个甘氨酰残基后，缓慢地转化为有活性的赖氨酸加压素，用于治疗肝硬化门脉高压引起的急性食道静脉曲张出血，是一种安全有效的治疗急性静脉出血的药物。临床用于治疗严重急性食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃烂出血，急性糜烂性胃炎或出血性胃炎，胰、胆和肠道的辅助治疗以及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。

目前相关专利如<<固相多肽合成特利加压素的制备方法>>，专利公开号CN1865282，该发明公开了一种固相多肽合成特利加压素的制备方法，其环化时采用空气氧化法，此方法环化速度慢，特别是在较大规模生产中，生产效率较低，在线性粗肽在溶液中久置时很容易出现副反应；另有专利如<<一种固相氧化环合合成特利加压素的方法>>，专利公开号CN101693738A，该发明公开了一种固相氧化环合合成特利加压素的方法，该专利中提到用碘氧化法，该法从小试到中试工艺较难重现，反应条件剧烈且不容易控制，一旦出现环化异常则很可能导致产品最终报废。

发明内容

本发明的目的是提供一种特利加压素的纯化制备方法，该特利加压素的纯化制备方法解决目前该产品生产过程中环化效率和纯化收率不高，不易控制的问题，反应条件比较温和，反应效率高，产品纯度高，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种特利加压素的纯化制备方法，包括以下步骤：

步骤一、获得特利加压素粗品；

步骤二、将特利加压素粗肽溶液溶于水中，在搅拌下加入5%的氨水，调节pH至7~8，从而获得碱性特利加压素粗肽溶液；

步骤三、在pH7~8的条件下加入适量1.5%双氧水水溶液氧化，过滤后获得氧化型粗肽；

步骤四、以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，纯化流动相A相：由磷酸三乙胺水溶液和二乙胺乙酸盐组成，B相：乙腈，将氧化型粗肽溶液进行梯度洗脱；所述磷酸三乙胺水溶液由水、磷酸、三乙胺按照1000：10：11重量份比例混合形成，将20mmol/L二乙胺乙酸盐加入磷酸三乙胺水溶液，并调pH值至4.5获得所述纯化流动相A相。

上述技术方案进一步改进的技术方案如下：

1. 上述方案中，所述溶解浓度2mmol/L，1.5%双氧水水溶液：制备规模（V/mmoL）=10：1，氧化时间30min～60min。

2. 上述方案中，所述步骤三和步骤四之间包括以下步骤：将步骤三的氧化型粗肽溶液经0.45μm的水系滤膜过滤。

3. 上述方案中，所述步骤四流速为400mL/min，洗脱梯度B由10～30%的梯度进行洗脱。

由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明特利加压素的纯化制备方法，其解决目前该产品生产过程中环化效率和纯化收率不高，不易控制的问题，反应条件比较温和，反应效率高，产品纯度高，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益；且反应效率高，粗肽的纯度可达到90%左右，成品纯度可达达到99%以上，最大单杂0.2%以下，最终产品的纯化收率可超过75%，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益。且整个生产的过程采用的是常规试剂原料，无剧毒物质，安全环保。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1：一种特利加压素的纯化制备方法，包括以下步骤：

将1000mmol特利加压素粗肽加入纯水中溶解（溶解浓度2.1mmol/L），充分搅拌至全溶解，5%氨水调pH至7.5，加入10L 1.5%双氧水，搅拌30～60min， HPLC追踪反应进程。

溶液经0.45μm的水系滤膜过滤，滤除不溶物，得滤液，滤液经直径15CM的硅胶反相高效液相制备柱（粒径10微米，孔径100埃）纯化。纯化流动相A相：磷酸三乙胺水溶液加二乙胺乙酸盐，B相：乙腈，检测波长为230nm，流速为400mL/min，洗脱梯度B由10～30%，40分钟，上样量为15g，收集并合并纯度≥99%的样品，然后根据HPLC分析检测并定量，对于峰前、峰后样品，按步骤多次纯化得到合格品。最后再用醋酸铵和醋酸转盐、减压浓缩、冻干得到505.7g成品，总纯达到99.4%（最大单杂为0.14%），纯化收率76.1%。

实施例2：一种特利加压素的纯化制备方法，包括以下步骤：

将1000mmol特利加压素粗肽加入纯水中溶解（溶解浓度2.0mmol/L），充分搅拌至全溶解，5%氨水调pH至7.6，加入10.6L 1.5%双氧水，搅拌30～60min， HPLC追踪反应进程。溶液经0.45μm的水系滤膜过滤，滤除不溶物，得滤液。滤液经直径15CM的硅胶反相高效液相制备柱（粒径10微米，孔径100埃）纯化。纯化流动相A相：磷酸三乙胺水溶液加二乙胺乙酸盐，B相：乙腈，检测波长为230nm，流速为400mL/min，洗脱梯度B由10～30%，40分钟，上样量为15g，收集并合并纯度≥99%的样品，然后根据HPLC分析检测并定量，对于峰前、峰后样品，按步骤多次纯化得到合格品。最后再用醋酸铵和醋酸转盐、减压浓缩、冻干得到497.1g，总纯达到99.5%（最大单杂为0.16%），纯化收率75.8%。

综上，本发明特利加压素的纯化制备方法，其解决目前该产品生产过程中环化效率和纯化收率不高，不易控制的问题，反应条件比较温和，反应效率高，产品纯度高，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益；且反应效率高，粗肽的纯度可达到90%左右，成品纯度可达达到99%以上，最大单杂0.2%以下，最终产品的纯化收率可超过75%，具有降低成本，减少了危险性和污染，提高了效率，而且非常适合于大生产，有着显著的经济社会效益。且整个生产的过程采用的是常规试剂原料，无剧毒物质，安全环保。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims

1. 一种特利加压素的纯化制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、获得特利加压素粗品；

2. 根据权利要求1所述的特利加压素的纯化制备方法，其特征在于：所述溶解浓度2mmol/L，1.5%双氧水水溶液：制备规模（V/mmoL）=10：1，氧化时间30min～60min。

3. 根据权利要求1所述的特利加压素的纯化制备方法，其特征在于：所述步骤三和步骤四之间包括以下步骤：将步骤三的氧化型粗肽溶液经0.45μm的水系滤膜过滤。

4. 根据权利要求1所述的特利加压素的纯化制备方法，其特征在于：所述步骤四流速为400mL/min，洗脱梯度B由10～30%的梯度进行洗脱。