CN102775475A - 一种纯化醋酸特利加压素的方法 - Google Patents
一种纯化醋酸特利加压素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102775475A CN102775475A CN2012102480837A CN201210248083A CN102775475A CN 102775475 A CN102775475 A CN 102775475A CN 2012102480837 A CN2012102480837 A CN 2012102480837A CN 201210248083 A CN201210248083 A CN 201210248083A CN 102775475 A CN102775475 A CN 102775475A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- terlipressin
- purifying
- mass percentage
- percentage concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用反相高效液相色谱法纯化醋酸特利加压素的方法,包括如下步骤:1)将特利加压素氧化液以滤膜过滤后待用,以固定相聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,流动相为两相,磷酸三乙胺缓冲液为A相,色谱乙腈为B相,进行梯度洗脱纯化,收集目的峰值含量大于90%的肽溶液;2)以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱进行二次纯化同时转盐,流动相为醋酸水溶液为A相,色谱乙腈为B相,收集目的峰值含量大于99%的肽溶液;3)将最终的高纯度肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥,得粉末状成品肽。本发明提出了一条适合放大生产的高效液相色谱法纯化醋酸特利加压素的纯化工艺。
Description
技术领域
本发明涉及一种规模化纯化醋酸特利加压素的方法。
背景技术
醋酸特利加压素,英文名为Terlipressin,结构式为:
分子式为:C52H74N16O15S2,分子量为1227.4。醋酸特利加压素临床用于治疗严重急性食管静脉曲张破裂出血,严重急性胃、十二指肠溃疡出血,急性糜烂性胃炎或出血性胃炎,胰、胆和肠屡的辅助治疗以及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。 目前,醋酸特利加压素为人工合成的三甘氨酸-赖氨酸-加压素,是合成的血管压素类似物,本身无活性,在体内经氨基肽酶作用,脱去N末端的3个甘氨酸残基后,缓慢地转化为有活性的赖氨酸加压素,用于治疗肝硬化门脉高压引起的急性食道静脉曲张出血,是一种安全有效的治疗急性静脉曲张出血的药物。
醋酸特利加压素明显优于血管加压素,在一项多中心临床研究中,醋酸特利加压素70%的患者出血终止,加压素为9%,输血需求量也低于加压素组。醋酸特利加压素也明显优于生长抑素和奥曲肽,在一项多中心临床研究中,从集中评价结果可知,与生长抑素和奥曲肽不同,醋酸特利加压能明显降低食管静脉曲张出血的死亡率。醋酸特利加压素联合硬化治疗优于单独硬化治疗,在一项596例肝硬化静脉曲张出血病人的多中心临床研究中,使用联合治疗97%的患者出血终止,明显优于单独硬化治疗,不仅能有效控制出血,而且可降低再出血的可能性。由于醋酸特利加压素的疗效优于血管加压素、奥曲肽、生长抑素,因而在第二届Baveno国际统一会议将其作为治疗急性静脉曲张出血的首选药物。
国内外关于醋酸特利加压素的制备文献报道很少,而具体的纯化方法还没有文献报道,特别是规模化纯化醋酸特利加压素的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一条适于规模化生产醋酸特利加压素的纯化工艺方法,使用反相高效液相色谱法纯化醋酸特利加压素,并用HPLC转盐法交换转盐,效率高,成本低且收率好,达到产业化的要求,解决现有技术分离得到醋酸特利加压素的空白。
为实现上述目的,本发明的技术方案如下:
一种纯化醋酸特利加压素的方法,包括如下步骤:
1)将特利加压素氧化液以孔径0.45μm滤膜过滤后待用,以固定相聚苯乙烯-聚乙烯苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,流动相为两相,其中磷酸三乙胺缓冲液为A相,色谱乙腈为B相,梯度洗脱进行一次纯化,收集目的峰值含量大于90%的肽溶液;
2)以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱进行二次纯化同时转盐,流动相为两相,其中醋酸水溶液为A相,色谱乙腈为B相,收集目的峰值含量大于99%的肽溶液;
3)将最终的高纯度肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥,得粉末状成品肽。
优选的方案是:所述磷酸三乙胺缓冲液pH为3.0-4.0;
优选的方案是:所述一次纯化中梯度洗脱的B相质量百分浓度为10%~50%,检测波长为220nm;
优选的方案是:所述二次纯化及转盐中醋酸水溶液质量百分浓度为0.5%,梯度洗脱为三段式,依次为B相的质量百分浓度:5-5%,0-60min;B相的质量百分浓度:15-30%,60-90min; B相的质量百分浓度:30-80%,90-120min,检测波长为220nm。
本发明的有益效果是:本发明提出的一条适于规模化生产醋酸特利加压素的纯化工艺方法,先以聚合物制备柱进行一次纯化得到90%以上的产品,再以C18填料的制备柱进行二次纯化同时转盐,不仅能得到HPLC纯度大于99.0%的精肽,还有效地提高了产品的收率,降低了成本,同时生产方法简单,易于操作,从而达到大规模工业化生产的目的。
具体实施方式
实施例1
1.样品处理:在特利加压素氧化液中加入少许乙腈超声至液体澄清,用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用。
2.一次纯化
纯化条件:色谱柱:以固定相聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,柱子直径和长度为:5cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.085%的磷酸水溶液,以三乙胺调pH为3.5;B相:色谱乙腈。流速:60-80ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:10-50%,30-50min。进样量为4.0-4.5g。
纯化过程:将色谱柱用质量百分浓度30%的B相平衡好后上样,上样量为1.5-2.0L样品溶液。线性梯度洗脱60min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
3.二次纯化及转盐:
纯化条件:色谱柱:以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱色谱柱,柱子直径和长度为:5cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.5%的醋酸水溶液;B相:色谱乙腈。流速:40-55ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:5-5%,0-60min;B相的质量百分浓度:15-30%,60-90min; B相的质量百分浓度:30-80%,90-120min。进样量为一次纯化两针粗品收集的肽溶液。
纯化过程:将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样,上样量为一次纯化两针粗品收集的样品溶液。线性梯度洗脱120min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
4.将转盐后所得的所有肽溶液,进行减压浓缩至1g/50ml,浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得纯度大于99.0%的醋酸特利加压素,纯化收率75.3%。
实施例2
1.样品处理:在特利加压素氧化液中加入少许乙腈超声至液体澄清,用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用。
2.一次纯化
纯化条件:色谱柱:以固定相聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,柱子直径和长度为:10cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.085%的磷酸水溶液,以三乙胺调pH为3.0;B相:色谱乙腈。流速:180-200ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:10-50%,30-50min。进样量为10-11g。
纯化过程:将色谱柱用质量百分浓度30%的B相平衡好后上样,上样量为4-4.5L样品溶液。线性梯度洗脱60min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
3.二次纯化及转盐:
纯化条件:色谱柱:以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱色谱柱,柱子直径和长度为:10cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.5%的醋酸水溶液;B相:色谱乙腈。流速:60-65ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:5-5%, 0-60min;B相的质量百分浓度:15-30%,60-90min; B相的质量百分浓度:30-80%,90-120min。进样量为一次纯化两针粗品收集的肽溶液。
纯化过程:将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样,上样量为一次纯化两针粗品收集的样品溶液。线性梯度洗脱120min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
4.将转盐后所得的所有肽溶液,进行减压浓缩至1g/50ml,浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得纯度大于99.0%的醋酸特利加压素,纯化收率72.9%。
实施例3
1.样品处理:在特利加压素氧化液中加入少许乙腈超声至液体澄清,用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用。
2.一次纯化
纯化条件:色谱柱:以固定相聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,柱子直径和长度为:15cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.085%的磷酸水溶液,以三乙胺调pH为4.0;B相:色谱乙腈。流速:300-350ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:30-50%,30-50min。进样量为22-25g。
纯化过程:将色谱柱用30%的B相平衡好后上样,上样量为9-10L样品溶液。线性梯度洗脱60min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
3.二次纯化及转盐:
纯化条件:色谱柱:以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱色谱柱,柱子直径和长度为:15cm×25cm.流动相:A相:质量百分浓度0.5%的醋酸水溶液;B相:色谱乙腈。流速:120-150ml/min。检测波长:220nm。梯度:B相的质量百分浓度:5-5%,0-60min;B相的质量百分浓度:15-30%,60-90min; B相的质量百分浓度:30-80%,90-120min。进样量为一次纯化两针粗品收集的肽溶液。
纯化过程:将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样,上样量为一次纯化两针粗品收集的样品溶液。线性梯度洗脱120min,收集目的峰,将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用。
4.将转盐后所得的所有肽溶液,进行减压浓缩至1g/50ml,浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得纯度大于99.0%的醋酸特利加压素,纯化收率71.2%。
Claims (5)
1. 一种纯化醋酸特利加压素的方法,其特征是包括如下步骤:
1)将特利加压素氧化液以滤膜过滤后待用,以固定相聚苯乙烯-聚乙烯苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱,流动相为两相,其中磷酸三乙胺缓冲液为A相,色谱乙腈为B相,梯度洗脱进行一次纯化,收集目的峰值含量大于90%的肽溶液;
2) 以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱进行二次纯化同时转盐,流动相为两相,其中为醋酸水溶液为A相,色谱乙腈为B相,收集目的峰值含量大于99%的肽溶液;
3)将最终的高纯度肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥,得粉末状成品肽。
2.根据权利要求1所述一种纯化特利加压素的方法,其特征是所述的滤膜孔径为0.45μm。
3.根据权利要求1所述一种纯化特利加压素的方法,其特征是:所述步骤1)中磷酸三乙胺缓冲液pH为3.0-4.0。
4.根据权利要求1所述一种纯化特利加压素的方法,其特征是:所述步骤1)中梯度洗脱的B相质量百分浓度为10%~50%,检测波长为220nm。
5.根据权利要求1所述一种纯化特利加压素的方法,其特征是:所述步骤2)中醋酸水溶液质量百分浓度为0.5%,梯度洗脱为三段式,依次为B相的质量百分浓度:5-5%,0-60min;B相的质量百分浓度:15-30%,60-90min; B相的质量百分浓度:30-80%,90-120min,检测波长为220nm。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102480837A CN102775475A (zh) | 2012-07-18 | 2012-07-18 | 一种纯化醋酸特利加压素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102480837A CN102775475A (zh) | 2012-07-18 | 2012-07-18 | 一种纯化醋酸特利加压素的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102775475A true CN102775475A (zh) | 2012-11-14 |
Family
ID=47120604
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012102480837A Pending CN102775475A (zh) | 2012-07-18 | 2012-07-18 | 一种纯化醋酸特利加压素的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102775475A (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103992391A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-08-20 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种纯化特利加压素的方法 |
CN104530214A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
CN104761618A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-07-08 | 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 | 特利加压素的纯化制备方法 |
CN104829695A (zh) * | 2015-05-04 | 2015-08-12 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种纯化阿拉瑞林的方法 |
CN105301156A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-02-03 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种注射用特利加压素的有关物质分析方法 |
CN110658297A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-01-07 | 海南通用三洋药业有限公司 | 一种注射用特利加压素中高分子聚合物的检测方法 |
CN115856149A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-03-28 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特利加压素中杂质的检测方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1865282A (zh) * | 2005-05-18 | 2006-11-22 | 周达明 | 固相多肽合成特利加压素的制备方法 |
CN101693738A (zh) * | 2009-10-29 | 2010-04-14 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种固相氧化环合合成特利加压素的方法 |
CN102068685A (zh) * | 2010-04-09 | 2011-05-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特利加压素制剂及其制备方法 |
CN102408471A (zh) * | 2011-06-23 | 2012-04-11 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 特利加压素的制备方法 |
-
2012
- 2012-07-18 CN CN2012102480837A patent/CN102775475A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1865282A (zh) * | 2005-05-18 | 2006-11-22 | 周达明 | 固相多肽合成特利加压素的制备方法 |
CN101693738A (zh) * | 2009-10-29 | 2010-04-14 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种固相氧化环合合成特利加压素的方法 |
CN102068685A (zh) * | 2010-04-09 | 2011-05-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特利加压素制剂及其制备方法 |
CN102408471A (zh) * | 2011-06-23 | 2012-04-11 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 特利加压素的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
《分析化学》 20071031 邵承伟等 聚(苯乙烯-二乙烯基苯)反相高效液相色谱填料在胸腺素alpha1分离中的应用 1491-1494 第35卷, 第10期 * |
邵承伟等: "聚(苯乙烯-二乙烯基苯)反相高效液相色谱填料在胸腺素α1分离中的应用", 《分析化学》 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103992391A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-08-20 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种纯化特利加压素的方法 |
CN103992391B (zh) * | 2014-02-14 | 2016-10-05 | 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司 | 一种纯化特利加压素的方法 |
CN104530214A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
CN104530214B (zh) * | 2014-12-23 | 2018-07-20 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
CN104761618A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-07-08 | 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 | 特利加压素的纯化制备方法 |
CN104829695A (zh) * | 2015-05-04 | 2015-08-12 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种纯化阿拉瑞林的方法 |
CN104829695B (zh) * | 2015-05-04 | 2018-09-07 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种纯化阿拉瑞林的方法 |
CN105301156A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-02-03 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种注射用特利加压素的有关物质分析方法 |
CN110658297A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-01-07 | 海南通用三洋药业有限公司 | 一种注射用特利加压素中高分子聚合物的检测方法 |
CN115856149A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-03-28 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特利加压素中杂质的检测方法 |
CN115856149B (zh) * | 2022-12-26 | 2023-12-05 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特利加压素中杂质的检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102775475A (zh) | 一种纯化醋酸特利加压素的方法 | |
CN101372504B (zh) | 一种纯化去氨加压素的方法 | |
CN101012163B (zh) | 一种高纯度丹参素的制备方法 | |
CN102584918B (zh) | 一种制备高纯度黄芩苷的方法 | |
CN101787071B (zh) | 一种伐普肽的纯化方法 | |
CN102827258A (zh) | 一种纯化恩夫韦肽的方法 | |
CN107312073A (zh) | 一种纯化分离西曲瑞克的方法 | |
CN105037488A (zh) | 一种美拉诺坦ii的纯化方法 | |
CN101463080B (zh) | 一种纯化奈西利肽的方法 | |
CN111057141A (zh) | 一种三肽的精制工艺 | |
CN109293509B (zh) | 一种从竹叶提取物中制备高纯度绿原酸的方法 | |
CN106546673A (zh) | 一种利用高效液相色谱法分离棕榈酰五胜肽‑3的方法 | |
CN108689849B (zh) | 山楂叶粗提物中同时分离黄酮类和绿原酸类化合物的方法 | |
WO2014206210A1 (zh) | 一种爱啡肽的制备方法 | |
CN107759655A (zh) | 一种高效分离纯化高纯度甘草酸的方法 | |
CN104119229A (zh) | 一种制取纯品绿原酸的工艺 | |
CN101798335B (zh) | 一种胸腺素α1的纯化方法 | |
CN102675450A (zh) | 一种纯化胸腺素β4的方法 | |
CN104744567A (zh) | 一种卡贝缩宫素的纯化方法 | |
CN105254746A (zh) | 一种胸腺肽α1脱盐的方法 | |
CN102702344A (zh) | 一种纯化替莫瑞林的方法 | |
CN102920727B (zh) | 制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法 | |
CN104829695B (zh) | 一种纯化阿拉瑞林的方法 | |
CN106478804A (zh) | 一种纯化鲑降钙素的方法 | |
CN102993267A (zh) | 一种灵芝活性肽的制取方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121114 |