CN105254746A - 一种胸腺肽α1脱盐的方法 - Google Patents

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徐红岩
秦敬国
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Abstract

本发明公开了一种胸腺肽α1利用反相高效液相色谱脱盐的方法，主要解决使用离子交换树脂进行脱盐存在的耗时长，前处理比较麻烦，而且一次样品处理量小，工作效率低，重现性比较差，不适合于大规模工业生产的技术问题。本发明技术方案包括如下步骤：1）将胸腺肽α1纯化后的溶液调节pH为6-8，以0.45μm滤膜过滤后待用，以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱，水溶液为A相，甲醇溶液为B相，进行梯度洗脱纯化，收集目的峰值的肽溶液；将最终的肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥，得粉末状成品肽。本发明用于批量化产业化胸腺肽α1脱盐。

Description

一种胸腺肽α1脱盐的方法
技术领域
本发明涉及胸腺肽α1脱盐的方法，尤其是涉及一种批量化产业化胸腺肽α1脱盐的方法。
背景技术
胸腺肽是胸腺分泌的具有生物活性的多肽的混和物，是一种免疫增强剂。在机体的免疫系统、神经内分泌系统、生殖系统中起到重要的调节作用。它能够改善机体的免疫状态，协调内分泌，提高机体对细菌病毒感染的抵抗力。胸腺肽已经用于多种疾病的辅助治疗，疗效显著，在饲料中添加亦能起到促生长作用。胸腺肽含有的多种多肽均具有一定的药效，其中一些已经用于疾病的治疗。
胸腺肽α1是一种治疗慢性乙型肝炎和增强免疫系统反应性的多肽类药物。多项体外试验显示，该肽通过刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素α、干扰素γ以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平。该肽还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。该肽可能增加前NK细胞的聚集，而干扰素可使其细胞毒性增强。体内试验显示，该肽可以提高经刀豆蛋白A激活后小鼠淋巴细胞白介素2受体的表达水平，同时提高白介素2的分泌水平。
多肽在合成、裂解及纯化的过程中，会使用大量的TFA(三氟乙酸)、醋酸、等，从而引入了大量对人体有害的酸根离子，特别是TFA酸根，在纯化后干燥前必须去除这些有害的酸根离子。目前使用SephadexG25(葡聚糖凝胶G25)柱或者使用离子交换树脂(专利号200910304817.7)进行脱盐的方法，不但耗时长，前处理比较麻烦，而且一次样品处理量小，工作效率低，重现性比较差，不适合于大规模工业生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一条适于大规模工业化胸腺肽α1脱盐的方法，主要解决使用离子交换树脂进行脱盐存在的耗时长，前处理比较麻烦，而且一次样品处理量小，工作效率低，重现性比较差，不适合于大规模工业生产的技术问题。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种纯化胸腺肽α1的方法，包括如下步骤：
1）将胸腺肽α1溶液以0.45μm滤膜过滤，调节pH为6-8；
2）固定相为十八烷基硅胶键合硅胶的反相硅胶柱，水溶液为A相，甲醇溶液为B相，采用HPLC法脱盐，收集目的峰值的肽溶液；
3）将最终收集的肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥，得粉末状成品肽。
优选的方案是：所述B相的甲醇溶液为色谱纯。所述色谱甲醇溶液的浓度为20-60%，检测波长为220nm。
优选的方案是：所述的A相为纯水。
本发明的有益技术效果：本发明提供了一种胸腺肽α1脱盐的工艺，采用HPLC法去除胸腺肽α1中的有害酸根离子。利用色谱原理对酸根离子不能吸附而能吸附肽类物质的特点进行离子交换，从而达到有效去除酸根离子的目的。使用HPLC法脱盐，生产成本低，工艺简单，环境污染低，便于工业化实施。
具体实施方式
实施例1
1.样品处理：称取5g胸腺肽α1溶解后，溶液调节pH值为7，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液。
2.脱盐
条件：色谱柱：以十八烷基硅胶键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：5cm×25cm.流动相：A相：,水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。检测波长：220nm。浓度梯度：B%：20-60%，30-50min。
过程：将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样，线性梯度洗脱，收集目的峰，将收集好的肽溶液放置收集瓶中。
3．将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至1g/50ml，浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得胸腺肽α1样品，收率88.2%，含盐0.44%。
实施例2
1.样品处理：称取40g胸腺肽α1溶解后，溶液调节pH值为8，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液。
2.脱盐
条件：色谱柱：以十八烷基硅胶键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：10cm×25cm.流动相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：180-200ml/min。检测波长：220nm。浓度梯度：B%：20-60%，30-50min。
过程：将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样，线性梯度洗脱，收集目的峰，将收集好的肽溶液放置收集瓶中。
3．将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至1g/50ml，浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得胸腺肽α1样品，收率90.4%，含盐0.36%。
实施例3
1.样品处理：定量胸腺肽α1纯化后溶液含量为5.5g，溶液调节pH值为6.5，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液。
2.脱盐
条件：色谱柱：以十八烷基硅胶键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：5cm×25cm.流动相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。检测波长：220nm。浓度梯度：B%：20-60%，30-50min。
过程：将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样，。线性梯度洗脱，收集目的峰，将收集好的肽溶液放置收集瓶中。
3．将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至1g/50ml，浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得胸腺肽α1样品，收率89.3%，含盐0.26%。
实施例4
1.样品处理：定量胸腺肽α1纯化后溶液含量为42g，溶液调节pH值为7.5，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液。
2.脱盐
条件：色谱柱：以十八烷基硅胶键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：10cm×25cm.流动相：A相：纯水；B相：色谱纯甲醇溶液。流速：180-200ml/min。检测波长：220nm。浓度梯度：B%：20-60%，30-50min。
过程：将色谱柱用质量百分浓度5%的B相平衡好后上样，线性梯度洗脱，收集目的峰，将收集好的肽溶液放置收集瓶中。
3．将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至1g/50ml，浓缩温度不超过37℃,然后冷冻干燥得胸腺肽α1样品，收率91.2%，含盐0.23%。

Claims (3)

1.一种胸腺肽α1脱盐的方法，其特征是包括如下步骤：
1）将胸腺肽α1溶液以0.45μm滤膜过滤，调节pH为6-8；
2）固定相为十八烷基硅胶键合硅胶的反相硅胶柱，水溶液为A相，甲醇溶液为B相，采用HPLC法脱盐，收集目的峰值的肽溶液；
3）将最终收集的肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥，得粉末状成品肽。
2.根据权利要求1所述一种胸腺肽α1脱盐的方法，其特征是：A相为纯水,B相为色谱纯甲醇溶液。
3.根据权利要求1所述一种胸腺肽α1脱盐的方法，其特征是：所述HPLC法脱盐，B相的浓度梯度为20-60%，检测波长为220nm。
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